检索结果-南通市图书馆

作者：刘艳超苏州大学

学位级别：硕士

一、脊柱胸腰段内固定术后对脊椎相邻结构影响的生物力学研究目的:探讨脊柱胸腰段骨折椎弓根内固定术后相邻结构的生物力学性能及其力学变化,了解内固定术后的邻近小关节、椎间盘、椎体的退变,下腰部疼痛等并发症并提供充分... 详细信息

一、脊柱胸腰段内固定术后对脊椎相邻结构影响的生物力学研究目的:探讨脊柱胸腰段骨折椎弓根内固定术后相邻结构的生物力学性能及其力学变化,了解内固定术后的邻近小关节、椎间盘、椎体的退变,下腰部疼痛等并发症并提供充分的科学依据。方法:选择10 具正常胸腰段尸体标本,水平截断T12 后柱及椎体的后三分之二,保留椎体前三分之一、前纵韧带、及小关节突结构的完整,建立实验模型。设定正常组、前路固定组（五具）、后路固定组（五具）。在生理载荷下,分别在前屈、后伸、轴向压缩、侧屈（左侧屈）4 种生理状况下测量固定节段相邻椎体（T10,L2）、椎间盘（T10～T12,LI～L2）、小关节突（T10,L2）、前纵韧带等结构的载荷—应变的关系、应力强度的变化、轴向压缩刚度、水平剪切刚度和正常节段之间的关系,以及两种固定方法对相邻结构影响的比较,并进行分析论证。结果分析证明:在后路椎弓根固定后和前路短节段内固定后,邻近椎体、小关节突应变增大,椎间盘的位移增加,邻近结构的轴向压缩刚度和水平剪切刚度下降,邻近结构的应力强度增大和正常组相比具有显著性差异（p＜0.05）。结论:坚强的内固定是治疗胸腰段骨折的有效方法,但对相邻结构则存在不利的影响,这对术后内固定器械是否取出、邻近椎体的退变及术后并发症的预防处理有重要的现实意义。二、脊柱胸腰段骨折内固定对相邻椎体影响的临床观察目的:探讨椎弓根内固定术后邻近节段椎间隙变化的临床意义。方法:选择我院9 例胸腰段骨折（T12）病例,对使用TRSH 椎弓根螺钉内固定治疗后的患者术前摄片（前屈20 度,后伸80 度）,并且和正常组同节段的椎间隙高度进行比较。结果:在本实验组所研究的9 例患者中,在前屈状况下,内固定组与正常组相比,邻近椎间

关键词：胸腰段骨折内固定相邻结构生物力学临床应用

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解剖钢板治疗Pilon骨折

解剖钢板治疗Pilon骨折

作者：汪颖峰苏州大学

学位级别：硕士

目的探讨解剖钢板治疗Pilon骨折的临床疗效。方法对在2005年10月007年12月于黄山市人民医院骨科接受解剖钢板治疗的20例Pilon骨折患者进行随访。采用Rüedi-Allg?wer分类方法对Pilon骨折进行分类:I型5例,II型5例,III型10例。术后平均随... 详细信息

目的探讨解剖钢板治疗Pilon骨折的临床疗效。方法对在2005年10月007年12月于黄山市人民医院骨科接受解剖钢板治疗的20例Pilon骨折患者进行随访。采用Rüedi-Allg?wer分类方法对Pilon骨折进行分类:I型5例,II型5例,III型10例。术后平均随访16个月（4-30个月）。结果疗效评定标准采用Mazur等制定的踝关节症状与功能评分系统。优秀11例;良好7例:一般2例;较差0例。术后并发症包括创口感染1例,切口延迟愈合6,骨折延迟愈合1例。结论选择合适的手术治疗时间,应用塑型良好解剖型钢板治疗胫骨Pilon骨折可以获得良好疗效。

关键词：胫骨骨折外科手术骨折内固定术

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绝经后女性股骨头铁含量与骨密度相关性研究

绝经后女性股骨头铁含量与骨密度相关性研究

作者：王兵苏州大学

学位级别：硕士

目的：检测股骨颈骨折患者（绝经女性）股骨头骨铁含量,结合骨密度、血清铁蛋白和血清骨代谢指标,探讨骨组织铁含量与绝经女性骨质疏松的关系。方法：10例绝经后女性脆性股骨颈骨折患者（行走跌倒6例、扭伤跌倒4例）为绝经组,年龄56... 详细信息

