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发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白的表达和定位及宿主互作蛋白的筛选和分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1286-1296页

作者：骆丽可程子文程廓李永刚王大为杨宝玲锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学畜牧兽医学院基础兽医学教研室辽宁锦州121000

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pS... 详细信息

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pSFTSV-NSs-Flag (实验组)和Flag-CMV-3 (阴性组)分别转染进人胚胎肾293T细胞中,同时设置空白组(不进行任何处理)。收集各组细胞裂解液,采用间接免疫荧光和Western blotting法验证SFTSV NSs在宿主细胞中的表达及定位。蛋白裂解液经protein A/G处理,采用免疫沉淀法富集与NSs结合的宿主蛋白,通过银染和考马斯亮蓝染色初步分析捕获的互作蛋白,观察各组蛋白差异条带。采用液相色谱和串联质谱技术得到蛋白质的序列信息,保留可信蛋白基于UniProt数据库检索,对鉴定到的蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析、蛋白结构域和功能位点数据库(IPR)、真核生物同源蛋白簇(KOGs)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、亚细胞定位和转录因子(TF)功能注释,确定互作蛋白的亚细胞结构、基因功能及参与的生物过程。结果:SFTSV NSs在相对分子质量33 000处表达单一特异性条带,免疫荧光检测其定位于细胞质中,且聚集呈砂粒体包涵体样。银染和考马斯亮蓝染色,实验组和阴性组均存在显著差异条带。质谱筛选出46种潜在互作蛋白;GO功能富集分析、KOGs功能注释和KEGG信号通路富集分析,与病毒翻译、细胞代谢及蛋白质运输相关的生物途径富集到较多数目的蛋白,注释中有8种蛋白具有中间丝蛋白结构域。亚细胞定位所占百分率最高的是细胞质蛋白;与NSs定位场所一致。TF功能注释,有1种蛋白来自NF-Y家族。结论:互作蛋白在协助蛋白质正确折叠、参与核糖体翻译和构成细胞骨架等进程中发挥作用,可能参与了抗病毒复制,可作为候选蛋白进一步研究SFTSV的复制机制。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白蛋白-蛋白互相作用免疫沉淀质谱

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超声辅助高凝固点低共熔溶剂提取黄芪黄酮

中国饲料 2024年第1期 58-65页

作者：孟悦潘旭张鑫艺袁帅刘婷婷袁橙刘吉成齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医药科学研究所博士后科研工作站黑龙江齐齐哈尔161000 黑龙江中医药大学博士后流动站黑龙江齐齐哈尔161000

为将新型绿色溶剂应用于传统中草药活性成分的提取,同时改善低共熔溶剂在提取领域的限制因素,本试验使用超声辅助低共熔溶剂提取黄芪中的五种黄酮类化合物。共合成了10种不同的低共熔溶剂,单因素试验考察了超声温度、超声时间、液固比... 详细信息

为将新型绿色溶剂应用于传统中草药活性成分的提取,同时改善低共熔溶剂在提取领域的限制因素,本试验使用超声辅助低共熔溶剂提取黄芪中的五种黄酮类化合物。共合成了10种不同的低共熔溶剂,单因素试验考察了超声温度、超声时间、液固比、含水量和超声功率对五种黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上,以五种黄酮的总得率为指标使用响应面优化法优化提取工艺。结果表明:低共熔溶剂氯化胆碱-草酸(摩尔比1:2)为最佳提取溶剂,优化后的提取条件为:超声时间43 min,超声温度44℃,含水量54%,在此条件下五种黄酮的总得率为1.70 mg/g,高于传统的甲醇提取法。因此,超声辅助低共熔溶剂提取法可有效提高黄芪黄酮的得率。

