检索结果-南通市图书馆

作者：张锐石河子大学

学位级别：硕士

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)又称牛霉形体,是引起牛群发生多种感染的重要致病性病原体之一。1961年,美国Hale等最早从患乳腺炎的牛乳中分离得到牛支原体,1976年有研究报道,牛支原体与呼吸系统疾病密切相关。2008年国内首次分离得到... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)又称牛霉形体,是引起牛群发生多种感染的重要致病性病原体之一。1961年,美国Hale等最早从患乳腺炎的牛乳中分离得到牛支原体,1976年有研究报道,牛支原体与呼吸系统疾病密切相关。2008年国内首次分离得到牛支原体后,此病在全国范围内逐步蔓延,给我国的养牛业造成了较大的经济损失。牛支原体结构简单,细胞膜外没有细胞壁,大量的脂蛋白聚集在细胞膜的表面,这些膜表面的脂蛋白在牛支原体调节宿主免疫系统的功能上起着非常重要的作用。P48蛋白就是牛支原体众多的表面脂蛋白中的一种,它是牛支原体的一种特异性抗原。本试验对新疆不同牛支原体分离株P48基因进行克隆、序列比对,选定其中一株进行原核表达得到纯化后的P48蛋白,对其免疫原性进行探究,为新型牛支原体疫苗的研发提供理论基础,主要研究内容及结果如下:1新疆不同分离株牛支原体P48基因的PCR扩增及序列分析为研究新疆不同分离株牛支原体P48基因的遗传特性,本试验以从新疆不同地区分离得到的牛支原体为研究对象,根据NCBI上已收录的P48基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增检测P48基因并对其进行序列分析。试验结果表明:10株来自新疆不同地区的牛支原体均扩增得到1341 bp的P48特异性目的条带,经序列分析与同源性比较,新疆分离株的P48基因与PG45国际标准株及国内其它地区分离株的P48基因同源性为96.8%9.8%,说明P48基因在牛支原体中属于保守性基因。2牛支原体新疆分离株P48基因的克隆与原核表达为确定牛支原体P48基因的免疫原性,为进一步筛选牛支原体免疫保护性基因奠定基础。本研究以牛支原体新疆分离株为研究对象,运用Overlap PCR方法扩增得到点突变后的牛支原体新疆分离株的P48基因,构建原核表达载体p ET-32a(+)-P48质粒,经筛选将构建成功的原核表达pET-32a(+)-P48质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,在诱导剂ITPG的诱导下获得重组蛋白P48,其大小约为66 KDa。3 P48蛋白的抗原性研究运用Western-blotting和ELISA方法验证重组蛋白P48的反应原性和免疫原性。试验结果表明,纯化后的牛支原体P48重组蛋白免疫小鼠后可产生良好的免疫反应,血清抗体滴度达到较高水平(OD值1.126),Western-blotting结果显示,牛支原体阳性血清与牛支原体P48重组蛋白能产生明显的抗原抗体反应,表明P48重组蛋白具有良好的免疫原性与反应原性,可作为牛支原体新型疫苗的候选基因。最后将牛支原体P48蛋白免疫给犊牛,采用P48蛋白作为抗体包被时,测定其抗体滴度为0.84(OD),但采用牛支原体全菌蛋白包被时,则试验组和对照之间无明显差异。

关键词：牛支原体新疆分离株 Overlap PCR P48基因原核表达免疫原性

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新疆拜城县绵羊布鲁氏杆菌病流行病学调查

新疆拜城县绵羊布鲁氏杆菌病流行病学调查

作者：刘建石河子大学

学位级别：硕士

目的:布鲁氏菌病是由布鲁氏菌杆菌引起的人畜共患的传染病,该病在许多国家都有不同程度的流行。拜城县自90年代初起,不断检测出牛羊布鲁氏菌病,近年来拜城县绵羊流产、人间布病数量又有所上升,对人类健康及农牧民的经济收入造成了很大... 详细信息