目的：检测股骨颈骨折患者（绝经女性）股骨头骨铁含量,结合骨密度、血清铁蛋白和血清骨代谢指标,探讨骨组织铁含量与绝经女性骨质疏松的关系。方法：10例绝经后女性脆性股骨颈骨折患者（行走跌倒6例、扭伤跌倒4例）为绝经组,年龄56-87岁,平均72.6岁;6例年轻女性暴力性股骨颈骨折患者（车祸伤4例、骑车摔倒1例、高处坠落1例）为对照组,年龄19-43岁,平均31岁。2组患者均为住院、单发、非开放性骨折,入院检查无炎性反应,既往无病理性铁过载史。2组入院后均检测血清铁代谢和骨代谢指标,术中留取骨组织行骨铁含量测定和骨组织铁染色,术后均行腰椎和髋部（健侧）骨密度检查。结果：绝经组髋部和L1-4BMD值、铁蛋白（FER）、25羟基维生素D（25-OH-VD）均＞参考值范围;对照组各项指标均在正常范围内;绝经组骨铁含量均值为（88.9±47.2）μg/g,血清FER均值为（234.3±91.70） ng/mL,Ⅰ型胶原C端肽p降解产物（β-CTX）均值为（643.4±284.3）pg/mL,抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）均值为（3.44-0.73）U/L,均明显高于对照组的（32.5±12.7）μg/g,（69.6±42.5）ng/mL,（254.3±129.9）pg/mL,（2.3±0.45）U/L,差异有统计学意义（P＜0.05）。绝经组髋部BMD均值为（0.63±0.11）g/cm2、L1-4BMD均值为（0.87±0.10）g/cm2,均低于对照组的（0.88±0.67）g/cm2和（1.06±0.18）g/cm2,差异有统计学意义（P＜0.05）。骨组织普鲁士蓝+HE染色后可见条絮状骨小梁结构,绝经组骨小梁区可见特异性铁元素沉积,对照组骨小梁区未见明显铁元素沉积;2组骨小梁之外区域均有散在特异性铁元素沉积。绝经组骨铁含量与血清FER呈正相关（r=0.966）,与髋部BMD值呈负相关（r=-0.820）。结论：绝经后女性易发生铁代谢及骨代谢异常,骨铁水平升高、骨量减少;骨铁含量增加可能是导致绝经后女性骨质疏松症发生的潜在危险因素之一。

关键词：绝经女性骨铁含量骨铁染色骨密度骨质疏松症

绝经女性髋部脆性骨折后不同骨质疏松症管理与再骨折率及相关风险临床分析

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绝经女性髋部脆性骨折后不同骨质疏松症管理与再骨折率及相关风险...

作者：朱柯雨苏州大学

学位级别：硕士

[目的]:本研究回顾性分析了绝经后髋部脆性骨折术后2年内开展不同类型骨折后骨质疏松管理(Management of Osteoporosis after Fracture,MOF)对再骨折风险的影响;探究不同管理方式与再骨折发生率的相关性以及再骨折发生相关危险因素。[方... 详细信息

[目的]:本研究回顾性分析了绝经后髋部脆性骨折术后2年内开展不同类型骨折后骨质疏松管理(Management of Osteoporosis after Fracture,MOF)对再骨折风险的影响;探究不同管理方式与再骨折发生率的相关性以及再骨折发生相关危险因素。[方法]:收集2016年1月至2018年12月入住苏州大学附属第二医院接受手术治疗的绝经后髋部骨折患者病历资料并进行问卷调查;根据问卷内容将患者分成4个“管理方式”组;对问卷调查结果统计,使用COX回归模型比较不同“管理方式”对再骨折风险影响,评估影响患者再骨折风险的相关危险因素。[结果]:符合入组标准病例817例,经排除,最终653例患者纳入研究分析。结合问卷结果和病历资料审查,根据是否了解骨质疏松症防治知识分为2大组:MOF组450例,no-MOF组203例。在MOF组中,根据是否行骨密度(DXA)检测、是否行骨质疏松治,分为4个亚组:MOF-A组121例,MOF-B组93例,MOF-C组101例,MOF-D组135例。整个随访期间,所有患者再骨折发生率为13.6%,MOF组患者相较于no-MO组降低了 45%(HR:0.565),对侧髋部再骨折风险下降45%(HR:0.556)。MOF-A组降低约72%再骨折风险(HR:0.280),降低约71%对侧髋部再骨折风险(HR:0287),MOF-B组降低约57%再骨折风险(HR:0.430);MOF-A和MOF-B组患者再骨折风险未见显著降低(P>0.05)。再骨折相关危险因素中,下列因素均为髋部骨折术后2年内再骨折危险因素:年龄(HR:1.056,P<0.001),BMI<18.5(HR:1.865;P=0.006),合并冠状动脉粥样硬化(HR:2.016;P=0.028),合并阿兹海默病(HR:2.012;P=0.036),合并帕金森病(HR:2.737;P=0.002),合并消化性溃疡(HR:2.486;P=0.050),独居或仅与配偶居住(HR:3.251;P<0.001),素食(HR:3.062;P=0.049)。[结论]:本研究提示MOF可有效降低再骨折发生风险;在MOF中单纯告知骨质疏松症防治知识无法有效降低再骨折风险,抗骨质疏松症治疗可显著降低再骨折风险;另外,在骨质疏松治疗中前进行DXA检测可显著增加患者双膦酸盐使用率,提高用药依从性。关于再骨折危险因素分析结果提示,年龄、BMI<18.5、合并冠状动脉硬化、合并阿兹海默病、合并帕金森病、合并消化性溃疡、独居或仅与配偶居住、素食均为髋部脆性骨折术后2年内再骨折危险因素。

