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基于蛋白质组学探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第8期30卷 1-8页

作者：张玉昆冯月男卞敬琦刘欣欣肖洪彬牛雯颖黑龙江中医药大学实验实训中心黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室哈尔滨150040

目的:通过长期高脂饲料喂养复制高脂血症动物模型,采用蛋白质组学、分子生物学等方法阐释丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制。方法:Wistar大鼠,按血脂水平随机分正常组、模型组、丹参饮组,每组10只。正常组动物喂食基础饲料... 详细信息

目的:通过长期高脂饲料喂养复制高脂血症动物模型,采用蛋白质组学、分子生物学等方法阐释丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制。方法:Wistar大鼠,按血脂水平随机分正常组、模型组、丹参饮组,每组10只。正常组动物喂食基础饲料,模型组和丹参饮组动物喂食高脂饲料造模,3组动物均自由饮水、自由进食。于第9周开始治疗干预,丹参饮组实验动物给予丹参饮灌胃给药,剂量为3.6 g·kg^(-1)生药;模型组和正常组实验动物根据体质量给予等体积生理盐水。第12周后取材并进行相关指标检测,利用生化分析仪来检测血清中血脂4项水平,利用血液流变仪来检测全血黏度和血浆黏度,利用液质联用色谱仪来检测血小板蛋白质组,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血小板膜糖蛋白4(CD36)、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果:与模型组比较,丹参饮组高脂血症模型大鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平能够明显降低(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,丹参饮组大鼠血小板聚集率明显降低(P<0.05);模型组与正常组比较上调蛋白数目44个,下调蛋白数目12个,差异蛋白总数为56个;丹参饮组与模型组比较上调蛋白数目21个,下调蛋白数目22个,差异蛋白总数为43个;丹参饮组和正常组比较上调蛋白数目31个,下调蛋白数目49个差异蛋白总数共计80个,通过基因本体(GO)功能富集分析主要涉及胆固醇转运和外排,以及细胞因子的产生比较显著且与血脂异常和血小板活化有关,京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析涉及ECM-receptor interaction信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、黏着斑信号通路、PI3K/Akt信号通路比较显著;丹参饮能够显著下调CD36、FAK、PIP5K、PI3K、p-Akt(Ser473)、p-Akt1/2/3(Thr308)蛋白表达。结论:丹参饮可以改善高脂血症模型大鼠血脂水平;并可以显著抑制异常血脂水平引起的血小板活化,相关机制可能与下调CD36/PI3K/Akt信号级联有关。

关键词：高脂血症丹参饮活血化瘀血小板膜糖蛋白4

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经典名方圣愈汤的历史沿革与临床应用考证

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：曹郁宁刘文攀马天宇陈兰茹黄家豪孟永海黑龙江中医药大学药学院教育部北药基础与应用研究重点实验室

圣愈汤为补益类经典名方，由四物汤加人参、黄芪化裁而来，收录于《古代经典名方目录（第一批）》。该文以《古代经典名方关键信息考证原则》为依据，运用文献计量学方法，对圣愈汤历史沿革、药物组成、基原与炮制、剂量、煎煮法、功效... 详细信息

圣愈汤为补益类经典名方，由四物汤加人参、黄芪化裁而来，收录于《古代经典名方目录（第一批）》。该文以《古代经典名方关键信息考证原则》为依据，运用文献计量学方法，对圣愈汤历史沿革、药物组成、基原与炮制、剂量、煎煮法、功效主治等方面的关键信息进行梳理考证。经考证，圣愈汤首载于金代李东垣的《兰室秘藏》，由生地、熟地、川芎、人参、黄芪、当归身组成，历代流传方名较为统一，源流脉络较为清晰，后世多以此方为主流，根据主治偏重在药物用量、组成上有所加减。方中地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa、川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong、人参为五加科植物人参Panax ginseng、当归身为伞形科植物当归Angelica sinensis、黄芪为蒙古黄芪Astragalus membranaceus var. Mongholicus，皆以生品入药，剂型为煮散。以金代度量标准折算现代计量标准，建议用法用量为，生地黄、熟地黄、川芎、人参各1.24 g，当归身、黄芪各2.07 g，粉碎为过4目筛不过10目筛的粗颗粒，加水1 200 mL，煮至300 mL，除药渣。圣愈汤功能补气、补血、摄血，主治诸恶疮，血出多而心烦不安不得睡眠，古代被广泛应用于治疗外科疮疡、女科疾病、虚劳证等，现代临床多用于治疗气血亏虚所致的妇科系统、神经科系统、肌肉骨骼系统、血液系统等疾病。该文通过梳理圣愈汤相关古籍文献，考证关键信息，以期为圣愈汤的现代应用及研发提供参考依据。

