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深喉唾液诊断肺结核的多中心，前瞻性研究及其经济成本分析

深喉唾液诊断肺结核的多中心，前瞻性研究及其经济成本分析

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作者：张若禹苏州大学

学位级别：硕士

第一部分:深喉唾液GeneXpert MTB/RIF Ultra检测对肺结核诊断的临床多中心研究目的:通过一项在疑似肺结核患者中开展的诊断试验研究,以支气管肺泡灌洗液(Bronchial lavage fluid,BALF)MGIT液体培养结果为金标准,评价深喉唾液(Deep throa... 详细信息

第一部分:深喉唾液GeneXpert MTB/RIF Ultra检测对肺结核诊断的临床多中心研究目的:通过一项在疑似肺结核患者中开展的诊断试验研究,以支气管肺泡灌洗液(Bronchial lavage fluid,BALF)MGIT液体培养结果为金标准,评价深喉唾液(Deep throat saliva,POS)GeneXpert MTB/RIF Ultra检测诊断肺结核的诊断效能,明确其诊断价值,有望为无痰肺结核患者的及时诊断和治疗提供细菌学依据,以期解决临床工作中结核病患者难以早期细菌学确诊的难题。方法:此次研究是一项前瞻性、多中心、随机性研究,以评估GeneXpert MTB/RIF Ultra(简称Ultra)通过POS样本诊断无痰或少痰型肺结核的能力。通过设计统计了首都医科大学附属北京胸科医院、苏州市第五人民医院、山东省公共卫生临床中心三家医院在2021年4月1日至2022年3月31日期间肺结核病例相关数据进行研究。纳入分析的644例患者全部接受涂片显微镜、分枝杆菌培养和GeneXpert MTB/RIF(简称Xpert)痰液检测。对于涂片和Xpert结果均为阴性的患者,从每个患者身上获取6毫升的POS标本和肺泡灌洗液10ml。结果:纳入的644例患者中,417例(64.3%)患者没有肺结核的检验学证据,其中118例(28.3%)患者最终临床诊断为肺结核,299例(71.7%)患者最终排除诊断为肺结核。在有明确病原学的227例确诊病例中,GeneXpert MTB/RIFUltra对POS样本的总体诊断灵敏度为78.9%(95%可信区间:72.8-83.8),而GeneXpert MTB/RIF对此的诊断灵敏度为56.4%(95%可信区间:49.7-62.9)。所有患者样本中,BALF或POS细菌学检测为阳性的有238例(37.0%),这其中24例(10.1%)患者的BALF样本仅被Ultra检测出。在227例(95.4%)BALF细菌学阳性患者中,通过GeneXpert Ultra和GeneXpert检测POS标本阳性的患者分别为138例(60.1%)和193例(85.0%)。除此之外,分别有5位(2.1%)患者和1位(0.45%)患者仅通过Ultra和Xpert检测POS标本后出现阳性结果,在POS样品中Ultra检测阳性而Xpert检测为阴性的56例,43例(76.8%)被归类为含有微量细菌,表明菌落数的差异是Ultra比Xpert灵敏度提高的主要原因。结论:POS作为肺结核诊断的新型样本,通过Ultra检验病原学确诊肺结核病例的样本比Xpert检测具有较高的灵敏度,主要原因是菌落数的差异。这提示我们POS可能作为未来肺结核诊断的替代样本。第二部分:结核病诊断成本效益分析目的:疑似结核患者基数庞大,带来了极大的社会经济负担和诊断时间成本。虽然现阶段的新型检测方式如Ultra和Xpert相较于结核杆菌培养等传统手段能更加准确、快速诊断肺结核,但是出于经济学与时间成本等方面的考量,我们需要选择出诊断肺结核的最优路径。方法:我们对首都医科大学附属北京胸科医院、苏州市第五人民医院、山东省公共卫生临床中心及成都公共卫生临床中心4家结核病治疗专科医院肺结核相关诊断的检测及操作进行了经济学调查,对肺泡灌洗液培养、肺泡灌洗液Xpert及深喉唾液GeneXpert Ultra检测费用进行了数据收集与比较分析。结果:根据一部分POS及肺泡灌洗液在Ultra及Xpert检测的灵敏度设计了 2条无痰可疑肺结核患者的诊断路径,路径1:完善支气管镜检查,对肺泡灌洗液分别进行培养,Xpert,Xpert Ultra等检查。路径2:先对患者进行POS样本Ultra检测,根据先前研究下POS Ultra检测进行分类,对Ultra检测阴性患者共465例进行支气管镜检测,对肺泡灌洗液分别进行培养,Xpert,Xpert Ultra等检查。所有医院费用最高的路径均为完成POS Ultra检测后行气管镜灌洗液培养、Xpert及Ultra检测;费用最低的路径均为仅完成气管镜灌洗液培养。除了山东省公共卫生临床中心医院路径2以外,所有路径中Ultra检测均比Xpert检测阳性病例平均成本低。所有路径中除了肺泡灌洗液培养检查以外,完成BALF Ultra检测平均费用成本最低。结论:此次研究通过卫生经济学调查分析,发现Ultra在阳性病例人均诊断费用上也有优势,因此期待在不久的未来Ultra将会作为诊断肺结核首选检测之一。