关键词：髋部脆性骨折再骨折风险骨质疏松症管理危险因素

合并症对髋部骨质疏松性骨折术后髋关节功能的影响

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合并症对髋部骨质疏松性骨折术后髋关节功能的影响

作者：顾颀苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究髋部骨质疏松性骨折患者术前合并症对术后髋关节功能的影响,分析合并症评估工具对术后髋关节功能的预测效果,为术前预测术后髋关节功能、制定相应治疗及康复策略提供临床参考。方法:①、收集2016年12月至2017年12月于我院骨科... 详细信息

目的:研究髋部骨质疏松性骨折患者术前合并症对术后髋关节功能的影响,分析合并症评估工具对术后髋关节功能的预测效果,为术前预测术后髋关节功能、制定相应治疗及康复策略提供临床参考。方法:①、收集2016年12月至2017年12月于我院骨科接受手术的194例髋部骨质疏松性骨折（年龄≥65岁,骨密度T值＜-1.0）术前合并症数据,并记录相关临床资料:年龄、性别、住院时间等;②、将收集的合并症数据按照三种合并症评估工具分别进行评分;③、根据美国骨科医师协会（AAOS）髋关节及膝关节问卷进行电话随访,随访结果再量化为髋关节及膝关节评分（HKS）;④、分析合并症及三种合并症评估工具与髋关节及膝关节评分（HKS）之间的相关性。结果:①、七种合并症与术后HKS有相关性,其中帕金森病、肿瘤的风险比较高,差值HKS的相关性分析也验证了这一结论;②、帕金森病、痴呆、脑血管疾病和ASA分级与骨折前HKS有相关性;③、在三种合并症评估工具中,ASA分级与术后HKS及差值HKS有最显著的相关性。结论:对于髋部骨质疏松性骨折患者,有七种术前合并症（帕金森病、肿瘤、慢性肺疾病、痴呆、脑血管疾病、糖尿病和中重度肾疾病）是手术后髋关节功能不良的独立风险因素;帕金森病、痴呆和脑血管疾病可以影响骨折前髋关节功能;在三种合并症评估工具中,ASA分级对术后髋关节功能预测能力最强（ASA分级的等级越高,术后髋关节功能将会越差）。

关键词：髋部骨折骨质疏松症合并症髋关节功能

中老年体检人群血清铁蛋白增加与骨量变化的相关性分析

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中老年体检人群血清铁蛋白增加与骨量变化的相关性分析

作者：高焱苏州大学

学位级别：硕士

第一部分苏州地区中老年人群腰椎和股骨颈骨密度影响因素的相关性分析目的:研究苏州地区50岁以上健康人群的人体测量学指标和常见血生化指标与腰椎和股骨颈骨密度(BMD)的相关性。方法:收集2011年1月至2017年12月来我院行健康体检的人群1... 详细信息

