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Pseudomonas protegens FD6次生代谢物合成基因簇分析及抗菌肽的初步鉴定及抑菌活性

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Pseudomonas protegens FD6次生代谢物合成基因簇分析及抗菌肽的...

作者：贾祥子扬州大学

学位级别：硕士

随着病原物抗药性和环境污染问题日益严重,生物防治成为一种环境友好的植物病害防治措施。Pseudomonasprotegens FD6抑菌谱广,对番茄灰霉病有较好防病效果,本论文旨在利用生物信息学分析FD6产生次生代谢物种类,分离和鉴定新型抗菌肽,为... 详细信息

随着病原物抗药性和环境污染问题日益严重,生物防治成为一种环境友好的植物病害防治措施。Pseudomonasprotegens FD6抑菌谱广,对番茄灰霉病有较好防病效果,本论文旨在利用生物信息学分析FD6产生次生代谢物种类,分离和鉴定新型抗菌肽,为研发绿色安全、新型高效的生物农药提供参考。antiSMASH分析结果显示FD6全基因组包含17个次生代谢产物合成基因簇,进一步对合成抗生素类物质的基因簇进行分析,Region 3和Region 10分别合成藤黄绿脓菌素（pyoluteorin,Plt）和2,4-二乙酰基间苯三酚（2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG）。Region 16有88%可能为 orfamide 类环脂肽,根据腺苷酰化结构域进行分析发现,其由10个氨基酸组成,初步预测为L-Leu1-D-Asp2-D-Thr3-D-Ile4-L-Leu5-D-Ser6-L-Leu7-L-Leu8-D-Ser9-L-Val10。此外,通过进一步比对分析发现,防御假单胞菌FD6还产生甲烷氧化菌素（methanobactin）、丰原素（fengycin）、嗜铁素（pyoverdine）等其它抗菌物质。不同培养基抑菌活性检测发现在PA培养基上FD6拮抗能力最强,且有机溶剂乙酸乙酯和三氯甲烷萃取后的提取物具有较强抑菌活性。对提取物的理化性质检测,结果表示,粗提物可能不是蛋白,还原糖检测显示为阴性,排油圈实验和坍塌实验均表明粗提物具有良好的表面张力。全波长扫描,核磁等都可佐证粗提物中可能含有环脂肽类物质,对其进行高温处理,发现100℃处理粗提物及紫外线处理后仍有抗菌活性。为提高活性物质的产量,对培养条件进行优化获得最佳发酵条件:发酵培养基为PB培养基,装液量为摇瓶30%、28℃条件下200 rpm振荡培养3.5 d。根据前期振荡培养条件的优化,发酵罐培养时的条件为28℃、375 rpm培养3d。使用乙酸乙酯萃取发酵上清液,初步获得抗菌粗提物28 g,以番茄灰霉病菌为指示菌测定抑菌活性,结果显示粗提物具有较强抑菌能力,且对多种植物病原真菌和细菌都有良好的抑菌效果。MALDI-TOFMS显示特征峰集中在1200m/z-1400 m/z,最高强度峰经MALDI-TOFMS2分析发现其1317.8m/特征峰为[M+Na]+。粗提物经凝胶柱层析后得到651管样品,TLC条带集中在16-200管,对展开剂进行优化后显示三氯甲烷:甲醇=15:1最适宜。上述结果为进一步鉴定分析环脂肽的化学结构及作用机制奠定基础。

关键词：防御假单胞菌番茄灰霉病菌生物防治次生代谢产物环脂肽

荧光假单胞菌FD6抗生素合成调控基因的克隆及功能分析

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荧光假单胞菌FD6抗生素合成调控基因的克隆及功能分析

作者：肖琦扬州大学

学位级别：硕士

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) FD6分离自福建省闽侯青口青菜根围,对番茄灰霉病和桃褐腐病具有较好的防病效果。该菌株可以产生多种抑菌物质,如抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG, PHL)、硝吡... 详细信息

