检索结果-南通市图书馆

检索条件"导师=于珊珊"

共 3 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

人参皂苷的酶转化及其抗炎活性研究

人参皂苷的酶转化及其抗炎活性研究

引用

作者：周凯璐长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究应用分子生物学技术,在大肠杆菌中克隆、表达了来源于Streptomyces *** G7菌的β-糖苷酶Srglu1,并对Srglu1进行纯化及酶学性质表征。同时,将Srglu1应用于人参皂苷的酶转化中,利用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用技... 详细信息

目的:本研究应用分子生物学技术,在大肠杆菌中克隆、表达了来源于Streptomyces *** G7菌的β-糖苷酶Srglu1,并对Srglu1进行纯化及酶学性质表征。同时,将Srglu1应用于人参皂苷的酶转化中,利用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS),对Srglu1转化人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3和Rc的过程进行定性和定量研究,鉴定其转化产物的化学结构,同时建立该酶转化以上四种人参皂苷的最适反应条件及最佳工艺参数,阐明转化路径及转化机制。此外,我们建立斑马鱼尾鳍截肢炎症模型,探究人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3和Rc及其转化产物对斑马鱼中性粒细胞向损伤部位迁移活动的影响,为人参皂苷进一步的药理活性研究以及开发高疗效,低毒副作用的抗炎新药物和临床应用提供科学依据。方法:1.应用分子生物学技术,克隆、表达了来源于菌的β-糖苷酶Srglu1。2.采用镍柱亲和层析方法对重组β-糖苷酶Srglu1进行分离纯化,利用SDS-PAGE凝胶电泳分析,确定重组β-糖苷酶Srglu1的纯度及分子量。Streptomyces *** G73.使用紫外分光光度法对Srglu1的酶活力及酶学性质(包括最适温度及温度稳定性、最适p H及p H稳定性,底物选择性、有机溶剂和金属离子对酶活力的影响等参数)进行研究。4.使用薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对Srglu1转化人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc的产物进行结构鉴定,同时分析其转化路径及转化机制。5.建立斑马鱼尾鳍截肢的急性炎症模型,通过荧光显微镜观察人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、F2、C-O+C-Y、C-Mc-1+C-Mc、C-Mx-1+C-Mx对中性粒细胞向损伤组织的迁移活动,初步探索以上人参皂苷的抗炎活性。结果:1.我们对来源于Streptomyces *** G7菌的重组β-糖苷酶Srglu1进行了克隆,表达及纯化,经序列同源性比对分析及系统发育学分析,β-糖苷酶Srglu1属于糖苷水解酶家族一(GH1),纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE检测,蛋白分子量为48k Da,该分子量与预测分子量一致。2.对重组β-糖苷酶Srglu1进行酶学性质表征,确定了Srglu1是一种同时具有β-D-吡喃葡萄糖苷和β-D-吡喃乳糖苷活性的双功能酶,其最适温度为56℃,最适p H为7.4;同时发现Srgu1在宽范围内具有较好的热稳定性和p H稳定性。3.通过TLC、HPLC及HPLC-MS对转化后的人参皂苷结构鉴定,确定重组β-糖苷酶Srglu1水解人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3和Rc的转化路径如下:Rb1→Gyp XVII→F2,Rb2→C-O→C-Y,Rb3→C-Mx-1→C-Mx,Rc→C-Mc-1→C-Mc,以上四种皂苷底物在3 h内均被转化完全。Srglu1对人参皂苷的转化机制分析表明:该酶能够定向水解人参皂苷Rb1,Rb2,Rb3、Rc的C-3位葡萄糖,C-20位外侧葡萄糖,生成稀有皂苷Gyp XVII、F2、C-O、C-Y、C-Mx-1、C-Mx、C-Mc-1和C-Mc。4.建立斑马鱼尾鳍截肢炎症模型,探讨人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc及其转化产物的抗炎活性,结果显示:人参皂苷Rb1及其产物F2、人参皂苷Rb2及其产物(C-O+C-Y)、人参皂苷Rb3及其产物(C-Mx-1+C-Mx)、人参皂苷Rc及其产物(C-Mc-1+C-Mc)均可抑制中性粒细胞向损伤部位的迁移,呈现较好的抗炎效果。结论:来源于Streptomyces *** G7菌的β-糖苷酶Srglu1属于GH1家族,该酶可以在大肠杆菌中大量可溶性表达,并且可应用简单方便的镍柱亲和层析纯化,Srglu1反应条件范围广泛,为酶的工业化应用提供选择。我们采用了HPLC及HPLC-MS的分析方法对人参皂苷转化产物及其路径进行确定,发现Srglu1能够定向水解人参皂苷Rb1,Rb2,Rb3、Rc的C-3位葡萄糖,C-20位外侧葡萄糖,生成稀有皂苷Gyp XVII、F2、C-O、C-Y、C-Mx-1、C-Mx、C-Mc-1和C-Mc。鉴于Srglu1在转化稀有人参皂苷的过程中具有催化效率快,专一性高,无副产物的优势,在稀有人参皂苷工业应用方面具有很大的应用潜力。此外,我们建立斑马鱼炎症模型,对酶转化人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc及其产物进行抗炎活性的初步探讨,可为开发相关天然抗炎药物提供理论支撑。