第一部分苏州地区中老年人群腰椎和股骨颈骨密度影响因素的相关性分析目的:研究苏州地区50岁以上健康人群的人体测量学指标和常见血生化指标与腰椎和股骨颈骨密度(BMD)的相关性。方法:收集2011年1月至2017年12月来我院行健康体检的人群11032例,其中50岁以上的中老年人群2602例。记录年龄、身高、体重、腰围、血压,测量腰椎和股骨颈BMD,测定常见生化指标和血清肿瘤指标,分析其与BMD的相关性,并进一步探究对骨量减低或骨质疏松患病风险的影响。结果:多重线性回归分析显示,年龄、腰围和碱性磷酸酶(ALP)是引起男女性腰椎或股骨颈骨量下降的危险因素,身高、体重指数(BMI)和收缩压则是保护因素;此外,血清铁蛋白是50岁以上女性BMD下降的重要危险因素。进一步logistics回归分析显示,高龄、低身高、低BMI、高ALP水平均会增加男女性骨量减低或骨质疏松的风险;在女性中,高血清铁蛋白水平也是骨质疏松患病风险上升的另一重要因素。结论:本研究揭示了 50岁以上人群的人体学测量指标和血清指标与不同部位BMD之间的关系。高龄、高ALP水平是中老年骨量流失的危险因素,而身高和BMI则对骨量具有一定的保护作用。同时,绝经后女性体内铁蓄积也会进一步增加骨质疏松症的患病风险。第二部分评估健康人群的铁储量及其与骨密度变化的年龄相关性分析目的:本研究旨在评估苏州地区健康人群体内的铁储量状况,并探讨体内铁储量与骨密度(BMD)在不同年龄段之间的相关关系。方法:该横断面研究共纳入11032名来我院行健康体检的受试者,年龄在16-90岁之间。通过电化学发光免疫测定法测量血清铁蛋白浓度,并计算铁蛋白在不同性别和年龄段浓度的变化趋势。在上述所有健康受试者中,4978例通过双能X射线吸收测定法(DXA)测量了腰椎和股骨颈BMD。观察BMD随年龄的变化趋势,并在不同年龄段中分析血清铁蛋白水平与BMD之间的相关性。结果:男性的血清铁蛋白浓度[中位数(四分位数范围)]为123.01(77.64-200.50)ng/mL,女性为33.44(13.91-73.79)ng/mL。血清铁蛋白浓度在男性和绝经前女性中保持相对稳定,而在绝经后女性则发生显著变化。根据年血清铁蛋白浓度随年龄的变化趋势,我们将受试者分为三组,即≤50岁,51-75岁和≥76岁,然后分析各年龄段铁蛋白浓度与BMD之间的相关性。偏相关分析结果显示,血清铁蛋白水平与仅与51-75岁女性的腰椎和股骨颈BMD呈负相关(r分别为-0.108和-0.082;P<0.001)。多重回归分析显示,铁蛋白是51-75岁女性骨密度下降的独立危险因素。进一步,根据四分位数法,我们将血清铁蛋白从低到高分成四组,我们发现与最低四分位数组相比,铁蛋白浓度最高组患骨质减少和骨质疏松症的风险要高出2.35倍(95%CI=1.44-3.84)和 3.16 倍(95%CI=1.34-7.49)。结论:本研究进一步证实了在健康人群中铁蓄积和骨量下降之间的关联。同时,研究显示血清铁蛋白和BMD仅在51-75岁年龄段的女性中呈显著负相关,而并非是全年龄段的女性。

关键词：骨密度骨质疏松影响因素相关性血清铁蛋白绝经后女性

去铁胺和铁调素对高铁环境下斑马鱼骨形成指标影响的实验研究

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去铁胺和铁调素对高铁环境下斑马鱼骨形成指标影响的实验研究

作者：陈斌苏州大学

学位级别：硕士

第一部分去铁胺在铁过载相关骨形成抑制中的治疗作用目的近年来，铁过载被认为是骨质疏松症的独立危险因素。铁过载可以促进破骨细胞分化和骨的再吸收。本文研究了铁过载对斑马鱼成骨细胞分化和骨形成的影响，并进一步探讨去铁胺（... 详细信息

