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胶质瘤-巨噬融合细胞的巨噬细胞极化特征及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力影响的实验研究

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中华神经外科杂志 2024年第5期40卷 512-518页

作者：胡跃东王佩文张梦梦周贤喆刘福生米蕊芳首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070

目的通过建立胶质瘤细胞与巨噬细胞的融合细胞模型,探究胶质瘤-巨噬融合细胞的巨噬细胞极化特征及其对胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响。方法应用小鼠来源的胶质瘤细胞GL261和巨噬细胞RAW264.7构建并筛选GL261xRAW264.7融合细胞。分别培... 详细信息

目的通过建立胶质瘤细胞与巨噬细胞的融合细胞模型,探究胶质瘤-巨噬融合细胞的巨噬细胞极化特征及其对胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响。方法应用小鼠来源的胶质瘤细胞GL261和巨噬细胞RAW264.7构建并筛选GL261xRAW264.7融合细胞。分别培养GL261、RAW264.7、GL261xRAW264.7融合细胞,收集细胞上清获得相应的条件培养基(CM,即GL261-CM、RAW264.7-CM、GL261xRAW264.7-CM)。采用流式细胞术检测GL261xRAW264.7融合细胞的染色体含量及其与RAW264.7细胞的巨噬细胞标志物CD86、CD206的表达量;通过CCK-8、Transwell或划痕实验评估GL261xRAW264.7融合细胞与亲代细胞(即GL261、RAW264.7细胞)增殖、迁移能力的差异,以及GL261xRAW264.7-CM与亲代细胞CM培养的GL261细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异;通过免疫磁珠-流式细胞术检测RAW264.7与RAW264.7xGL261融合细胞分泌巨噬细胞M1型细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-23及M2型细胞因子IL-10、转化生长因子β1(TGF-β)的差异。结果成功构建了GL261xRAW264.7融合细胞,且经流式细胞术证实GL261xRAW264.7融合细胞的染色体含量明显增加(G_(1)和G_(2)/M峰均较亲代细胞右移)。CCK-8增殖实验结果显示,GL261xRAW264.7融合细胞的增殖能力较GL261细胞强,但较RAW264.7细胞弱,差异均有统计学意义(均P0.05]。免疫磁珠-流式细胞术检测结果显示,GL261xRAW264.7融合细胞与RAW264.7相比,IL-10、TGF-β表达增多,TNF-α、IL-1β减少,差异均有统计学意义(均P0.05)。CCK-8、Transwell及划痕实验均显示,GL261xRAW264.7-CM较亲代细胞CM培养的GL261细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论体外构建的GL261xRAW264.7融合细胞具有M2型巨噬细胞的免疫特征,且可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

关键词：神经胶质瘤细胞融合细胞增殖肿瘤相关巨噬细胞细胞侵袭

反复性轻型颅脑损伤后认知功能障碍小鼠模型的建立及其颅内早期病理改变

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中华神经外科杂志 2024年第6期40卷 611-617页

作者：卢盛华高国一徐晓健葛芊芊杨梦石牛非庄园刘佰运田润发首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070 首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070

目的构建反复性轻型颅脑损伤(rmTBI)后认知功能障碍小鼠模型,探讨其颅内早期病理改变.方法将45只C57BL/6小鼠随机分为健康对照组(n=15,简称对照组)与rmTBI建模组(n=30,简称rmTBI组).rmTBI组使用悬重式闭合性颅脑打击装置每日打击1次,连... 详细信息

