检索结果-南通市图书馆

作者：周懿雯山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.分离人子宫内膜间充质干细胞(human endometrial mesenchymal stem cell,hEMSCs),并对hEMSCs、人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)、人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)进行间充质干细胞鉴定。2.摸索2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针最适合浓度;3.研究HO 干预对hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法:***、hADSCs、hUCMSCs的获取及鉴定:采用酶消法自子宫内膜组织提取hEMSCs。hADSCs、hUCMSCs由合作单位山西大学生物医学研究院提供。观察三种细胞形态,采用流式细胞仪检测三种细胞表面特异性抗原。检测三种细胞成脂、成骨及成软骨细胞的分化能力。2.采用第四代hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs,分别加入不同浓度DCFH-DA探针孵育30min,采用流式细胞仪测定细胞绿色荧光百分比,确定最佳浓度。3.采用第四代hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs,分别加入不同浓度HO作为实验组,采用DCF试剂盒中DCFH-DA探针孵育30min,共干预1h后采用显微镜观察细胞形态,采用流式细胞仪测定细胞绿色荧光发光强度,即ROS表达情况。4.采用graphpad prism 8.0软件进行数据处理。所有数据结果均采用均数±标准差(?±)表示。两组间差异比较采用单因素方差分析,P平。实验结果显示:在hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs三种细胞实验中,随着浓度的升高,荧光强度百分比逐渐升高,于250μM浓度下到达平台期。3.分别经0、50、100、200、300μM HO干预1h后:hEMSCs、hUCMSCs两种细胞ROS含量均随着浓度的升高逐渐增加,300μM HO干预后明显增加;hADSCs在不同浓度HO干预后,ROS表达无明显变化。表明hADSCs受HO影响小,耐受能力较强,可能与抗氧化能力有关。结论:1.成功分离、培养hEMSCs,并对hEMSCs、hADSCs、hUCMSCs进行了鉴定,三种细胞形态正常,符合MSCs表面特异性抗原标准,具有多向分化能力;2.确定250μM DCFH-DA荧光探针浓度作为标准浓度进行后续实验;3.比较hADSCs、hUCMSCs、hEMSCs三种细胞,hADSCs受HO影响最小,hEMSCs次之,hUCMSCs反应最为强烈。以300μM HO浓度进行干预,可明显提高hUCMSCs、hEMSCs的ROS水平。

关键词：人子宫内膜间充质干细胞人脂肪间充质干细胞人脐带间充质干细胞活性氧氧化应激

基于综合生物信息学的卵巢癌预后模型建立及NOTCH2NLA通过上皮间质转化介导卵巢癌进展的分子机制研究

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基于综合生物信息学的卵巢癌预后模型建立及NOTCH2NLA通过上皮间...

作者：郭文迪山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过生物信息学分析,探求并筛选影响卵巢癌患者预后的差异表达基因,构建影响卵巢癌预后的基因模型。细胞实验验证NOTCH2NLA表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响,探索NOTCH2NLA介导卵巢癌进展的潜在分子机制,进而为卵巢癌的靶... 详细信息

目的:本实验通过生物信息学分析,探求并筛选影响卵巢癌患者预后的差异表达基因,构建影响卵巢癌预后的基因模型。细胞实验验证NOTCH2NLA表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响,探索NOTCH2NLA介导卵巢癌进展的潜在分子机制,进而为卵巢癌的靶向治疗及预后评估提供新的生物学理论依据。方法:1.从TCGA、GTEx数据库中获取卵巢癌及正常卵巢组织样本的m RNA测序数据集和临床信息筛选出DEGs,通过生存分析构建卵巢癌患者基因预后模型;2.通过细胞增殖、划痕、侵袭实验,检测NOTCH2NLA对卵巢癌A2780-GFP细胞生物学行为的影响;3.通过Western blot实验,检测NOTCH2NLA对EMT相关蛋白(E-cadherin、Vimentin和SNAI2)表达水平的影响。结果:1.卵巢癌预后分析显示,PI3、CCDC80、IL27RA、HERC1、NOTCH2NLA是预后不利因素,HMGB3、CXCL11、CXCL9为有利预后因素。2.细胞实验证实,沉默NOTCH2NLA表达可抑制A2780-GFP细胞的增殖、迁移和侵袭能力。*** blot实验证实,NOTCH2NLA在卵巢癌中的表达与E-cadherin呈负相关,与Vimentin、SNAI2呈正相关。结论:1.综合生物信息学构建的8基因模型可较有效评估卵巢癌预后。2.沉默NOTCH2NLA表达可抑制卵巢癌细胞的恶性生物学行为。***2NLA对EMT相关蛋白的调控是卵巢癌进展的关键因素。

