检索结果-南通市图书馆

作者：魏婉娥扬州大学

学位级别：硕士

乙烷基亚硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea,ENU）是一种高效基因诱变剂,利用ENU诱变技术,可获得大量与人类疾病相似的动物疾病模型用于与人类疾病相关的研究。通过ENU诱导小鼠突变的方法,本实验获得一例可遗传眼畸形杂合小鼠模型（主要表... 详细信息

乙烷基亚硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea,ENU）是一种高效基因诱变剂,利用ENU诱变技术,可获得大量与人类疾病相似的动物疾病模型用于与人类疾病相关的研究。通过ENU诱导小鼠突变的方法,本实验获得一例可遗传眼畸形杂合小鼠模型（主要表型为虹膜缺损及角膜混浊）,并对该小鼠眼球进行组织学分析及突变基因的定位和鉴定。研究工作分为以下三个部分:1、ENU诱变获得一例眼畸形小鼠模型及其眼球组织学分析采用ENU腹腔注射20只成年C57BL/6J（B6）雄鼠（G0）,待其恢复生殖能力后分别与野生型B6雌鼠配种,获得G1代小鼠。经显性突变筛选和遗传实验,4例G1代小鼠的异常表型可以遗传。本文以G1代中一例可遗传的眼畸形小鼠为研究对象,将其与野生型B6小鼠配种,记录的120只后代小鼠中有56只后代小鼠出现虹膜缺损、角膜混浊或同时可见虹膜缺损及角膜混浊表型。筛选4周龄和8周龄角膜混浊表型的眼畸形小鼠使用同窝野生型小鼠为对照,进行组织学分析。HE染色发现:角膜混浊表型小鼠的角膜上皮细胞层出现明显空泡,角膜基质层胶原纤维排列杂乱松散且角膜内皮细胞部分脱落;采用免疫组织化学技术检测角膜混浊小鼠角膜上皮细胞K14、K12、K10的表达,结果发现:（1）4周龄和8周龄野生型小鼠角膜上皮K12表达于整个角膜上皮;K14表达于角膜上皮细胞的基底层,信号较弱;K10不表达;（2）与野生型小鼠相比,角膜混浊表型的小鼠角膜上皮在4周龄时K12表达无明显变化,8周龄时在角膜上皮空泡病变局部K12表达量明显减弱,K14表达在4周龄及8周龄时均表达增强;K10为阴性。2、眼畸形小鼠突变基因的染色体定位将B6背景的眼畸形小鼠与野生型C3He/J（C3）小鼠配种获得F1代小鼠,F1代小鼠回交野生型B6小鼠,获得[（B6×C3）F1×B6]N2代杂合子小鼠。利用微卫星标记及连锁分析法进行突变基因的染色体定位,结果显示:眼畸形小鼠的突变基因与微卫星D2Mit249连锁（LODs为3.19）,故将该突变基因初步定位于2号染色体上。在初步定位的基础上扩大N2样品并继续筛选高密度的微卫星对其进行精确定位,最终将该小鼠的突变基因定位于小鼠2号染色体D2Mit107（距着丝粒65.13cM）与D2Mit423（距着丝粒73.57cM）之间。3、眼畸形小鼠突变基因的鉴定在定位区域内逐个查询并分析相关基因,结果发现有文献报道Jag1基因突变小鼠与本小鼠表型类似,故最终选出本突变的一个候选基因为Jag1基因。设计相应引物,对PCR或RT-PCR扩增产物进行胶回收后直接测序分析发现:从外显子25开始,突变杂合子RT-RCR产物测序信号图出现连续的重叠信号,考虑到可能存在mRNA剪接异常。将该RT-PCR产物进行T-A克隆后再次测序,并继续对外显子25及侧翼序列进行测序。结果发现:突变杂合子小鼠一条染色体上Jag1基因第24号内含子3’端AG碱基被GG碱基所替代,导致第25号外显子存在7个碱基的缺失。蛋白预测发现该突变使得Jag1编码区移码及蛋白质编码提前终止。结论:利用ENU诱变技术,本文获得一例可稳定遗传眼部畸形小鼠模型（主要表现为角膜混浊和虹膜缺损）,并对角膜混浊小鼠眼球进行组织学病理特点分析。突变基因鉴定发现,此表型是由Jag1基因新的等位突变引起。本研究为该小鼠作为人类眼畸形疾病动物模型的应用奠定了基础。

