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基于胶体金免疫层析技术术中快速判断甲状腺乳头状癌淋巴结转移检测方法的建立

基于胶体金免疫层析技术术中快速判断甲状腺乳头状癌淋巴结转移检...

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作者：许利杰安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:2020年全球新增59万甲状腺癌病人,居全球癌症新发病率第九。95%的甲状腺癌恶性程度低,但早期局部淋巴结转移率高达40%-60%。术中快速诊断淋巴结有无癌细胞转移对于准确制定手术范围、彻底清除癌灶以及术后治疗至关重要。当前临床... 详细信息

背景:2020年全球新增59万甲状腺癌病人,居全球癌症新发病率第九。95%的甲状腺癌恶性程度低,但早期局部淋巴结转移率高达40%-60%。术中快速诊断淋巴结有无癌细胞转移对于准确制定手术范围、彻底清除癌灶以及术后治疗至关重要。当前临床上术中检测淋巴结癌细胞转移方式主要为术中冰冻切片,由于术中冰冻切片假阴性率较高(5%-10%)、检测样本数量受限及耗时较长等因素极大地影响了甲状腺癌手术效率,因此临床实践中亟需一种术中快速判断淋巴结有无甲状腺癌细胞转移的方法。方法:胶体金免疫层析检测技术可将纳米技术、胶体金标记、免疫反应以及色层分析等多种检测方法结合在一起,是一种新型固相层析技术。具有检测快速、耗费低、灵敏度高、特异性强等多种优势条件,因此被广泛应用于即时检测。本课题主要致力于建立一种基于胶体金免疫层析技术术中快速客观判断甲状腺癌淋巴结转移的检测方法,主要通过以下几个方面来完成;1.制备检测淋巴结Cyfra21-1含量免疫层析试纸条:本次研究对于胶体金颗粒的制备条件、胶体金颗粒与抗体耦联的最佳PH值及最小抗体用量、胶体金释放速度、Cyfra21-1抗体的筛选及配对等多方面阐述了胶体金快速检测试纸条的制备及优化。2.检测并优化试纸条的性能:通过梯度稀释Cyfra21-1重组蛋白,层析读数仪读取不同浓度时T线及C线的灰度积分并且转化为T/C比值,绘制试纸条的标准曲线,运用Probit模型分析试纸条检测低值极限;运用试纸条检测CK8、CK18、EMA、ESA等上皮细胞标志物,判断试纸条检测特异性;常温下储存试纸条半年,测定检测效能;***21-1检测试纸条在临床样本中的应用:收集临床样本后进行后处理,试纸条检测淋巴结,判定淋巴结转移情况并与术后组织病理学结果相对比;免疫组化测定上述淋巴结中Cyfra21-1表达情况,并与病理学及试纸条检测结果对比。结果:1.合成的胶体金颗粒形态规则,平均直径33.50 nm,胶体金结合Cyfra21-1抗体最佳PH为7.8,最佳抗体浓度为2μg/ml,胶体金颗粒成功结合抗体;2.本次研发的试纸条检测极限值为0.55-1.14 ng/ml,标准曲线方程为:Y=0.003708×X+0.1101;R=0.9800,最快反应时间在12min以内,可常温下保存半年;3.本次研究共应用试纸条检测40枚甲状腺癌术中清扫的淋巴结,与术后组织病理学相比,试纸条灵敏度为100%,特异性为95%,与免疫组化结果相比,试纸条的灵敏度及特异性均为100%。结论:本次研究建立的甲状腺癌淋巴结转移检测方法便携、易于操作、价格低廉、快速、客观、灵敏度高、特异性好,适用于同时检测大批量淋巴结样本,可减轻病人麻醉时间,提高甲状腺癌手术效率,减轻社会疾病负担,临床应用前景广泛。

关键词：胶体金免疫层析甲状腺癌淋巴结转移 Cyfra21-1 即时检测

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IGHG基因家族在泛癌中的预后价值和肿瘤微环境的关系以及在头颈鳞癌中免疫分型的应用和免疫检查点的研究

IGHG基因家族在泛癌中的预后价值和肿瘤微环境的关系以及在头颈鳞...