关键词：卵巢癌综合生物信息学分析上皮间质转化预后

HOXA11介导PI3K/Akt信号通路在盆腔器官脱垂韧带组织中的表达及相关性研究

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HOXA11介导PI3K/Akt信号通路在盆腔器官脱垂韧带组织中的表达及相...

作者：申思晋山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过研究HOXA11、Akt、p-Akt、MMP-2在盆腔器官脱垂（POP）韧带组织中的表达及相关性,探索HOXA11与PI3K/Akt信号通路在POP发生、发展中作用,阐明POP的发生、发展可能与HOXA11介导PI3K/Akt信号通路调节盆底组织细胞外基质（Ex... 详细信息

目的:本实验通过研究HOXA11、Akt、p-Akt、MMP-2在盆腔器官脱垂（POP）韧带组织中的表达及相关性,探索HOXA11与PI3K/Akt信号通路在POP发生、发展中作用,阐明POP的发生、发展可能与HOXA11介导PI3K/Akt信号通路调节盆底组织细胞外基质（Extracellular Matrix,ECM）有关,为POP的临床防治提供新的分子生物学方向。方法:选择山西医科大学第二医院妇科2019年10月到2020年12月间收治并行腹腔镜下子宫全切+阴道骶骨固定术的20例POP（III-VI）患者为POP组。同时选取同时期在本院住院因子宫良性病变行经腹或腹腔镜下子宫全切术的20例非POP患者为对照组。所选患者均无恶性肿瘤史、无子宫内膜异位症史、既往无盆底脱垂疾病及盆底手术史、无与激素相关疾病史、手术前3个无激素用药史。经伦理小组审查、批准合格,患者及家属同意后术中取患者骶韧带组织。通过HE染色及Masson染色,确定符合韧带组织病理特征,通过免疫组织化学检测骶韧带组织中HOXA11、Akt、p-Akt、MMP-2表达情况;采用蛋白免疫印迹法（Western-Blot,WB）检测HOXA11、Akt、p-Akt、MMP-2蛋白表达水平。结果:***染色:可见胶原纤维于Masson特殊染色下呈蓝绿色,肌纤维于Masson特殊染色下呈红色。子宫骶韧带中镜下观察,对照组中可见大量呈网状交叉、规则排列的胶原纤维及规则排列平滑肌细胞,POP组中胶原纤维明显减少,分布紊乱、结构疏松。2.免疫组织化学:骶韧带组织中HOXA11、MMP-2、Akt、p-Akt主要表达于细胞核;POP组较对照组的HOXA11表达明显减弱,MMP-2、p-Akt的表达及p-Akt/Akt比例明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,Akt表达水平无显著差异（P＞0.05）;HOXA11与MMP-2、p-Akt表达呈显著负相关（P＜0.05）。3.蛋白印迹法:对比对照组,POP组骶韧带组织中HOXA11表达水平显著降低,MMP-2、p-Akt表达水平显著增高,p-Akt/Akt比例明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,Akt表达水平无显著差异（P＞0.05）;HOXA11与MMP-2、p-Akt表达呈显著负相关（P＜0.05）。结论:***11表达水平降低与盆腔器官脱垂的发生密切相关。2.人体内HOXA11表达水平降低介导PI3K/Akt信号通路共同作用于盆腔器官脱垂的发生。***患者子宫骶韧带组织中存在Akt的磷酸化激活。

关键词：盆底器官脱垂骶韧带 HOXA11 PI3K/Akt信号通路

miR-125b对宫颈癌SiHa细胞有氧糖酵解相关蛋白PKM2的影响

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miR-125b对宫颈癌SiHa细胞有氧糖酵解相关蛋白PKM2的影响

作者：张瑜山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1、明确与正常上皮相比宫颈癌SiHa细胞中miR-125b以及PKM2的表达差异。2、探讨宫颈癌SiHa细胞中miR-125b表达的改变对PKM2表达的影响。方法:1、常规培养宫颈癌Si Ha细胞及正常上皮细胞(293T细胞),其中293T细胞作为阴性对照组(N组)... 详细信息