关键词：乙烷基亚硝基脲 Jag1基因眼畸形小鼠模型

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植物青枯菌spoT与relA基因功能研究

植物青枯菌spoT与relA基因功能研究

作者：梁欢中国农业科学院

学位级别：硕士

由雷尔氏菌属致病种(Ralstonia spp.)引起的植物细菌性枯萎病(bacterial wilt of plants俗称“青枯病”)是世界性重大土传病害。青枯菌通过内部调节机制适应复杂多变的自然环境,其中鸟苷四磷酸(即,ppGpp)是一种警示性信号分子,当细菌处... 详细信息

由雷尔氏菌属致病种(Ralstonia spp.)引起的植物细菌性枯萎病(bacterial wilt of plants俗称“青枯病”)是世界性重大土传病害。青枯菌通过内部调节机制适应复杂多变的自然环境,其中鸟苷四磷酸(即,ppGpp)是一种警示性信号分子,当细菌处于逆境条件时,细胞内ppGpp的水平发生变化,进而调控细菌细胞的运动性、生物膜形成等生物学功能,调控细菌更好的适应逆境条件,relA是负责合成ppGpp的基因,spo T是负责合成降解ppGpp的双功能基因。本研究以青枯菌4号生理小种Z-Aq-1菌株为研究对象,通过反向遗传学的手段构建relA和spoT基因缺失菌株及其相应互补菌株,解析青枯菌relA和spoT基因与致病性、运动性和生物膜形成等生物学表型之间的关系。富营养培养基为青枯菌分离培养常用培养基,寡营养培养基更贴近于青枯菌在寄主植物中的生长环境,为此,应用转录组测序技术,测定在富营养和寡营养两种培养条件下Z-Aq-1菌株与relA、spoT基因突变菌株之间的转录本差异,发掘突变菌株和野生型菌株差异表达基因,以期探明relA、spoT基因的功能并发掘与运动性相关基因,为进一步明晰青枯菌在逆境条件下的调控机制奠定理论基础。*** Gpp相关基因relA和spoT基因功能验证致病性测定结果表明,Z-Aq-1△relA和Z-Aq-1△spoT菌株的致病能力较野生型菌株均无显著差异。生长曲线测定结果表明,NB培养基中,突变菌株和野生型菌株生长速率无显著差异,而hrp培养基中,与野生型菌株相比relA、spoT突变菌株在对数期的生长速率均显著上升,且spo T突变菌株快于relA突变菌株。生物膜测定结果表明,相比野生型菌株,relA、spoT突变菌株的生物膜形成能力均显著上升,且spo T突变菌株的形成能力强于relA突变菌株。代谢活性测定结果表明,spo T和relA基因突变菌株对96种底物的利用代谢较野生型菌株无显著差异。运动性测定结果表明,相比野生型菌株,relA、spoT突变菌株的运动能力均显著下降,且spoT突变菌株的运动能力比relA突变菌株下降的更明显。逆境诱导可培养性实验结果表明,对高温的耐受性Z-Aq-1△relA高于Z-Aq-1△spoT菌株且均高于野生型菌株,对渗透压的耐受性Z-Aq-1△relA高于Z-Aq-1△spoT菌株均低于野生型菌株。为此,推测relA和spoT基因不参与青枯菌Z-Aq-1菌株的致病调控网络,但对青枯菌Z-Aq-1菌株的运动性、生物膜和生长速率生物学表型具有调控作用。2.野生型菌株与突变菌株的转录组学研究研究明确富营养培养条件和寡营养培养条件下突变菌株与野生型菌株差异表达的基因。在寡营养培养条件下,与野生型菌株相比,relA突变菌株中motA、motB、flg K三个与运动性相关的基因表达量显著下调;spoT突变菌株中motA、motB、flgK等十几个与运动性相关的基因表达量显著下调;发现两个突变菌株中TetR、LysR、Asn C、MarR等调控转录因子均差异表达。为此,推测relA、spo T基因参与青枯菌运动性的调控,motA、motB、flgK是调节青枯菌运动性的关键基因。转录组测序结果初步探明了青枯菌中ppGpp调控网络以及发掘新的与运动性相关基因。

关键词：青枯菌 ppGpp relA基因 spoT基因转录组

两面针叶抗炎镇痛活性部位及低极性化学成分分析

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两面针叶抗炎镇痛活性部位及低极性化学成分分析

作者：阿优广西医科大学

学位级别：硕士

目的：研究两面针叶不同极性部位的抗炎镇痛药理活性,为两面针植物的综合应用提供实验基础;对不同采收期两面针叶的低极性化学成分进行分析测定,为两面针叶的合理采收期提供科学实验依据。方法： 1.应用溶剂法回流提取两面针叶得到粗提... 详细信息