第一部分去铁胺在铁过载相关骨形成抑制中的治疗作用目的近年来，铁过载被认为是骨质疏松症的独立危险因素。铁过载可以促进破骨细胞分化和骨的再吸收。本文研究了铁过载对斑马鱼成骨细胞分化和骨形成的影响，并进一步探讨去铁胺（DFO）对铁过载斑马鱼骨形成的治疗作用，为铁过载相关骨质疏松症的治疗提供理论依据。方法以受精后第2天（2dpf）斑马鱼幼鱼为模型，用不同浓度的枸橼酸铁胺FAC（10、25、50、100μg/mL）干预斑马鱼，于6dpf进行茜素红染色并统计骨矿化面积;在上述100μg/mLFAC干预6dpf基础上，再移除FAC，用不同浓度的DFO（1、10、100μM）处理至10dpf。进行茜素红染色，对斑马鱼进行椎体个数统计，并用实时定量PCR方法检测了各组之间成骨细胞特异性基因（runx2a、runx2b、bglap、spp1、alpl和col1a1a）的表达差异;用ICP/MS分析了各组间的铁元素含量;用DCFH-DA检测了各组间斑马鱼体内的活性氧（ROS）水平。结果（1）、用不同浓度FAC处理斑马鱼后，斑马鱼骨矿化面积成剂量依赖性降低，与对照组相比，100μg/mL浓度组差异具有统计学意义（p＜0.05）;成骨细胞特异性基因表达下调;与对照组相比，100μg/mL FAC处理时斑马鱼体内铁含量增加3.2倍（p＜0.05）;ROS水平增加4.2倍（p＜0.05）。（2）、DFO可增加高铁干预后斑马鱼的椎体个数，且呈剂量依赖性效应。成骨细胞特异性基因表达较高铁干预组有明显提高。与高铁干预相比，用10和100μM DFO处理使斑马鱼体内铁含量降低23.3%和58.9%（p＜0.05）;ROS水平同样降低了37.5%和50.9%（p＜0.05）。结论铁过载通过增加斑马鱼体内氧化应激水平抑制斑马鱼骨形成，去铁胺（DFO）通过螯合铁过载斑马鱼体内过多的铁离子，降低铁过载引起的氧化损伤，从而缓解铁过载所致的骨形成抑制作用。第二部分铁调素在铁过载所致的斑马鱼骨形成抑制中的保护作用目的通过前期研究，我们已经证实铁过载可以抑制斑马鱼骨形成，为观察铁调素在铁过载抑制斑马鱼骨形成中的预防作用，我们构建了含有斑马鱼铁调素的表达载体。以期为进一步研究“铁调素预防围绝经期和绝经后骨质疏松症”提供实验依据。方法以斑马鱼受精卵为模型，用不同浓度的枸橼酸铁胺FAC（10、25、50、100μg/mL）干预，第4天进行茜素红染色并统计骨矿化面积，选择FAC最适干预浓度;挑选发育至1-2细胞期的斑马鱼受精卵，显微注射入不同浓度的带Flag标签的铁调素mRNA（0、50、250、500ng/μL），用Western Blot检测斑马鱼体内Hepcidin-Flag融合蛋白的表达情况。将注射了不同浓度铁调素mRNA的受精卵置于含100μg/mLFAC的培养液中，干预至第4天进行茜素红染色，用实时定量PCR方法检测骨钙素（bglap）及runx2a、runx2b基因的表达变化情况;用ICP/MS分析了各组间的铁元素含量;用DCFH-DA检测了各组间斑马鱼体内的活性氧（ROS）水平。结果（1）、成功构建了斑马鱼铁调素表达载体，在斑马鱼受精卵内显微注射体外转录的hepcidin-flag mRNA，能被有效翻译成铁调素蛋白。（2）、当铁调素浓度为250ng/μL及500ng/μL时，能显著预防铁过载所导致的斑马鱼骨形成抑制作用（p＜0.05），减缓FAC干预引起的斑马鱼成骨细胞bglap及runx2a、runx2b的表达下调（p＜0.05）;与FAC组相比，显微注射500ng/μL铁调素能显著降低斑马鱼体内的铁水平达30.5%;铁调素浓度为250ng/μL及500ng/μL时，ROS水平比FAC组减少了分别为36.0％和42.4％（p ＜0.05）。结论适量过表达铁调素能通过抑制斑马鱼吸收过多的铁离子，降低铁过载引起的氧化损伤，从而预防铁过载所致的骨形成抑制作用。

关键词：铁过载斑马鱼 DFO 铁调素

铁离子对破骨细胞分化及骨吸收影响的机理研究

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铁离子对破骨细胞分化及骨吸收影响的机理研究

作者：贾鹏苏州大学

学位级别：硕士

目的：探讨铁离子（Ferric ion）在破骨细胞分化过程以及骨吸收中的作用，同时阐述其中可能存在的机理，以进一步阐明铁代谢与骨代谢之间的关系。方法：1.以RAW264.7作为破骨细胞前体细胞，以枸橼酸铁铵（ferric ammoniumcitrate, FAC... 详细信息

