检索结果-南通市图书馆

作者：杨晓亮河北医科大学

学位级别：硕士

目的:儿童白癣发病呈世界范围性分布,因地理位置、气候环境、生活习惯等的不同,发病率也存在差异。近期研究显示在欧洲大部分地区[1-3]和我国内陆[4-15](除新疆外)其致病菌种主要为犬小孢子菌。治疗犬小孢子菌引起的头癣,有效药物包括... 详细信息

目的:儿童白癣发病呈世界范围性分布,因地理位置、气候环境、生活习惯等的不同,发病率也存在差异。近期研究显示在欧洲大部分地区[1-3]和我国内陆[4-15](除新疆外)其致病菌种主要为犬小孢子菌。治疗犬小孢子菌引起的头癣,有效药物包括灰黄霉素、伊曲康唑和特比萘芬等,各种药物治疗疗程和疗效报道不一[16-19]。为降低传统药物的毒副作用,提高疗效,国内外学者多主张采用联合用药。徐铮等人[20]报道小檗碱与氟康唑、酮康唑、咪康唑等抗真菌药合用,能不同程度地提高真菌感染的治疗效果,并能使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用,因此可用作抗真菌药物的增效剂。已有学者[32,33]报道应用粗提盐酸小檗碱有抗皮肤癣菌的作用,但应用盐酸小檗碱纯品联合抗真菌药对犬小孢子菌进行体外抗菌活性研究至今尚未见报道。到目前为止,对于皮肤癣菌的药敏标准方案和对结果耐药及敏感标准的界定尚无统一标准[21]。本次实验参照美国国家临床和实验室标准化研究所(CLSI)推荐的《产孢丰富丝状真菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验方案》(M38-A)和相关文献[21,23-25],采用微量稀释法测定盐酸小檗碱单独及联合应用临床常用的三种抗真菌药物对从临床分离的30株犬小孢子菌进行体外药敏试验,并对不同浓度联合应用的抗真菌活性进行比较,以进一步探讨最优联合方案。方法:1菌种分离、培养及鉴定:菌株分离自2007年9月至2008年10月就诊于河北医科大学第二医院皮肤科门诊的头癣患者。用镊子拔除病发和周边鳞屑,若真菌镜检阳性,同时做培养。接种于含氯霉素的沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基,每例标本同时作2管培养,(25-27)℃培养(2-4)周;观察菌落生长情况并涂片镜检为皮肤癣菌时,转种于米饭培养基上,同时做小培养以鉴定菌种。2体外药敏实验2.1单独抗真菌药物药敏实验:用移液器将2倍药物终浓度抗真菌药物倍比稀释液依次加入96孔细胞培养板的每行第1至第10列孔中,每孔加入100uL,第11列和第12列加入RPMI1640培养基100uL。将菌悬液用RPMI-1640液体培养基稀释50倍,得到(0.4～5 )×104 CFU/ mL的2倍终浓度的菌悬液。96孔细胞培养板的每行第1至第11列孔中加入100uL菌悬液,第12列加入100uL培养基。28℃恒温培养,于第5天判读结果。2.2盐酸小檗碱等量联合抗真菌药物药敏实验:上述浓度的盐酸小檗碱和抗真菌药物各50uL加入96孔细胞培养板第1至10列。余操作同单独药敏实验。28℃恒温培养,于第5天进行结果判读。2.3盐酸小檗碱交叉联合抗真菌药物药敏实验:用微量移液器将药物加入96孔细胞培养板内,其中第1至第8行的第1列(孔)至第10列(孔),从高浓度到低浓度,依次加入盐酸小檗碱系列药液各50μL;第1列至第10列的第1行(孔)至第8行(孔)为抗真菌药物第3至第10个倍比稀释浓度的系列药物各50μL,余同单独抗真菌药物药敏实验。28℃恒温培养,培养5天判读结果。3统计学方法:所得数据经SPSS11.5软件进行统计学处理。不同抗真菌药物MIC值比较经秩转换后用单因素方差分析;盐酸小檗碱和抗真菌药物联合抗菌FIC值用χ2检验;进一步两两比较用χ2分割法检验。P0.05,差异无统计学意义。(Table.1)2盐酸小檗碱分别与灰黄霉素、伊曲康唑、特比萘芬等量联合FIC值结果:FIC0.05,差异无统计学意义。(Table.2)3盐酸小檗碱和三种抗真菌药物交叉联合抗菌FIC结果:3.1不同浓度盐酸小檗碱和灰黄霉素联合抗菌结果:盐酸小檗碱各浓度分别和8ug/ml、4ug/ml、2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml灰黄霉素交叉联合所得FIC<1所占比例分别为: 3.3%(1/30)、20.0%(6/30)、40.0%(12/30)、50.

关键词：头癣犬小孢子菌盐酸小檗碱灰黄霉素特比萘芬伊曲康唑药敏实验

亚硝酸钠联合抗真菌药物对红色毛癣菌体外抗菌实验研究

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亚硝酸钠联合抗真菌药物对红色毛癣菌体外抗菌实验研究

作者：冯琴河北医科大学

学位级别：硕士

目的:红色毛癣菌（trichophyton rubrum）是一种最常见的亲人性致病性皮肤癣菌,主要侵犯人的皮肤,指（趾）甲,偶可侵犯人的毛发。国内外多个研究均显示在浅部真菌病患者病原菌分析中,红色毛癣菌的分离率占到首位。此外,国内金学洙等人吉... 详细信息