关键词：低共熔溶剂黄芪黄酮响应面优化法超声辅助

过氧化物酶体膜蛋白4通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路促进肝细胞癌细胞的上皮间质转化

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第8期31卷 786-795页

作者：李巍徐梓山马柯张静雨胡晓云贺国洋新乡医学院法医学院法医物证学教研室河南新乡453003 新乡医学院基础医学院病理学系河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院病理科河南新乡453003

目的:探讨过氧化物酶体膜蛋白4(PXMP4)对肝细胞癌(HCC)细胞迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:采用生物信息学和免疫组织化学方法分析HCC组织中PXMP4的表达,分析其与患者临床病理特征的相关性。在HCCLM3和MHCC97H细胞中干... 详细信息

目的:探讨过氧化物酶体膜蛋白4(PXMP4)对肝细胞癌(HCC)细胞迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:采用生物信息学和免疫组织化学方法分析HCC组织中PXMP4的表达,分析其与患者临床病理特征的相关性。在HCCLM3和MHCC97H细胞中干扰PXMP4,在Huh7和MHCC97L细胞中过表达PXMP4,利用WB和qPCR法验证干扰/过表达效率。利用CCK-8、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测干扰/过表达PXMP4对HCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,采用WB法检测干扰/过表达PXMP4或0、5、10和20μmol/L U0126处理对HCC细胞中N-cadherin、E-cadherin、vimentin、细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK表达的影响。结果:生物信息学和免疫组织化学分析显示,HCC组织中PXMP4呈高表达(P病理分析发现,PXMP4的表达与肿瘤分化程度有关联(P<0.05)。在HCC细胞中,干扰PXMP4后抑制细胞增殖、侵袭和EMT进程(P<0.05);反之,过表达PXMP4后促进HCC细胞增殖、侵袭及EMT进程(P<0.05)。此外,PXMP4通过激活ERK1/2信号通路促进HCC细胞EMT进程,U0126处理同样能够抑制HCC细胞EMT进程。结论:PXMP4在HCC组织中呈高表达且与HCC细胞分化有关联,PXMP4通过激活ERK1/2信号通路促进HCC细胞EMT进程。

关键词：肝细胞癌过氧化物酶体膜蛋白4 细胞外信号调节激酶迁移侵袭上皮间质转化

水通道蛋白9商品化抗体和自制抗体识别位点的分析和应用

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解剖学报 2024年第2期55卷 237-240页

作者：程全成丁慧如王子元方金玉张晓丽张卫光北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100191 北京卫生职业学院医学基础教研室北京102402

目的分析水通道蛋白9(AQP9)商品化抗体和自制抗体的抗原识别位点,并鉴别其应用效果。方法利用Western blotting对比3种商品化抗体与自制AQP9抗体鉴定基因型的效果。分析4种抗体的抗原识别位点,及其在实际应用中的特异性。结果Western bl... 详细信息

目的分析水通道蛋白9(AQP9)商品化抗体和自制抗体的抗原识别位点,并鉴别其应用效果。方法利用Western blotting对比3种商品化抗体与自制AQP9抗体鉴定基因型的效果。分析4种抗体的抗原识别位点,及其在实际应用中的特异性。结果Western blotting结果显示,3种商品化抗体在野生型(WT)和Aqp9^(-/-)小鼠中均可见蛋白条带。3种商品化抗体对应的血蓝蛋白(KLH)共轭合成肽依次为大鼠、人源和人源,与小鼠AQP9氨基酸序列存在一定差异。AQP3/7与AQP9分子量相近,且在肝中均有表达,同源性较高。自制抗体在WT鼠的27 kD位置可见一明显条带,但是Aqp9^(-/-)鼠的相应位置未见条带。结论1号和3号商品化抗体可用于辅助鉴别Aqp9^(-/-)鼠的基因型,自制抗体在蛋白水平上可以准确鉴定基因型。

关键词：水通道蛋白9 肝脏抗体基因敲除免疫印迹法小鼠大鼠人

CD226在小鼠小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 1-6页

作者：羊璐马菁昌刘懿天王婷婷王玉玲庄然张正祥延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS... 详细信息