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) FD6分离自福建省闽侯青口青菜根围,对番茄灰霉病和桃褐腐病具有较好的防病效果。该菌株可以产生多种抑菌物质,如抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG, PHL)、硝吡咯菌素(Pyrrolnitrin, PRN)和藤黄绿脓菌素(Pyoluterrin, PLT)等。前期的研究已证实这三种抗生素的生物合成受到GacS因子的正调控。RetS (Regulator of exopolysaccharide and type III secretion)是位于细胞膜上的感应激酶,对多种基因的表达都有调控作用。本研究通过PCR法克隆得到FD6菌株中3767 bp的retS基因片段,利用同源重组进行基因缺失,通过功能互补分析retS基因对FD6生防相关性状的影响。结果表明,retS基因缺失后抗生素PRN.2,4-DAPG和PLT的产量比野生型菌株FD6显著升高,分别是野生菌FD6的8.4倍、1.5倍和1.3倍,说明retS负调控抗生素PRN、2,4-DAPG和PLT生物合成。同时,retS基因在转录水平负调控prnA、phlA和pltA基因的转录。本研究还发现retS基因在转录水平负调控小RNA rsmX、rsmY和rsmZ的转录表达。在retS基因和gacS基因双缺失突变菌株中,抗生素PRN、2,4-DAPG和PLT合成量降低、小RNA转录表达及对病原真菌拮抗能力等性状也降低,且与gacS基因单缺失突变体的表型相似,说明retS基因对抗生素PRN、2,4-DAPG和PLT生物合成的调控依赖于Gac/Rsm信号传导途径中的GacS蛋白。此外,还影响菌株FD6生长、游动性、生物膜的形成和定殖能力。以上结果表明,retS是影响FD6菌株生防能力的一个重要因子。通过PCR法还克隆得到FD6菌株中2496 bp的vfr (Virulence factor regulator)基因,同样方法构建vfr基囚内缺失突变菌株FD6Avfr和互补菌株FD6-vfr,分析vfr基因对FD6生防相关性状的影响。结果表明,vfr基因缺失后抗生素PRN、2,4-DAPG和PLT的合成量都显著升高,分别是野生型菌株FD6的2.2倍、2.8倍和2.2倍,说明vfr基因也是抗生素生物合成的负调控因子。为了进一步探索vfr基因可能的调控机制,检测了vfr基因在转录水平的影响,实验结果表明,vfr基因对抗生素的调控不依赖于Gac/Rsm,但明显抑制rsmA、fleQ和rpoS的表达。同时,vfr基因在转录水平负调控prnA、phlA和pltA基因的转录。此外,vfr基因还影响菌株FD6生长、游动性、蛋白酶、生物膜的形成和定殖能力。以上结果表明,vfr是影响FD6菌株生防能力的一个重要因子。

关键词：荧光假单胞菌抗生素 Gac/Rsm RetS Vfr 调控因子

Pseudomonas protegens FD6次生代谢物分离鉴定及其发酵条件优化

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Pseudomonas protegens FD6次生代谢物分离鉴定及其发酵条件优化

作者：熊正文扬州大学

学位级别：硕士

随着化学农药产生的抗药性及农药残留问题日益严重,利用有益微生物防治病害已经成为一种较为理想的绿色防控措施。前期研究结果表明,Pseudomonasprotegens FD6可以产生2,4-二乙酰基间苯三酚、藤黄绿脓菌素、硝吡咯菌素、Pyochelin、Pyov... 详细信息