目的：研究两面针叶不同极性部位的抗炎镇痛药理活性,为两面针植物的综合应用提供实验基础;对不同采收期两面针叶的低极性化学成分进行分析测定,为两面针叶的合理采收期提供科学实验依据。方法： 1.应用溶剂法回流提取两面针叶得到粗提物,用不同极性溶剂萃取得到不同极性部位。 2.采用热板法及醋酸扭体法实验对两面针叶不同极性部位灌胃口服给药后小鼠的镇痛活性试验。 3.应用小鼠足趾肿胀、耳廓肿胀及棉球肉芽肿胀实验对两面针叶不同极性部位灌胃口服给药后的抗炎活性试验。 4.采用水蒸气蒸馏法提取不同采收期两面针叶的挥发性成分,应用气相色谱毛细管柱进行分离,质谱检测,面积归一化法测定其相对百分含量。结果： 1.与模型组相比,除热板法中水层提取物的低剂量组镇痛活性无统计学意义外,两面针叶粗提物及其余不同提取部位均有显著的镇痛活性(P0.05),粗提物及其余不同极性部位均有显著的抗炎镇痛药理活性(P<0.05,P<0.01),且正丁醇和乙酸乙酯提取部位为主要的有效部位。尽管不同采收期两面针叶低极性成分的挥发油主要成分基本相同,但是主要成分含量存在差异。此研究为两面针叶抗炎镇痛方面的开发利用提供科学实验依据,为两面针叶的合理采收期提供实验数据,也为两面针叶化学及药理方面的深入研究提供前期科学实验内容。

关键词：两面针叶挥发性成分 GC-MS 毛细管色谱活性部位抗炎镇痛

文旅融合背景下舟山地区博物馆数字化传播研究

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文旅融合背景下舟山地区博物馆数字化传播研究

作者：楼书妍浙江工商大学

学位级别：硕士

文旅融合发展的新时代已经来临,将单一的传统旅游转变为文化和旅游的深度结合,文旅深度融合发展成为地区旅游业提质增效的新引擎和新动力。舟山作为一个海岛旅游城市,素有“海天佛国”、“东海渔都”的美名,同时,旅游事业一向为舟山经... 详细信息

文旅融合发展的新时代已经来临,将单一的传统旅游转变为文化和旅游的深度结合,文旅深度融合发展成为地区旅游业提质增效的新引擎和新动力。舟山作为一个海岛旅游城市,素有“海天佛国”、“东海渔都”的美名,同时,旅游事业一向为舟山经济的支柱产业。而博物馆作为公共文化传播的重要阵地,在继承优秀传统文化、传播科技知识、满足人民群众的文化和文化需求等多个领域中起到重要影响。在旅游与文化融合发展的大环境下,随着博物馆数字化传播环境与传播要素的改变,对其发展与改善的研究需求愈发迫切。本论文在梳理了国内外学术研究文献的基础上,阐述了有关文旅融合和博物馆数字化传播的相关理论,对文旅融合背景下舟山地区博物馆的数字化传播情况进行概述,从官方网站、微博、微信以及线上博物馆四个维度来分析舟山地区博物馆的数字化现状,对舟山地区博物馆数字化整体情况及具有代表性的市级博物馆进行了综合的分析,以此为研究依据从传播主体、传播内容、传播渠道和传播受众三个维度来对其进行分析。调查研究显示,舟山地区博物馆数字化传播目前仍有融合乏力,文化科技壁垒森严、理念陈旧,对互联网平台的重视程度不足、资源倾斜,缺乏有效开发、竞争力低,海洋特色不鲜明等问题。研究认为,在“文旅融合”背景下,舟山地区博物馆要抓住机会,努力改善,始终保持以文促旅、以旅彰文的导向,建立起“文化+旅游”的基本逻辑。加强队伍建设,提高人才素养、利用网络渠道,扩大声势、资源共享,形成良好聚落效应、打造IP品牌,提升地区认可度。从而发挥博物馆传递城市文化和服务城市形象的双重优势,奋力做好文旅融合联结器和助燃剂,不断释放影响力,从而步入新时代。

关键词：文旅融合舟山地区博物馆数字化传播

《环境政策与公共健康》第6章、第17章英汉翻译实践报告

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《环境政策与公共健康》第6章、第17章英汉翻译实践报告

作者：王英洁内蒙古工业大学

学位级别：硕士

本文是一篇基于《环境政策与公共健康》一书第6章和第17章的英汉翻译实践报告。该书主要描述了环境中的污染问题。现如今中国化学污染越来越严重,而美国化学污染问题于第二次工业革命时期已很严重,美国政府采取了一些系列措施和颁布了... 详细信息