关键词：气管镜灌洗液,肺结核诊断,肺泡灌洗液,成本分析,结核病,临床中心,公共卫生,细菌学,肺结核病,结核病诊断,

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亚临床结核病患者的免疫学特征及其与结核分枝杆菌基因型相关性研究

亚临床结核病患者的免疫学特征及其与结核分枝杆菌基因型相关性研...

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作者：梁尔敏苏州大学

学位级别：硕士

第一部分亚临床患者基本社会学与免疫学特征分析目的:比较亚临床结核病与活动性结核病患者基本社会学、血清学指标、病原学及影像学结果及其临床意义。方法:收集2018年1月至12月期间,苏州大学附属传染病医院收治的380例初治肺结核患者... 详细信息

第一部分亚临床患者基本社会学与免疫学特征分析目的:比较亚临床结核病与活动性结核病患者基本社会学、血清学指标、病原学及影像学结果及其临床意义。方法:收集2018年1月至12月期间,苏州大学附属传染病医院收治的380例初治肺结核患者,根据是否存在结核感染症状将患者分为2组,其中活动性肺结核组:存在结核感染症状的311例患者,亚临床结核病组:无结核感染症状的69例患者,收集两组患者的基本信息、检验结果、微生物学结果及影像学结果,进行统计学分析,然后根据γ-干扰素释放试验检测值将患者分为高值组、低值组,进一步对相关指标进行比较。结果:亚临床结核以年轻群体为主（P＜0.05）;与活动性结核相比,亚临床结核患者确诊为继发性肺结核合并胸膜炎、病灶累及多个肺野、病原学阳性率均更低（P＜0.05）;亚临床结核病原学阳性检测方法中培养比重最大（P＜0.05）;亚临床结核患者的外周血B淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比、血红蛋白、淋巴细胞/中性粒细胞高于活动性结核患者,但NK细胞计数、白细胞计数、中性粒细胞百分比、血小板计数更低（P＜0.05）;两组患者性别、人口属性、病灶是否合并空洞、是否存在合并症、外周血T淋巴细胞、CD4、CD8、CD4/CD8、中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值、γ-干扰素释放试验测定值、γ-干扰素释放试验测定值与CD4/CD8相关性的差异均无统计学意义（P＞0.05）。将亚临床结核与活动性结核根据γ-干扰素释放试验测定值高低各分为2组,与低值组相比,高值组多肺野病灶的比例和病原学阳性率均更高（P＜0.05）,患者外周血白细胞计数、血红蛋白无明显差异（P＜0.05）;四组间患者性别、人口属性、肺部是否存空洞、是否存在合并症,及外周血T淋巴细胞、CD4细胞、CD8细胞、NK细胞、CD4/CD8、中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值、血小板计数、淋巴细胞/中性粒细胞相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:亚临床和活动性结核患者基本社会学、血清学指标、病原学及影像学结果存在不同程度的变化,且亚临床患者体内炎症反应较轻,免疫状态较好,因此可以考虑以培养作为亚临床结核病的主要筛查方式。第二部分苏州地区结核分枝杆菌基因型分布及耐药性目的:通过调查苏州地区结核分枝杆菌基因型分布和耐药性,比较不同基因型患者的临床特征,从而拓展对不同结核分枝杆菌基因型结核病的了解。方法:研究2018年1月至12月苏州大学附属传染病医院收治的380例初治肺结核患者中145例结核分枝杆菌培养阳性的患者,根据结核分枝杆菌培养结合McSpoligotyping分型技术分析其基因型分布、耐药性及基本社会学和临床特征。结果:苏州地区结核分枝杆菌菌株以北京基因型为主,其痰培养药敏结果示丙硫异烟胺耐药性较低（P＜0.05）。北京基因型更易表现结核相关症状,更易存在合并症,培养阳性率和外周血淋巴细胞/中性粒细胞均更高（P＜0.05）。两组患者痰及肺泡灌洗液培养的链霉素异烟肼、利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、对氨基水杨酸、阿米卡星药敏结果,肺泡灌洗液培养的丙硫异烟胺药敏结果,外周血T淋巴细胞、CD4细胞、CD8细胞、B淋巴细胞、NK细胞、CD4/CD8、白细胞计数、中性粒细胞绝对值、中性粒细胞百分比、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比、血红蛋白、血小板计数、IGRAs测定值与CD4/CD8相关性均无统计学意义（P＞0.05）。结论:苏州地区北京基因型菌株的丙硫异烟胺耐药性低于非北京基因型,但北京基因型菌株毒性稍强。第三部分亚临床患者结核分枝杆菌基因型特点及免疫学分析目的:通过比较苏州地区亚临床结核病患者的结核分枝杆菌基因型分布及不同基因型患者免疫学特征的差异,寻找亚临床结核病与结核分枝杆菌基因型之间的关联。方法:测定2018年1月至12月苏州大学附属传染病医院收治的380例初治肺结核患者中,15例结核分枝杆菌培养阳性的亚临床结核病患者的结核分枝杆菌基因型,统计不同基因型患者相关基本信息及其检验结果、微生物学结果和影像学结果,并进行比较。结果:亚临床结核病培养阳性患者基因型以北京基因型为主,北京基因型更易出现多肺野病灶（P＜0.05）;亚临床结核中北京基因型及非北京基因型患者在性别、人口属性、年龄、人口属性,结核病种类、病原学结果、肺部是否空洞、是否存在合并症,痰与肺泡灌洗液的结核分枝杆菌涂片、培养及X-pert结果,外周血T淋巴细胞、CD4细胞、CD8细胞、B淋巴细胞、NK细胞、CD4/CD8、白细胞计数、中性粒细胞绝对值、中性粒细胞百分比、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比、血红蛋白、血小板计数、淋巴细胞绝对值/中性粒细胞绝对值、γ-干扰素释放试验测定值、γ-干扰素释放试验测定值与CD4/CD8相关性上差别均无统计学意义（P＞0.05）。结论:苏州地区亚临床结核患者基因型以北京基因型为主