随着化学农药产生的抗药性及农药残留问题日益严重,利用有益微生物防治病害已经成为一种较为理想的绿色防控措施。前期研究结果表明,Pseudomonasprotegens FD6可以产生2,4-二乙酰基间苯三酚、藤黄绿脓菌素、硝吡咯菌素、Pyochelin、Pyoverdine、Orfamide等8个次生代谢产物,对番茄灰霉病具有良好的防治效果,此外,还可以产生3个未知的次生代谢产物,为了深入挖掘菌株FD6产生哪些次生代谢产物,本研究对FD6发酵液粗提物进行了分离纯化,并对获得的化合物进行结构鉴定。次生代谢物的产生不仅受菌株本身的影响,往往还受到很多因素的影响,如碳源、氮源、温度、微量元素等。为提高菌株FD6的抑菌活性,本研究通过单因素试验和响应面试验对发酵条件进行优化,以期显著提高FD6的抑菌活性。具体结果如下:1、本研究首先采用摇瓶发酵,从KB、LB、TSB、DMB、PB、Landy这六种培养中,筛选确定KB作为菌株FD6的发酵最佳培养基。相较于其它五种培养基,KB发酵代谢物产量最高,可达500 μg/mL,是PB产物量的2倍、是Landy产物量的8倍。1H-NMR谱显示,KB发酵粗浸膏无论是高场区还是低场区的氢信号都比较丰富。2、以KB为发酵培养基,利用发酵罐发酵100 L,发酵液经离心、乙酸乙酯萃取三次、减压旋蒸去除有机溶剂,共得到16 g粗浸膏。粗浸膏经正相硅胶柱层析分离后共得到20个组分,本论文使用LC-MS及TLC选取其中的5个组分分析,综合采用正相、反相柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析及高效液相色谱对这5个组分继续进行分离纯化,结果分离得到两个化合物,经LC-MS及核磁共振谱等方法鉴定化合物 1 为邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP),化合物 2 为 Methyl 2-(2-hydroxyphenyl)-4-thiazole-carboxylate。3、以KB为基础培养基,通过单因素试验和响应面试验对菌株FD6进行培养基及培养条件优化,结果表明,菌株FD6发酵最优培养基及培养条件为:甘油5‰,精氨酸 1.98%,K2HPO4 1.5‰,MgSO4·7H2O 1.5‰;最适 pH 为 6.97,最适发酵温度为 24.12℃,振荡培养60 h。优化后菌株FD6无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑制率较优化前提高近1倍。发酵粗提物中含有环脂肽类化合物orfamide A;粗提物较为耐热,但是对紫外线照射敏感。以上结果说明,*** FD6在KB培养基中次生代谢产物更为丰富,从菌株FD6发酵粗提物中鉴定到2个化合物。优化培养基及培养条件可使其无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑制率提高近1倍,为提高生防细菌FD6的防病效果提供发酵条件。

关键词： Pseudomonas protegens Botrytis cinerea 次生代谢产物分离纯化结构鉴定发酵条件优化

拮抗细菌JY1-5的种类鉴定及其防病机制研究

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拮抗细菌JY1-5的种类鉴定及其防病机制研究

作者：何玲玲扬州大学

学位级别：硕士

番茄灰霉病是棚室番茄栽培中的重要病害之一,对番茄生产造成了很大危害。本实验前期从江苏江阴萝卜根际土壤中分离到一株拮抗细菌JY1-5,其能够抑制番茄灰霉病菌的生长,同时对多种植物病原真菌有较好的拮抗作用。为进一步研究和利用该生... 详细信息

