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过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

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发生发育小鼠肾输尿管芽分支的形态特点

解剖学报 2023年第5期54卷 593-598页

作者：顾玲张萍宋科昕李娜陈虹宇张婕丛敬翟效月中国医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室沈阳110122 锦州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室辽宁锦州121001 沈阳市第四人民医院干诊科沈阳110082 沈阳医学院基础医学院组织学胚胎学教研室沈阳110034

目的通过对输尿管芽树状结构三维追踪,结合形态学分析及测量,探讨输尿管芽分支模式及其末端诱导肾单位发生的数量。方法取胚胎期及生后多时间点小鼠肾脏各3只,制备石蜡和树脂连续切片,显微图像摄取并配准,计算机辅助输尿管芽追踪并可视... 详细信息

目的通过对输尿管芽树状结构三维追踪,结合形态学分析及测量,探讨输尿管芽分支模式及其末端诱导肾单位发生的数量。方法取胚胎期及生后多时间点小鼠肾脏各3只,制备石蜡和树脂连续切片,显微图像摄取并配准,计算机辅助输尿管芽追踪并可视化,计数其分支数及单个分支所诱导的肾单位数量。此外,石蜡切片进行HE染色用于生肾区与输尿管芽形态学观察,Claudin-7免疫组织化学染色标记输尿管芽,测量输尿管芽分支末端的数量及反映其密度的输尿管芽间距。结果输尿管芽树状分支三维可视化显示,起始的两主叉分支构成肾髓质,而皮质和生肾区分支茂密,输尿管芽分支末端间距越来越小。单个输尿管芽末端诱导肾单位数量由胚胎14.5 d的1个到胚胎17.5 d的2个,偶见3个。结论三维可视化显示输尿管芽树状分支呈区域复杂性,提示不同区域分子驱动不同的分支模式;而输尿管芽末端在生肾区的密度随肾脏发生发育而增加,与生肾区厚度减少相一致,而出生后分支末端的消失也反映了与肾单位祖细胞逐渐耗竭相一致。

关键词：肾脏输尿管芽分支肾单位数量发生发育三维可视化小鼠

高糖环境下P物质活化Akt通路促进间充质干细胞增殖和成血管内皮细胞分化的研究

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天津医药 2022年第5期50卷 461-465页

作者：刘娜张晓东李永涛金海峰姜杨王璐璐刘丹阳沈雷佳木斯大学解剖学教研室 154000 齐齐哈尔医学院基础医学院解剖学教研室齐齐哈尔医学院组织学与胚胎学教研室

目的揭示高糖环境下P物质(SP)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据。方法细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B(Akt)抑制剂组;正常环境培养... 详细信息

目的揭示高糖环境下P物质(SP)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据。方法细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B(Akt)抑制剂组;正常环境培养的BMSC为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell细胞小室迁移实验检测BMSC迁移数目;各组BMSC进行成血管内皮细胞分化实验,酶联免疫吸附试验检测成血管内皮细胞分化后各组BMSC的CD31蛋白含量;基质胶网眼形成实验检测成血管形成能力。Western blot检测各组BMSC的Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,高糖对照组吸光度(A_(450))值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均降低;与高糖对照组比较,高糖SP组A_(450)值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均升高;与高糖SP组相比,高糖Akt抑制剂组上述指标均降低(P<0.01)。结论高糖环境下,SP可活化Akt通路促进BMSC增殖、迁移和血管内皮细胞分化。

关键词： P物质间充质基质细胞细胞增殖细胞运动细胞高糖模型成血管内皮细胞分化

基于网络药理学探讨趋化因子-13对间充质干细胞增殖和迁移的影响

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解剖学报 2021年第6期52卷 889-900页

作者：李永涛姜杨孙石柱王璐璐刘丹阳刘娜张晓东沈雷齐齐哈尔医学院基础医学院解剖学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院基础医学院组织学胚胎学教研室黑龙江齐齐哈尔161006

目的以网络药理学技术探讨趋化因子-13(CXCL-13)对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和迁移的影响。方法在线数据库预测CXCL-13作用于BMSCs的靶点。Metascape数据库对靶点的基因本体论和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分... 详细信息