目的：探讨铁离子（Ferric ion）在破骨细胞分化过程以及骨吸收中的作用，同时阐述其中可能存在的机理，以进一步阐明铁代谢与骨代谢之间的关系。方法：1.以RAW264.7作为破骨细胞前体细胞，以枸橼酸铁铵（ferric ammoniumcitrate, FAC）作为三价铁离子供体，首先研究12uM、25uM、50uM、100uM、200uMFAC对RAW264.7增值活力的影响。2.在20ng/ml核因子κB受体活化因子配体（RANKL）存在下，根据实验1结果选取12uM、25uM、50uM FAC干预RAW264.7，抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）观察TRAP阳性细胞形成情况并计数（以细胞核≥3个为TRAP阳性细胞，即破骨细胞）。3.以2,7-DCF-DA作为细胞内荧光探针，流式细胞仪检测不同浓度FAC以及FAC联合RANKL干预RAW264.7后细胞内活性氧（Reactive oxygen species/ROS）水平。4.检测FAC联合RANKL干预后破骨细胞内总谷胱甘肽含量，以及还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比值（GSH/GSSG）。5.利用N-乙酰-半胱氨酸（NAC）作为抗氧化剂，观察FAC联合NAC干预后对破骨细胞形成的影响。6.分别用RT-PCR、Western blot检测FAC以及FAC+NAC干预RAW264.7后TRAP、Cathepsin-K、NFATc1表达变化情况。7.选取24只雄性ICR小鼠，随机分为3组，分别腹腔注射生理盐水、FAC、FAC+NAC，建立对照组、高铁组、高铁+抗氧化剂组小鼠模型。干预完成后取小鼠骨髓源性单核细胞进行破骨细胞培养，观察不同组别破骨细胞形成情况。8.取各组小鼠股骨进行HE染色观察骨小梁情况。9.用Miro-CT对各组小鼠股骨远端及股骨中段进行扫描，并进行三维图像重建，分析各参数值。10.留取各小鼠血清，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中铁蛋白（Ferritin）、丙二醛（MDA）、8-羟基-鸟苷（8-OH-DG）、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRAP-5b）、一型胶原C端肽（CTX）、核因子κB受体活化因子配体/骨保护素（RANKL/OPG）、骨碱性磷酸酶（BALP）、骨钙素（BGP）水平。结果：1.12uM、25uM、50uM FAC对RAW264.7增值无抑制作用（P>0.05），100uM、200uM FAC对RAW264.7有抑制作用（P<0.05）。2. FAC能在一定范围内（0uM、12uM、25uM、50uM）促进破骨细胞（TRAP阳性细胞）形成（P<0.05）。3. FAC能在一定范围内提高细胞内活性氧，同时FAC和RANKL联合干预也能提高RAW264.7细胞内活性氧水平（P<0.05）。4. FAC联合RANKL干预RAW264.7细胞后，细胞内总谷胱甘肽含量下降（P<0.05），GSH/GSSG上升（P <0.05）。5.抗氧化剂NAC能部分抑制FAC对破骨细胞形成的促进作用（P <0.05）。6. RT-PCR、Westernblot结果提示FAC能上调TRAP、Cathepsin-K、NFATc1的表达（P<0.05），NAC能部分抑制FAC介导的这一作用（P <0.05）。7.利用动物模型骨髓源性单核细胞培养破骨细胞结果提示，高铁组动物模型骨髓源性单核细胞形成的破骨细胞显著多于正常对照组（P <0.05），而铁离子和NAC联合干预组形成的破骨细胞少于高铁组（P<0.05）。8.高铁组小鼠股骨远端骨小梁较对照组稀疏，而NAC和铁离子联合干预组小鼠股骨远端骨小梁密度高于高铁组。9. Micro-CT对小鼠股骨远端分析结果提示，高铁组小鼠股骨远端微观结构较对照组退变明显，而NAC与铁离子联合干预组小鼠股骨远端骨微观结构退变较轻。10.高铁组小鼠血清中Ferritin、MDA、8-OH-DG、TRAP-5b、CTX、RANKL/OPG显著高于对照组（P<0.05），而NAC和铁离子联合干预组MDA、8-OH-DG、TRAP-5b、CTX、RANKL/OPG显著低于高铁组（P<0.05）;相反，高铁组小鼠血清中BALP、BGP含量明显低于对照组（P<0.05），而铁离子和NAC联合干预组血清中BALP、BGP含量显著高于高铁组（P <0.05）。结论：铁离子能促进破骨细胞的分化，同时能在体内增强骨吸收;这一作用可能与铁离子能促进活性氧形成，提高体内氧化应激水平有关。铁离子对骨吸收的促进作用是其引起骨质疏松的重要因素，抗氧化剂可能通过抑制铁离子介导的骨吸收增强在铁过载骨质疏松防治方面起到一定的作用。

关键词：铁离子破骨细胞骨质疏松活性氧氧化应激

铁蓄积介导成骨细胞mTOR影响小鼠骨内H亚型血管及骨量的机制研究

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铁蓄积介导成骨细胞mTOR影响小鼠骨内H亚型血管及骨量的机制研究

作者：王爱飞苏州大学

学位级别：硕士

第一部分“铁蓄积”对小鼠骨量和成骨细胞活性及mTOR水平影响的实验研究目的:本研究旨在进一步明确铁蓄积对雄性小鼠骨量的影响,并探索铁蓄积通过成骨细胞及其mTOR影响小鼠骨量的可能机制,为“伴铁蓄积骨质疏松症”的机制研究寻找新的... 详细信息

