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Molecular diagnostics in a teacup:Non-Instrumented Nucleic Acid Amplification(NINA) for rapid,low cost detection of Salmonella enterica

引用

Chinese Science Bulletin 2013年第10期58卷 1162-1168页

作者： KUBOTA Ryo LABARRE Paul WEIGL Bernhard H LI Yong HAYDOCK Paul JENKINS Daniel M Molecular Biosciences and Bioengineering University of Hawaii at ManoaHonoluluHI 96822USA diagenetics IncHonoluluHI 96822USA Program for Appropriate Technologies in Health(PATH) SeattleWA 98109USA Human Nutrition Foodand Animal ScienceUniversity of Hawaii at ManoaHonoluluHI 96822USA Blood Cell Storage Inc(BCSI) SeattleWA 98109USA

We report on the use of a novel non-instrumented platform to enable a Loop Mediated isothermal Amplification(LAMP) based assay for Salmonella *** energy is provided by addition of a small amount(<150 g) of boiling water,and the reaction temperature is regulated by storing latent energy at the melting temperature of a lipid-based engineered phase change *** classification of the reaction is achieved without opening the reaction tube by observing the fluorescence of sequence-specific FRET-based assimilating probes with a simple handheld *** or above 22℃ ambient temperature the non-instrumented devices could maintain reactions above a threshold temperature of 61℃ for over 90 min-significantly longer than the 60 min reaction *** the simple format,detection limits were less than 20 genome copies for reactions run at ambient temperatures ranging from 8 to 36℃.When used with a pre-enrichment step and non-instrumented DNA extraction device,trace contaminations of Salmonella in milk close to 1 CFU/mL could be reliably *** findings illustrate that the non-instrumented amplification approach is a simple,viable,low-cost alternative for field-based food and agricultural diagnostics or clinical applications in developing countries.

关键词：沙门氏菌污染检测设备分子诊断 NINA 核酸扩增成本低反应温度仪表

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