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基于单质粒拯救系统的塞内卡病毒感染性克隆的构建与生物学特性

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1398-1405页

作者：史燕李名洋樊帅胡曼张雨杭何文瑞万博韩世充张改平河南农业大学动物医学院动物免疫学国家国际联合研究中心河南郑州450046 龙湖现代免疫实验室河南郑州450046

参考甲型塞内卡病毒(SVA)CH/HuB/2017株全基因组序列,构建SVA通用型载体,合成SVA FragⅠ和FragⅡ基因片段,并通过无缝克隆技术依次将病毒基因片段插入通用型载体,获得包含病毒全基因组的真核转录质粒pcDNA-SVA;经双酶切和测序验证后,在I... 详细信息

参考甲型塞内卡病毒(SVA)CH/HuB/2017株全基因组序列,构建SVA通用型载体,合成SVA FragⅠ和FragⅡ基因片段,并通过无缝克隆技术依次将病毒基因片段插入通用型载体,获得包含病毒全基因组的真核转录质粒pcDNA-SVA;经双酶切和测序验证后,在IBRS-2细胞上进行转染和传代,以获得拯救毒株rSVA-CH/HuB/2017;经遗传稳定性评价后,利用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光和半数组织培养感染量等试验,鉴定和分析拯救毒株在猪肾细胞系IBRS-2和PK-15中的生物学特性。结果显示,重组质粒pcDNASVA直接转染普通敏感细胞系IBRS-2,即可快速拯救出含有沉默突变NheⅠ分子标记的毒株,且具有良好的遗传稳定性;拯救毒株和野生亲本毒株在IBRS-2和PK-15细胞中的复制和增殖特性相似。结果表明,通过建立一种基于T7启动子、RNA聚合酶Ⅱ启动子、终止子、核酶HamRz和HDVRz等元件的SVA单质粒高效拯救系统,可以在质粒水平快速编辑病毒基因组,为定向改造和拯救病毒提供了基础性技术平台。

关键词：甲型塞内卡病毒单质粒拯救系统感染性克隆反向遗传学生物学特性

猪圆环病毒2型灭活疫苗的植物源免疫增强剂筛选

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河南农业大学学报 2024年

作者：李军伟余秋颖张艳芝王运珂任红涛王娜郑州市营养与健康食品重点实验室河南农业大学食品科学技术学院龙湖现代免疫实验室河南农业大学动物医学院河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心

【目的】筛选安全、高效的抗猪圆环病毒2型病毒疫苗免疫增强剂，改善现有佐剂存在的免疫效力及安全性。【方法】以昆明小鼠为研究对象，选取萜类（青蒿素、紫杉醇、穿心莲内酯、熊果酸）、生物碱类（黄连素、石蒜碱、千金藤素、氧化苦... 详细信息

【目的】筛选安全、高效的抗猪圆环病毒2型病毒疫苗免疫增强剂，改善现有佐剂存在的免疫效力及安全性。【方法】以昆明小鼠为研究对象，选取萜类（青蒿素、紫杉醇、穿心莲内酯、熊果酸）、生物碱类（黄连素、石蒜碱、千金藤素、氧化苦参碱）、酚酸类（咖啡酸、绿原酸、没食子酸、香豆酸）和黄酮类（山柰酚、槲皮素、木犀草素、原花青素）共16种植物源活性物质，通过测定小鼠体质量比例、IgG抗体水平、脏器指数、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC），开展靶向猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫增强剂的筛选，并对其抗氧化活性进行初步评价。【结果】1）小鼠灌胃植物源活性物质后，体质量呈增加趋势。2）各组抗体水平呈现先上升后下降的趋势。与疫苗组相比，黄连素、石蒜碱、千金藤素、槲皮素、木犀草素和原花青素组可极显著性提高机体的抗体水平，其中以原花青素组效果最佳，比疫苗组抗体水平提高了53.59%。3）槲皮素组小鼠心脏、肝脏和肾脏指数呈显著性升高，黄连素、石蒜碱、原花青素组无显著差异；其中，槲皮素、原花青素组小鼠脾脏和胸腺指数呈极显著性提高，脾脏指数提高了49.50%和53.23%，胸腺指数提高了121.82%和103.64%，提示其可能在促进免疫器官的发育、分化和成熟，提高机体的免疫功能方面发挥重要作用。4）木犀草素、槲皮素和原花青素组T-SOD活性呈极显著性升高，MDA含量呈极显著性降低，千金藤素、石蒜碱、槲皮素、木犀草素、黄连素和原花青素组T-AOC含量呈极显著性升高。以原花青素对机体的抗氧化效果较好，T-SOD活力和T-AOC分别提高了9.60%和48.57%，MDA含量降低了26.82%。【结论】原花青素对小鼠的免疫增强效果最佳，可作为靶向猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂研究的候选者。