目的:布鲁氏菌病是由布鲁氏菌杆菌引起的人畜共患的传染病,该病在许多国家都有不同程度的流行。拜城县自90年代初起,不断检测出牛羊布鲁氏菌病,近年来拜城县绵羊流产、人间布病数量又有所上升,对人类健康及农牧民的经济收入造成了很大的影响,但拜城县没有制定出一套全面系统地绵羊布病流行病学调查报告,使布病防范控制处于盲目状态,无完善的防控措施。本研究旨在对拜城县2011年-2015年绵羊感染布病情况进行流行性病学调查,综合分析,掌握布鲁氏菌杆病在拜城县绵羊中的发病情况、流行规律和主要影响因素,并根据调查结果提出拜城县布病防控建议。方法:采用现场流行病学的方法,调查感染动物的养殖方式与规模、动物来源、检疫、扑杀情况、自然因素,并分析其感染的相关因素。结果:(1)2011年-2015年共累计监测血清19460头份,总体监测率0.60%,监测总体阳性率为3.77%。(2)绵羊不同养殖规模方式监测结果:散养户的阳性率均高于规模养殖场。(3)不同品种布病监测结果:阿勒泰肉用细毛羊监测阳性数554只,阳性率占2.86%(554/19341);西门塔尔牛监测阳性率占0.79%(138/17392),黄牛监测阳性率占1.63%(28/1720),荷斯坦奶牛监测阳性率占0.89%(18/2015),牛布病阳性率平均0.87%(184/21127)。(4)不同地理区域绵羊布病监测结果:拜城县布病阳性率与地域关系不大。(5)人间布病检测结果:布病在人间的感染与从事职业、饮食习惯有很大的相关性,88人中饮食致病的26人,占患病总人数的29.54%(26/88),饲养、畜牧兽医从业人员高达63.63%(56/88)。结论:通过对拜城县2011年-2015年布病的疫情发生情况进行调查分析,拜城县绵羊布病疫情2011年-2014年呈现上升态势,2015年政府加大防控力度后有所下降。散户养殖方式粗放、牲畜流动中有检疫监督漏洞、人间布病防控疏忽、监督管理体制不健全、畜牧兽医从业人员整体水平偏低、宣传工作没有有效开展、行政政策发挥作用不足等原因造成了拜城县2011年-2014年布病的持续高发态势,综合分析,提出以下防控建议:(1)加强畜牧兽医队伍建设,强化专业技术培训,引进科技人才,优化队伍结构,不断提升对布病的防控技术的掌握能力,不断提升队伍的整体业务能力和个人素质;(2)加大宣传力度,每年以乡镇(场)为单位,集中广大养殖户进行布病危害和综合防制的技术的宣传,不断提高养殖户布病防控意识,并引导广大养殖户自觉落实布病阳性畜的扑杀;(3)规范外地购畜制度,完善报检制度,并在拜城县东西两侧建立检测站,降低由外购畜导致布病感染的机率;(4)加大监督监测力度,不断完善检测体系,强制实行免疫制度;(5)加强业务部门之间的配合,协调合作,开展好人畜布病检测、预防工作;(6)积极推广人工授精技术,杜绝由自然交配导致的布病传播。

关键词：拜城县布鲁氏菌病流行病学血清学调查

新疆部分地区绵羊及相关环境肠球菌的生态分布及部分生物特性研究

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新疆部分地区绵羊及相关环境肠球菌的生态分布及部分生物特性研究

作者：陈玉石河子大学

学位级别：硕士

肠球菌（Enterococcus）是人类和动物肠道的正常菌群,通常不引起发病,但近年研究已证实肠球菌可引起人及动物致病,美国医院感染监视系统（NISS）已将其列为引起医院感染的第二大病原菌。近几年,新疆部分地区规模化养羊场新发生了一种由... 详细信息