目的:红色毛癣菌（trichophyton rubrum）是一种最常见的亲人性致病性皮肤癣菌,主要侵犯人的皮肤,指（趾）甲,偶可侵犯人的毛发。国内外多个研究均显示在浅部真菌病患者病原菌分析中,红色毛癣菌的分离率占到首位。此外,国内金学洙等人吉林15年菌种分析研究显示在头癣致病菌中,红色毛癣菌的分离率随年代逐渐增高,到90年代后期,由80年代后期的10.6%明显增高至76.9%。红色毛癣菌不仅引起皮肤感染,最近报道也引起深部组织感染如脓癣、肉芽肿等,其发病率也在逐年升高。由于该菌所致真菌病病程持久,且难治愈,易复发,成为临床亟待研究问题之一。临床上对于红色毛癣菌引起的足癣治疗,推荐采用“1+1联合治疗”方案,即一种外用抗真菌药物加一种口服抗真菌药物联合治疗,可以缩短疗程、提高疗效及患者依从性、降低复发率。目前临床上应用的抗真菌药物对红色毛癣菌病有较好的疗效,但这些药物大都价格昂贵,毒副作用较大,且随着这些抗真菌药物的广泛应用,耐药菌株不断出现,为临床治疗带来困难。为减少药物不良反应,减少耐药菌株出现,临床常采用联合用药。亚硝酸钠是一种常用的食品添加剂,世界食品卫生科学委员会1992年发布的人体安全摄入亚硝酸钠的标准为0～0.1mg/kg体重,按此标准使用和食用,对人体不会造成危害。亚硝酸钠来源丰富,成本低廉,国外已有研究证实亚硝酸钠在酸性条件下对多种酵母菌及皮肤癣菌有较强的杀伤作用,并且临床上应用其外用制剂治疗足癣及甲真菌病有效。我科研究人员既往曾应用MTT法测定亚硝酸钠对红色毛癣菌抗菌活性的影响,结果显示在沙氏液基中亚硝酸钠对红色毛癣菌具有抑制作用;在1.25mmol/L 60mmol/L浓度范围内,亚硝酸钠纯品对红色毛癣菌无细胞毒作用,其中在1.25mmol/L0mmol/L浓度范围内,随着作用浓度的增加,抑制作用逐渐增强;而在10mmol/L60mmol/L浓度范围内对红色毛癣菌抑制作用差异无显著性。电镜观察结果显示,亚硝酸钠影响菌丝超微结构,表现为菌丝的形态学改变以及红色毛癣菌细胞膜和细胞壁的破坏,并在一定浓度范围内随亚硝酸钠药物浓度的增加及作用时间的延长,对菌丝破坏程度增强,呈现剂量和时间依赖性。但目前尚未见亚硝酸钠联合其他临床常用抗真菌药物对红色毛癣菌体外联合抗菌作用的报道。在过去的几年里,对于皮肤癣菌的体外药敏试验方法及结果判读标准尚无统一界定,直至2008年,美国国家临床和实验室标准化研究所（CLSI）提出了产孢丝状真菌微量液基稀释法抗真菌药敏试验方案（M38-A方案）的第二次改良方案（M38-A2方案）,其中增加了皮肤癣菌的相关内容。本试验参照该方案及其他相关文献,采用微量稀释法应用亚硝酸钠联合伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑及卡泊芬净五种抗真菌药物对临床分离的30株红色毛癣菌进行体外药敏试验,以探讨其体外联合用药的抗菌活性及最佳联合浓度,从而指导临床合理使用抗真菌药,有效预防和治疗红色毛癣菌引起的真菌感染性疾病提供依据。方法:1菌株分离、培养及鉴定30株红色毛癣菌均分离自河北医科大学第二医院皮肤科门诊的股癣及甲真菌病患者。自病变部位取材镜检并培养,根据显微镜下特征及沙氏和马铃薯培养基菌落特征等鉴定为红色毛癣菌。2体外药敏试验2.1抗真菌药物单独药敏试验用移液器分别取抗真菌药物倍比稀释液100uL,依次加入96孔板的每行第1～10孔中,第11、12孔为空白及阳性对照,分别加入200uL及100uL RPMI1640液体培养基。将菌悬液用RPMI1640液体培养基稀释50倍,得到二倍终浓度菌悬液,再依次将100uL菌悬液加入96孔板的第1～10列及第12列。30℃恒温培养4～7天,阳性对照100%生长后判读结果。2.2亚硝酸钠交叉联合抗真菌药物药敏试验用微量移液器将药物加入96孔板内,其中每行的第1～10孔,依次加入亚硝酸钠倍比稀释液50uL,浓度从高到低;每列第1～8孔依次加入抗真菌药物倍比稀释液50uL,浓度从高到低,余操作同单独药敏试验。30℃恒温培养5～7天,阳性对照100%生长后判读结果。3统计学方法:应用SPSS16.0软件对数据进行统计学处理。单独应用抗真菌药物MIC值之间比较采用多独立样本比较的Kruskal-wallis H检验,进一步两两比较采用秩转换后单因素方差分析;各抗真菌药物联合亚硝酸钠前后MIC值的比较采用配对样本比较的Wilcoxon符号秩检验;亚硝酸钠和抗真菌药物联合抗菌FIC值之间以及各抗真菌药物不同浓度之间FIC值比较采用多个独立样本比较的Kruskal-wallis H检验,进一步两两比较采用Nemenyi法检验,P<0.05有统计学意义。

关键词：亚硝酸钠红色毛癣菌药敏试验伊曲康唑特比萘芬氟康唑伏立康唑卡泊芬净

播散性念珠菌病小鼠肾脏中p38MAPK和INF-γ的表达及相关性研究

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播散性念珠菌病小鼠肾脏中p38MAPK和INF-γ的表达及相关性研究

作者：刘佩河北医科大学

学位级别：硕士

目的：p38MAPK是MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路超家族的亚类之一，激素、G蛋白偶联受体、以及渗透压在内的许多因素均能激活p38MAPK信号通路，使它在炎症、细胞应激、凋亡、生长等多种生理和病理过程中发挥... 详细信息