关键词：经典名方圣愈汤功能主治文献考证气血两虚临床应用

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关苍术化学成分研究

中药材 2024年 1700-1705页

作者：王艺萌孙延平祝明涛白浩东姬蓉匡海学黑龙江中医药大学/教育部北药基础与应用研究重点实验室

目的:研究菊科苍术属植物关苍术Atractylodes japonica Koidz. ex Kitam.根茎的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、制备型HPLC对关苍术根茎的75%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用脂多... 详细信息

目的:研究菊科苍术属植物关苍术Atractylodes japonica Koidz. ex Kitam.根茎的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、制备型HPLC对关苍术根茎的75%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7体外炎症模型测定化合物对一氧化氮(NO)释放的抑制作用。结果:从关苍术中分离得到16个化合物,分别鉴定为:桉叶-4(15),7-二烯-3α,9β,11-三醇(1)、白术内酯Ⅶ(2)、过氧化白术内酯Ⅲ(3)、ent-(3R)-3-hydroxyatractylenolideⅢ(4)、4β,7β,11-enantioeudesmantriol(5)、双白术内酯(6)、脱落酸A(7)、1-acetoxytertadeca-6E,12E-dien-8,10-diyne-3-ol(8)、1,3-diacetoxytetradeca-6,12-dien-8,10-diyne(9)、(6E,12E)-tetradeca-6,12-dien-8,10-diyne-1,3-diol(10)、(6E,12E)-tetradecadiene-8,10-diyne-1,3-diol(11)、maricaffeolylide A(12)、绿原酸丁酯(13)、5-O-咖啡酰基奎宁酸丁酯(14)、(+)-jatrointelignan A(15)、threo-guaiacylglycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether(16)。结论:其中,化合物7、12～16为首次从苍术属植物中分离得到,化合物1～5、8、9为首次从关苍术中分离得到。化合物1～3、8～11、13、14、16具有一定的抗炎活性。

关键词：关苍术化学成分分离鉴定抗炎活性

基于蛋白质组学探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血脂异常的调节机制

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中国药房 2024年第9期35卷 1070-1075页

作者：张玉昆冯月男卞敬琦刘欣欣肖洪彬牛雯颖黑龙江中医药大学实验实训中心/黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室哈尔滨150040

目的探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血脂异常的调节机制。方法实验大鼠分为空白组(n=9,不造模)、模型组(n=8,造模)和丹参饮组(n=9,造模)。于高脂饲料喂养第9周开始,丹参饮组大鼠灌胃相应药液(3.6 g/kg),空白组和模型组大鼠灌胃等体积生... 详细信息