肠球菌（Enterococcus）是人类和动物肠道的正常菌群,通常不引起发病,但近年研究已证实肠球菌可引起人及动物致病,美国医院感染监视系统（NISS）已将其列为引起医院感染的第二大病原菌。近几年,新疆部分地区规模化养羊场新发生了一种由肠球菌感染所致的羔羊脑炎,齐亚银等对致羔羊脑炎肠球菌的生物学特性进行了研究。本研究为了了解新疆部分地区肠球菌的生态分布以及其与致病肠球菌生物特性的差异,从新疆生产建设兵团农五师84团羊场与90团羊场、农八师142团羊场、新业羊场、西部牧业及农七师129团羊场健康绵羊的鼻拭、肛拭、粪便、青贮、棉籽壳、饮水以及周围环境中的土壤等样本中分离肠球菌;对其与致羔羊脑炎肠球菌进行了生物学特性对比以及针对能够致小白鼠死亡的肠球菌分离株进行PCR检测毒力因子esp和gelE基因。结果如下: 1.共检测470个样本,分离得到75株革兰氏阳性、成双或链状排列的球菌,经培养特性、生化特性鉴定,并针对肠球菌高保守的特异性tuf基因设计的特异性引物对这75株分离株进行PCR扩增,对扩增产物进行分析,结果有4株为非肠球菌,其余71株均为肠球菌。结果表明羊体及其周围环境中肠球菌分布率达15.1%。其中在粪便中带菌率较高,其次是土壤及健康绵羊肛拭。 2. 71株肠球菌分离株链球菌乳胶凝集分型结果表明:63株分离株血清型为常规的兰氏D型,8株分离株血清型为C型;而致羔羊脑炎肠球菌多数为D型,还有G型和未定型。 3.检测71株肠球菌分离株的溶血性,采用K-B法检测β-溶血肠球菌、非β-溶血肠球菌对10种抗生素的敏感性,同时进行小白鼠致病力试验。结果表明59.2%肠球菌分离株溶血;β-溶血株对抗生素的耐药性明显高于非β溶血株;其中有7株肠球菌分离株导致小白鼠死亡,分别为84团及129团分离株,均为绵羊羊体溶血性肠球菌分离株。 4.根据GenBank中肠球菌主要毒力因子表面蛋白（esp）和明胶酶（gelE）的基因序列设计引物,对7株致小白鼠死亡的肠球菌分离株进行PCR检测,同时随机从84团及129团各抽取3株环境中正常肠球菌分离株及1株正常肠球菌标准菌株作对照。结果7株致小白鼠死亡的肠球菌分离株中有3株含有明胶酶（gelE）毒力因子,不含有表面蛋白（esp）毒力因子,其余4株均不含这两种毒力因子;环境中正常肠球菌分离株和肠球菌标准菌株均不含这两种毒力因子。本研究首次对新疆部分地区健康绵羊羊体及其周围环境中肠球菌进行了生态学初步研究,为进一步探讨绵羊肠球菌感染的机制提供了重要的理论素材,同时也为肠球菌感染的防治工作提供了重要依据,并为制备适合本地区高效的羔羊肠球菌菌苗提供了科学根据和理论指导。

关键词：绵羊肠球菌周围环境生态分布生物学特性

北疆部分规模化牛场奶牛BVD，IBR，BPI和Brucellosis的流行病学调查

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北疆部分规模化牛场奶牛BVD，IBR，BPI和Brucellosis的流行病学调...

作者：罗玉江石河子大学

学位级别：硕士

奶牛繁殖障碍是指母牛达到正常的性成熟和体成熟年龄时,由各种因素引起的母畜生殖能力下降,临床表现为不孕不育、流产、产死胎、产后子宫内膜炎等一系列症候群的统称。引起奶牛繁殖障碍的原因主要包括非传染性因素和传染性因素两大类,... 详细信息