目的：p38MAPK是MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路超家族的亚类之一，激素、G蛋白偶联受体、以及渗透压在内的许多因素均能激活p38MAPK信号通路，使它在炎症、细胞应激、凋亡、生长等多种生理和病理过程中发挥重要的作用。近年来研究发现，MAPK信号转导通路在天然免疫和特异性免疫应答中起着重要的调节作用。γ-干扰素（γ-interferon, IFN-γ）作为免疫细胞因子，IFN-γ水平的高低可以反映机体细胞的免疫状态。白念珠菌是最常见的院内感染致病菌，研究表明，当机体感染白念珠菌后，细胞免疫在机体抗白念珠菌感染中占主导地位。最近有研究表明，p38MAPK可促进IFN-γ的表达，但在念珠菌病中尚未见报道。本研究通过建立播散性白念珠菌感染小鼠动物模型，采用免疫组织化学染色方法来检测不同感染时间p38MAPK和IFN-γ在小鼠肾脏的表达情况，同时对二者的表达情况进行相关性研究，探讨其在播散性念珠菌病发病中可能的机制，为临床治疗播散性念珠菌病提供新的思路和方法。方法：1菌株白念珠菌，来自于河北医科大学第二医院皮肤性病科真菌室保存菌种。2播散性念珠菌病小鼠模型的建立昆明小鼠90只，雌雄各半，购自河北医科大学动物饲养中心，在河北医科大学第二医院实验中心普通环境下，给予全价配合饲料饲养。经适应环境后，按体重随机分为A、 B、C三组，每组各30只。A组小鼠为实验组：从第1天开始经腹腔注射环磷酰胺200mg/kg·d，连续4天，第5天时，经腹腔注射浓度为1～5×10～6cfu/ml白念珠菌菌悬液1ml/只，共1天。B组为环磷酰胺对照组：从第1天开始小鼠经腹腔经腹腔注射同等量环磷酰胺，连续4天，于第5天再经腹腔注射生理盐水1ml/只，共1天。C组为空白对照组：从第1天开始小鼠经腹腔注入同等量生理盐水，连续5天。于实验第6d、第9d、第20d分批断颈处死小鼠，观察腹腔脏器大体情况。3播散性念珠菌感染小鼠肾脏菌株的鉴定无菌条件下取出小鼠肾脏，无菌生理盐水冲洗数次后，将小鼠一侧1/2肾组织研磨后，接种于沙氏培养基上培养。4组织病理学检查及免疫组化检测另一部分肾组织用10%福尔马林溶液固定，做常规病理HE染色及PAS染色观察小鼠肾脏组织病理变化及白念珠菌感染情况。采用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法（SP）检测p38MAPK和IFN-γ的表达情况。结果：1播散性念珠菌感染小鼠模型的建立实验过程中，小鼠由于免疫抑制剂环磷酰胺造成多脏器出血、水肿死亡共10只;由白念珠菌播散感染死亡共11只;不明原因死亡共15只。最终，纳入实验小鼠共54只。 A组小鼠从实验第4d开始，精神、食欲差，毛发无光泽，活动差;实验第6d，经解剖后小鼠腹腔内部分脏器水肿明显，肾脏可见少量白色脓点形成;实验第9d，经解剖后，肾脏可见白色脓点生成;第20d，经解剖后，肾脏可见大量白色脓点生成，部分脏器充血、坏死。B组小鼠从实验第4d开始，精神、食欲差，毛发无光泽，活动差，在实验第6d，小鼠肾脏未见明显变化;实验第9d经解剖后，小鼠肾脏水肿明显，体积增大，无白色脓点形成;实验第20d，经解剖后，肾脏水肿，体积增大，无白色脓点形成。C组小鼠组精神、食欲无变化，毛发光泽，活动好，在实验第6d、第9d、第20d经解剖后，小鼠肾脏均呈正常表现。2播散性念珠菌感染小鼠体内肾脏组织真菌培养及鉴定实验组小鼠肾脏第6d、第9d、第20d在沙氏培养基上培养72小时，均可见白色菌落生长，经厚膜孢子琼脂培养基及血清培养法鉴定为白念珠菌。3组织病理学检查A组小鼠，实验第6d，镜下肾脏可见完整肾小球、肾小管结构，PAS染色无紫红色菌丝和孢子;第9d，镜下肾小球、肾小管结构破坏，细胞核固缩，PAS染色可见紫红色菌丝和孢子;第20d，肾小球、肾小管消失，可见坏死形成，PAS染色可见大量紫红色菌丝和孢子;B组小鼠，实验第6d，第9d及第20d，肾小球、肾小管结构均完整，部分细胞变性，胞浆均质红染，胞核完整;C组小鼠镜下均呈正常表现。4p38MAPK在蛋白水平表达情况免疫组织化学检测小鼠肾脏组织中的p38MAPK主要在细胞胞浆中表达，阳性细胞可见胞浆染成棕黄色;免疫组化染色结果显示，A、B、C组均可见阳性细胞表达。A组：实验第6d、第9d、第20d OD值分别为0.1727±0.0089、0.1799±0.0102、0.1638±0.0079，表达呈先上升后下降趋势，P<0.05，差异有统计学意义。B组：实验第6d、第9d、第20d OD值分别为0.1697±0.0074、0.1763±0.0149、0.1618±0.0

关键词：白念珠菌真菌病免疫组化 p38MAPK IFN-γ

263例住院梅毒阳性患者临床分析及梅毒阳性冠心病病例对照研究

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263例住院梅毒阳性患者临床分析及梅毒阳性冠心病病例对照研究

作者：郭鹏英河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本次研究通过对2015年-2017年间河北医科大学第二医院住院梅毒阳性患者临床资料及实验室化验指标进行回顾分析,深入认识住院梅毒阳性患者的流行概况和临床特征。探讨梅毒感染阳性冠心病患者的临床特点,以进一步了解梅毒心脏病。方... 详细信息