本文是一篇基于《环境政策与公共健康》一书第6章和第17章的英汉翻译实践报告。该书主要描述了环境中的污染问题。现如今中国化学污染越来越严重,而美国化学污染问题于第二次工业革命时期已很严重,美国政府采取了一些系列措施和颁布了环保法案,有效解决了该环境问题。笔者选取英文科技类文本著作《环境政策与公共健康》一书的第6章和第17章作为翻译实践任务,以提高公众对有毒化学物质及其如何何危害公共健康和美国政府制定的相关法律法规的认识,同时,也希望为其他译者们提供相关借鉴。笔者在本实践报告中以生态翻译学理论为指导,从语言维,交际维和文化三个维度来探究科技文本的翻译策略,解决翻译问题。笔者在语言维上主要采取词意、词性和语态转换的翻译策略;在文化维上主要采用意译的翻译方法;在交际维上主要采取增译,省译的翻译方法,以实现翻译生态环境的平衡和多维度适应性转换,进而使译文清楚自然,符合译入语的语言表达习惯。笔者期望为自己今后的翻译实践活动提供一个新的思路,从而提升自身翻译水平和译文翻译质量,向读者输出一个优秀的译本。

关键词：有害化学物质科技文本生态翻译学理论三维转换翻译实践报告

马铃薯黑胫病菌的种类鉴定、种群动态模拟分析及室内药剂筛选

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马铃薯黑胫病菌的种类鉴定、种群动态模拟分析及室内药剂筛选

作者：张彤河北北方学院

学位级别：硕士

马铃薯黑胫病(Potato Blackleg),是由软腐果胶杆菌科(Soft Rot Pectobacteriaceae,SRP)细菌引起的一种世界性分布的重要病害。该病在马铃薯的不同生育期和贮藏期均可发生危害。2015年,我国马铃薯主粮化国家战略正式启动,随着马铃薯种植... 详细信息

马铃薯黑胫病(Potato Blackleg),是由软腐果胶杆菌科(Soft Rot Pectobacteriaceae,SRP)细菌引起的一种世界性分布的重要病害。该病在马铃薯的不同生育期和贮藏期均可发生危害。2015年,我国马铃薯主粮化国家战略正式启动,随着马铃薯种植面积不断扩大,马铃薯黑胫病的危害也日趋严重,成为制约我国马铃薯产业的健康发展瓶颈之一。国外相关研究表明,黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)、胡萝卜果胶杆菌(***)、巴西果胶杆菌(***)、茄迪基氏菌(Dickeya solani)和石竹迪基氏菌(***)等多种软腐果胶杆菌科的植物病原细菌均可引起马铃薯黑胫病。迄今为止,国内马铃薯黑胫病的病原学相关报道,几乎全部集中于黑腐果胶杆菌。因此,本研究通过病原菌稀释分离、菌落PCR、BIOLOG、理化代谢活性测定、16S r DNA系统进化分析、病原菌种群动态消涨规律以及室内杀菌剂毒力测定等研究手段,旨在明确国内马铃薯黑胫病的病原菌种类,探究相关病原的生物、生态学特征与杀菌剂敏感性,为进一步解析马铃薯黑胫病的流行学规律,制定科学的病害防控策略提供理论依据。研究结果如下:1.从国内马铃薯北方一作区和南方冬作区共采集到312份黑胫病疑似样品,采用稀释法分离获得了95个马铃薯黑胫病菌株。通过对分离纯化获得的95个病原菌进行培养性状、形态特征观察、菌落PCR、生理生化测定、致病性测定、BIOLOG测定和16S r DNA系统进化分析等方法,明确了我国马铃薯黑胫病的病原菌包括黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)、巴西果胶杆菌(***)、胡萝卜果胶杆菌(***)和北极星果胶杆菌(***),菌株数量分别为40,15,34和6个。2.通过研究探明了黑腐果胶杆菌(菌株P2K1808)、巴西果胶杆菌(菌株P2K1910)、胡萝卜果胶杆菌(菌株P2K1902)和北极星果胶杆菌(菌株P2K1902),均可在4℃水处理中长期存活,且种群动态最稳定,菌体细胞密度最高,检测260 d后各菌株的菌体细胞密度均在10cfu·m L以上。巴西果胶杆菌、胡萝卜果胶杆菌和北极星果胶杆菌在-20℃土壤处理中可存活200 d以上,巴西果胶杆菌和胡萝卜果胶杆菌菌体密度保持在接近于10cfu·g的水平,北极星果胶杆菌菌体密度在接近10cfu·g的水平,而黑腐果胶杆菌仅能存活不超过80 d。3.本研究采用碟片法与生长速率法,以72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂作为对照处理,评价了9种杀菌剂对4种马铃薯黑胫病菌的离体抑菌活性,明确了不同杀菌剂对4种病原菌的毒力效果存在明显差异。对4种病原菌(黑腐果胶杆菌、巴西果胶杆菌、胡萝卜果胶杆菌,北极星果胶杆菌)均有较好抑制作用的是0.3%四霉素水剂,EC分别为8.375,12.761,9.996,8.675 mg·L,相关系数R值依次是0.984,0.958,0.943,0.953;其次是3%噻霉酮可湿性粉剂,EC分别为18.450,36.083,33.425,37.408 mg·L,相关系数R值依次是0.888,0.982,0.959,0.986。