奶牛繁殖障碍是指母牛达到正常的性成熟和体成熟年龄时,由各种因素引起的母畜生殖能力下降,临床表现为不孕不育、流产、产死胎、产后子宫内膜炎等一系列症候群的统称。引起奶牛繁殖障碍的原因主要包括非传染性因素和传染性因素两大类,非传染性因素有饲养管理不善、母体自身疾病、繁殖技术操作不当等;传染性因素由传染性疫病引起。其中,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感3型病毒(BPIV-3)及布鲁氏菌(Brucella),是引起奶牛繁殖障碍的重要病原。奶牛繁殖障碍给养牛业造成了较大的经济损失,严重影响和制约着奶牛业的持续健康发展,但有关新疆地区致奶牛繁殖障碍的传染性因素尚不清楚。因此,开展奶牛繁殖障碍类传染病的流行病学调查,确定引起奶牛繁殖障碍相关的病原种类及感染情况,对制定有效的防控措施具有重要的指导意义。为调查BVD、IBR、BPI及Brucellosis的感染情况及流行状况,选择北疆4个规模化奶牛场为调查对象,采用现场流行病学调查、血清流行病学调查和分子流行病学调查的方法,研究结果如下:1.现场流行病学调查查明了规模化牛场2011013年奶牛流产情况及其发生规律,流产率为9.95%(361/3629),同时流产与胎次、妊娠天数和季节存在较大关系。①流产与胎次之间的关系,流产主要发生在第1胎次,以首胎流产情况严重,4胎以后流产情况较少。②流产与妊娠天数之间的关系,流产在妊娠的各个时期都会发生,但集中发生于妊娠的6020d之间。③流产与季节之间的关系,新疆春夏季节(3月)是流产发生的高峰期,以夏季(6月)流产最为常见,秋季(91月)流产情况很少出现。2.血清流行病学调查4个规模化奶牛场BVD、IBR及BPI感染性抗体的平均阳性率分别是75.4%、87.4%和91.4%,从流产死胎的成母牛、子宫炎牛、1-2月龄患有肺炎的犊牛及尚未饲喂初乳的犊牛等血清样品中,均检测出存在有以上3种病毒的阳性抗体。而从流产死胎的成母牛血清中,检测出存有布鲁氏菌病抗体的平均阳性率为25.1%。3.分子流行病学调查采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法,从流产死胎、1-2月龄患有肺炎的犊牛的鼻拭子等组织病料中,检测出BVDV、IBRV和BPIV-3病原的总阳性率分别为11.29%(28/248)、9.26%(15/162)和10.00%(18/180)。其中,59份流产死胎组织中检测出BVDV、IBRV及BPIV-3病原的阳性率分别为25.42%(15/59)、5.08%(3/59)及25.42%(15/59),而从与配公牛的冻精中,未检测到有上述病原。4.混合感染情况对血清流行病学调查和分子流行病学调查结果进行分析,从发病犊牛的鼻拭子及流产死胎组织中,同时检测出存在有2种疫病混合感染的情况;而从犊牛和流产死胎成母牛的血清中,检测出有2种疫病混合感染的情况。其中,从流产死胎的成母牛中,检测出同时含有BVD、IBR、BPI及Brucellosis的抗体阳性率为22.6%。结果表明,这些病原在致奶牛繁殖障碍中混合感染现象较为普遍。本研究初步查明了北疆规模化牛场致奶牛繁殖障碍4种疫病的感染情况及流行状况,为相应疫病的防控提供了流行病学数据,对实践生产具有重要的指导作用。

关键词：繁殖障碍牛病毒性腹泻牛传染性鼻气管炎牛副流感布鲁氏菌病流行病学调查

牛源金黄色葡萄球菌肠毒素的提取及其部分免疫活性的研究

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牛源金黄色葡萄球菌肠毒素的提取及其部分免疫活性的研究

作者：柳旭伟石河子大学

学位级别：硕士

乳房炎作为奶牛常见病的一种,是世界奶牛业的主要危害疾病之一,它不仅引起泌乳量下降,而且影响乳的品质,甚至危及人的健康,造成较大的经济损失。在动物的临床及亚临床感染中,金黄色葡萄球菌感染最为广泛,它是一个重要的细菌性病原。在... 详细信息