目的:1、明确与正常上皮相比宫颈癌SiHa细胞中miR-125b以及PKM2的表达差异。2、探讨宫颈癌SiHa细胞中miR-125b表达的改变对PKM2表达的影响。方法:1、常规培养宫颈癌Si Ha细胞及正常上皮细胞(293T细胞),其中293T细胞作为阴性对照组(N组)。将Si Ha细胞进行细胞转染,分3个组:(1)实验组:miR-125b mimics(M组)、miR-125b inhibitor(I组);(2)阴性对照组:miR-125b mimics negative control(MNC组)、mi R-125b inhibitor negative control(INC组);(3)空白对照组(B组):未进行转染。2、qRT-PCR检测6小组细胞中miR-125b的含量。3、免疫荧光及Western Blot检测6小组细胞中PKM2蛋白的表达。结果:1、SiHa细胞中miR-125b的表达水平相对于阴性对照组293T细胞(N组)中的miR-125b下调(0.820±0.052)倍,P平(0.400±0.033)高于抑制物阴性对照组的PKM2蛋白表达水平(0.340±0.042),P<0.05。结论:1、宫颈癌SiHa细胞中miR-125b低于正常上皮细胞。2、宫颈癌SiHa细胞中PKM2高于正常上皮细胞。3、过表达miR-125b可能会抑制宫颈癌SiHa细胞PKM2的表达,从而抑制其糖酵解,抑制肿瘤的生长;敲低mi R-125b可能会增加宫颈癌SiHa细胞PKM2的表达,从而增强其糖酵解作用,促进肿瘤的生长。

关键词：宫颈癌微小RNA-125b M2型丙酮酸激酶

BRAP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及临床意义

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BRAP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及临床意义

作者：赵楠楠山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.检测BRAP(BRCA1 associated protein)在慢性宫颈炎(chronic cervicitis)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈鳞癌(Cervical squamous cell carcinoma,CSCC)中的表达情况。2.结合临床病理特征资料,分析BRAP的表达与临床病理特征的关系,为宫颈癌的临床诊断、治疗及判断预后提供理论依据。方法:1.实验标本取自2016年9月-2017年9月在我院(山西医科大学第二医院)妇产科行阴道镜活检、宫颈锥切术、子宫全切术的90例宫颈组织标本。经过我院病理医师检查证实,LSIL、HSIL、CSCC各30例,根据国际妇产科联合会(FIGO)2009修订的宫颈癌临床分期:I期11例,IIa期19例;宫颈癌组织学分级:高中分化16例,低分化14例;有淋巴结转移5例,无淋巴结转移25例;患者年龄28-69岁,平均年龄48岁,其中0.05);在肿瘤直径大小≤4cm和>4cm组中表达量为(3.01±0.23;3.51±0.22),差异具有统计学意义(P平呈现逐渐增高的趋势。***的表达与肿瘤直径大小、宫颈癌组织分化程度、临床分期、是否淋巴结转移等临床病理参数相关,提示BRAP可能在宫颈癌的发生、发展、浸润及转移过程中起着不可忽视的重要作用。3.检测BRAP的表达可作为宫颈癌前病变及宫颈癌的分子生物学指标,为宫颈癌的诊断、分子靶向治疗及预后判断提供科学的理论依据。

关键词：宫颈上皮内瘤变宫颈鳞癌乳腺癌易感基因相关蛋白

抗氧化酶MnSOD、GPX1介导转录因子Nrf2在盆腔器官脱垂子宫韧带组织中的表达及意义

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抗氧化酶MnSOD、GPX1介导转录因子Nrf2在盆腔器官脱垂子宫韧带组...