番茄灰霉病是棚室番茄栽培中的重要病害之一,对番茄生产造成了很大危害。本实验前期从江苏江阴萝卜根际土壤中分离到一株拮抗细菌JY1-5,其能够抑制番茄灰霉病菌的生长,同时对多种植物病原真菌有较好的拮抗作用。为进一步研究和利用该生防细菌,本文测定了该细菌在棚室栽培中对番茄灰霉病的防病效果,对JY1-5的分类地位、抗菌物质产生培养条件、抗菌物质提取及鉴定进行了初步研究。2016、2017连续两年在蒋王农业观光园番茄温室大棚进行防病接种实验,结果表明JY1-5对番茄灰霉病防效均在32%以上,且防病效果明显高于药剂腐霉利。经16SrRNA基因序列分析及相关生理生化特征检测,菌株JY1-5初步鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。JY1-5在TSB与LB培养基中生长缓慢,培养72hOD600分别为0.30、0.29;其次为Glucose-Starch-CaCO3(GSC)、Landy、KatznelsonandLochhead(KL)、PDB 培养基,培养72 h后OD600分别为1.59、1.39、1.37和1.07;在NB培养基中细菌生长最快,培养72 h菌体浓度可达OD600 1.66。培养基NB、PDB、KL、GSC培养后,菌体抗菌物质有较高的抑菌活性,抑菌率分别为84.7%、85.2%、80.5%和76.1%。培养基KL、Landy、PDB培养滤液有较高抑菌活性,抑菌率分别为85.9%、81.9%和88.6%,其他培养基显示较弱的抑菌活性甚至没有抑菌活性。使用KL和PDB培养细菌时,培养滤液和菌体提取物均具有较强抑菌活性,但菌体抗菌物质抑菌活性明显高于培养滤液。本文选择KL培养基筛选抗菌物质产生的最佳培养时间,结果显示,培养36h以内,细菌浓度、培养滤液与菌体抗菌物质的抑菌活性均呈上升趋势,在36 h达到最大值,之后随着时间的推移逐渐呈下降趋势。菌体中提取的抗菌物质抑菌谱广,对水稻纹枯病菌、桃褐腐病菌、黄瓜枯萎病菌、稻瘟病菌、小麦全蚀病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、瓜果腐霉病菌、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌及马铃薯疮痂病菌均显示出一定的抑菌效果。在室内番茄果实接种实验中,菌体抗菌物质对灰霉病菌的抑菌率达到80%以上。菌体抗菌物质的基质辅助激光解离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF Mass Spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)数据显示,出现 m/z= 869.50,883.54,897.54,901.54,915.55,929.58,947.53,965.53,979.55 的峰值,其与杀镰菌素(fusaricidin)环状多肽类抗生素分子量相同。根据其二级质谱分析分子量为883.54和897.54化合物,从其断裂方式和离子碎片峰得出与fusaricidins分子结构相似,最终确定分子量m/z 883.54的离子为Fusaricidin A,分子量 m/z 897.54 的离子为 Fusaricidin B。除产生杀镰菌素外,JY1-5还可以产生胞外水解酶,包括纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、解淀粉酶,不产生氢氰酸(HCN)、嗜铁素,不具有解磷固氮作用。上述结果为多粘类芽孢杆菌JY-5在番茄灰霉病防治中的应用提供重要参考价值。

关键词：番茄灰霉病抗菌物质多粘类芽孢杆菌杀镰菌素生物防治

生防菌FD6的鉴定及硝吡咯菌素调控基因克隆与功能分析

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生防菌FD6的鉴定及硝吡咯菌素调控基因克隆与功能分析

作者：常琳扬州大学

学位级别：硕士

拮抗细菌FD6分离自福建闽侯青口青菜根围土壤,该菌株抑菌谱广,可抑制多种植物病原真菌生长,细菌悬浮液可显著抑制番茄灰霉病菌分生孢子萌发,抑制率达99%,离体叶片生物测定结果显示菌株FD6对番茄灰霉病防效达59.7%。经16S rDNA序列比对... 详细信息

拮抗细菌FD6分离自福建闽侯青口青菜根围土壤,该菌株抑菌谱广,可抑制多种植物病原真菌生长,细菌悬浮液可显著抑制番茄灰霉病菌分生孢子萌发,抑制率达99%,离体叶片生物测定结果显示菌株FD6对番茄灰霉病防效达59.7%。经16S rDNA序列比对和相关生理生化性状分析,将FD6菌株鉴定为荧光假单胞菌P. fluorescens。经测定菌株FD6可产生硝吡咯菌素(PRN)、2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)、藤黄绿脓菌素(PLT)、嗜铁素、氢氰酸和蛋白酶等抗菌物质,不产生吩嗪-1-羧酸,其中,硝吡咯菌素可直接抑制番茄灰霉病菌分生孢子萌发和菌丝的生长。双因子调控系统(two-component regulatory system)广泛存在于细菌中,包括感受激酶(Sensor kinase) GacS和反应调控因子(Response regulator) GacA。为明确gacS对细菌FD6生防功能的影响,本论文构建了gacS基因的插入突变菌株FD6-MS及其互补菌株FD6-S。通过比较野生型FD6及其突变体生物学性状,发现突变菌株丧失产硝吡咯菌素、2,4-二乙酰基间苯三酚、藤黄绿脓菌素、HCN及蛋白酶的能力,嗜铁素、生物膜的产生能力也显著下降,但对菌株生长速率影响较小,结果表明,gacS基因对于这些次生物质的产生具有重要的调控作用。此外对番茄灰霉病和桃褐腐病的生物测定实验结果表明,gacS突变菌基本丧失了对这两种病原真菌的抑制作用,病斑直径与对照组接近,互补菌恢复了防病能力,说明gacS基因是生防细菌FD6中一个重要调控元件。为了筛选影响PRN转录与表达的特异性调控因子,本研究以p-半乳糖苷酶活性为筛选指标,利用Tn5转座子可以在基因组中随机插入突变的方法,建立了FD6突变体库,并筛选到3株β-半乳糖苷酶活性显著变化的突变体,依次是prnA基因、hemK基因和ATP-binding protein内部。在P. fluorescens FD6中,prnA基因为PRN结构基因,与PRN的合成密切相关。缺失互补实验证实prnA基因对于菌株的生长速率和对病原菌的拮抗能力没有影响,β-半乳糖苷酶活性变化显示,prnA在转录水平上负调控PRN产生,可能该基因对PRN有反馈调节作用。