目的:本次研究通过对2015年-2017年间河北医科大学第二医院住院梅毒阳性患者临床资料及实验室化验指标进行回顾分析,深入认识住院梅毒阳性患者的流行概况和临床特征。探讨梅毒感染阳性冠心病患者的临床特点,以进一步了解梅毒心脏病。方法:1收集我院三年期间住院病人中符合梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)阳性、甲苯胺红不加热血清试验(Trust)(+)或Trust(-)患者的临床资料进行描述性分析。2收集我院三年期间住院病人中32例患者符合TPPA阳性、Trust(+)或Trust(-)冠心病患者和同期住院非梅毒感染阳性冠心病患者实验室化验结果对照研究。结果:1我院住院梅毒感染阳性患者的临床特征:2015年-2017年间我院住院梅毒患者全部为汉族,各年龄组均有发病,中年组(41-65岁)发病率显著高于其他年龄组,差异具有统计学意义(P<0.05)。男女发病率呈逐年上升趋势;职业分布主要以农民、其他(司机、民工、厨师、职业不详等)、退休为主;婚姻关系中以已婚者为主;以本市县级地区人数最多;住院科室几乎覆盖了全院所有科室,主要分布于心血管科、神经科、消化科等内科科室;外科主要分布于神经外科科室。梅毒感染阳性患者更容易合并感染肝炎(包括HBV或HCV)或HIV中的一种疾病,与合并两种以上疾病的病例经统计学分析其差异有意义(P<0.05)。2梅毒感染阳性冠心病患者的临床特点:2.1冠心病住院梅毒患者合并高血压者明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.2冠心病住院梅毒患者比对照组更容易出现同型半胱氨酸异常,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:2015年至2017年我院住院患者中梅毒感染阳性患病人数呈逐年上升趋势,以中老年发病率最高,几乎分布在全院各个科室,内科科室发病高于外科科室。梅毒阳性冠心病患者与单纯冠心病病人相比,合并高血压风险较低,而血清中高同型半胱氨酸风险较高。

关键词：住院梅毒患者流行病学临床特征梅毒感染阳性冠心病患者同型半胱氨酸

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亚硝酸钠对红色毛癣菌抑制作用的实验研究

亚硝酸钠对红色毛癣菌抑制作用的实验研究

作者：谢红霞河北医科大学

学位级别：硕士

目的:浅部真菌感染是皮肤科的常见病及多发病,其中红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）是最常见的一种皮肤癣菌,也是浅部真菌病的主要病原菌之一。红色毛癣菌属于亲人性皮肤癣菌,主要侵犯人的皮肤、指甲（趾甲）,偶可侵犯人的毛发。有研... 详细信息

目的:浅部真菌感染是皮肤科的常见病及多发病,其中红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）是最常见的一种皮肤癣菌,也是浅部真菌病的主要病原菌之一。红色毛癣菌属于亲人性皮肤癣菌,主要侵犯人的皮肤、指甲（趾甲）,偶可侵犯人的毛发。有研究统计90%的皮肤癣菌慢性感染是由该菌所致。最近报道红色毛癣菌不仅引起皮肤感染,也引起深部组织感染,发病率也在逐年升高。该菌所引起的真菌疾病较难治愈而且容易复发和再感染,从而导致患者生活质量的下降。红色毛癣菌感染的浅部真菌病患者首选外用抗真菌药物,相对安全、便宜、方便,但由于患者依从性等问题,单用一种药物治疗往往耗时长,而且容易出现耐药现象。联合用药可以提高疗效,缩短治疗时间,提高治愈率。大量研究表明,NO作为活化巨噬细胞产生的一种细胞毒效应分子,能介导巨噬细胞抑制和杀伤病毒、细菌、真菌及寄生虫等病原体,是机体抗感染防御体系中的一个重要因子。既往研究证实真菌感染与机体免疫状态密切相关,而NO能直接影响机体的特异性免疫及非特异性免疫。许多研究者在体外试验和动物模型中发现NO在免疫系统中起作用,佟盼琢等研究了30例足癣和35例甲真菌病患者血清中NO和iNOS水平并与正常人群组比较,发现病例组均低于正常对照组水平且NO和iNOS水平呈直线正相关关系。足癣和甲真菌病患者血清NO和iNOS水平降低,也进一步证实了NO在真菌免疫中发挥一定作用。亚硝酸钠是一种化学物质,在酸中易得电子形成NO。近年来国外研究小组对亚硝酸盐的杀菌作用进行了体外实验研究,当pH为4.4时,5～10 mmol/ L的亚硝酸盐化合物可以抑制95 %以上的酵母菌生长,在同样的条件下也观察到酸性的亚硝酸盐化合物可以杀灭其它真菌和细菌。同时国外研究也证实了在酸性环境中亚硝酸盐对酵母菌,皮肤癣菌均具有较强的杀伤作用。临床研究局部应用酸性的亚硝酸盐制剂治疗由红色毛癣菌感染引起的甲真菌病患者16周后,大于90%患者的培养结果转为阴性;应用3%亚硝酸物乳膏治疗足癣4周,坚持完成整个疗程的19位患者中,18人完全治愈。这些体内外研究证实酸性的亚硝酸化合物是有效的抗真菌剂,但目前尚未见亚硝酸钠对红色毛癣菌抑菌情况和超微结构影响的报道。MTT是一种测定细胞抑制率的方法,能以数值形式反映出药物对细胞的抑制情况。近年来应用于念珠菌,曲霉菌等的真菌药敏试验,证实是一种快速简便精确的抗真菌药敏实验终点判断方法。本研究中红色毛癣菌在含有不同浓度亚硝酸钠的沙氏液体药基培养96小时,通过MTT测定亚硝酸钠对红色毛癣菌的抑制作用。同时通过扫描电镜、透射电镜观察不同浓度和不同时间亚硝酸钠对红色毛癣菌超微结构的影响,为临床应用亚硝酸钠提供实验室依据。材料和方法:1菌株选择:菌株为河北医科大学第二医院真菌室保存的典型红色毛癣菌,分离自体癣、股癣、足癣、甲真菌病等浅部真菌病患者。根据显微镜下特征、沙氏和马铃薯培养基菌落特征等鉴定菌种,选择红色毛癣菌30株。2 MTT法测定不同浓度亚硝酸钠对红色毛癣菌的抑制作用:应用MTT法测定不同浓度亚硝酸钠在530nm的吸光度值以此量化对红色毛癣菌的抑制作用。3亚硝酸钠对红色毛癣菌超微结构的影响:3.1扫描电镜:观察不同浓度亚硝酸钠（160mmol/ L、80mmol/ L、40mmol/ L、20mmol/ L）作用于红色毛癣菌96小时,160mmol/L亚硝酸钠作用不同时间（48h、72h和96h）对红色毛癣菌超微结构的影响,同时设未加药物的生长对照组。3.2透射电镜:观察80mmol/L亚硝酸钠作用96小时对红色毛癣菌超微结构的影响,同时设未加药物的生长对照组。4统计学方法:应用SPSS13.0统计软件进行数据处理。首先应用SPSS 13.0软件计算不同浓度亚硝酸钠的抑制率,单因素方差分析比较不同浓度的抑制率,进一步两两分析采用LSD检验,P<0.05为差异有显著性。结果:1 MTT法测定亚硝酸钠作用96h对红色毛癣菌抑菌结果:亚硝酸钠的浓度为160mmol/ L、80mmol/ L、40mmol/ L、20mmol/ L、10mmol/L、5mmol/L、2.5mmol/L、1.25mmol/L.作用96小时对红色毛癣菌抑制率依次为: （73.62+9.7%）、（71.93+1.47%）、（73.53+1.14%）、（70.80+1.50%）、（68.67+1.27%）、（41.76+1.53%）、（29.59+1.90%）、（16.98+1.82%）。随亚硝酸钠浓度减小,对红色毛癣菌的抑制率逐渐降低;经单因素方差分析P<0.05,差异有统计学意义。进一步两两比较结果:160mmol/ L