关键词：马铃薯黑胫病分离鉴定存活时间消涨规律药剂筛选

高光谱成像技术实现马铃薯叶片叶绿素及病害联合检测

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高光谱成像技术实现马铃薯叶片叶绿素及病害联合检测

作者：卓伟云南师范大学

学位级别：硕士

马铃薯是全球广泛种植的经济作物,在农业生产中占有重要地位,马铃薯叶片的叶绿素含量和变化情况能够很好地指示植株的生长健康状况。目前传统的叶绿素检测手段效率偏低、操作要求高,且与精细化农业快速、准确地获取作物生长信息的要求... 详细信息

马铃薯是全球广泛种植的经济作物,在农业生产中占有重要地位,马铃薯叶片的叶绿素含量和变化情况能够很好地指示植株的生长健康状况。目前传统的叶绿素检测手段效率偏低、操作要求高,且与精细化农业快速、准确地获取作物生长信息的要求不匹配。高光谱成像技术的高分辨率、图谱合一、光谱波段数量高等特点,使其能作为一种新型的农作物叶绿素检测手段,并能符合精细化农业的主要要求。论文基于高光谱成像技术,对马铃薯叶片叶绿素的快速无损检测展开研究;利用叶绿素预测模型与图像处理技术,开展了马铃薯叶片叶绿素分布可视化的研究,最后将叶绿素分布图与病害检测建立一定关系,为使用叶绿素分布图检测马铃薯病害奠定理论基础。首先通过高光谱成像系统采集健康马铃薯叶片高光谱图像,对其进行反射率校正、掩膜、标准正态变量变换等光谱预处理。预处理后采用相关系数、连续投影算法、遗传偏最小二乘法共获得5组不同的叶绿素敏感高光谱特征参数:光谱一阶导数与相关系数的498、612、685、742、934nm五个波段信息;二阶导数与相关系数的496、617nm两个特征波段;植被指数结合相关分析得到4个特征参数,即修正型叶绿素吸收指数、改进型叶绿素系数指数、陆地叶绿素指数、叶绿素系数比率指数;连续投影算法的8个特征波段450、555、690、712、722、744、921、968nm;遗传偏最小二乘算法的10个特征波段。基于选取的5组特征参数,分别使用一般函数、改进神经网络、偏最小二乘回归、最小二乘支持向量机回归对马铃薯叶绿素含量建模,根据决定系数、均方根误差等判断指标得到5个最优模型(一般函数法有2个)。本文重点对比分析了神经网络改进前后的建模效果:相同条件下,改进后的神经网络模型决定系数为0.8978,均方根误差为0.0834mg/g,普通神经网络模型的决定系数是0.9472,均方根误差为0.216mg/g。结果表明,本文使用贝叶斯正则化改进的神经网络有更高的预测精度与较低的过拟合现象,最优模型将用于马铃薯叶片叶绿素的快速无损检测。利用本文的最优叶绿素预测模型,通过计算与图像处理得到叶绿素在马铃薯叶片上的分布情况,结果表明,健康马铃薯叶片的叶绿素最低值在0.9mg/g以上,主叶脉附近叶绿素值最高,叶缘的叶绿素偏低。论文最后探索了利用叶绿素分布图中的量化数据和颜色变化以及“空洞”现象来判断马铃薯是否发病的可行性,为后续利用叶绿素分布图诊断马铃薯病害提供理论支撑。

关键词：高光谱成像马铃薯叶片特征参数选取 BP神经网络贝叶斯正则化叶绿素无损检测叶绿素分布可视化

岭南山竹子果皮提取物对溃疡性结肠炎的治疗作用及化学成分研究

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岭南山竹子果皮提取物对溃疡性结肠炎的治疗作用及化学成分研究