关键词：硝吡咯菌素假单胞菌作用机制灰葡萄孢

甘蓝黑腐病菌Xanthomonas campestris pv. campestris topoIB基因的克隆及功能分析

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甘蓝黑腐病菌Xanthomonas campestris pv. campestris topoIB基因...

作者：张迎扬州大学

学位级别：硕士

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris ***,Xcc)可以引起十字花科植物的黑腐病,在全世界范围内造成严重的农业减产。同时该细菌也是研究植物与细菌相互作用的模式菌株,具有较高的理论研究和利用价值。DNA拓扑异构酶是催... 详细信息

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris ***,Xcc)可以引起十字花科植物的黑腐病,在全世界范围内造成严重的农业减产。同时该细菌也是研究植物与细菌相互作用的模式菌株,具有较高的理论研究和利用价值。DNA拓扑异构酶是催化DNA拓扑学异构体相互转变酶的总称,是细胞中一类重要的酶,能够调节DNA的拓扑结构,因而在细胞的DNA复制、重组和转录过程中起关键作用。但有关植物病原细菌中拓扑异构酶功能研究,目前尚未见文献报道。本实验以Xcc 8004中Xc034基因,预测编码的TopoIB蛋白作为研究对象,通过生物信息学对TopoIB蛋白的理化性质进行初步分析,结果表明TopoIB蛋白含有核定位信号和信号肽,无跨膜结构域。RT-PCR实验表明,topoIB基因可以表达,但表达量较低。构建亚细胞定位载体p1305-GFP-TopoIB,在农杆菌介导烟草叶片中瞬时表达,发现p1305-GFP-TopoIB融合蛋白定位于烟草叶片的细胞核上。通过SOE-PCR法构建topoIB基因的突变体△TopoIB,检测结果显示△TopoIB菌株无论是在植物体内还是培养基中与野生型Xc8004的生长状况无明显差异,且胞外多糖产量基本相同,其他常见致病因子如胞外蛋白酶、胞外纤维素酶和胞外淀粉酶产量也与野生型Xc 8004基本一致。将野生型Xcc 8004和△TopoIB突变体接种于拟南芥和甘蓝(京华一号),结果显示△TopoIB菌株致病性并没有受到影响。构建topoIB基因的原核表达载体并进行高效表达,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21菌株中成功表达了与His标签融合的TopoIB蛋白,分子量大小约为43 kDa,利用镍柱在200mM咪唑洗脱下可以得到纯化蛋白,浓度为788ng/μL,表明topoIB基因的体外诱导表达成功。体外酶活检测结果显示,394 ng的TopoIB重组蛋白反应1 min就可以将超螺旋DNA解旋,反应15min可以完全解旋,表明TopoIB蛋白具有拓扑异构酶活性。综上所述,本实验明确了Xc 8004中的topoIB基因可以低水平表达,且topoIB基因编码产物作用于植物细胞核内,topoIB基因的缺失对其菌株自身的胞外多糖、胞外酶和致病性无明显影响,体外原核表达分析显示,通过异源表达纯化获得的重组蛋白具有较高的解旋活性,为今后病原细菌中topoIB基因的研究提供重要理论依据。

关键词： Xcc 8004 topoIB 缺失突变亚细胞定位原核表达

Pseudomonas protegens FD6分子伴侣Hfq的功能研究及其对番茄青枯病防病能力的影响

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Pseudomonas protegens FD6分子伴侣Hfq的功能研究及其对番茄青枯...