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作者：吴喆晨安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:免疫球蛋白重链恒定区G(IGHG)家族基因广泛参与人类癌症的生物学功能,尤其是免疫功能。然而,很少有研究全面分析IGHG家族成员在泛癌中的预后以及其和肿瘤微环境(TME)的关系,而在头颈鳞癌中对IGHG家族成员预后及免疫治疗的探索尚未... 详细信息

背景:免疫球蛋白重链恒定区G(IGHG)家族基因广泛参与人类癌症的生物学功能,尤其是免疫功能。然而,很少有研究全面分析IGHG家族成员在泛癌中的预后以及其和肿瘤微环境(TME)的关系,而在头颈鳞癌中对IGHG家族成员预后及免疫治疗的探索尚未展开。目的:研究IGHG家族成员与泛癌预后、肿瘤微环境(TME)和肿瘤免疫功能的关系,并在HNSCC中进一步探索。方法:1.在本项研究中,我们通过UCSC数据库,利用生物信息学全面分析了IGHG基因家族的表达和预后情况。我们评估IGHG基因家族表达量与TME、干细胞评分、肿瘤突变状态之间的潜在关联,也评估了IGHG基因家族表达与免疫细胞、免疫检查点、错配修复(MMR)基因的相关性,并基于GO、KEGG和GSEA富集分析探讨了IGHG基因家族在泛癌进展中可能参与的机制。2.我们对IGHG基因家族在HNSCC中的诊断和预后价值进行了分析,构建诊断模型并进行验证。为了在HNSCC中探讨IGHG基因家族和免疫系统的关系,我们在免疫细胞、免疫检查点、免疫治疗等方面对IGHG基因家族的表达进一步分析,并利用聚类分析对肿瘤样本进行分型,用以研究肿瘤IGHG分型的预后价值和免疫功能差异。我们利用主要成分分析(PCA)构建了一套评分体系:IGHG评分,并对其进行了一些简单验证及药物敏感性分析。3.我们通过实时定量聚合酶链反应(q PCR)、免疫印迹(WB)和免疫组化(IHC)的方法检测IGHG基因家族在HNSCC的表达水平;我们还通过IHC探索了IGHG基因家族和免疫检查点PD-L1的表达关系和IGHG基因家族在免疫治疗中应用的可能性。结果:***基因家族在大部分肿瘤中存在表达差异和肿瘤预后相关;IGHG基因家族与肿瘤微环境、肿瘤突变状态、免疫细胞组分、免疫检查点基因、错配修复基因存在相关性;IGHG表达相关的差异基因在免疫相关的生物过程和代谢活动中高度富集。2.在HNSCC中IGHG基因家族的表达情况是良好的诊断及预后因素,并且我们构建了拥有良好预测能力的诺模图来预测HNSCC的发生;在HNSCC中IGHG基因家族的表达量和免疫细胞组分、免疫检查点基因存在相关性,高表达组拥有更好的免疫治疗效果。3.在HNSCC中,我们构建了两个不同的肿瘤分型:免疫炎症型和免疫荒漠型,并构建IGHG评分对肿瘤样本IGHG综合表达量进行量化;同时发现在低评分的免疫炎症型中患者有着更好的免疫治疗效果及预后,但在高评分组中化疗药物敏感性更高。4.在HNSCC中,利用标本从不同层次对癌及癌旁组织中IGHG基因家族的表达差异进行了验证,通过统计分析,我们还发现在HNSCC中IGHG基因家族与免疫检查点PD-L1相关,其中IGHG1和免疫治疗指标(TPS和CPS)高度相关。结论:***基因家族的表达与肿瘤微环境的状态密切相关,并可能通过多种免疫相关途径影响泛癌的发生及发展。2.在HNSCC中,IGHG基因家族的表达可以诊断肿瘤的发生,并且其的高表达和HNSCC的良好预后相关。3.在HNSCC中,IGHG基因家族的表达和肿瘤免疫分型相关,影响癌症患者的治疗选择,而IGHG1和PD-L1的表达以及免疫治疗指标高度相关,有望成为新的免疫治疗评价指标。

关键词：免疫球蛋白重链恒定区G基因家族免疫治疗泛癌肿瘤微环境头颈鳞状细胞癌

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