乳房炎作为奶牛常见病的一种,是世界奶牛业的主要危害疾病之一,它不仅引起泌乳量下降,而且影响乳的品质,甚至危及人的健康,造成较大的经济损失。在动物的临床及亚临床感染中,金黄色葡萄球菌感染最为广泛,它是一个重要的细菌性病原。在治疗上由于抗菌药物的广泛应用,使金黄色葡萄球菌乳房炎发病率有所下降,但耐药菌株明显增多。传统的金黄色葡萄球菌疫苗包括灭活的疫苗及稀释的活疫苗、变性毒素苗,以及从实验性菌株分离细胞壁成分制成的疫苗,这些尝试并没有为抵抗不同性质的金黄色葡萄球菌菌株导致的乳房炎提供显著的保护力。金黄色葡萄球菌肠毒素是一组多克隆T细胞的有丝分裂原,无种属特异性,在开发防治金黄色葡萄球菌型奶牛乳房炎新型免疫制剂方面有着很好的前景。本研究对石河子地区部分奶牛场的43份临床型乳房炎奶样进行了金黄色葡萄球菌的分离、培养,并通过接触酶试验、血浆凝固酶试、自制生化鉴定试验以及API对其进行了鉴定,43份奶样中检出金黄色葡萄球菌阳性9份,阳性率为20.93%（9/43）。药物敏感试验表明:各分离株对硫酸链霉素、卡那霉素、头孢噻肟钠、氟苯尼考、氧氟沙星、磺胺嘧啶和土霉素表现敏感;对青霉素、氨苄青霉素、多黏菌素B和林可霉素表现耐药性;采用液体透析培养法进行肠毒素提取并测定其含量,结果表明肠毒素的含量为33.27mg/ml。其型别鉴定表明:9株金黄色葡萄球菌有1株只产生一种肠毒素,占11.11%（1/9）;其余8株金黄色葡萄球菌均产生2～3种肠毒素,占88.89%（8/9）;产生A型肠毒素的菌株有4株,占44.44%（4/9）;产生B和E型肠毒素的菌株都是3株,分别占33.33%（3/9）;产生C型肠毒素的菌株有5株,占55.56%（5/9）;产生D型肠毒素的菌株有6株,占66.67%（6/9）。家兔试验结果表明:肠毒素组、金黄色葡萄球菌菌体蛋白组、肠毒素+金黄色葡萄球菌菌体蛋白组对动物的各项生理指标有一定影响,但差异不显著（P＞0.05）;淋巴细胞转化试验,外周血T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶（ANAE）的测定以及中型粒细胞吞噬试验结果表明,三种免疫原都能显著提高动物的免疫水平,且肠毒素+金黄色葡萄球菌菌体蛋白组对于提高机体的细胞免疫水平和非特异性免疫功能效果最好。本研究结果为进一步开发研制抗奶牛乳房炎免疫制剂提供了理论与试验依据。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌肠毒素家兔免疫活性

致犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

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致犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

作者：马晓菁石河子大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella mutocida, Pm）是牛出血性败血症的主要病原菌,由该菌引起的疾病呈散发或地方流行性,主要表现为败血症和出血性炎症,以高热、肺炎或急性胃肠炎并内脏广泛出血为主要特征。国内外有关该菌引起犊牛肺炎的研... 详细信息

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella mutocida, Pm）是牛出血性败血症的主要病原菌,由该菌引起的疾病呈散发或地方流行性,主要表现为败血症和出血性炎症,以高热、肺炎或急性胃肠炎并内脏广泛出血为主要特征。国内外有关该菌引起犊牛肺炎的研究报道甚少。2007年,新疆石河子先后有6个规模化奶牛场1-9周龄犊牛突然发病,共有90余头犊牛死亡,主要临床症状以体温升高、咳嗽、腹泻为特征。为确定引起犊牛发病死亡原因,避免疫情扩大并有效地控制该病的传播。本文采集发病犊牛病料进行病原菌的分离、培养特性鉴定、生理生化以及分子生物学鉴定,对分离菌进行动物感染试验、毒力因子的检测以及药敏试验等研究。结果如下： 1、4株分离株均为革兰氏阴性短杆菌,两端钝圆。分离菌形态特征及培养特性与以往引起成年牛败血症状的巴氏杆菌相符,分离菌株生化鉴定结果与多杀性巴氏杆菌的生化特性一致。 2、参考多杀性巴氏杆菌种特异性基因kmtl及荚膜血清型特异性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD序列,设计引物对4株分离菌用多重PCR方法扩增,结果分离株均可扩增出小于500bp和1000bp左右的条带,用胸膜肺炎放线杆菌、肠球菌及大肠杆菌做模板都不能扩增出特异性条带,送测序并与GenBank中核苷酸进行比对,表明分离菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌。且凡是引物Kmtl扩增为阳性的菌株生化结果都符合Pm标准。 3、采用分离株的纯培养物分别接种小白鼠、家兔,进行动物致病性实验,分离株表现出较强的致病性,所有试验组小白鼠在48h内全部死亡,家兔均在72h后死亡,从死亡家兔和小鼠体内均可回收到接种细菌。 4、药敏试验结果表明,所分离的4株Pm对氧氟沙星、庆大霉素表现较高的敏感性。对环丙沙星、新霉素敏感性不高,但对于氨苄青霉素钠无敏感性。 5、本实验选取多杀性巴氏杆菌与铁摄取有关的tbpA基因和编码4型菌毛ptfA基因,对分离株进行毒力因子的检测,结果经测序比对,分析后仅能检测到ptfA基因。 6、从犊牛、小鼠、家兔病理组织学变化可见主要病变发生在肺部,可见肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡浆液性水肿,肺泡腔内有纤维素渗出物,其中可见少量中性粒细胞和红细胞。其它脏器均出现不同程度的出血现象。研究结果证实,该分离菌为多杀性巴氏杆菌。本研究首次证实新疆地区多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型引起犊牛肺炎,并系统地研究了新疆多杀性巴氏杆菌生物学特性,同时建立一个从普通生化鉴定到分子生物学快速检测的诊断模式。