目的探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血脂异常的调节机制。方法实验大鼠分为空白组(n=9,不造模)、模型组(n=8,造模)和丹参饮组(n=9,造模)。于高脂饲料喂养第9周开始,丹参饮组大鼠灌胃相应药液(3.6 g/kg),空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续4周。给药4周后,检测各组大鼠血浆甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;观察大鼠肝脏组织病理形态学变化;采用TMT定量蛋白质组学分析筛选出样本间的差异蛋白;检测大鼠肝脏组织关键差异蛋白环氧化物水解酶2(EPHX2)、围脂滴蛋白2(PLIN2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)表达情况。结果与模型组比较,丹参饮组大鼠血浆TC、TG、LDL-C水平均显著降低(P部分细胞的细胞核固缩或消失,细胞质肿胀、融合,结缔组织增生,呈现弥散性空泡样脂肪滴改变;丹参饮组大鼠肝脏组织上述病理形态均有不同程度的改善。差异蛋白分析结果显示,模型组与空白组比较,差异蛋白总数为298个;丹参饮组与模型组比较,差异蛋白总数为139个。与模型组比较,丹参饮组大鼠肝脏组织中EPHX2、PLIN2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),GSK-3β、PPARγ蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论丹参饮对高脂血症模型大鼠血脂水平和肝脏病理形态学均有显著的改善作用,其调节机制可能与上调PPARγ、GSK-3β表达和下调EPHX2、PLIN2表达有关,涉及的信号通路可能包括PPARγ信号通路。

关键词：高脂血症丹参饮蛋白质组学差异蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ 糖原合酶激酶3β

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中药皂苷类成分的抗癌作用及机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 236-245页

作者：祝明涛孙延平王艺萌白浩东杨炳友王秋红匡海学黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室哈尔滨150046 广东药科大学中药学院广州510000

癌症是由细胞逃脱稳态控制,异常增殖和分化引起的一种最为致命的疾病,正迅速成为本世纪负担最重的疾病之一。随着人类对癌症几十年的研究和认知变迁,癌症治疗方式也在飞速发展,但仍然缺乏有效的治疗和对策,特别是寻找安全、高效、无毒... 详细信息

癌症是由细胞逃脱稳态控制,异常增殖和分化引起的一种最为致命的疾病,正迅速成为本世纪负担最重的疾病之一。随着人类对癌症几十年的研究和认知变迁,癌症治疗方式也在飞速发展,但仍然缺乏有效的治疗和对策,特别是寻找安全、高效、无毒的药物,成为抗癌领域中的长期目标。从中药提取和分离得到的皂苷成分,可通过多种途径改善癌症且几乎无不良反应,基于此,对皂苷抗癌的研究日益升温。研究发现中药皂苷主要通过抑制癌细胞增殖、转移和血管生成,促进癌细胞凋亡、诱导肿瘤细胞自噬、调节miRNA表达和免疫功能等途径发挥抗肿瘤作用。中药皂苷可通过调控分泌型糖蛋白/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核转录因子-κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Janus激酶/信号转导和转录激活因子3(JAK/STAT3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Toll样受体(TLR)等相关信号通路参与癌细胞的增殖、转移、血管生成、凋亡、自噬等过程中,进而干扰癌症的进展。因此,该综述的重点是更新具有抗癌特性的中药皂苷的发现和评价,以及阐明其作用机制,包括相关信号通路的进展,加深对中药皂苷抗癌功能的认识,以期为中药防治肿瘤提供新的视角和方向,更好地推进资源的开发和利用。

关键词：癌症中药皂苷作用机制信号通路研究进展

大麻二酚对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病的改善作用

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现代药物与临床 2024年第6期39卷 1369-1374页

作者：孔令阳吴玮李琛良徐姣黑龙江中医药大学药学院黑龙江哈尔滨150040 黑龙江中医药大学佳木斯学院黑龙江佳木斯154007 黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室黑龙江哈尔滨150040

目的探究大麻二酚对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病炎症反应和氧化应激指标的改善作用。方法将BALB/c小鼠随机对照组、模型组、他克莫司组、大麻二酚(50、100、150 mg/kg)组,每组8只。除对照组小鼠外,其他组小鼠背部每日均匀涂抹62.5 mg的5%... 详细信息