目的以网络药理学技术探讨趋化因子-13(CXCL-13)对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和迁移的影响。方法在线数据库预测CXCL-13作用于BMSCs的靶点。Metascape数据库对靶点的基因本体论和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析。STRING 11.0数据库进行蛋白质相互作用分析,Cytoscape 3.8的cyto Hubba 0.1插件筛选核心基因编码的蛋白质。BMSCs分为对照组、CXCL-13组和PI3K抑制剂组。分别以MTT、流式细胞术和Transwell细胞小室迁移实验检测各组BMSCs的吸光度(A)值、细胞凋亡率和细胞迁移数目情况;ELISA检测各组BMSCs上清液表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量。Western blotting检测各组BMSCs的Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达。结果 CXCL-13作用于BMSCs 21个靶点。与细胞增殖相关的生物学过程包括干细胞增殖、调节内皮细胞增殖、正向调控平滑肌细胞增殖等32条;与细胞迁移相关的生物学过程包括调节细胞迁移、阿米巴状细胞迁移、调节内皮细胞迁移等22条。KEGG通路包括癌症途径、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等40条。核心蛋白包括肿瘤蛋白P53(TP53)、表皮生长因子受体(EGFR)、90kD热休克蛋白αB1(HSP90AB1)、蛋白激酶Cα(PRKCA)、雌激素受体2(ESR2)及前列腺素E受体4(PTGER4)。与其他组相比,CXCL-13组BMSCs的吸光度(A)值和细胞迁移数目均显著增高(P<0.01,n=15),细胞凋亡率明显降低(P<0.01,n=15);PI3K抑制剂组BMSCs的A值、细胞凋亡率和细胞迁移数目与CXCL-13组相比均呈相反变化(P<0.01,n=15)。相对于对照组,CXCL-13组BMSCs的EGF和VEGF蛋白含量显著提高(P<0.01,n=15),Akt和p-Akt相对表达均明显升高(P<0.01,n=9);而PI3K抑制剂组EGF和VEGF蛋白含量、Akt和p-Akt相对表达呈相反变化。结论 CXCL-13激活PI3K-Akt通路促进BMSCs旁分泌EGF和VEGF蛋白,提高BMSCs增殖和迁移,抑制BMSCs凋亡。

关键词：趋化因子-13 骨髓间充质干细胞细胞迁移自分泌网络药理学生物信息学

PI3K/Akt/mTOR自噬通路在人参皂苷Rg1延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用

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中国中药杂志 2020年第24期45卷 6036-6042页

作者：刘小虎赵志慧周玥王翠丽韩艳军周雯大理大学基础医学院组织学与胚胎学教研室云南大理671000

研究磷脂酰肌醇3-激酶(posphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)自噬信号通路在人参皂苷Rg_(-1)(ginsenoside Rg_(-1),Rg_(-1))延缓D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用。将SPF级雌性BALB/c小鼠54只随机分成PBS组、D-gal组、Rg_(-1)组。D-gal组给予颈背部皮下注射D-半乳糖200 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续给药42 d;PBS组给予颈背部注射等时等量磷酸盐缓冲液(PBS),连续注射42 d;Rg_(-1)组在D-gal组处理基础上,于第15天开始给予腹腔注射Rg_(-1)20 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续给药28 d,同时D-gal组和PBS组也在第15天开始给予腹腔注射等时等量PBS,连续给药28 d。给药后,检测小鼠动情周期改变,卵巢SA-β-Gal苷酶染色检测卵巢衰老状态改变,Western blot法检测PI3K,Akt,mTOR,S6k,LC3-Ⅱ,P16^(INK4a)蛋白表达的改变。荧光定量PCR法检测衰老调控因子PI3K,Akt,mTOR,S6k,P16^(INK4a)mRNA表达的改变。研究结果显示,与PBS组比较,D-gal组第3周开始出现动情周期紊乱,卵巢SA-β-半乳糖苷酶染色阳性率升高,衰老标记物P16^(INK4a)表达量升高,自噬信号分子LC3-Ⅱ表达量降低;Rg_(-1)作用后,Rg_(-1)组卵巢SA-β-半乳糖苷酶染色阳性率降低,衰老标记物P16^(INK4a)表达量低于D-gal组,自噬信号分子LC3-Ⅱ表达量高于D-gal组。与PBS组比较,D-gal组PI3K,Akt,mTOR,S6k蛋白和mRNA表达上调,Rg_(-1)组Akt,mTOR,S6k蛋白表达上调,PI3K,mTOR mRNA表达上调。Rg_(-1)作用后,Rg_(-1)组PI3K,Akt,mTOR,S6k蛋白表达量低于D-gal组,Akt,mTOR,S6k mRNA表达量低于D-gal组。研究结果提示,Rg_(-1)具有延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型中卵巢早衰的作用,PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路在其中发挥重要功能。

关键词：人参皂苷Rg_(1) 卵巢早衰 PI3K Akt mTOR 自噬 D-gal

SIRT1在人参皂苷Rg1延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用

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中国中药杂志 2020年第19期45卷 4699-4704页