作者：任洁山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过研究抗氧化酶MnSOD、GPX1及转录因子Nrf2在盆腔器官脱垂（POP）子宫韧带组织中的表达情况,并进一步探索Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路在POP的发生发展过程中是否发挥了一定的作用,同时分析POP氧化应激机制的相关影响因素,为... 详细信息

目的:本实验通过研究抗氧化酶MnSOD、GPX1及转录因子Nrf2在盆腔器官脱垂（POP）子宫韧带组织中的表达情况,并进一步探索Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路在POP的发生发展过程中是否发挥了一定的作用,同时分析POP氧化应激机制的相关影响因素,为POP的治疗提供新的靶点及思路。方法:本研究选取山西医科大学第二医院妇产科2018年10月至2019年12月收治的22例POP（III-IV）患者作为POP组,手术方式采用腹腔镜下子宫全切术+阴道骶骨固定术;另选择同期在该院妇产科住院的非POP患者26例作对照组,手术方式采用经腹或腹腔镜子宫全切术。所有患者近3个月均无全身激素用药史;既往无尿失禁或阴式等盆底手术史;无恶性肿瘤、激素相关疾病的患者、糖尿病、哮喘或心血管疾病等相关病史。获伦理讨论小组批准及患者同意签字后,术中均取相应组织标本。主韧带组织取靠近子宫动脉下方约1.0cm;骶韧带取韧带与宫颈连接处以外约1.0cm。采用HE染色法及特殊染色（Masson染色和醛品红染色）观察韧带的组织学特征;免疫组织化学法检测MnSOD、GPX1的表达情况,蛋白质免疫印迹法（western blot,WB）从分子水平检测MnSOD、GPX1及Nrf2的表达水平。结果:1.各组HE及特殊染色结果示:对照组子宫主韧带和骶韧带中可见大量纤维结缔组织,其中以胶原纤维和弹性纤维为主,组织结构致密、排列有序;POP组患者子宫韧带中纤维结缔组织明显减少,并且结构疏松、紊乱,其中存在胶原纤维和弹性纤维的细碎及断裂,脂肪组织的增多。2.免疫组化染色结果显示:抗氧化酶MnSOD和GPX1均主要表达于细胞质;在子宫主韧带和骶韧带中,POP组较对照组中MnSOD和GPX1的表达水平显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;且二者的表达呈正相关（P＜0.01）。***检测结果显示:在子宫主韧带和骶韧带中,POP组较对照组中抗氧化酶MnSOD、GPX1及转录因子Nrf2的表达水平均明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;二者与Nrf2的表达均呈正相关（P＜0.01）;MnSOD、GPX1的表达水平与POP组患者的年龄、产次呈负相关（P＜0.01）,与孕次和BMI无相关关系。结论:1.氧化应激机制与POP的发生发展密切相关。2.转录因子Nrf2可能通过Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路参与POP中氧化应激机制的调控。3.年龄与产次是POP氧化应激损伤的相关危险因素。

关键词：盆腔器官脱垂子宫韧带组织氧化应激抗氧化酶

hEMSC、hADSC及hUCMSC细胞外基质对H2O2损伤成纤维细胞的作用研究

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hEMSC、hADSC及hUCMSC细胞外基质对H2O2损伤成纤维细胞的作用研究

作者：韩巧玲山西医科大学

学位级别：硕士

目的1.利用hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基获取外泌体,并鉴定比较;2.建立合适的成纤维细胞氧化应激模型;3.为了研究hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基对氧化应激损伤的成纤维细胞的作用。方法***由酶消子宫内膜组织获取并培养鉴定,... 详细信息

目的1.利用hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基获取外泌体,并鉴定比较;2.建立合适的成纤维细胞氧化应激模型;3.为了研究hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基对氧化应激损伤的成纤维细胞的作用。方法***由酶消子宫内膜组织获取并培养鉴定,培养扩增hADSC及hUCMSC,进而获取他们的条件培养基,使用外泌体提取试剂盒与超高速差速离心法两种方式提取hEMSC源性外泌体以及超高速差速离心法提取hADSC及hUCMSC间充质干细胞源性外泌体并通过NTA分析粒径大小及浓度、TEM镜下观察外泌体形态鉴定外泌体,并通过BCA测定蛋白浓度等方式比较各组外泌体的蛋白含量;2.为建立合适的氧化应激模型,先确定合适的DCFH-DA探针的浓度;通过不同浓度的HO溶液刺激成纤维细胞后流式细胞术测定各组成纤维细胞的ROS荧光强度;并对刺激后的成纤维细胞进行活/死细胞染色,确定合适的HO溶液浓度;3.确定以100μM HO溶液刺激成纤维细胞1小时为合适的氧化应激模型;用无血清DMEM基础培养基、hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基对无损伤或损伤后的成纤维细胞进行孵育,24小时后流式细胞术测定各组成纤维细胞的ROS荧光强度。4.统计学方法:采用SPSS 22.0软件分析原始数据,所有数据以均数+标准差形式描述,采用单因素方差分析组间差异,实验组与对照组的差异显著性采用两独立样本t检验进行描述。结果1.成功分离hEMSC、hADSC及hUCMSC源性外泌体,NTA测定的外泌体大小均在100-150nm之间,TEM镜下观察显示外泌体呈双膜样囊泡结构,有典型的茶托样;BCA蛋白浓度测定显示超高速离心法hEMSC源性外泌体蛋白浓度最高(P平相对于空白对照组是升高的,经过24小时各组基础培养液或条件培养基的孵育发现,用无血清DMEM培养液孵育降低了受损成纤维细胞的ROS荧光强度,但是hEMSC、hADSC及hUCMSC条件培养基孵育增加了成纤维细胞ROS的水平,以hUCMSC条件培养基为显著差异。结论经过hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基孵育HO刺激成纤维细胞后,受损的成纤维细胞ROS荧光强度大幅度的增加,说明hEMSC、hADSC及hUCMSC的条件培养基加剧了成纤维细胞的氧化应激损伤。