关键词：红色毛癣菌亚硝酸钠一氧化氮 MTT 抑制率电镜

石家庄地区321例2型糖尿病患者足浅部真菌感染患病率及易感因素研究

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石家庄地区321例2型糖尿病患者足浅部真菌感染患病率及易感因素研...

作者：周静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:了解石家庄地区321例2型糖尿病患者足浅部真菌感染的危险因素与患病率,以及糖尿病足与足浅部真菌感染的关系。方法:本研究通过调查问卷调查、查阅病历的方式对研究对象进行一般情况、生活习惯、家族史、糖尿病、合并症等信息的采集... 详细信息

目的:了解石家庄地区321例2型糖尿病患者足浅部真菌感染的危险因素与患病率,以及糖尿病足与足浅部真菌感染的关系。方法:本研究通过调查问卷调查、查阅病历的方式对研究对象进行一般情况、生活习惯、家族史、糖尿病、合并症等信息的采集,评估足皮肤干燥情况,并对研究对象的足皮屑与甲屑进行真菌镜检,通过统计学软件处理数据,得到相关结果。结果:321例2型糖尿病患者中足浅部真菌感染患病率为42.67%,男性2型糖尿病患者足浅部真菌感染患病率46%,女性2型糖尿病患者足浅部真菌感染患病率37.2%,（P＞0.05）差异无统计学意义。2型糖尿病患者中足浅部真菌感染组的年龄、职业、文化程度、运动程度、皮肤干燥程度、血管损伤、神经损伤与无浅部真菌感染组相比存在明显差异（P＜0.05）。进一步行Logistic回归分析表明年龄增加、文化程度、皮肤干燥程度是足浅部真菌感染的独立危险因素。2型糖尿病患者中足浅部真菌感染并不是糖尿病足的危险因素。结论:石家庄地区2型糖尿病患者足浅部真菌感染发生率与年龄、文化程度、皮肤干燥程度呈正相关,足浅部真菌感染不是影响糖尿病足患病率的危险因素。石家庄地区高龄2型糖尿病患者为减少足浅部真菌感染应该加强足部皮肤护理。

关键词：足浅部真菌感染糖尿病足患病率易感因素

足癣患者血清IL-12、IFN-γ、iNOS、NO表达水平的研究

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足癣患者血清IL-12、IFN-γ、iNOS、NO表达水平的研究

作者：吉冯伟河北医科大学

学位级别：硕士

目的:足癣呈世界性分布,一些需长时间穿不透气胶鞋和长统靴的职业中,患病率高达80%以上。其致病真菌主要是红色毛癣菌,不规范治疗导致疾病复发和耐药菌的产生。近期研究表明,天然免疫在抗真菌免疫中起重要作用,可直接杀伤病原体并能激... 详细信息