作者：刘小虎赵志慧周玥王翠丽韩艳军周雯大理大学基础医学院组织学与胚胎学教研室云南大理671000

探索沉默信息调节因子2相关酶1(slient mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)在人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)延缓D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用。将SPF级雌性BALB/c小鼠54只随机分成PBS组、D-gal组、Rg1组。D-gal组给予颈背部皮下注射D-半乳糖200 mg·kg^-1·d^-1,连续给药42 d;PBS组给予颈背部注射等时等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),连续注射42 d;Rg1组在D-gal组处理基础上,于第15天开始给予腹腔注射Rg120 mg·kg^-1·d^-1,连续给药28 d,同时D-gal组和PBS组也在第15天开始给予腹腔注射等时等量PBS,连续给药28 d;给药后,检测小鼠体质量变化和卵巢质量系数改变,检测外周血雌二醇(estradiol 2,E2)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平,HE染色法检测卵巢形态学改变,荧光定量PCR和Western blot法检测衰老调控因子SIRT1表达的改变。结果显示,与PBS组比较,D-gal组小鼠体质量增长率明显减缓,卵巢质量系数下降;血清E2,LH,SOD,CAT水平明显降低,FSH水平明显升高。Rg1作用后,Rg1组体质量增长率,卵巢质量系数以及血清E2,LH,SOD,CAT水平均高于D-gal组,FSH水平低于D-gal组。HE染色检测显示PBS组卵巢卵泡形态结构正常;D-gal组卵泡数量减少,黄体空泡化明显,闭锁卵泡数量增多;与D-gal组比较,Rg1组卵泡数量增多,黄体数量减少。与PBS组比较,D-gal组SIRT1表达下调;与D-gal组比较,Rg1组SIRT1表达上调。研究结果提示,Rg1具有延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型中卵巢早衰的作用,衰老调控因子SIRT1在其中发挥重要功能。

关键词：人参皂苷Rg1 卵巢早衰 SIRT1 D-半乳糖

跑步运动对APP/PS1小鼠内侧前额叶皮质及其小胶质细胞的作用

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陆军军医大学学报 2022年第9期44卷 862-873页

作者：郭一静蒋林张钐钐朱琳周春妮张蕾肖倩何琦杨浩李静邓宇辉晁凤蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的研究跑步锻炼对阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)的体积变化、淀粉样β蛋白(amyloid beta protein,Aβ)和小胶质细胞的作用。方法将10月龄雄性APP/PS1转基因AD小鼠以... 详细信息

目的研究跑步锻炼对阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)的体积变化、淀粉样β蛋白(amyloid beta protein,Aβ)和小胶质细胞的作用。方法将10月龄雄性APP/PS1转基因AD小鼠以简单随机法分为AD跑步组(给予为期4个月的主动跑步干预)和AD对照组,同时设相同月龄的雄性非转基因小鼠为正常对照组(AD对照组、正常对照组不做处理)。Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力;Y迷宫评估小鼠的工作记忆和参考记忆能力;体视学三维定量检测小鼠mPFC的体积和小胶质细胞(IBA1^(+))的总数;运用免疫荧光多重标记和激光共聚焦定量小鼠mPFC内活化小胶质细胞(CD68^(+)/IBA1^(+))的数量、细胞面积和突起数量,Aβ斑块的数量和面积,IBA1^(+)细胞内Aβ斑块的面积及其与Aβ斑块总面积的比值。结果AD跑步组和正常对照组在Morris水迷宫和Y迷宫中的表现明显优于AD对照组;AD对照组mPFC的体积较正常对照组显著性减小(P学习和记忆能力以及工作和参考记忆能力。

关键词：阿尔茨海默症跑步内侧前额叶皮质小胶质细胞 CD68 Aβ

1,25-维生素-D3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度

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解剖学报 2019年第5期50卷 580-588,607页

作者：刘洋吕洋王浩宇李娇任君旭王海萍河北北方学院基础医学院组织学胚胎学教研室

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱... 详细信息

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。5.Real-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。

关键词：骨髓间充质干细胞 1,25-维生素-D3 心肌样细胞细胞分化免疫印迹法大鼠

鹿茸多肽在阿尔茨海默病模型小鼠中抗氧化应激的作用机制

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解剖学报 2022年第4期53卷 432-439页

作者：郎尉雅张春梅张羽镝刘忠锦衣同辉张可爽张海燕齐齐哈尔医学院基础医学院组织学胚胎学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第一医院神经内科黑龙江齐齐哈尔161000

目的探讨鹿茸多肽(VAP)在阿尔茨海默病(AD)模型中抗氧化应激的作用机制。方法选用8月龄雄性淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组、VAP组,另以同窝阴性小鼠设立为对照组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行行为... 详细信息

目的探讨鹿茸多肽(VAP)在阿尔茨海默病(AD)模型中抗氧化应激的作用机制。方法选用8月龄雄性淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组、VAP组,另以同窝阴性小鼠设立为对照组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行行为学、形态学和氧化应激相关指标检测。Western blotting检测小鼠海马组织中APP及β-分泌酶1(BACE1)蛋白的表达水平。另外以β-淀粉样蛋(Aβ)_(25~35)(25μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞损伤建立AD细胞模型组,VAP组(VAP 500 mg/L+Aβ_(25~35)25μmol/L)和对照组。检测细胞凋亡、膜电位、活性氧簇(ROS)水平和氧化应激相关指标。结果动物实验发现,与模型组比较,VAP组小鼠逃避潜伏期缩短(P学意义(P学意义(P学意义(P<0.05)。结论VAP对AD模型动物和细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可能是通过降低ROS产生,且提高抗氧化酶系活性,减少Aβ的沉积而实现的。

关键词：鹿茸多肽阿尔茨海默病抗氧化 β-淀粉样蛋白线粒体免疫印迹法小鼠