作者：邢成林扬州大学

学位级别：硕士

番茄青枯病是一种由茄劳尔氏菌（Ralstonia,solanacearum）引起的番茄上重要细菌病害。生防假单胞菌（Pseudomonas protegens）FD6可产生多种次生代谢产物,包括抗生素2,4-DAPG、PLT、orfamide、蛋白酶以及嗜铁素等,对番茄灰霉病和桃褐... 详细信息

番茄青枯病是一种由茄劳尔氏菌（Ralstonia,solanacearum）引起的番茄上重要细菌病害。生防假单胞菌（Pseudomonas protegens）FD6可产生多种次生代谢产物,包括抗生素2,4-DAPG、PLT、orfamide、蛋白酶以及嗜铁素等,对番茄灰霉病和桃褐腐病有较好防病作用。为明确FD6对番茄青枯病防病效果,本论文利用平板对峙培养、试管苗实验及盆栽生测实验多种方法证实FD6可有效抑制青枯菌的扩展,在接种病原细菌15 d后防病效果可以达到60%以上,并能显著降低番茄根际和茎基部青枯菌的种群数量。抗生素的产生通常受到多种调控因子的影响,RNA分子伴侣Hfq是一种保守的细菌RNA结合蛋白,该蛋白通过与mRNA或小的调控性非编码RNA（sRNA）结合,对革兰氏阴性细菌的蛋白翻译效率和RNA的衰减具有显著调控作用,是重要的细菌转录后调控因子。不同生防细菌中Hfq对基因调控作用有明显差异,从生防细菌FD6的全基因组序列中搜索到261 bp hfq基因,该基因编码86个氨基酸,并具有一个保守的Hfq结构域,包含Sm1、Sm2两个与RNA结合有关的motif。利用同源重组构建hfq基因突变体Mhfq,RT-PCR验证hfq基因突变不存在极性效应。生物学表型结果显示,hfq突变导致细菌生长速率显著降低,运动能力下降,蛋白酶、嗜铁素和HCN产量减少,六型分泌系统（T6SS）功能减弱,而生物膜形成能力增强,但hfq突变不影响细菌的抑菌活性及对番茄青枯病的防病效果。我们同时检测了 Hfq对抗生素合成的影响,HPLC数据显示,Hfq不影响orfamide的合成,但Mhfq中PLT产量上调1.5倍,qRT-PCR结果证明,Mhfq中PLT合成基因pltA、pltB、pltC、pltD、pltE的表达量显著上调,说明Hfq在转录水平负调控PLT产生。此外,Mhfq中2,4-DAPG产量显著下降,甚至几乎不产生。qRT-PCR检测发现,hfq突变后2,4-DAPG合成基因phlABC表达量明显升高,而phlD表达水平显著下调,调控基因phlH表达量升高而phlF表达量也显著降低。以上结果说明,Hfq差异性调控这2种抗生素的合成。通过生物信息学手段对2,4-DAPG合成基因簇mRNA的5’非翻译区搜索Hfq结合基序,推定了Hfq可能结合的靶标mRNAphphlH、phlA、phlD。构建Hfq蛋白的原核表达载体,并进行蛋白表达条件的优化,在大肠杆菌中成功表达了融合His标签的13 kDa Hfq蛋白,其中小部分为可溶性蛋白,大部分以包涵体的形式存在。为提高可溶性蛋白的表达量,对蛋白表达条件进行优化,以0.5 mM IPTG、16℃诱导8h为诱导条件,利用镍亲和填料纯化Hfq蛋白,经过200 mM咪唑洗脱后浓缩得到891 ng/μL的纯蛋白。RNA-EMSA实验证实phlA、phlD与Hfq结合能力强,而phlH需要更高浓度的Hfq蛋白与之结合。综上所述,*** FD6中Hfq对抗生素的合成、生物膜形成、嗜铁素和六型分泌系统具有多效调控作用,且Hfq通过结合结构基因phlA、phlD和调节基因phlH mRNA5’非翻译区正调控2,4-DAPG的合成,在Hfq调控抗生素合成过程中是否还有其他sRNA参与还有待进一步深入研究。

关键词： Pseudomonas protegens FD6 生物防治番茄青枯病分子伴侣Hfq 2,4-DAPG PLT