目的探究大麻二酚对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病炎症反应和氧化应激指标的改善作用。方法将BALB/c小鼠随机对照组、模型组、他克莫司组、大麻二酚(50、100、150 mg/kg)组,每组8只。除对照组小鼠外,其他组小鼠背部每日均匀涂抹62.5 mg的5%咪喹莫特诱导银屑病模型,造模4 h后,他克莫司组小鼠背部均匀涂抹他克莫司乳膏、大麻二酚组均匀涂抹50、100、150 mg/kg大麻二酚醇溶液,对照组、模型组背部均匀涂抹凡士林,1次/d,连续7 d每天拍照记录PASI评分。末次给药24 h后用酶联免疫吸附法检测皮肤组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;苏木精–伊红染色(HE)皮损组织;对小鼠脾脏就进行称量,并计算脾脏指数。检测小鼠的皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果PASI评分及HE染色结果显示,与模型组比较,大麻二酚组可显著改善小鼠背部皮肤发红、增厚、皮屑增多等银屑病特征,小鼠背部皮肤表皮增厚现象明显减轻;脾脏指数显著降低(P部皮肤组织中SOD活力和GSH含量,降低MDA的含量(P<0.01、0.001)。结论大麻二酚对咪喹莫特引发的小鼠银屑病样炎症具有显著的抑制作用,并对炎症细胞的浸润和氧化应激状态等细胞因子的产生具有抑制作用。

关键词：大麻二酚咪喹莫特银屑病皮肤屏障白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 超氧化物歧化酶谷胱甘肽

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中草药皂苷类成分的抗癌作用及机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：祝明涛孙延平王艺萌白浩东杨炳友王秋红匡海学广东药科大学中药学院黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室

癌症是由细胞逃脱稳态控制，异常增殖和分化引起的一种最为致命的疾病，正迅速成为本世纪负担最重的疾病之一。随着人类对癌症几十年的研究和认知变迁，癌症治疗方式也在飞速发展，但仍然缺乏有效的治疗和对策，特别是寻找安全，高效，... 详细信息

癌症是由细胞逃脱稳态控制，异常增殖和分化引起的一种最为致命的疾病，正迅速成为本世纪负担最重的疾病之一。随着人类对癌症几十年的研究和认知变迁，癌症治疗方式也在飞速发展，但仍然缺乏有效的治疗和对策，特别是寻找安全，高效，无毒的药物，成为抗癌领域中的长期目标。从中药提取和分离得到的皂苷成分，可通过多种途径改善癌症且几乎无毒副作用，基于此，对皂苷抗癌的研究日益升温。研究发现中药皂苷主要通过抑制癌细胞增殖、转移和血管生成，促进癌细胞凋亡、诱导肿瘤细胞自噬、调节miRNA表达和免疫功能等途径发挥抗肿瘤作用。中草药皂苷可通过调控分泌型糖蛋白/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、核转录因子-κB（NF-κB）、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、Janus 激酶/信号转导和转录激活因子3 (JAK/ STAT3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Toll样受体（TLR）等相关信号通路参与癌细胞的增殖、转移、血管生成、凋亡、自噬等过程中，进而干扰癌症的进展。因此，本综述的重点是更新具有抗癌特性的中药皂苷的发现和评价，以及阐明其作用机制，包括相关信号通路的进展，加深对中草药皂苷抗癌功能的认识，以期为中药防治肿瘤提供新的视角和方向，更好的推进资源的开发和利用。

关键词：癌症中药皂苷作用机制信号通路研究进展

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牛胆汁的解热作用及作用机制研究

中草药 2024年第10期55卷 3363-3374页

作者：苏发智白晨曦张文森王雨孙延平杨炳友匡海学王秋红黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室黑龙江省中药天然药物药效物质基础重点实验室黑龙江哈尔滨150040 广东药科大学中药学院中药炮制学教研室广东广州510006

目的基于干酵母混悬液诱导的发热大鼠模型,评价牛胆汁的解热效果,并进一步通过基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法探索其潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、对乙酰氨基酚(200 mg/kg)组、牛胆汁(10 mL/kg)组及猪胆汁(10 ... 详细信息