作者：覃癸铭广西医科大学

学位级别：硕士

岭南山竹子(Garcinia oblongifolia *** Benth)为藤黄科(Guttiferae)藤黄属植物,主要分布在广西、广东、海南等地,其果实、树皮、树叶均可作为药材,主治消炎止痛,收敛生肌,内服可用于肠炎、小儿消化不良、胃溃疡、十二指肠溃疡、泄泻、... 详细信息

岭南山竹子(Garcinia oblongifolia *** Benth)为藤黄科(Guttiferae)藤黄属植物,主要分布在广西、广东、海南等地,其果实、树皮、树叶均可作为药材,主治消炎止痛,收敛生肌,内服可用于肠炎、小儿消化不良、胃溃疡、十二指肠溃疡、泄泻、呕吐、口腔炎、牙周炎、痈疮溃烂;外用于烧烫伤、下肢溃疡、湿疹。溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种原因不明的非特异性结肠慢性炎症,是炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)的一种,常反复发作,迁延不愈,病变主要牵连结直肠,主要临床症状有腹痛、腹泻和粘液血便等。临床上常用氨基水杨酸类、糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗UC,但效果不显著且常伴不良反应发生,因此寻找其他安全有效的药物仍是十分必要。目的:探索岭南山竹子70%乙醇提物(Garcinia oblongifolia ethanol extract,GOEE)的安全性和其对UC是否有治疗作用,并对岭南山竹子果皮的成分进行研究,为岭南山竹子安全应用于UC和进一步研究提供实验数据。方法:使用课题组前期提取的岭南山竹子醇提物一次性灌胃给药,观察小鼠的毒性反应和器官脏器改变,测试其半数致死量(Median lethal dose,LD)值,评价岭南山竹子的安全性。建立3%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)诱导C57BL/C小鼠UC模型,将小鼠随机分为正常组、DSS模型组、美沙拉嗪组、GOEE(200、400、800 mg/kg),观察小鼠体重变化、结肠长度、疾病活动指数(Disease activity index,DAI)和结肠HE染色病理学改变;检测小鼠血清和结肠中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(L-10)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活力。对GOEE进行分离,岭南山竹子醇提物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位的抗炎活性较好,因此对这两部分采用多个溶剂系统,通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱,聚酰胺柱色谱、ODS柱色谱等进行化学成分分离,对所得化合物使用理化性质,1D-NMR,HSQC,HMBC,MS,IR,UV等现代波谱技术及参考文献数据对照进行结构鉴定。通过化合物抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生,计算化合物抑制NO的IC,评价化合物的抗炎活性。结果:一次性灌胃毒性试验GOEE的LD=7.16 g/kg,部分小鼠出现的毒性反应均可逆,一次性灌胃毒性观察中没有发现明显的器官变化。此外,GOEE能显著抑制UC小鼠的体重下降、结肠缩短,改善DAI及结肠组织病理评分,减少小鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量,升高IL-4、IL-10的水平,并且GOEE能降低结肠MPO、MDA的含量,提高SOD、GSH-px酶的活性,对UC小鼠具有很好改善作用。从正丁醇部位和乙酸乙酯部位分离纯化并鉴定得到6个化合物,经过现代波谱技术鉴定,分别为柠檬酸三丁酯(1)、2-(butoxycarbonylmethyl)-3-butoxycarbo nyl-2-hydroxy-3-propanolide(2)、羟基柠檬酸三丁酯(3)、guttiferone I(4)、Oblongifolins A(5)、Oblongifolins B(6)。其中化合物(3)为新化合物,化合物1-4为该植物首次分离得到。化合物(2)的IC为7.79±3.31μM和化合物(5)的IC为8.39±2.17μM,展现良好的抗炎活性,化合物(3)无明显的抗炎活性,化合物(4)和化合物(6)在大于30μM的时候具有明显的毒性,化合物(1)的IC为16.71±2.54μM,化合物GOL-10的IC为27.03±7.36μM。结论:通过GOEE的急性毒性考察,发现GOEE安全低毒,并且发现GOEE能明显改善DSS诱导的UC小鼠的结肠长度、疾病活动指数和结肠组织病理评分等。并通过对正丁醇部位和乙酸乙酯部位分离鉴定,得到3个苯甲酮类化合物、3个柠檬酸衍生物,进一步对化合物进行体外抗炎活性的研究,发现化合物(2)的IC为7.79±3.31μM和化合物(5)的IC为8.39±2.17μM,展现较好的抗炎活性。