关键词：间充质干细胞外泌体条件培养基氧化应激活性氧

ROS通过Nrf2在盆腔器官脱垂韧带组织中的表达及相关性研究

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ROS通过Nrf2在盆腔器官脱垂韧带组织中的表达及相关性研究

作者：黄玲玲山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过研究氧化应激反应相关指标在盆腔器官脱垂患者宫旁韧带组织的表达情况,阐明盆腔器官脱垂患者宫旁韧带组织中存在氧化水平的升高,探索氧化应激反应在盆腔器官脱垂疾病中的发病机制,进一步为盆底障碍性疾病的防治提供新的... 详细信息

目的:本实验通过研究氧化应激反应相关指标在盆腔器官脱垂患者宫旁韧带组织的表达情况,阐明盆腔器官脱垂患者宫旁韧带组织中存在氧化水平的升高,探索氧化应激反应在盆腔器官脱垂疾病中的发病机制,进一步为盆底障碍性疾病的防治提供新的治疗思路。方法:本研究选取山西医科大学第二医院妇产科2018年10月至2019年12月收治的22例因盆腔器官脱垂（POP III-IV）行腹腔镜下子宫全切术+阴道骶骨固定术的患者为实验组（POP组）。另选择同期在该院妇产科因妇科良性疾病而非盆腔器官脱垂行经腹或腹腔镜子宫全切术的26例患者为对照组（非POP组）。收集患者的子宫主韧带及骶韧带组织,首先通过Masson染色及醛品红染色观察组织病理学特征,初步确定所取部位为宫旁韧带组织;然后采用免疫组织化学法检测患者韧带组织中相应氧化指标:8-OHdG、4-HNE的表达情况,进一步采用Western-Blot检测4-HNE及Nrf2的表达情况。结果:1.醛品红染色及Masson染色观察组织病理学特征,进一步确定取材部位:在醛品红染色中,弹性蛋白呈现紫色至深紫色,与非POP患者相比,POP患者组织中弹性蛋白分布疏松断裂,排列杂乱无章,整体染色较浅淡。Masson染色中,胶原纤维呈现红色,而肌纤维被染为蓝绿色,在非POP患者组织中,胶原纤维排列整齐连续呈波浪状,而在POP患者组织中,其数量少、排列无规则且断裂呈碎片状,整体染色较浅。2.采取免疫组织化学方法检测非POP组及POP组中氧化反应相关指标的表达,结果显示:在POP组中骶韧带与主韧带中8-OHdG及4-HNE的阳性表达显著均高于非POP组,二者的表达呈正相关,两组内差异无统计学差异。3.采用蛋白印迹法（Western-blot）检测结果显示:4-HNE在非POP组子宫主韧带中与骶韧带的相对表达水平低于POP组,Nrf2在非POP组子宫主韧带与骶韧带中的相对表达水平高于POP组,二者的表达呈负相关。结论:***患者主韧带及骶韧带组织中8-OHdG、4-HNE呈高表达,且呈正相关,提示氧化应激反应参与了在盆腔器官脱垂的发生发展。2.氧化水平升高使Nrf2表达下降致相关抗氧化通路Keap1-Nrf2/ARE激活障碍,为POP的发生发展提供分子生物学机制。

关键词：盆腔器官脱垂氧化应激主韧带骶韧带

HOXA11基因介导Wnt/β-catenin信号通路在女性盆腔器官脱垂患者骶韧带中的表达及相关性研究

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HOXA11基因介导Wnt/β-catenin信号通路在女性盆腔器官脱垂患者骶...