目的:足癣呈世界性分布,一些需长时间穿不透气胶鞋和长统靴的职业中,患病率高达80%以上。其致病真菌主要是红色毛癣菌,不规范治疗导致疾病复发和耐药菌的产生。近期研究表明,天然免疫在抗真菌免疫中起重要作用,可直接杀伤病原体并能激发适应性免疫。入侵的真菌等病原体被天然免疫系统识别是激发宿主产生免疫应答的第一步。一旦真菌感染,体内的吞噬细胞活化,分泌包括IL-12的多种细胞因子和炎性介质。IL-12是触发天然免疫应答的关键因子,也是激活Th1细胞介导特异性免疫应答的必要条件。IL-12对非特异免疫和特异性免疫都发挥重要作用,其架起非特异免疫和特异性免疫之间的桥梁,是一种前炎症细胞因子。IL-12能强有力地诱导天然免疫的NK细胞、APC及获得性免疫的Th1细胞等产生IFN-γ等细胞因子。INF-γ又是一个潜在的强有力的IL-12诱导因子,它的产生依赖于IL-12,但它产生以后反过来增加IL-12的分泌。IFN-γ作用于巨噬细胞产生诱生一氧化氮合酶(inducible NO synthase,iNOS),生成NO,而NO是清除真菌病原体的重要效应分子。NO在炎症反应的许多环节中发挥复杂的调节作用,其对外界病原微生物具有毒性作用。上述四种细胞因子由此构成一个正反馈途径,同时作为一个功能单位,可促进特异性免疫应答,成为联系天然免疫和获得性免疫应答的纽带。红色毛癣菌引起的足癣患者临床表现多为鳞屑角化型,病程慢性且易复发。本研究通过对足癣患者血清中IL-12、IFN-γ、iNOS、NO水平的检测,以探讨红色毛癣菌引起的足癣患者免疫功能是否存在异常以及这四种细胞因子在免疫发病机制中所起的作用。方法:1、病例选择患者组30例足癣患者(真菌培养均为红色毛癣菌)均来自河北医科第二医院皮肤科门诊。入选标准:凡临床症状典型,真菌直接镜检阳性,诊断为足癣,且培养确定是红色毛癣菌者,年龄18～70岁,非妊娠及哺乳期妇女,就诊前1周内未外用或1个月内未系统应用过抗真菌药,以及2个月内未用皮质类固醇激素和免疫抑制剂等影响全身免疫功能药物的患者。排除标准:就诊前1周内曾外用或1个月内系统应用过抗真菌药,以及2个月内曾用皮质类固醇激素和免疫抑制剂的患者,及合并有其它系统性疾病和免疫性疾病的患者。对照组:来自健康志愿者,共20例。均无足癣疾患和自身免疫性疾病及家族史。经t检验,性别、年龄与病例组无显著差异。2、征得患者同意采静脉血5毫升,提取血清分装,-20℃保存备用。3、取材及培养:用钝刀刮取病变处鳞屑(或剪取疱壁),同时做真菌镜检和培养。采用25℃恒温培养,随时观察培养情况,4周以上无菌落生长判定为阴性。4、菌种鉴定:皮肤癣菌主要根据菌落形态、小培养的镜下结构进行鉴定,确定真菌的种属。5、细胞因子测定:采用双抗体夹心ELISA方法分别检测实验组及对照组血清中IL-12、IFN-γ的浓度;应用721分光光度计法测定实验组及对照组血清中iNOS、NO的浓度。操作过程均按试剂盒说明书进行。6、统计学方法:所得数据经SPSS11.5软件进行统计学处理,数据用均数±标准差(—X±s)表示,采用t检验分析足癣患者与正常对照组, IL-12、IFN-γ、iNOS、NO的血清水平有无显著性差异;P<0.05有统计学意义。结果:检验数据采用SPSS11.5统计学软件,两样本t检验。1.血清中IL-12测定结果(单位pg /ml):足癣患者血清IL-12平均值为8.0633±1.936,对照组为11.6115±2.424,病例组水平低于对照组,P < 0.05,差异有统计学意义。2.血清中IFN-γ测定结果(单位pg /ml):足癣患者血清IFN-γ平均值为9.1763±1.033,对照组为13.3555±1.506,病例组水平低于对照组,P < 0.05,差异有统计学意义。3.血清中iNOS测定结果(单位U /ml):足癣患者血清iNOS平均值为11.4270±1.007,对照组为20.4315±0.795,病例组水平低于对照组,P <0.05,差异有统计学意义。4.血清中NO测定结果(单位μmol /L):足癣患者血清NO平均值为60.572±5.174,对照组为79.388±6.365,病例组水平低于对照组,P < 0.05,差异有统计学意义。结论:1.足癣患者外周血血清IL-12、IFN-γ、iNOS、NO表达水平降低。2.感染红色毛癣菌的足癣患者存在免疫功能低下,IL-12、IFN-γ、iNOS、NO表达水平降低可能与患者的慢性感染有一定联系。

关键词：足癣红色毛癣菌白介素-12 γ-干扰素诱生型一氧化氮合酶一氧化氮

HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞增殖和p38MAPK表达的影响

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HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞增殖和p38MAPK表达的影响

作者：霍文倩河北医科大学

学位级别：硕士

目的:炎症反应是宿主抵抗病原体的一个重要反应途径,然而,当炎症过度活化或失去调节时,将导致宿主的组织损伤。大量实验证实:过度活化的炎性细胞因子介导的固有免疫和适应性免疫能够导致人类脓毒血症以及免疫功能障碍的发生。在临床中,... 详细信息