关键词：糖苷酶生物转化人参皂苷抗炎活性斑马鱼

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

比较三七总皂苷发酵前后成分变化和对环磷酰胺诱导免疫低下大鼠的治疗作用

比较三七总皂苷发酵前后成分变化和对环磷酰胺诱导免疫低下大鼠的...

引用

作者：张旭长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:优化三七总皂苷发酵最佳工艺条件,并比较发酵前后三七总皂苷对环磷酰胺诱导免疫低下大鼠的治疗作用。方法:1.采用植物乳杆菌发酵三七总皂苷,得到发酵后三七总皂苷;利用响应面分析法优化培养基初始p H、发酵时间、发酵温度、植物乳... 详细信息

目的:优化三七总皂苷发酵最佳工艺条件,并比较发酵前后三七总皂苷对环磷酰胺诱导免疫低下大鼠的治疗作用。方法:1.采用植物乳杆菌发酵三七总皂苷,得到发酵后三七总皂苷;利用响应面分析法优化培养基初始p H、发酵时间、发酵温度、植物乳杆菌菌液接种量四个发酵工艺条件;2.采用质谱法对发酵前后三七总皂苷中单体皂苷进行定性分析,高效液相法对发酵前后三七总皂苷中单体皂苷进行定量分析;3.采用皮下注射乙酰苯肼和环磷酰胺建立免疫低下大鼠模型,造模7天,连续给药21天,比较三七总皂苷和发酵三七总皂苷对免疫抑制大鼠的治疗作用。大鼠腹主动脉采血测定血常规WBC、RBC、HGB和PLT相关参数;取大鼠胸腺和脾脏计算脏器指数;利用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+的数量;通过酶联免疫吸附测定法(EILSA法)测定血清中炎症因子IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IFN-γ、TGF、TNF-α水平,造血因子TPO、EPO、GM-CSF含量;利用碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶试剂盒(LDH)、直接胆红素(D-BIL)(微板法)、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(赖氏法)、转铁蛋白(TRF)测定试剂盒(免疫比浊法)测定血清生化指标含量;利用荧光定量PCR法测出大鼠脾脏组织中IL-4、IL-6、IFN-γ、STAT-3、T-bet、Foxp3、GATA3、TPO、EPO、GMCSF、c-MPL、EPOr m RNA含量表达。采用western blot实验检测脾脏组织中pJAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白水平含量;采用HE染色观察大鼠胸腺、脾脏及骨髓病理组织变化。结果:1.基于单因素实验,利用响应面优化法对植物乳杆菌发酵三七总皂苷进行工艺优化,得到发酵三七总皂苷最优工艺条件为:培养基p H值7.0、发酵时间3.2d、发酵温度37.6℃和植物乳杆菌菌液接种量3.1%,此条件下得到人参皂苷Rg3、Rh1、CK含量分别增加了338.60%,107.78%和130.56%。2.采用质谱法对发酵前后三七总皂苷进行定性分析,结果共鉴定出了28种皂苷,测定出相对含量变化,且检测出人参皂苷Rg3、Rh1、Ft1、F4、Rk3、Rk1、CK、Rh2、Rk2、Rh3等多种稀有皂苷;高效液相色谱法测定发酵前后三七总皂苷中三七皂苷R1以及人参皂苷Rh1、Rg3、CK、Re、Rh2、Rd、PPT八种单体皂苷发酵前后含量变化情况,与三七总皂苷相比,人参皂苷Rh1、Rg3、CK、Rh2、Rd、PPT在发酵总皂苷中含量显著增多。3.采用乙酰苯肼和环磷酰胺建立的免疫低下大鼠模型实验中,三七总皂苷和发酵三七总皂苷能显著改善模型大鼠外周血液指标;二者均可显著抑制胸腺和脾脏萎缩,增加脏器指数;二者均能改善大鼠淋巴细胞亚群数量的变化,增加CD4+T淋巴细胞的数量,降低CD3+T淋巴细胞的数量;二者均能增加模型大鼠血清炎症因子IL-6、IL-4、IL-10、IL-12、IL-13、IFN-γ、TGF、TNF-α的表达水平,且发酵后总皂苷效果好于发酵前(p<0.05);二者均可提高造血因子TPO、EPO、GM-CSF含量,且发酵总皂苷作用明显优于总皂苷的作用(p<0.05);二者均可抑制模型大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,增加乳酸脱氢酶试剂盒(LDH)和转铁蛋白(TRF)含量,其中三七发酵总皂苷组大鼠血清中ALP、ALT、AST含量显著高于总皂苷组;二者均可改善模型大鼠脾脏组织中IL-4、IL-6、IFN-γ、STAT-3、T-bet、Foxp3、GATA3、TPO、EPO、GM-CSF、c-MPL、EPOr、m RNA水平;在WB实验中,三七总皂苷和发酵三七总皂苷均能显著降低模型组大鼠脾脏中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白相对含量;在HE染色结果中,三七总皂苷和发酵三七总皂苷明显改善乙酰苯肼和环磷酰胺诱导的脾脏、胸腺和骨髓损伤。结论:1.采用植物乳杆菌发酵三七总皂苷制备发酵三七总皂苷,可增加三七总皂苷中稀有皂苷含量。2.三七总皂苷及发酵三七总皂苷均对环磷酰胺诱导的免疫抑制大鼠有治疗作用,且发酵三七总皂苷效果明显优于三七总皂苷。