关键词：植物源活性物质猪圆环病毒2型疫苗免疫增强剂

白藜芦醇对沙门氏菌诱导型IPEC-J2细胞损伤的缓解作用

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河南农业大学学报 2024年

作者：赵峥余秋颖杨聪燕李珊珊陈琳琳王娜河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心郑州市营养与健康食品重点实验室河南农业大学食品科学技术学院河南农业大学动物医学院龙湖现代免疫实验室

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol，RES)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)诱导猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cells， IPEC-J2)损伤的缓解作用，为促进动物健康养殖提供新思路。【方法】用鼠伤寒沙门氏菌建立... 详细信息

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol，RES)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)诱导猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cells， IPEC-J2)损伤的缓解作用，为促进动物健康养殖提供新思路。【方法】用鼠伤寒沙门氏菌建立IPEC-J2损伤模型，测定细胞上清中一氧化氮(NO)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-4(IL-4)分泌量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)水平、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)活力、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)氧化应激相关指标含量，分析RES对IPEC-J2损伤模型的缓解作用。【结果】RES预处理IPEC-J2细胞的最佳质量浓度为7.8 mg·L-1，能有效缓解鼠伤寒沙门氏菌诱导IPEC-J2细胞产生的炎症损伤，显著降低促炎因子(TNF-α和IL-6)的含量，提高抑炎因子(IL-4)的表达，从而有效减缓肠道炎症反应。同时，RES可显著提高T-SOD和GSH还原酶的活力，显著降低MDA的表达水平，缓解鼠伤寒沙门氏菌诱发的氧化损伤，达到维持机体肠道氧化还原平衡的稳态。【结论】RES对IPEC-J2损伤具有保护作用，可用于预防鼠伤寒沙门氏菌感染。

关键词：白藜芦醇鼠伤寒沙门氏菌 IPEC-J2细胞炎症反应氧化应激

花生红衣原花青素纯化工艺及其对乳糜泻细胞模型的影响

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中国食品学报 2023年第12期23卷 167-178页

作者：王娜郑玉茹徐超李军伟任红涛余秋颖河南农业大学动物医学院郑州450046 河南农业大学食品科学技术学院郑州450002 龙湖现代免疫实验室郑州450046 河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心郑州450046 郑州市营养与健康食品重点实验室郑州450002

目的:优化AB-8型大孔树脂对花生红衣原花青素的纯化工艺并对纯化物组分进行表征鉴定。采用乳糜泻模型评价其对细胞毒性的抑制作用。研究方法:选用AB-8型大孔树脂,通过静态、动态吸附-解吸试验对纯化条件进行优化,用紫外-可见光谱、傅里... 详细信息

目的:优化AB-8型大孔树脂对花生红衣原花青素的纯化工艺并对纯化物组分进行表征鉴定。采用乳糜泻模型评价其对细胞毒性的抑制作用。研究方法:选用AB-8型大孔树脂,通过静态、动态吸附-解吸试验对纯化条件进行优化,用紫外-可见光谱、傅里叶红外和高效液相色谱串联质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)对纯化物鉴定。基于乳糜泻细胞模型评价纯化物对细胞毒性的抑制作用。结果表明:纯化条件:上样质量浓度1.2 mg/mL,上样液pH值3.0,上样流速1.0 mg/mL,上样量360 mL,吸附时间180 min,解吸液为120 mL的40%乙醇溶液,解吸时间40 min,解吸流速1.0 mg/mL,此时测得该纯化物纯度达95%。紫外-可见光谱分析表明该纯化物属于原花青素类;傅里叶红外分析表明纯化物是以原花青定为主要结构单元,与标准品特征吸收峰趋势相符;UPLC-QTOF-MS/MS分析表明Pspc纯化物以A型原花青素为主要成分;细胞试验结果表明该纯化物在一定程度上可明显抑制乳糜泻模型的毒性作用。研究结果可为花生红衣资源综合开发提供理论参考。

关键词：花生红衣原花青素 AB-8大孔树脂高效液相色谱串联质谱(UPLC-QTOF-MS/MS) 细胞毒性

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冠状病毒入侵细胞途径的研究进展

微生物学杂志 2023年第1期43卷 1-8页

作者：魏战勇袁一心河南农业大学动物医学院河南郑州450046 龙湖现代免疫实验室河南郑州450046 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450046