关键词：岭南山竹子急性毒性溃疡性结肠炎化学成分抗炎

黄淮麦区不同耕作制度下小麦赤霉病菌群体遗传多样性分析

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黄淮麦区不同耕作制度下小麦赤霉病菌群体遗传多样性分析

作者：段旭峰中国农业科学院

学位级别：硕士

由镰孢菌引起的小麦赤霉病,在世界各地广泛发生。小麦赤霉病作为一种毁灭性的经济病害,不仅会使产量下降,也会因镰孢菌产生的代谢物而引发安全问题,造成巨大损失。近年来,由于气候、耕作制度等外界因素与镰孢菌自身进化等内在因素的变化... 详细信息

由镰孢菌引起的小麦赤霉病,在世界各地广泛发生。小麦赤霉病作为一种毁灭性的经济病害,不仅会使产量下降,也会因镰孢菌产生的代谢物而引发安全问题,造成巨大损失。近年来,由于气候、耕作制度等外界因素与镰孢菌自身进化等内在因素的变化,给赤霉病的防治带来挑战。本研究通过比较黄淮麦区两种耕作制度下赤霉病菌群体的种和毒素化学型组成差异,以及各自优势病原种与其他麦区群体间遗传差异,明确耕作制度对赤霉病菌群体的影响,揭示不同区域群体间的遗传分化与亲缘关系;结合生物学特性比较,旨在阐明不同群体的演化方向及其生态适应性,为重点群体和潜在群体的动态监测与治理提供农业防治依据。1.黄淮麦区不同耕作制度下镰孢菌群体组成采集黄淮水稻-小麦、小麦-玉米轮作区共61个采样点的小麦赤霉病穗,建立了619株镰孢菌的菌种库和基因库。通过对镰孢菌种和毒素化学型鉴定,明确了黄淮麦区两种耕作制度下,引起小麦赤霉病的镰孢菌种共有9种,两个轮作区的优势群体均为产15ADON毒素的禾谷镰孢菌,说明气候对优势群体的影响大,小麦-玉米轮作区中的镰孢菌多样性水平高于水稻-小麦区,其中FFSC与FIESC在稻麦轮作区中均没有发现;稻麦区有22%左右的3ADON化学型的***群体,经卡方检验明确了两种耕作制度下镰孢菌群体组成存在差异,以及稻麦轮作模式下水稻对***具有选择作用。2.黄淮水稻-小麦轮作区亚洲镰孢菌与其它麦区群体遗传分析与生态适应性比较黄淮稻-麦轮作区采集的36株***菌株为主,加入本实验室在多个麦区采集的菌株数据,包括长江中下游、福建南平以及西南麦区共334株,将其按地理来源与毒素化学型分为7个群体进行多群体比较分析。遗传分析显示,黄淮与长江中下游的3ADON化学型***群体的亲缘关系最近,推测黄淮麦区的***可能从长江中下游远距离扩散而来。依据贝叶斯杂合模型将菌株划分为DON和NIV型为代表的遗传群体,明确了小麦对产DON毒素***群体的选择作用;其中15ADON毒素化学型群体较为特殊,其与所在地优势群体间的遗传差异更小。两个遗传群体在生物学特性方面存在显著差异,这与DON群体对小麦的选择压力相吻合。另外,长江中下游产15ADON毒素化学型***,尽管其群体基数小,但该群体具有与当地优势群体相当的生态适应力。3.黄淮小麦-玉米轮作区禾谷镰孢菌与其它麦区群体遗传分析与生态适应性比较以2018年黄淮小麦-玉米轮作区***为主,结合本实验室长江中下游、西南麦区的优势群体以及2008年黄淮麦区已有菌株、匈牙利供试菌株共470株,按地理来源、毒素化学型以及采集年份划分为8个群体进行遗传分析。结果表明,黄淮群体在2008年与2018年间未出现分化;尽管群体遗传多样性降低,但仍具有较高水平的多态性。黄淮群体与四川15ADON群体之间的亲缘关系更近,独立于长江中下游以及匈牙利群体。根据杂合模型,两个遗传群体间存在分化,但在生物学特性方面无显著差异,其中黄淮15ADON群体的生态适应性能力在产孢量和生长速率方面略强于其他群体。此外,结合遗传结构与生态适应性,明确了引发小麦赤霉病的***在我国四川地区存在由POP1向POP2扩张的潜在趋势。

关键词：耕作制度亚洲镰孢菌禾谷镰孢菌群体遗传结构

氯化两面针碱调控Bel-7402细胞线粒体自噬与凋亡的关系研究

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氯化两面针碱调控Bel-7402细胞线粒体自噬与凋亡的关系研究