作者：付利梅山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究通过测定盆腔器官脱垂患者骶韧带组织中HOXA11基因与Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白Wnt16、β-catenin及其下游基因MMP2的表达及相关性,初步探讨HOXA11基因及Wnt/β-catenin信号通路在POP发病机制中的作用,从而为POP的预... 详细信息

目的:本研究通过测定盆腔器官脱垂患者骶韧带组织中HOXA11基因与Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白Wnt16、β-catenin及其下游基因MMP2的表达及相关性,初步探讨HOXA11基因及Wnt/β-catenin信号通路在POP发病机制中的作用,从而为POP的预防及治疗提供新的靶点及思路。方法:选取山西医科大学第二医院妇科2019年10月至2020年10月收治的20例因盆腔器官脱垂(POP III-IV)行腹腔镜下子宫全切术+阴道骶骨固定术术中取得的骶韧带组织作为POP组,另选取同期在该院因子宫良性病变行经腹或腹腔镜下子宫全切术的骶韧带组织20例为对照组。将收集的子宫骶韧带组织首先通过HE染色法观察韧带的组织学特征;通过Masson染色法观察骶韧带中胶原纤维含量、形态、排列特点;采用免疫组织化学法检测HOXA11、Wnt16、β-catenin、MMP2在骶韧带中分布位置及表达;采用Western-blot检测HOXA11、Wnt16、β-catenin、MMP2在骶韧带中的表达情况;在POP组中,分析HOXA11与各检测指标的相关性。结果:***染色结果对照组子宫骶韧带组织可见大量纤维结缔组织,组织排列致密、呈束状;而POP组纤维结缔组织明显减少,且结构疏松、紊乱,排列无序,其中可见断裂呈片状的纤维组织,成纤维细胞数量较对照组减少。***染色结果Masson染色观察组织病理学特征,特异性染色胶原纤维呈蓝绿色,肌纤维呈红色。在对照组子宫骶韧带组织中,胶原纤维排列整齐连续呈波浪状,而在POP患者子宫骶韧带组织中,胶原纤维数量明显减少、排列无规则且断裂呈碎片状,整体染色较浅。3.免疫组化检测结果通过免疫组化染色观察,在子宫骶韧带组织中,HOXA11、Wnt16、β-catenin在POP组较对照组表达水平降低,然而,MMP2在POP组较对照组中的表达水平显著升高。通过Image-Pro Plus 6.0(IPP 6.0)软件对染色目标蛋白进行半定量分析,结果显示,POP组子宫骶韧带中HOXA11、Wnt16、β-catenin表达量分别为0.000931±0.000163、0.00220±0.00076、0.00109±0.000160,显著低于对照组0.00259±0.000931、0.00485±0.00130、0.00191±0.000439;MMP2表达量为0.00332±0.00122,显著高于对照组0.000719±0.000107,差异均有统计学意义(P=0.000)。***-blot检测结果在子宫骶韧带组织中,POP组HOXA11、Wnt16、β-catenin表达量分别为0.253±0.029、0.298±0.024、0.212±0.0377,显著低于对照组0.319±0.029、0.371±0.045、0.425±0.0689;MMP2表达量为0.674±0.056,显著高于对照组0.290±0.054,差异均有统计学意义(P=0.000)。***11各检测指标相关性分析通过免疫组化半定量结果分析相关性,在POP组中,HOXA11与Wnt16、β-catenin表达均呈正相关,相关系数分别为(r=0.496,r=0.451);HOXA11与MMP2的表达呈负相关,相关系数为(r=-0.686)。通过Western-blot检测结果,进一步验证了在POP组,HOXA11与Wnt16、β-catenin表达呈正相关,与MMP2表达呈负相关,相关系数分别为(r=0.490,r=0.524,r=-0.621)。结论:1.胶原代谢与POP的发生发展密切相关。2.盆腔器官脱垂患者骶韧带组织中,HOXA11与Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白Wnt16、β-catenin表达均降低,POP的发生发展可能与二者表达受抑制有关。***11与Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白表达呈正相关,与MMP2表达呈负相关,可能共同参与了POP的致病过程。