第一部分“铁蓄积”对小鼠骨量和成骨细胞活性及mTOR水平影响的实验研究目的:本研究旨在进一步明确铁蓄积对雄性小鼠骨量的影响,并探索铁蓄积通过成骨细胞及其mTOR影响小鼠骨量的可能机制,为“伴铁蓄积骨质疏松症”的机制研究寻找新的方向。方法:动物实验:该实验共选取16只C57BL6雄性小鼠,随机分为对照组(Ctrl组)、高铁组(Fe组),小鼠年龄均为8周龄。Fe组小鼠经腹腔注射枸橼酸铁铵(FAC)40mg/kg,3次/wk,连续注射8wk干预,Ctrl组亦经腹腔注射等量生理盐水,频次相同;所有实验小鼠均于干预后8周时处死,分离各组小鼠双侧股骨和胫骨,普鲁士蓝染色肝脏石蜡切片及肝铁定量检测观察肝铁蓄积情况;利用微型计算机断层扫描(Micro-CT)检测小鼠股骨骨微结构等参数。细胞实验:将人成骨细胞株hFOB1.19分为两组,一组为对照组(cont组),一组为枸橼酸铁铵干预组(iron组);cont组成骨细胞不做任何处理,iron组成骨细胞铺板后用200 μM浓度的枸橼酸铁铵进行干预72h,干预完成后,对两组成骨细胞分别进行碱性磷酸酶染色(ALP染色)检测成骨细胞活性、进行茜素红染色检测两组成骨细胞的矿化能力;并运用定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨相关基因(Runx2、ALP、SP7)及mTOR基因的mRNA表达,同时采用免疫印迹实验(Western Blot)检测成骨相关蛋白(Runx2、Ocn)及mTOR蛋白的表达变化。结果:动物实验结果:Ctrl组、Fe组肝组织普鲁士蓝染色及肝铁含量检测提示:Fe组小鼠肝脏铁蓄积水平与Ctrl组相比明显升高;同时Fe组小鼠的骨量与Ctrl组小鼠相比明显下降。细胞实验结果:枸橼酸铁铵干预后成骨细胞iron组与对照组cont组相比,成骨细胞的碱性磷酸酶染色和茜素红染色明显减少;成骨相关基因表达水平下降明显(Runx2、ALP、SP7);成骨相关蛋白的表达也显著下降(Runx2、Ocn);同时,iron组成骨细胞的mTOR表达在mRNA和蛋白水平均显著上升。结论:铁蓄积能够加重小鼠的骨量丢失引起“铁蓄积骨质疏松症”,同时铁蓄积能够显著抑制成骨细胞的功能活性以及矿化能力,铁蓄积可能介导成骨细胞mTOR变化进而影响小鼠的骨量。第二部分“铁蓄积”对小鼠骨内H亚型血管和血管内皮细胞的影响及机制研究目的:研究“铁蓄积”对小鼠骨内H亚型血管数量的影响,并探究铁蓄积介导成骨细胞mTOR影响血管内皮细胞的可能机制。方法:动物实验:实验共选取16只C57BL6雄性小鼠,随机分为一组对照组(Ctrl组)、另一组高铁组(Fe组),小鼠年龄均为8周龄。Fe组小鼠经腹腔注射右旋糖酐铁***/(kg-wk),连续注射8wk干预,Ctrl组亦经腹腔注射等量生理盐水,频次相同;所有实验小鼠均于干预后8周时处死,分离各组小鼠双侧股骨和胫骨,并将各小鼠的胫骨制成冰冻切片,应用EMCN和CD31共染免疫荧光检测各小鼠骨内H亚型血管的数量。细胞实验:利用间接共培养的方式,将cont组和iron组成骨细胞的培养基分别用以培养两组人脐内血管内皮细胞(HUVEC)亦为cont组和iron组,并通过划痕试验检测两组血管内皮细胞的迁徙能力;运用管型形成实验(Tube-formation Test)检测内皮细胞HUVEC的成管能力,以及EMCN免疫荧光检测血管内皮细胞HUVEC的活性。同时检测两组成骨细胞中mTOR的mRNA和蛋白表达水平的变化,以及两组血管内皮细胞血管内皮生长因子受体(KDR)表达及其活化水平的变化;并利用mTOR特异性的siRNA转染iron组的成骨细胞(iron+si-MT组)观察以上指标的恢复与否,空白siRNA转染作为阴性对照组(iron+si-NC组)。结果:动物实验结果:Fe组小鼠的胫骨近端松质骨骨内H亚型血管的数量显著少于Ctrl组小鼠。细胞实验结果:经与成骨细胞间接共培养的iron组HUVEC,其细胞迁移能力和管型形成能力较cont组受抑制明显,iron组成骨细胞的mTOR水平升高后,与之间接共培养的HUVEC(iron组)的KDR的磷酸化水平却被抑制明显;经mTOR特异性si-RNA转染后(iron+si-MT组)各项指标有所恢复,转染空白siRNA后未发生明显变化。结论:铁蓄积会明显降低小鼠骨内H亚型血管的数量,铁蓄积影响骨内H血管的可能机制为:铁蓄积会激活成骨细胞mTOR水平,使血管内皮细胞表面KDR活化受限,从而使得血管内皮活性受到抑制,骨内H亚型血管数量下降影响小鼠骨量。

关键词：铁蓄积骨质疏松症成骨细胞 mTOR 骨内H亚型血管 HUVEC

甲基强的松龙与促红细胞生成素联合应用对原代星形胶质细胞作用的研究

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甲基强的松龙与促红细胞生成素联合应用对原代星形胶质细胞作用的...