目的构建反复性轻型颅脑损伤(rmTBI)后认知功能障碍小鼠模型,探讨其颅内早期病理改变.方法将45只C57BL/6小鼠随机分为健康对照组(n=15,简称对照组)与rmTBI建模组(n=30,简称rmTBI组).rmTBI组使用悬重式闭合性颅脑打击装置每日打击1次,连续7 d.建模后3、30 d进行头颅磁共振波谱扫描(n=6).建模后30 d采用转棒和Morris水迷宫实验评价两组小鼠的运动协调能力及认知功能.采用透射电子显微镜分析建模3 d rmTBI组(n=3)、建模30 d rmTBI组(n=3)和对照组(n=3)小鼠内侧前额叶及海马CA2区域轴索外径、髓鞘厚度,并计算G-ratio[轴索外径/(轴索外径-2×髓鞘厚度)].应用Spearman相关性检验分析轴索外径与髓鞘厚度的相关性.结果磁共振波谱结果显示,与对照组比较,rmTBI组建模3、30 d的皮质N-乙酰天冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)值和海马NAA/Cr值的差异均无统计学意义(均P>0.05).转棒实验和Morris水迷宫实验结果显示,与对照组比较,rmTBI组小鼠的运动协调和认知功能均下降(均P<0.05).电子显微镜检查结果显示,在内侧前额叶区域,建模3 d rmTBI组、建模30 d rmTBI组与对照组神经轴索外径的差异无统计学意义(H=2.11,P=0.347);三组间髓鞘厚度的差异具有统计学意义(H=-2.52,P=0.035),其中建模30 d rmTBI组的髓鞘厚度小于对照组[M(Q1,Q3)分别为0.11(0.09,0.13)μm、0.12(0.11,0.14)μm].在海马CA2区域,建模3 d和30 d rmTBI组均可观察到髓鞘板层结构中存在空泡样改变,同时存在包绕轴索和髓鞘剥离现象;三组间轴索外径及髓鞘厚度的差异均具有统计学意义(均P<0.05),其中建模30 d rmTBI组的轴索外径小于建模3 d rmTBI组[0.67(0.59,0.84)μm对比0.82(0.72,0.99)μm],建模3 d rmTBI组的髓鞘厚度[0.12(0.11,0.14)μm]大于对照组[0.11(0.09,0.12)µm]和建模30 d rmTBI组[0.08(0.06,0.11)μm].与对照组比较,建模3 d和30 d rmTBI组小鼠海马CA2区域G-ratio的差异具有统计学意义(Z=4.25,P<0.001),其中建模30 d rmTBI组最高;而三组间内侧前额叶区域的差异无统计学意义(Z=1.55,P=0.267).相关性分析结果显示,对照组、建模3 d和30 d rmTBI组小鼠内侧前额叶和海马CA2区域的轴索外径与髓鞘厚度均呈正相关(均P<0.05),其中对照组内侧前额叶区域的相关性最强(R=0.66),建模3 d rmTBI组小鼠海马CA2区域的相关性最小(R=0.33).结论rmTBI小鼠伤后30 d运动协调能力和认知功能均明显下降,动物模型病理结果提示其内侧前额叶存在少量髓鞘的损伤,但轴索结构相对完好,而海马CA2区域轴索-髓鞘结构不稳定,有脱髓鞘和髓鞘新生表现,可能与上述功能障碍存在因果关系.

关键词：颅脑损伤认知功能障碍病理过程疾病模型,动物小鼠髓鞘

胶质母细胞瘤脂肪酸合酶调控巨噬细胞M1极化影响细胞迁移和侵袭能力的实验研究

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中华神经外科杂志 2024年第3期40卷 283-290页

作者：张文欣季佳宇周贤喆王佳琳袁桂强张梦梦张俊文刘福生金贵善首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070

目的探究胶质母细胞瘤(GBM)细胞中脂肪酸合酶(FASN)表达对巨噬细胞U937极化状态的影响.方法采用慢病毒转染GBM细胞(U87和LN229)构建稳定干扰FASN的细胞株,获得干扰RNA对照组(sh-con,即U87sh-con组、LN229sh-con组)和敲低FASN实验组(sh... 详细信息

目的探究胶质母细胞瘤(GBM)细胞中脂肪酸合酶(FASN)表达对巨噬细胞U937极化状态的影响.方法采用慢病毒转染GBM细胞(U87和LN229)构建稳定干扰FASN的细胞株,获得干扰RNA对照组(sh-con,即U87sh-con组、LN229sh-con组)和敲低FASN实验组(sh-FASN,即U87sh-FASN组、LN229sh-FASN组),收集以上4组的细胞上清液(GBM细胞条件培养基)后分别与经佛波酯(PMA)诱导分化后的U937巨噬细胞共培养(共培养后的细胞上清为巨噬细胞条件培养基),再分别将4组巨噬细胞条件培养基与GBM细胞(U251)进行共培养.通过蛋白质免疫印迹法(WB)和(或)细胞免疫荧光(IF)实验检测 U87sh-con、U87sh-FASN、LN229sh-con、LN229sh-FASN 4 组细胞中FASN蛋白的表达情况及GBM条件培养基与U937细胞共培养后环氧合酶2(COX-2)、精氨酸酶1(ARG1)蛋白的表达情况;通过CCK-8实验检测敲低FASN后U87和LN229细胞的增殖情况;通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测4组GBM条件培养基与U937细胞共培养后成熟巨噬细胞标志物CD68,巨噬细胞M1表型标志物CD11c、COX-2及M2表型标志物白细胞介素10(IL-10)、ARG1的表达情况;通过Transwell小室实验检测4组巨噬细胞条件培养基对U251细胞迁移、侵袭能力的影响.统计学以P0.05).qRT-PCR结果显示,与U937细胞相比,经诱导分化后的U937细胞及其分别与4组GBM细胞条件培养基共培养后的细胞中CD68的相对表达量均增加(均P0.05);WB结果显示,与对应细胞的sh-con组相比,U87、LN229细胞sh-FASN组COX-2蛋白表达均升高(均P0.05).Transwell小室迁移、侵袭实验结果均显示,与对应细胞的sh-con组比较,U87、LN229细胞sh-FASN的巨噬细胞条件培养基与U251细胞共培养后的穿膜细胞数均减少(均P<0.05).结论 GBM细胞FASN表达下调可促进巨噬细胞M1极化,进而抑制GBM细胞的迁移和侵袭能力.