关键词：犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型分离鉴定 PCR 分子生物学特性

抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备及生物活性测定

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抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备及生物活性测定

作者：张霞石河子大学

学位级别：硕士

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌（GNB）细胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分。它主要是由亲水性的多糖和类脂—A构成的,类脂—A是其生物活性中心。少量的内毒素就能引起脓毒血症和败血性的休克,从而导致高血压,心血管衰弱,多器官衰竭甚至死亡。 ... 详细信息

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌（GNB）细胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分。它主要是由亲水性的多糖和类脂—A构成的,类脂—A是其生物活性中心。少量的内毒素就能引起脓毒血症和败血性的休克,从而导致高血压,心血管衰弱,多器官衰竭甚至死亡。应用抗体阻断法治疗人类内毒素血症已有多年历史,但由于抗内毒素血清制备成本高,尚未在兽医临床上使用。本研究通过制备抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体,探讨防治奶牛乳房炎及内毒素血症的新途径。本研究对提取大肠杆菌内毒素粗制品的两种方法进行了比较,;制备出鸡抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体,对卵黄抗体的变化规律进行了研究;用间接血凝法测定卵黄和血清中抗大肠杆菌内毒素抗体效价;用制得的抗内毒素卵黄体对小鼠进行动物毒性试验及动物保护试验。研究结果表明:1.提取大肠杆菌内毒素两种方法的比较结果表明:酚-氯仿-石油醚法提取的内毒素含量比热—酚水法提取的内毒素含量高,因此更适用于内毒素的大量提取。2.卵黄抗体变化规律表明:免疫初期卵黄与血清中抗体水平没有太大差异,30d以后随着抗体水平的迅速上升,卵黄与血清中抗体水平出现明显差异。3.用间接血凝检测抗内毒素卵黄抗体滴度达到1:64以上。4.未发现抗内毒素卵黄抗体对小鼠的毒性作用,小鼠保护试验结果表明,抗内毒素卵黄抗体对小鼠腹泻和死亡模型具有明显的保护作用。

关键词：大肠杆菌内毒素卵黄抗体

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选

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牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选

作者：朱玲石河子大学

学位级别：硕士

目的:为了能够筛选出生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活苗候选菌株,本试验选取6株经分离和鉴定的来自新疆不同地区发病牛场,导致犊牛肺炎而死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏... 详细信息