作者：郝彦明苏州大学

学位级别：硕士

第一部分原代星形胶质细胞模型制作及鉴定目的通过新生鼠大脑制作原代星形胶质细胞,并进行鉴定和星形胶质细胞纯度测定方法采用出生三天内的SD大鼠大脑制成细胞悬浊液后,按1.5×107计数接种于已用0.01%多聚赖氨酸包被好的底面积为75cm2... 详细信息

第一部分原代星形胶质细胞模型制作及鉴定目的通过新生鼠大脑制作原代星形胶质细胞,并进行鉴定和星形胶质细胞纯度测定方法采用出生三天内的SD大鼠大脑制成细胞悬浊液后,按1.5×107计数接种于已用0.01%多聚赖氨酸包被好的底面积为75cm2培养瓶中,放置于培养箱中(5%CO2,95%O2,37OC)培养,采用含15%的胎牛血清的DMEM培养液培养7d,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,观察细胞的变化,通过免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞。结果通过摇床与高血清培养可获得高纯度星形胶质细胞,并随逐渐传代更加纯化,形态也逐渐变化,培养的细胞GFAP染色呈阳性,显示正常星形胶质细胞胞体呈多角形,胞膜光滑,边界清楚,突触长且多相互连接,GFAP阳性细胞占总细胞数比例在95%以上。结论通过新生鼠大脑制作原代星形胶质细胞,高血清培养基和摇床后培养可获得高纯度的星形胶质细胞。第二部分原代星形胶质细胞缺营养损伤模型制作目的制作理想的原代星形胶质细胞的损伤模型,观察形态变化方法采用出生三天内的SD大鼠大脑制成细胞悬浊液后,采用含15%的胎牛血清的DMEM培养液培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞。采用PBS缓冲液代替培养基模拟缺营养模型,缺营养3h后恢复营养,观察细胞缺营养前后形态变化。结果缺营养3h后部分细胞胞体变小,突触变短,细胞间相互连接减少或消失,个别细胞呈圆形,复营养后大多数细胞胞体变大,突出变长并相互交错,基本恢复缺营前形态,个别细胞死亡成圆形。结论高血清培养和摇床后可获得高纯度的星形胶质细胞,原代星形胶质细胞可耐受一定的缺营养损伤,恢复营养后可基本恢复至损伤前的形态第三部分甲基强的松龙与促红细胞生成素联合应用对原代星形胶质细胞作用的研究目的研究甲基强的松龙(MPSS)与促红细胞生成素(EPO)单独以及联合应用对体外培养的原代星形胶质细胞的作用。方法采用出生3d内的SD大鼠大脑制成细胞悬浊液,采用含15%的胎牛血清的DMEM培养液培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,按1.5×107计数接种于已用0.01%多聚赖氨酸包被好的底面积为75cm2培养瓶中,放置于培养箱中(5%CO2,95%O2,37OC)培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,实验分为正常组、正常+ MPSS组、正常+EPO组、正常+ MPSS+EPO组、损伤组、损伤+ MPSS组、损伤+EPO组、损伤+ MPSS+EPO组。通过PBS缓冲液代替培养基模拟缺营养模型3小时后即刻分别加入甲基强的松龙(10umol/l)、促红细胞生成素(10u/l)、甲基强的松龙(10umol/l)与促红细胞生成素(10u/l),然后分别继续培养三天,免疫荧光技术鉴定星形胶质细胞;MTT法检测细胞的增殖活性和凋亡;PCR技术测定细胞GFAP RNA表达的变化。结果星形胶质细胞摇床后传至第三代,经鉴定星形胶质细胞纯度达95%以上;缺营养3h后部分细胞胞体变小,突触变短,细胞间相互连接减少或消失,个别细胞呈圆形,复营养后大多数细胞胞体变大,突出变长并相互交错,基本恢复缺营前形态,个别细胞死亡成圆形;正常组和损伤组分别加入MPSS、EPO、MPSS和EPO三天后,损伤组细胞活性与GFAP表达均明显升高,并且联合应用MPSS与EPO与单独应用MPSS、EPO相比,细胞活性与GFAP表达明显升高,但是正常组没有明显变化。结论适当剂量的MPSS与EPO联合应用对缺营养损伤的星形胶质细胞有显著的保护作用,并且与单独应用MPSS、EPO相比有显著性作用,而MPSS、EPO单独应用,MPSS与EPO联合应用对正常的星形胶质细胞均无显著性保护作用。

关键词：星形胶质细胞原代培养鉴定形态变化星形胶质细胞原代培养鉴定损伤形态变化甲基强的松龙促红细胞生成素星形胶质细胞缺营养联合用药保护