近年来,冠状病毒严重威胁人类和动物的健康。病毒具有专性胞内寄生的特点,其需要利用细胞完成自身的增殖,因此入侵细胞的过程是其感染机制中非常重要的一部分。多项研究表明冠状病毒能通过细胞表面途径和内吞途径入侵细胞。通过对冠状... 详细信息

近年来,冠状病毒严重威胁人类和动物的健康。病毒具有专性胞内寄生的特点,其需要利用细胞完成自身的增殖,因此入侵细胞的过程是其感染机制中非常重要的一部分。多项研究表明冠状病毒能通过细胞表面途径和内吞途径入侵细胞。通过对冠状病毒入侵途径研究有助于了解其生命周期,有利于冠状病毒的防治以及新型药物和疫苗的研发。本文对近年来不同冠状病毒的入侵途径及针对入侵途径所开发的潜在药物的相关研究进行总结,以期为全面了解冠状病毒的入侵方式提供参考。

关键词：冠状病毒入侵方式胞吞作用病毒入侵抑制剂网格蛋白小窝蛋白巨胞饮

不同品种花生芽菜营养品质及活性物质差异分析

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花生学报 2024年

作者：张艳芝袁冲胡珂欣周宁任红涛王娜王凡龙湖现代免疫实验室河南农业大学动物医学院河南农业大学食品科学技术学院郑州市营养与健康食品重点实验室河南农业大学园艺学院河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心

为筛选生长快、营养价值高的花生芽菜,对6个品种花生发芽1～9d的生长特性、营养成分及活性物质差异进行研究。结果表明:不同花生品种的发芽率开农80>黑珍珠>四粒红>鲁花8号>红罗汉>花育42;在发芽期间各品种芽长均显著增加,且品种间差异... 详细信息

为筛选生长快、营养价值高的花生芽菜,对6个品种花生发芽1～9d的生长特性、营养成分及活性物质差异进行研究。结果表明:不同花生品种的发芽率开农80>黑珍珠>四粒红>鲁花8号>红罗汉>花育42;在发芽期间各品种芽长均显著增加,且品种间差异显著,其中四粒红的芽长最长(5.82cm),开农80的芽长最短(1.53cm);各品种的芽长均在发芽后1～3d增长速度较缓慢,在5～9d增长较快;蛋白质含量随着发芽天数呈先降后升(P黑珍珠>鲁花8号>花育42>红罗汉>开农80;发芽后各品种的多酚含量随着发芽天数呈先升后降的趋势,达到峰值时四粒红多酚含量最高(213.99mg/g)。感官评定综合评分表明,四粒红芽菜色泽、外观形态、滋味、气味评分均高于其他品种。聚类分析结果表明,四粒红是发芽后生长快、营养价值高、感官品质佳的优质花生芽菜品种。该研究可为开发优质花生芽菜及功能性花生食品提供参考。

关键词：花生芽菜品种筛选营养品质活性物质

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贝类炎症及其发生机制研究进展

大连海洋大学学报 2023年第3期38卷 369-379页

作者：孙洁洁宋林生大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室辽宁省海洋动物免疫学重点实验室辽宁大连116023

贝类在中国海水养殖业中占据重要地位,养殖贝类病害的频发,严重阻碍了贝类养殖业的可持续健康发展。炎症是机体对刺激的一种防御反应,在抵御病原菌感染中发挥重要作用,但过度的炎症反应会造成机体组织损伤,严重时会引发个体死亡。目前,... 详细信息

贝类在中国海水养殖业中占据重要地位,养殖贝类病害的频发,严重阻碍了贝类养殖业的可持续健康发展。炎症是机体对刺激的一种防御反应,在抵御病原菌感染中发挥重要作用,但过度的炎症反应会造成机体组织损伤,严重时会引发个体死亡。目前,已经在贝类中观察到了炎症现象,并鉴定出多种炎症细胞因子和炎症相关信号通路。本文围绕贝类炎症细胞因子种类与生物学功能、炎症相关信号通路及炎症反应的形态学特征,总结了近年来贝类炎症研究进展,重点阐述了炎症发生的分子机制,并针对研究中存在的问题,提出不同类型炎症细胞因子的挖掘、炎症细胞因子的免疫学功能及其与不同类型免疫细胞之间的关系等是该领域未来的重点研究方向,以期为推动贝类养殖产业绿色高质量发展提供科学参考。

关键词：贝类炎症反应炎症细胞因子信号转到免疫调节

微透析—高效液相色谱—化学发光法动态监测6—羟基多巴帕金森病模型大鼠纹状体内多巴胺水平

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药物分析杂志 2023年第1期43卷 133-140页

作者：吴丹孙志军张俊婷郑琴程文明谢晋张群林安徽医科大学药学院炎症免疫性疾病安徽省实验室合肥230032 江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室南昌330004