目的:为了能够筛选出生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活苗候选菌株,本试验选取6株经分离和鉴定的来自新疆不同地区发病牛场,导致犊牛肺炎而死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,对其进行生长曲线测定,药物敏感性试验,小鼠毒力测定,菌体脂多糖(LPS)含量测定,各菌株灭活苗免疫小鼠、家兔后抗体测定、攻毒保护试验以及犊牛免疫效果测定。方法:试验一:不同Pm分离株生长特性、菌体LPS含量以及药物敏感性测定。将6株分离株的纯培养物进行革兰氏染色与镜检,观察染色及形态特征,确保各菌株为纯培养物。采用活菌计数法(CFU)和菌液吸光度(OD值)的方法检测6株菌生长曲线并进行比较;用LPS提取试剂盒分别提取6株分离株的LPS,分别测定6株分离株LPS的核酸含量、多糖含量、蛋白含量;采用纸片法对6株分离株进行药物敏感性测定。试验二:不同Pm分离株毒力基因及小鼠致病性测定提取不同Pm分离株的DNA,参照与荚膜形成相关基因ceaA基因、细菌黏附相关基因fimA基因、四型菌毛相关基因ptfA基因以及与铁获得因子相关基因tbpA基因序列设计特异性引物分别进行PCR扩增;采用小鼠腹腔注射法,对6株Pm菌株进行小鼠半数致死量(LD)测定。试验三:不同Pm分离株灭活菌苗的制备及免疫效果测定灭活菌苗的制备:将6株分离株分别进行扩大培养,活菌计数,经甲醛灭活后,用ISA 206双相佐剂制备Pm灭活油佐剂疫苗,对所制备菌苗进行无菌检测、物理性状的检测、疫苗的稳定性检测、疫苗保存时间试验、动物安全性试验等检测;小鼠、家兔动物免疫效果测定:将制备的6株灭活苗分别皮下免疫小鼠及家兔后观察小鼠和家兔的食欲,精神状况,以及家兔体温变化,二免后14d采用已建立的IHA方法对免疫小鼠、家兔的血清进行抗体测定;犊牛免疫效果测定:选择小鼠、家兔血清抗体效价较高的分离株灭活苗进行犊牛免疫试验;观察并记录免疫犊牛健康状况,并于二免14d采集犊牛血清进行抗体检测。结果:1.六株Pm分离株的生长曲线相似,其中Pm2、Pm3、Pm5分离株生长较快;Pm1、Pm4、Pm6分离株生长较慢。Pm3分离株LPS中的核酸含量、多糖含量、蛋白含量最高,Pm5、Pm2菌株含量次之;其余菌株含量较少。药物敏感性试验表明:6株分离株对同种药物的敏感性相似,都对庆大霉素、氧氟沙星的敏感性较高,对新霉素、环丙沙星的敏感性不高,对氨苄西林钠几乎不敏感。2.毒力因子检测表明,6株分离株均含四型菌毛相关基因ptfA与黏附相关基因fimA;小鼠半数致死量(LD)测定表明分离株Pm1、Pm2、Pm3、Pm4、Pm5、Pm6的LD分别为10、10、10、10、10和10.52.52 CFU/mL。其中Pm3菌株毒力最强;3.所制灭活菌苗无杂菌污染、粘度符合要求、离心后无分层、稳定性良好;小鼠、家兔免疫保护性试验结果显示:Pm2、Pm3、Pm5分离株制备的灭活苗免疫小鼠、家兔后抗体效价高,达到1∶64∶128,且对其进行强毒攻毒后能全部存活,PBS对照组则全部死亡,免疫家兔产生的副反应较小,而Pm1、Pm4、Pm6抗体效价较低且对家兔产生的副反应较大;对Pm2、Pm3、Pm5这三株分离株制备的灭活苗进行犊牛免疫试验,免疫后犊牛采食量正常,且精神状态良好,体温在免疫1天内稍有上升后又恢复正常,对犊牛产生的副反应均较小,二免14 d后对犊牛血清进行抗体效价测定,结果Pm3菌株制备的灭活苗抗体效价较Pm2、Pm5高。6头免疫犊牛3头血清抗体达到1∶32,一头达到1∶64。结论:研究结果表明,六株不同Pm分离株中Pm3和Pm5株纯化后形态特征稳定、生长速度快、LPS含量高、携带两个主要毒力基因,对试验动物的致病力强;制备的灭活菌苗免疫小鼠家兔攻毒后达到100%的保护率;免疫犊牛后副反应小、免疫抗体水平高,可作为牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活苗的候选株,其中Pm3菌株可作为首选株。研究结果为进一步研发此菌苗提供了菌株支持。

关键词：牛源多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型疫苗菌株免疫保护抗体效价

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石河子某规模化猪场仔猪腹泻病原诊断

石河子某规模化猪场仔猪腹泻病原诊断

作者：吕雯石河子大学

学位级别：硕士

2012年1月至6月份期间，新疆石河子周边某些猪场,2-7日龄哺乳仔猪陆续发生严重腹泻，先后死亡仔猪800余头，发病率90%，死亡率80%。患病仔猪精神沉郁，食欲废绝，排黄色水样稀粪，病程3-5d。病理剖解可见：肠系膜充血严重，肠系膜淋巴... 详细信息