作者：廖艺楠广西医科大学

学位级别：硕士

氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从中药两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的根中分离到的一种生物碱,大量研究显示,NC能通过多途径诱导结肠癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤细胞凋亡,但NC的抗肿瘤机制研究主要集中于细胞凋亡的诱导... 详细信息

氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从中药两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的根中分离到的一种生物碱,大量研究显示,NC能通过多途径诱导结肠癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤细胞凋亡,但NC的抗肿瘤机制研究主要集中于细胞凋亡的诱导,其余机制尚待进一步深入探讨。目的:本研究拟通过体外细胞学实验研究天然化学成分NC抑制肝癌细胞的分子机制,探讨NC对肝癌细胞线粒体的影响,探究NC是否能影响Bel-7402细胞的线粒体自噬,以及NC调控的线粒体自噬与细胞凋亡的关系,为NC作为新型的抗肝癌药物进入临床应用提供前期实验研究。方法:1.采用CCK-8法检测细胞活力变化,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测胞毒性,探究NC对人肝癌Bel-7402、SMMC-7721、Huh-7、Hep G2、MHCC-97H细胞株增殖的影响,并选择抑制效果最好的细胞系进行后续试验;通过AO-EB染色法、Annexin V-FITC/7-AAD荧光双染法检测NC对细胞凋亡的影响。2.分别通过激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察NC处理前后线粒体的形态和结构的改变;通过检测ATP水平反映线粒体功能的改变,探究NC对Bel-7402人源肝癌细胞线粒体的损伤作用。3.采用DCFH-DA探针将细胞染色后,用流式细胞仪检测胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;在加用ROS淬灭剂N-乙酰-半胱酰胺(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)预处理的基础上,给药后分别检测细胞活力、LDH水平和细胞凋亡率的改变。通过免疫印迹法(Western blot,WB)检测细胞Akt和p-Akt的蛋白表达量,探究ROS水平的变化对细胞凋亡的影响及分子机制。4.通过WB检测细胞mito-LC3的蛋白表达量;利用Mito-Tracker Green标记线粒体,Lyso-Tracker Red标记溶酶体,在激光共聚焦显微镜下观察溶酶体与线粒体是否存在共定位,检测线粒体自噬水平的改变。通过实时荧光定量PCR和WB检测线粒体DNA拷贝数和线粒体内膜蛋白COXIV表达水平,反映线粒体的数量变化。5.通过WB检测PINK1和Parkin蛋白表达量的变化,探究NC调控线粒体自噬的机制。最后通过加用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1后检测Bel-7402细胞活力和凋亡率,探究NC调控的线粒体自噬与细胞凋亡之间的关联。结果:***以浓度依赖性的方式抑制人肝癌细胞Bel-7402、SMMC-7721、Huh-7和Hep G2增殖,且对Bel-7402细胞的抑制能力最强。NC能显著提高Bel-7402细胞培养液中LDH水平,并诱导Bel-7402细胞凋亡。***能引起Bel-7402细胞线粒体形态和结构改变:激光共聚焦显微镜下观察到线粒体由正常的细丝状变为短棒状甚至碎片状;在透射电子显微镜下观察发现,NC治疗后细胞线粒体肿胀明显,嵴结构溶解;此外,不同浓度NC处理组细胞内ATP含量均有不同程度的下降。提示NC处理使线粒体损伤,引起线粒体形态、结构改变,功能受损。***能促进Bel-7402细胞内ROS含量增加,p-Akt/Akt表达水平降低;NAC预处理细胞后,一定程度上逆转细胞活力、LDH水平和细胞凋亡率,同时能恢复部分p-Akt/Akt表达水平。***结果显示,NC能浓度依赖性降低mito-LC3蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜下观察到,NC处理后溶酶体与线粒体几乎不存在共定位;线粒体DNA拷贝数和线粒体内膜蛋白COXIV表达水平均随着NC浓度升高而增加。***以浓度依赖性的方式抑制Bel-7402细胞PINK1和Parkin蛋白的表达;Mdivi-1联合NC处理Bel-7402细胞可显著增强NC对细胞增殖的抑制,同时促进NC诱导的细胞凋亡。结论:1.本研究通过体外细胞实验,证明NC能抑制人肝癌细胞Bel-7402生长,并诱导细胞凋亡;***可促进细胞内ROS水平升高,且能通过介导ROS/Akt信号通路诱导人肝癌细胞凋亡;***可引起线粒体形态、结构和功能损伤,并能抑制PINIK1/Parkin通路介导的线粒体自噬;***通过抑制线粒体自噬,进而抑制细胞增殖,并促进Bel-7402人肝癌细胞凋亡。

关键词：氯化两面针碱细胞凋亡线粒体自噬活性氧线粒体损伤