目的观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠炎模型,观察CD226在ILC3上表达的变化情况。结果小鼠小肠ILC1和ILC3均表达CD226;肠炎模型中ILC3所占比例降低,但CD226在ILC3上的表达水平升高。结论小鼠小肠表达CD226,DSS诱导的肠炎模型中虽然ILC3比例降低,但CD226在ILC3的表达增加。

关键词： 3型固有淋巴样细胞(ILC3) CD226 黏膜免疫肠道

NKG2A-HLA-E轴介导NK细胞应答在病毒感染性疾病中的作用及机制研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第3期40卷 273-278页

作者：薛鳗玲许晓悦张希越唐康张宇丝张春梅庄然金伯泉张赟岳昌武马樱延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

自然杀伤(NK)细胞主要通过迅速释放细胞毒性介质以及细胞因子直接杀伤病毒感染的靶细胞。NK细胞表面抑制性和活化性受体的平衡以及靶细胞上相应配体的表达均参与调控NK细胞的杀伤功能。其中NK细胞2组成员A(NKG2A)是NK细胞上备受关注的... 详细信息

自然杀伤(NK)细胞主要通过迅速释放细胞毒性介质以及细胞因子直接杀伤病毒感染的靶细胞。NK细胞表面抑制性和活化性受体的平衡以及靶细胞上相应配体的表达均参与调控NK细胞的杀伤功能。其中NK细胞2组成员A(NKG2A)是NK细胞上备受关注的抑制性受体之一,通过与其配体人类白细胞抗原E(HLA-E)的相互作用,可抑制NK细胞对自身正常组织细胞的杀伤活性。研究发现病毒感染细胞表面HLA-E表达上调,并且可与病毒蛋白来源的多肽结合形成复合物,通过与NKG2A的相互作用调控NK细胞功能,从而参与病毒感染性疾病发病过程。本文总结了NKG2A与HLA-E分子互作特点,以及NKG2A-HLA-E轴参与调控NK细胞的功能机制,有助于了解NK细胞在病毒感染性疾病中的重要作用。

关键词：自然杀伤细胞2组成员A(NKG2A) 人类白细胞抗原E(HLA-E) 自然杀伤(NK)细胞病毒感染性疾病综述

改进Swin Transformer骨干网络的病理图像分割方法

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计算机仿真 2024年第9期41卷 194-199+222页

作者：刘雅楠李靖宇孟洪颜赵添羽齐齐哈尔医学院医学技术学院齐齐哈尔大学通信与电子工程学院

在人工手动计数乳腺癌病理图像的有丝分裂结果过程中，由于形态相近的细胞存在干扰，目标细胞难以手动分割标记，从而限制乳腺癌分级诊疗效率和准确性的提高。为了解决以上问题，以近年来在计算机视觉多个子领域获得SOTA的Swin Transfor... 详细信息

在人工手动计数乳腺癌病理图像的有丝分裂结果过程中，由于形态相近的细胞存在干扰，目标细胞难以手动分割标记，从而限制乳腺癌分级诊疗效率和准确性的提高。为了解决以上问题，以近年来在计算机视觉多个子领域获得SOTA的Swin Transformer算法为基础，基于Swin Transformer进行改进，并与Unet Decoder进行组合，最后提出一种新的乳腺癌有丝分裂图像语义分割网络，有效的定位到有丝分裂细胞区域，并利用后处理进行个数统计。对现有语义分割特征提取算法Swin Transformer基本结构进行优化，为了适应有丝分裂细胞小目标区域，通过构建跨尺度稠密连接，将图像中的纹理特征加权融合到深层网络中，并设计了一种卷积核尺寸选择的注意力机制进行跨尺度稠密连接的构建，最后使用了一种加权的L1损失函数，保证目标图像准确性，进而实现对目标有效分割。在ICPR14数据集上进行评估，实验结果表明上述网络实际训练中表现出更为优越性能，在MIOU指标上达到了87.01,在Dice指标上达到了87.18,能准确高效分割乳腺癌有丝分裂病理图像。