目的:炎症反应是宿主抵抗病原体的一个重要反应途径,然而,当炎症过度活化或失去调节时,将导致宿主的组织损伤。大量实验证实:过度活化的炎性细胞因子介导的固有免疫和适应性免疫能够导致人类脓毒血症以及免疫功能障碍的发生。在临床中,念珠菌血症具有一些同细菌性脓毒血症相似的症状。早期大部分表现为中高热、低血压、心率增快以及酸中毒等症状,而晚期一些患者常发展为感染性休克以及多器官功能障碍。促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族在炎症和应激中是信号转导重要的组成部分,能够调控一系列的生理过程。MAPK家族包括p38,JNK,和ERK,并通过磷酸化激活。有研究显示,在细菌性脓毒血症中p-p38,p-ERK,p-JNK的表达显著增加,而MAPK的磷酸化可导致器官的损伤。此外,p38的激活能够调节巨噬细胞和T细胞对创伤性损伤的反应。热休克蛋白是一组分子伴侣蛋白,当细胞遭受高温或者其他外界刺激时,能够维持客户蛋白的稳定性,防止未折叠蛋白降解。HSP90做为重要的分子伴侣之一,负责客户蛋白的三级折叠,如IKK,IRAK-1和MAP激酶,并通过TLR信号途径参与固有免疫反应。在体外实验中,HSP90抑制剂能够减轻脂多糖（LPS）诱导的大鼠脓毒血症中的炎症反应,延长大鼠的生存期。在LPS体外刺激小鼠巨噬细胞的实验中,HSP90抑制剂能够通过降低p38的磷酸化水平以及介导巨噬细胞的凋亡而发挥抗炎作用。而HSP90抑制剂对由白念珠菌引起的炎症反应未见报道。本实验通过白念珠菌体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞,探讨HSP90抑制剂是否通过抑制巨噬细胞的增殖及降低p38磷酸化水平而发挥抗炎作用。方法:1实验用小鼠健康的雌性昆明种小鼠35只,清洁级,4-5周龄,18～23g,由河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号:1508052。2实验用菌株白念珠菌标准株atcc90028购于中国医学科学院微生物研究所。3菌株的活化、菌悬液的配制及灭活白念珠菌标准株复温后在沙氏培养基上传代三次,加入含0.1%吐温80的1640培养液,吸管轻轻吹打混匀,血球计数板计数,调整终浓度为1-2×106/ml。随后将装有白念珠菌的试管放入65℃水浴锅中加热30min进行灭活。4巨噬细胞分离培养及鉴定采用小鼠腹腔巨噬细胞分离法提取巨噬细胞,1640培养液（含10%胎牛血清）进行培养,巨噬细胞培养3天后取出。采用形态学及免疫组织化学法进行巨噬细胞的鉴定:将巨噬细胞制成单细胞悬液后,进行细胞爬片,第2天后,取出盖玻片,丙酮固定,进行he染色及免疫组织化学sp法检测巨噬细胞cd68抗原的表达,中性树胶封固。5实验分组与处理实验分为实验组和对照组。巨噬细胞培养3天后取出,离心洗涤后计数板计数。并用含10%胎牛血清1640培养液调整终浓度至5-6×105/ml,转种至6孔板中,每孔2ml,培养8-10小时后每孔加入浓度为2×106/ml菌悬液0.5ml。实验组每孔分别加入终浓度为0.01μmol/lμmol/l的17-dmag100μl,对照组则加入同体积含10%胎牛血清1640培养液。于第12小时分别收集实验组及对照组细胞,-80℃冻存待测。每组均设置4个重复孔。6westernblot法检测各组细胞磷酸化p38蛋白的表达水平实验各组巨噬细胞从六孔板吹打下来后离心,pbs洗涤2遍,用含蛋白磷酸酶抑制剂的细胞裂解液ripa将上述细胞裂解,提取总蛋白,采用sds-page凝胶电泳,随后转至pvdf膜,牛奶蛋白封闭后,分别孵育p-p38（1:300）与β-actin（1:1000）一抗及抗兔igg二抗（1:3000）,最后用双色红外激光扫描仪进行扫膜,imagej软件分析结果。7cck-8法检测各组细胞增殖率的变化将100μl浓度为5-6×105/ml的细胞悬液接种至96孔培养板内,放置细胞培养箱8h后,分别加入90μl浓度为5.5-6.5×105/ml菌悬液及10μl终浓度为0.01μmol/l、0.1μmol/l、0.5μmol/l、1μmol/l的hsp90抑制剂孵育12h。同时设对照组（不加药物组）和空白组（只加培养液和白念珠菌悬液）,孵育12h后,每孔加入20μl的cck-8溶液,继续放置细胞培养箱内,3h后用酶标仪测定各孔在450nm波长的a值。按照公式:增殖抑制率（pi）=[a（对照组）-a（实验组）]/[a（对照组）-a（空白组）]×100%。计算细胞增殖抑制率。每组均设置3个重复孔。8巨噬细胞增殖与p-p38表达的相关分析用spearman相关分析法将上述计算的细胞增殖抑制率与p-p38的表达水平进行相关分析9统计学分析用spss13.0统计软件,数据结果以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用s-n-k检验,p<0.05为有统计学意义。结果1巨噬细胞形态观察培养第1天后,倒置

关键词： HSP90抑制剂 17-DMAG 白念珠菌巨噬细胞 p-p38

HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞分泌IL-23的研究

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HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞分泌IL-23的研究

作者：毛艳红河北医科大学

学位级别：硕士

目的:白念珠菌是引起人类真菌感染的主要致病菌,在医院获得性感染中居第四位,死亡率接近50%,它常寄生在人类的口腔、下呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道中,可引起口腔泌尿生殖道等的表浅感染,也可通过血行播散和器官入侵引起免疫力低下病人... 详细信息