目的基于干酵母混悬液诱导的发热大鼠模型,评价牛胆汁的解热效果,并进一步通过基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法探索其潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、对乙酰氨基酚(200 mg/kg)组、牛胆汁(10 mL/kg)组及猪胆汁(10 mL/kg)组,以背部sc 20%干酵母混悬液的方式构建发热大鼠模型,分别于造模前0.5 h及造模后3.5 h对各给药组大鼠给予药物干预,并于造模后第0、4、5、6、7、8小时测量大鼠肛温,收集造模后8 h大鼠血清及脑组织,采用ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL1β)、IL-6及下丘脑中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量;采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对大鼠的血清及下丘脑进行代谢组学分析,探究其潜在的生物标志物,结合血清及下丘脑代谢组学的相关分析结果及ELISA指标,共同阐释牛胆汁的解热作用机制。结果造模4 h后模型组大鼠肛温显著升高(P<0.01),牛胆汁组大鼠肛温显著低于模型组(P<0.01),牛胆汁能够显著抑制发热导致的TNFα、IL-1β、IL-6、PGE2、cAMP含量增加(P<0.01)。代谢组学结果表明干酵母致大鼠发热后血清及下丘脑的代谢轮廓发生了显著的变化,分别从其中鉴定得到24、18种内源性代谢物,给予牛胆汁干预后其含量均显著回调,主要影响花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、丙酮酸代谢、柠檬酸循环、鞘脂代谢、嘧啶代谢、氨基酸代谢、糖代谢等途径。结论牛胆汁对干酵母所致发热大鼠模型具有显著的解热作用,其作用机制可能与抑制内源性致热源的释放及调节机体的脂质代谢、氨基酸代谢、糖代谢有关,具有多靶点、多途径的特征。

关键词：牛胆汁解热下丘脑血清代谢组学胆酸去氧胆酸鹅去氧胆酸猪去氧胆酸甘氨胆酸甘氨去氧胆酸甘氨猪去氧胆酸甘氨鹅去氧胆酸牛磺胆酸牛磺猪去氧胆酸牛磺鹅去氧胆酸

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨商陆果发酵液体外抗肝癌作用

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中国现代应用药学 2024年

作者：李艳李慧敏齐英曾元宁王秋红广东药科大学中药学院黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室/黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和核转录因子(nuclear factor,NF)-κB信号通路探讨商陆果发酵液及其组分对Bel-7 402肝癌细胞的作用。方法采用超声提取、乙醇醇沉、... 详细信息

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和核转录因子(nuclear factor,NF)-κB信号通路探讨商陆果发酵液及其组分对Bel-7 402肝癌细胞的作用。方法采用超声提取、乙醇醇沉、732阳离子交换树脂以及D101大孔吸附树脂柱色谱分离技术的联合使用将商陆果发酵液进行分离。以人肝癌细胞Bel-7 402为研究对象，采用细胞活力检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK8)法考察商陆果发酵液及其组分对其增殖能力的影响，以获得主要药效物质以及合适剂量用于后续实验。利用平板克隆形成试验、细胞划痕试验、流式细胞术以及蛋白质印迹法检测生物碱组分对Bel-7 402肝癌细胞克隆形成能力、迁移能力、凋亡和周期的影响及其作用机制。结果相同浓度梯度下，商陆果发酵液生物碱组分抑制Bel-7 402肝癌细胞增殖效果最佳，IC50浓度在0.75 mg·mL-1左右，即选择0.375,0.75,1.5 mg·mL-1的生物碱作为后续实验低、中、高剂量组。后续实验发现生物碱组分可以降低Bel-7 402肝癌细胞的克隆形成能力和迁移能力，促进细胞凋亡，阻滞细胞于S期和G2/M期。进一步研究发现，生物碱组分能上调Bel-7 402肝癌细胞中p53蛋白和促凋亡蛋白Bax表达水平，下调PI3K、Akt、NF-κB P65、环氧化酶2(Cyclooxygenase 2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平，导致Bax/Bcl-2比率增加。结论商陆果发酵液体外治疗肝癌主要药效物质基础是生物碱组分，其可能通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路活化，进而增加Bax/Bcl-2比值来促进细胞凋亡和下调VEGF抑制细胞增殖，从而发挥抗肿瘤作用。

关键词：商陆果发酵液 Bel-7402肝癌细胞周期阻滞 PI3K/Akt/NF-κB信号通路