关键词：盆腔器官脱垂 HOXA11基因 Wnt/β-catenin信号通路 MMP2 发病机制

NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病中的作用及相关机制的体内研究

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NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病中的作用及相关机制的体内研究

作者：孙珍山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究利用公共数据库通过生物信息学分析识别卵巢癌中潜在的新型的肿瘤发生和预后的基因,并筛选出危险比最高的基因NOTCH2NLA基因,通过动物模型对NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病及预后中的作用进行验证。方法:采用基因型-组织表达数... 详细信息

目的:本研究利用公共数据库通过生物信息学分析识别卵巢癌中潜在的新型的肿瘤发生和预后的基因,并筛选出危险比最高的基因NOTCH2NLA基因,通过动物模型对NOTCH2NLA基因在卵巢癌发病及预后中的作用进行验证。方法:采用基因型-组织表达数据库、癌症基因组图谱数据库及国际癌症基因组协会获得m RNA测序数据集和临床信息,藉由R语言筛选和识别出可能影响卵巢癌发生和进展的关键基因。对可能影响卵巢癌的基因进行综合生存分析,然后进行内部验证。A2780-GFP细胞分为两组,一组通过将A2780细胞通过NOTCH2NLA的si RNA细胞转染得到NOTCH2NLA沉默细胞,另一组细胞经过阴性对照的si RNA转染得到阴性对照细胞。将NU/NU雌性裸鼠(12只)分成两组,皮下植入含有NOTCH2NLA沉默细胞的无血清培养液为NOTCH2NLA沉默组和皮下植入含有阴性对照细胞的无血清培养液为对照组。观察裸鼠异种移植瘤的形成情况,切除肿瘤组织,并固定、切片,采用HE染色法观察移植瘤的组织学特点,免疫组织化学法测定Ki67、E-cadherin、Vimentin、SNAI2在移植瘤中的分布和表达。在NOTCH2NLA沉默组中,分析NOTCH2NLA与各检测指标的相关性。结果:1.生物信息学分析的结果基于生物信息学分析方法对基因型-组织表达数据库、癌症基因组图谱数据库及国际癌症基因组协会的公共数据进行分析,建立了卵巢癌患者生存预测的八基因模型,包括PI3、CCDC80、IL27RA、HERC1、NOTCH2NLA、HMGB3、CXCL11、CXCL9,其中PI3、CCDC80、IL27RA、HERC1、NOTCH2NLA为不良预后,HMGB3、CXCL11、CXCL9为保护性预后。并从中筛选出危险比最高的基因NOTCH2NLA基因。2.动物模型获取异种移植瘤的结果结果显示异种移植瘤均呈椭球形或不规则形,质实,糟脆;对照组与NOTCH2NLA沉默组相比体积较大,且差异有统计学意义。***的结果对照组与NOTCH2NLA沉默组的异种移植瘤组织都可见大量的肿瘤细胞及癌巢,内可见神经、血管及肌肉浸润,但对照组的坏死面积比NOTCH2NLA沉默组大。4.免疫组织化学法的结果免疫组织化学方法检测发现在NOTCH2NLA沉默组中E-cadherin的表达升高,Vimentin、Ki67和SNAI2在NOTCH2NLA沉默组中的表达低于对照组。免疫组织化学图像结果通过IPP图像分析软件进行半定量分析,对照组平均光密度值:Ki67(0.004949033±0.001742568),Vimentin(0.017516897±0.0089690405),E-cadheri(0.000351671±0.0000825260),SNAI2(0.002890062±0.0007460115),NOTCH2NLA沉默组平均光密度值:Ki67(0.000327524±0.0003223711),Vimentin(0.003964411±0.003981856),E-cadheri(0.008766560±0.001112801),SNAI2(0.000009753±0.000003315)。进行组间比较示:对照组与NOTCH2NLA沉默组之间有统计学差异(P<0.05)。结论:***2NLA基因属于不良预后基因;***2NLA基因在裸鼠体内可促进肿瘤的生长;3.在卵巢癌组织中沉默NOTCH2NLA后E-cadherin的表达上调,Vimentin、Ki67和SNAI2表达下调。

关键词： NOTCH2NLA 卵巢癌生物信息分析预后生物标志物