2012年1月至6月份期间，新疆石河子周边某些猪场,2-7日龄哺乳仔猪陆续发生严重腹泻，先后死亡仔猪800余头，发病率90%，死亡率80%。患病仔猪精神沉郁，食欲废绝，排黄色水样稀粪，病程3-5d。病理剖解可见：肠系膜充血严重，肠系膜淋巴结肿大，小肠粘膜菲薄，剪开小肠其内容物呈黄色且含大量未消化的凝乳块。根据临床症状、流行病学及病理变化初步诊断为大肠杆菌引起的仔猪黄痢;为进一步确诊，对送检病料进行了致病菌的分离、生化鉴定、致病因子和毒力鉴定、病原体的分子生物学诊断，结果如下： 1.无菌采取病死哺乳仔猪肠内容物、肠系膜淋巴结等病理组织，涂片染色、镜检，同时将病料接种于LB肉汤中培养，将培养菌分别接种于麦康凯琼脂平板，兔鲜血琼脂平板;对分离致病菌进行生化试验、分子生物学鉴定、药物敏感试验。结果表明：分离株在麦康凯培养基上呈红色菌落;可使小白鼠在8h内死亡;生化鉴定及PCR鉴定为大肠埃希氏杆菌;分离株大肠杆菌对头孢菌素类和β-内酰胺类药物敏感。 2.通过PCR法和甘露糖血凝MRHA试验检测大肠杆菌的菌毛粘附素类型，采用兔回肠结扎试验检测不耐热肠毒素LT，运用乳鼠胃内注射试验检测耐热肠毒素STa。PCR和MRHA结果表明本试验分离的大肠杆菌致病因子为987P，兔回肠结扎试验未检测到LT，乳鼠胃内注射试验未检测到STa。将致病大肠杆菌培养液100℃煮沸30min，取0.5mL注射给小白鼠，小白鼠在8h内死亡，表明分离株致病大肠杆菌可能有其它种类的耐热肠毒素。 3.用RT-PCR法检测病死仔猪肠内容物中猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV），结果仅检测到PEDV，将PEDV的M基因和N基因与不同来源的PEDV毒株进行比较分析，结果显示本试验检测到的PEDV M基因与其他已发表的PEDV毒株M基因同源性为97.9-99.7％，N基因同源性为95.1％-96.4％;试验检测的PEDV的M基因与国内分离的CH-SC2-2012在同一分支上;PEDV的N基因与国内分离的YT12-4在同一分支上。试验室诊断确定该猪场发病的主要病因为携带987P菌毛的致病性大肠杆菌和猪流行性腹泻病毒混合感染。

关键词：哺乳仔猪大肠杆菌 987P PEDV PCR

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杂交盘羊传染性胸膜肺炎支原体的分离和鉴定

杂交盘羊传染性胸膜肺炎支原体的分离和鉴定

作者：李志远石河子大学

学位级别：硕士

绵羊肺炎支原体(MO)是引起绵羊传染性胸膜肺炎的病原体,本研究采用常规细菌学方法及分子生物学方法,对石河子公园野生盘羊发生疑似传染性胸膜肺炎病例进行了病原学诊断。结果:从3只发病死亡杂交一代盘羊的鼻腔分泌物、胸腔渗出物及肺组... 详细信息

绵羊肺炎支原体(MO)是引起绵羊传染性胸膜肺炎的病原体,本研究采用常规细菌学方法及分子生物学方法,对石河子公园野生盘羊发生疑似传染性胸膜肺炎病例进行了病原学诊断。结果:从3只发病死亡杂交一代盘羊的鼻腔分泌物、胸腔渗出物及肺组织中分离获得三株支原体、经生化鉴定、PCR检测及序列测定,确定为绵羊肺炎支原体,并对绵羊支原体的不同培养基的培养效果进行对比、优化与筛选,确定适合其生长的培养基为添加酵母汁的专用液体培养基和Hayflick固体培养基。本研究还对发病羊群进行健康盘羊鼻腔支原体的调查,结果表明:在调查的28只杂交盘羊中,有5只显示阳性。

关键词：盘羊传染性胸膜肺炎绵羊肺炎支原体分离 PCRⅠ