目的:建立动态监测自由清醒大鼠纹状体内多巴胺水平的微透析-高效液相色谱-化学发光分析法,研究天然冰片联合左旋多巴对6-羟基多巴诱导的帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内多巴胺水平的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、6-羟基多巴PD... 详细信息

目的:建立动态监测自由清醒大鼠纹状体内多巴胺水平的微透析-高效液相色谱-化学发光分析法,研究天然冰片联合左旋多巴对6-羟基多巴诱导的帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内多巴胺水平的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、6-羟基多巴PD模型组、左旋多巴组和天然冰片联合左旋多巴组。模型组大鼠麻醉后于右侧前脑内侧束缓慢注入4μg·μL^(-1)6-羟基多巴,术后4周腹腔注射0.5 mg·kg^(-1)阿扑吗啡,筛选旋转圈数≥7 r·min^(-1)(或每30 min 210 r)的大鼠作为6-羟基多巴诱导的PD模型动物。采用脑微透析活体采样联用高效液相色谱-化学发光法(HPLC-CL)监测自由清醒大鼠纹状体内多巴胺水平的动态变化。HPLC分离系统包括Shim pack ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),三水合乙酸钠缓冲液-乙腈(80∶20)作为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为37℃。CL检测系统包括3μmol·L^(-1)鲁米诺溶液、稀释1 000倍的纳米金溶液和50μmol·L^(-1)Ag(Ⅲ)溶液。结果:建立的HPLC-CL法分析多巴胺在0.05~50 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,检测限为0.014 ng·mL^(-1)。与左旋多巴组相比,天然冰片联合左旋多巴组大鼠脑微透析液中游离多巴胺药时曲线下面积(AUC0-t)从3.042 h·ng·mL^(-1)增加到4.395 h·ng·mL^(-1),达峰时间(Tmax)从1.516 h缩短为1.028 h;峰浓度(Cmax)从0.435 ng·mL^(-1)升高到0.792 ng·mL^(-1),更接近于正常组大鼠脑透析液中游离多巴胺水平(0.971 ng·mL^(-1))。结论:天然冰片可促进左旋多巴快速入脑并转化为多巴胺,这可能与天然冰片提高左旋多巴的血脑屏障通透性有关。本研究结果可为天然冰片联合左旋多巴用药临床治疗PD提供科学依据。

关键词：帕金森病天然冰片左旋多巴多巴胺微透析高效液相色谱化学发光

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七种骨舌鱼核糖体序列特征及遗传发育分析

中国水产科学 2022年第1期29卷 13-27页

作者：杨叶欣刘奕刘超宋红梅汪学杰牟希东中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部休闲渔业重点实验室广东省现代休闲渔业工程技术研究中心农业农村部都市农业重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

利用核糖体DNA序列探讨了骨舌鱼科(Osteoglossidae)高阶元的分子系统发育关系。采用分子标记技术,分析测定了现存的7种骨舌鱼核糖体基因,获得了巨骨舌鱼(Arapaima gigas)、尼罗异耳骨舌鱼(Heterotis niloticus)、双须骨舌鱼(Osteoglossu... 详细信息

利用核糖体DNA序列探讨了骨舌鱼科(Osteoglossidae)高阶元的分子系统发育关系。采用分子标记技术,分析测定了现存的7种骨舌鱼核糖体基因,获得了巨骨舌鱼(Arapaima gigas)、尼罗异耳骨舌鱼(Heterotis niloticus)、双须骨舌鱼(Osteoglossum bicirrhosum)、费氏骨舌鱼(O. ferreirai)、美丽硬仆骨舌鱼(Scleropages formosus)、乔氏硬仆骨舌鱼(S. jardinii)和硬仆骨舌鱼(S. leichardti)的rDNA全序列,长度分别为11714 bp、8957 bp、12057 bp、11556bp、10377bp、10724bp和10725bp,GC碱基含量为63.78%～66.13%。采用邻接法和贝叶斯推论法分别构建了系统进化树,结果显示,除ITS1外, 18S、ITS2、28S和18S+ITS1+5.8S+ITS2+28S联合序列建树均与传统的分类相符合,研究结果阐明了骨舌鱼科亚科、属和种间的分类关系,核糖体DNA可作为骨舌鱼科的分子标记。

关键词：骨舌鱼科核糖体基因 18S rDNA 5.8S rDNA 28S rDNA ITS IGS 系统发育分析