关键词：肺结核亚临床结核病结核分枝杆菌基因型免疫状态耐药性

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苏州地区非结核分枝杆菌病的流行病学研究及全基因测序的应用

苏州地区非结核分枝杆菌病的流行病学研究及全基因测序的应用

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作者：刘佳苏州大学

学位级别：硕士

目的:通过调查NTM的分离率、菌种分布、耐药情况,再运用全基因测序法分析菌种分布趋势、比较目前传统实验室方法、建立基因进化树、分析共线性,了解各菌株之间亲缘性、变异性、探索相关耐药基因,从而提升NTM病的诊疗水平。方法:回顾性... 详细信息

目的:通过调查NTM的分离率、菌种分布、耐药情况,再运用全基因测序法分析菌种分布趋势、比较目前传统实验室方法、建立基因进化树、分析共线性,了解各菌株之间亲缘性、变异性、探索相关耐药基因,从而提升NTM病的诊疗水平。方法:回顾性选取苏州市第五人民医院近五年分枝杆菌培养阳性的所有标木,了解非结核分枝杆菌培养阳性的分离率。选取确诊为NTM感染患者所留取的菌株,根据分枝杆菌培养结合PCR基因芯片技术法,分析苏州地区致病NTM菌株菌种分布、耐药情况,分析耐药影响因素。并运用全基因测序法,验证分枝杆菌培养结合PCR技术可靠性,了解本地区高发的菌种流行趋势,构建进化树,分析亲缘性、共线性,利用CARD数据库,寻找耐药基因。结果:1、近五年我院非结核分枝杆菌培养阳性菌株逐年增多。2、按基因芯片法共发现6种NTM菌株,胞内分枝杆菌>堪萨斯分枝杆菌>龟/脓肿分枝杆菌。胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌对乙胺丁醇、丙硫异烟胺敏感性较高,而脓肿分枝杆菌呈现广泛耐药性。3、全基因测序法测出有88.06%与分枝杆菌培养法结合PCR技术得出的菌种鉴定结果相同,未发现龟分枝杆菌。近年好发致病菌株均呈上升趋势,胞内分枝杆菌增多明显。构建基因进化树后发现堪萨斯分枝杆菌各菌株间同源性偏高。共线性分析发现菌株间可信度均为1 00,但同一患者的共线范围大。最后初步探索出非结核分枝杆菌耐药相关基因。结论:1、苏州地区NTM病发病率呈上升趋势,略低于全国平均水平。2、致病菌种以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌为主,以胞内分枝杆菌增长明显。乙胺丁醇、丙硫异烟胺敏感菌株偏多。非结核分枝杆菌基本为天然耐药。苏州地区疑似NTM感染者需先行诊断性用药的,可考虑予乙胺丁醇+丙硫异烟胺+克拉霉素联合治疗。3、全基因测序验证了分枝杆菌培养法结合PCR基因芯片技术可靠。本研究提示堪萨斯分枝杆菌可能存在人与人之间的传染性,需后期随访研究进一步验证。共线性分析同源性高的菌株中同一患者体内不同菌株保留了大量的保守区域,考虑内源性复燃。最后探索出的非结核分枝杆菌耐药相关基因为今后科研提供信息。

关键词：非结核分枝杆菌病分离率菌种分布全基因测序基因进化树亲缘性

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