关键词：发酵发酵三七总皂苷工艺优化免疫抑制三七总皂苷

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

贝叶斯网在农业专家系统中的应用研究 ——以德宏的涮辣种植为例

贝叶斯网在农业专家系统中的应用研究 ——以德宏的涮辣种植为例

引用

作者：濮永仙云南大学

学位级别：硕士

把农业专家系统应用于农业生产,对提高农业生产效率、推广农业生产知识实现农业现代化具有重要的意义。由于农业领域中的知识普遍是具有不确定性的,为了建立一个高效的农业专家系统,所以本文采用了贝叶斯网来表示和处理不确定性知识。... 详细信息

把农业专家系统应用于农业生产,对提高农业生产效率、推广农业生产知识实现农业现代化具有重要的意义。由于农业领域中的知识普遍是具有不确定性的,为了建立一个高效的农业专家系统,所以本文采用了贝叶斯网来表示和处理不确定性知识。这样与早期基于规则的方法相比,语义更明确,可以双向推理,便于快速调试与重构等。本文主要介绍和探讨了创建基于贝叶斯网的农业专家系统所涉及的两个关键问题：一是知识库的构建(根据领域知识建立相应的贝叶斯网模型);二是推理机的算法实现,即贝叶斯网推理算法的实现。鉴于实际的应用,论文探讨了在构建基于贝叶斯网的农业专家系统时,怎样确立贝叶斯网的结构和网中每个结点的条件概率表。‘在建网时为了减少条件概率表的数目,使用了“分离技术”,尽量使结构简单,从而降低问题复杂度。在条件概率表计算中,采用“局部结构”机制以实现用少的概率数目表示条件概率分布。在推理算法方面,本文介绍和实现了近似推理算法中的Gibbs采样算法和精确推理中的切集条件化算法,并在贝叶斯网的基础上介绍了决策网。决策网的应用增强了农业专家系统的功能。本文最后实现了基于贝叶斯网的农业专家系统：涮辣种植产量预测、涮辣决策网和涮辣病虫害诊断专家系统。通过决策网能得到采取什么样的措施能使涮辣种植的收益最大化。系统的运行结果和领域专家得到的结果基本一致。这说明了使用贝叶斯网来表示和处理农业领域中不确定性知识是非常有效的。本文的主要贡献如下：●对于农业专家系统的应用研究,国内外已取得了很多成果。可是对于不确定性知识的表示和处理主要是基于规则的方法。如果只用这种单一的方法处理农业中丰富复杂的不确定性知识,是远远不能满足需要的。基于上述处理的不足,本文使用贝叶斯网来表示与处理不确定性知识,这样能提高专家系统推理的精度和拓展了不确定性知识的表示范围。●贝叶斯网是表示与处理不确定性知识的优秀工具。文章阐述了应用贝叶斯网表示与处理不确定性知识的方法,并阐释了贝叶斯网的语法、语义及特性等。贝叶斯网有三大研究领域：表示、推理及学习,这些领域虽然取得了一定的成就,但仍有大量的工作需要做。作者在贝叶斯网的表示和推理算法方面做了一些工作。●针对基于贝叶斯网建立专家系统所涉及的关键问题,本文在贝叶斯网的构建方面,使用“分离技术”、“局部结构”机制和转换已有的确定性因子知识库等技术简化贝叶斯网的构建,把贝叶斯网应用于农业专家系统收到了非常好的效果。在推理算法领域中,介绍和实现了近似推理中的Gibbs采样算法,同时对精确推理中的切集条件化(cutset conditioning)算法进行介绍和应用。并给出了基于推理算法的决策网的建立方法和步骤。在此基础上,开发了基于贝叶斯网的涮辣种植产量预测、涮辣决策网和涮辣病虫害诊断的专家系统。

关键词：贝叶斯网构建贝叶斯网推理农业专家系统涮辣

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：