关键词：深度学习语义分割注意力机制乳腺癌病理图像有丝分裂

外泌体来源microRNA在微生物感染中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第6期19卷 729-732页

作者：杜文雅马枫茜代禹美陈瑞枫王国富吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

外泌体包含母细胞来源的蛋白质、脂质和核酸等多种成分,其中核酸中的miRNA起到越来越重要的作用,miRNA通过靶向mRNA 3′端非翻译区结合导致mRNA降解或翻译抑制。许多疾病的发生都伴随着miRNA表达失调,这对宿主基因调控和某些分子机制产... 详细信息

外泌体包含母细胞来源的蛋白质、脂质和核酸等多种成分,其中核酸中的miRNA起到越来越重要的作用,miRNA通过靶向mRNA 3′端非翻译区结合导致mRNA降解或翻译抑制。许多疾病的发生都伴随着miRNA表达失调,这对宿主基因调控和某些分子机制产生影响。越来越多研究证明miRNA可以作为疾病的潜在生物标志物、治疗靶点,参与炎症反应的过程等。本文就外泌体中的miRNA在病毒,细菌等微生物导致的感染性疾病,如流感病毒、肝炎病毒、HIV、结核分枝杆菌、梅毒螺旋体和支原体中的作用进行综述。

关键词：外泌体 miRNA 微生物感染性疾病综述

长链非编码RNA-SNHG15调控缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的研究

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2024年第6期 0193-0196页

作者：张晨昕冀方超康明明孙兴元刘宏斌齐齐哈尔医学院附属第三医院神经内科三病房黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医学院附属第三医院医务科黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医学院附属第三医院院长办公室黑龙江齐齐哈尔161000

讨论长链非编码RNA-SNHG15如何调节SH-SY5Y细胞在缺糖缺氧损伤下的增殖和凋亡。方法构建缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞模型,通过MTT和AnnexinV/PI等方法分析SNHG15对细胞增殖和凋亡的作用,从而明确SNHG15调控细胞的增殖和凋亡的分子机制。结... 详细信息

讨论长链非编码RNA-SNHG15如何调节SH-SY5Y细胞在缺糖缺氧损伤下的增殖和凋亡。方法构建缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞模型,通过MTT和AnnexinV/PI等方法分析SNHG15对细胞增殖和凋亡的作用,从而明确SNHG15调控细胞的增殖和凋亡的分子机制。结果缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞模型组SNHG15表达水平(4.48±0.12)明显高于常氧组(P<0.05);SiNC+OGD组(76.83±2.14)细胞的增值情况明显高于SiRNA+OGD组细胞(F=105.904;P=0.001),而细胞凋亡率则较之明显降低(F=2478.479;P=0.001),且细胞增殖结果为实验两组数据显著低于常氧组,细胞凋亡率结果为两组数据显著高于常氧组;与SiRNA+OGD组比较,SiNC+OGD组的细胞中Bax蛋白的表达显著减少,而Bcl-2和capase-3蛋白的表达则显著增加;与常氧组比较,两组细胞的Bcl-2、capase-3、Bax蛋白的表达均减少(F=80.146、P=0.001;F=3547.563、P=0.001;F=4164.163、P=0.001);P21在常氧组的表达明显低于其他组,SiRNA+OGD组中表达最高。结论长链非编码RNA-SNHG15在调控缺糖缺氧损伤下的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡中发挥作用。在缺血性脑卒中的兴奋毒性中,P21的表达迅速上调,通过增强促凋亡蛋白Bax的表达,从而诱导caspase3介导的凋亡途径或直接破坏线粒体膜通透性。

关键词：长链非编码RNA-SNHG15 SH-SY5Y细胞脑梗死