关键词：胶质母细胞瘤脂肪酸合酶巨噬细胞 M1极化细胞迁移细胞侵袭

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极光激酶A抑制剂对胶质母细胞瘤细胞增殖和B7-H3蛋白表达影响的实验研究

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中华神经外科杂志 2024年第4期40卷 406-413页

作者：刘金秋蒲焯楠邓宇轩吕一帆张绍东郝淑煜季楠万虹冯洁首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070

目的探讨极光激酶A(AURKA)抑制剂对胶质母细胞瘤(GBM)的细胞增殖和免疫检查点B7-H3表达的影响。方法基于中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)计划数据库(共325例患者),分析AURKA mRNA的表达水平与肿瘤的病理学类型、世界卫生组织(WHO)级别、原/... 详细信息

目的探讨极光激酶A(AURKA)抑制剂对胶质母细胞瘤(GBM)的细胞增殖和免疫检查点B7-H3表达的影响。方法基于中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)计划数据库(共325例患者),分析AURKA mRNA的表达水平与肿瘤的病理学类型、世界卫生组织(WHO)级别、原/复发状态、患者的生存期、O°-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)甲基化、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变及染色体1p19q共缺失的相关性。比较AURKA mRNA在不同病理学类型、不同WHO级别,以及原发与复发性脑胶质瘤中表达的差异。绘制Kaplan-Meier生存曲线以比较不同AURKA mRNA表达水平的脑胶质瘤患者生存期差异。通过单因素和多因素Cox回归模型分析探讨AURKAmRNA表达水平、IDH突变、染色体1p19q共缺失、发病年龄、放疗、化疗、WHO级别及原/复发状态对脑胶质瘤患者生存期的影响。绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),以确定AURKA mRNA表达水平对脑胶质瘤患者生存期的预测价值。收集首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心接受手术治疗患者的脑胶质瘤组织样本,其中低级别胶质瘤(LGG)4例,CBM4例;通过蛋白质免疫印迹(WB)法检测AURKA在肿瘤组织样本中的表达情况。采用AURKA抑制剂alisertib处理人CBM细胞株U87-MG,将其分为对照组(以DMSO处理)和alisertib处理组(以5μmol/Lalisertib处理)。采用CCK-8法和结晶紫染色方法分别检测alisertib对细胞活性和克隆形成的影响。采用WB法检测alisertib对AURKA、磷酸化AURKA和B7-H3蛋白表达的影响。应用流式细胞术检测alisertib对GBM细胞膜蛋白B7-H3表达的影响。结果CGGA计划数据库分析结果表明,AURKA mRNA在CBM中的表达水平高于星形胶质细胞瘤和少突胶质细胞瘤(均P<0.001);在WHO2、3及4级胶质瘤组间,AURKA mRNA的表达水平随WHO级别的升高而增加(P<0.001);AURKA mRNA在复发性胶质瘤中的表达水平高于原发性胶质瘤(t=4.50,P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,AURKA mRNA高表达组的患者比低表达组生存期短(均P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,AURKA mRNA的表达水平、IDH突变、染色体1p19q共缺失、发病年龄、放疗、化疗、WHO级别及原/复发状态均为脑胶质瘤患者生存期的影响因素(均P<0.05);多因素Cox回归模型分析结果显示,AURKA mRNA高表达、复发状态、WHO高级别、发病年龄偏高、未接受化疗及无染色体1p19q共缺失均为脑胶质瘤患者生存期的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,AURKA mRNA表达水平预测脑胶质瘤患者1年、3年和5年生存期的AUC(95%CI)分别为0.78(0.72~0.83)、0.85(0.80~0.89)、0.84(0.79~0.89)。临床样本的WB结果显示,人GBM组织中AURKA蛋白的表达水平高于LGG(t=2.62,P=0.040)。CCK-8实验结果显示,alisertib处理24、48、72h后均显著抑制了U87-MG细胞的活性(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示,alisertib明显抑制了U87-MG细胞的克隆形成(t=9.30,P<0.001)。WB实验结果表明,alisertib处理组的磷酸化AURKA表达水平明显低于对照组(t=10.98,P<0.001),而B7-H3蛋白表达水平高于对照组(t=7.55,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,alisertib处理组膜蛋白B7-H3的表达水平升高(t=20.04,P<0.001)。结论AURKA抑制剂alisertib可能能够抑制GBM的细胞增殖,并增强免疫检查点B7-H3的表达。