目的:白念珠菌是引起人类真菌感染的主要致病菌,在医院获得性感染中居第四位,死亡率接近50%,它常寄生在人类的口腔、下呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道中,可引起口腔泌尿生殖道等的表浅感染,也可通过血行播散和器官入侵引起免疫力低下病人致命的系统性感染,患者出现念珠菌血症、心内膜炎,中枢神经系统感染、眼内炎和骨髓炎,造成多器官功能的损害甚至死亡。在系统性白念珠菌感染过程中,强烈的炎症反应不仅对机体没有有利作用,反而对机体器官组织造成损伤。IL-23参与机体防御白念珠菌感染的天然免疫过程,IL-23产生后可刺激巨噬细胞产生更多的促炎因子,并可作用于Th17细胞,激活获得性免疫反应,进一步增强机体清除白念珠菌的能力,IL-23对Th17细胞的生存、增殖、再激活及产生IL-17是不可缺少的。因此,IL-23是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁。Hsp90是一个进化保守、含量十分丰富的分子伴侣,不仅参与应激反应,还参与了炎症反应和天然免疫反应过程,它影响着大量客户蛋白的活性和信号通路的传导。本实验通过巨噬细胞与白念珠菌体外相互作用,探讨巨噬细胞与白念珠菌体外相互作用后IL-23的表达分泌水平及Hsp90抑制剂对IL-23表达分泌水平的影响。方法:1实验用小鼠昆明种健康小鼠30只,雌性,清洁级,4-5周龄,15～20g,由河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号:1404078。2实验用菌株白念珠菌标准株ATCC 90028购于中国医学科学院微生物研究所。3菌株的活化和菌悬液的配制白念珠菌标准株复温后在沙氏培养基上活化三次,加入含0.1%吐温80的1640培养液,吸管吹打混匀,用血球计数板计数,调整终浓度至1-2×106/m L。4巨噬细胞分离培养及鉴定小鼠腹腔巨噬细胞分离法提取巨噬细胞,显微镜下计数,并用含10%胎牛血清的1640培养液进行培养,巨噬细胞培养3天后取出。巨噬细胞的鉴定采用形态学及免疫组化SP法:取出的巨噬细胞PBS洗涤3遍,丙酮固定,常规HE染色、瑞士-吉姆萨染色及免疫组织化学SP法检测巨噬细胞CD68抗原的表达,中性树胶封固。5实验分组与处理实验分为实验组和对照组。巨噬细胞培养3天后取出,离心洗涤后计数板计数。用含10%胎牛血清1640培养液调整终浓度至5-6×105/m L,转种至6孔板中,每孔2 ml,培养24小时后每孔加入浓度为1×106/m L菌悬液0.5 ml。实验组每孔分别加入0.01mmol/L.5mmol/L浓度的17-DMAG100mL,对照组加入同体积含10%胎牛血清1640培养液。0.1mmol/L浓度实验组及对照组分别于实验的第2、4、6、12小时收集细胞及上清液。不同浓度17-DMAG实验组于第4小时收集上清液。上清液-80℃冻存待测。各孔分别设3个平行孔。6流式细胞术检测IL-23的表达水平实验各组巨噬细胞从六孔板吹打下来后离心,PBS洗涤2遍,加入0.1%Triton X-100打孔,避光孵育20分钟,IL-23抗体染色,避光孵育15分钟,流式细胞仪检测巨噬细胞内IL-23的表达水平,用FACSDiva Software软件分析数据。7 ELISA法检测IL-23的分泌水平实验各组收集的上清液复温,按试剂盒说明操作,检测细胞培养液中IL-23在蛋白水平的表达。结果:1巨噬细胞培养形态观察培养第一天倒置显微镜下可见巨噬细胞为圆形和椭圆形,贴壁生长。培养第三天,显微镜下可见巨噬细胞体积略增大,为圆形,椭圆形,多角形,多数有伪足和凸起,贴壁生长。2巨噬细胞HE染色和瑞士-吉姆萨染色结果HE染色显微镜下可见巨噬细胞胞浆丰富,呈粉红色,核大深蓝色,瑞士染色显微镜下可见胞质淡蓝色,细胞核紫红色。两种染色均可见细胞核呈肾形,马蹄形,偏居于一侧。3巨噬细胞免疫组织化学结果CD68阳性反应定位于培养巨噬细胞的胞膜及胞浆。4流式细胞术检测巨噬细胞内IL-23表达水平结果在实验的2h、4h、6h及12h,实验组IL-23表达水平分别为6.24±1.16,8.09±1.15,10.54±0.67及3.69±0.21。对照组IL-23表达水平分别为8.19±1.01,10.06±0.32,12.10±1.97及4.76±0.86。实验组和对照组IL-23的表达水平均随着作用时间的延长先上升后下降,并在第6小时表达水平达高峰期。实验组表达水平明显低于对照组,F=55.643 P=0.000P<0.05,差异有统计学意义。5上清液中IL-23分泌水平检测结果。在实验的2h、4h、6h及12h,实验组IL-23表达水平（pg/m L）分别为225.17±7.95,243.60±5.81,257.61±12.48及259.19±7.92。对照组268.99±14.34,278.62±14.54,295.96±5.65及309.79±4.

关键词： HSP90抑制剂 17-DMAG 白念珠菌巨噬细胞 IL-23

石家庄市藁城区南凝仁村马拉色菌定植及其易感因素研究

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石家庄市藁城区南凝仁村马拉色菌定植及其易感因素研究

作者：杨晓平河北医科大学

学位级别：硕士

目的:既往研究认为马拉色菌定植与环境、气候、生活习惯及卫生状况相关,常见的易感因素为高温、高湿、多汗及油脂分泌过多。为了解石家庄市藁城区南凝仁村马拉色菌定植及其易感因素情况本文进行了调查研究。方法:本研究采用调查问卷及... 详细信息

目的:既往研究认为马拉色菌定植与环境、气候、生活习惯及卫生状况相关,常见的易感因素为高温、高湿、多汗及油脂分泌过多。为了解石家庄市藁城区南凝仁村马拉色菌定植及其易感因素情况本文进行了调查研究。方法:本研究采用调查问卷及随机抽样的方法对所抽取的研究对象进行一般情况、生活习惯、生活环境、既往疾病史等信息的采集,并收集研究对象胸部、背部及头部皮屑,进行真菌镜检,通过统计学软件处理数据,得到相关结果。结果:1.本研究显示马拉色菌定植率为45.7%,其中男性定植率为41.6%,女性定植率为48.1%,P>0.05,差异无统计学意义;2.不同部位马拉色菌定植率差异有统计学意义,P0.05;在头部不同性别马拉色菌定植率差异有统计学意义,P0.05,差异无统计学意义;5.洗澡后护理、是否经常去角质是影响背部马拉色菌定植的易感因素;以19-20点为对照,21-22点入睡、23点-凌晨以后入睡是影响头部马拉色菌定植的易感因素。结论:石家庄市藁城区南凝仁村300例居民中头部马拉色菌定植率高于胸部和背部;马拉色菌定植易感因素为经常去角质、洗澡后护理和入睡时间。

关键词：马拉色菌定植率易感因素