关键词：胶质母细胞瘤细胞增殖极光激酶A 免疫检查点 B7-H3蛋白

经耻骨后尿道中段悬吊带术治疗女性复发性压力性尿失禁：平均5年的随访

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北京大学学报(医学版) 2024年

作者：李雨清王飚乔鹏王玮关星首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿外科

目的：探讨经耻骨后尿道中段悬吊带术（tension-free vaginal tape,TVT）治疗女性复发性压力性尿失禁（recurrent stress urinary incontinence,rSUI）的效果及临床疗效。方法：回顾性分析2016年1月至2020年6月于北京朝阳医院采用TVT治... 详细信息

目的：探讨经耻骨后尿道中段悬吊带术（tension-free vaginal tape,TVT）治疗女性复发性压力性尿失禁（recurrent stress urinary incontinence,rSUI）的效果及临床疗效。方法：回顾性分析2016年1月至2020年6月于北京朝阳医院采用TVT治疗rS UI患者，收集患者基本信息。使用国际尿失禁咨询委员会尿失禁问卷表简表（international consultation on incontinence questionnaire-short form,ICIQ-SF）记录患者术前、术后1年、术后3年以上的尿失禁症状评分，比较ICI-QSF各项评分及总分变化。同时记录并比较患者术前、术后3年以上的尿失禁临床症状严重程度。结果：共纳入24例患者，其中1例在术后1年因脑血管意外死亡，余23例随访时间3.9～7.3年，平均随访时间（5.2±1.1）年。ICI-Q-SF总分中位数术前为20(16,21)，术后1年及平均5年随访时为5(1.5,7.75)和6(3,9)，与术前比较差异均有统计学意义（P<0.001）;ICI-Q-SF各分项评分在术后1年及平均5年的随访中均较术前减低，差异具有统计学意义（P<0.001）。从尿失禁严重程度来看，术前所有患者表现为中-重度尿失禁；术后平均5年，87.0%(20/23)的患者无尿失禁或仅有轻度尿失禁，13.0%(3/23)的患者再次出现中-重度尿失禁（P<0.001）。结论：经耻骨后尿道中段TVT对女性rS UI治疗有效，平均5年治愈和有效改善率达到87.0%。

关键词：压力性尿失禁女性复发尿道下悬吊术

垂体神经内分泌肿瘤手术策略调整对治疗效果的改善作用分析:附3 504例报告

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中华神经外科杂志 2024年第3期40卷 265-271页

作者：李朋杨智君毕智勇王兴朝张斌王博王振民薛海张哲刘丕楠首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070 首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070

目的分析垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)手术策略的调整对其治疗效果的改善作用.方法回顾性分析2008年1月至2022年12月于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心接受手术治疗的3 504例PitNET患者的临床资料.期间结合文献报道和自... 详细信息

目的分析垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)手术策略的调整对其治疗效果的改善作用.方法回顾性分析2008年1月至2022年12月于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心接受手术治疗的3 504例PitNET患者的临床资料.期间结合文献报道和自主探索,对手术策略进行了调整.2008年1月至2016年12月收治的患者(A组)采用调整前的手术策略治疗,2017年1月至2022年12月收治的患者(B组)采用调整后的手术策略治疗.手术策略调整要点包括多维度分隔空间手术切除、功能性PitNETs的超范围切除以及个体化颅底重建.对比分析两组患者的手术治疗效果及术后并发症的发生情况.结果 A组患者共1 394例,B组共2 110例.B组的肿瘤全切除率[91.0%(1 920/2 110)对比73.4%(1 023/1 394)]、术后视力好转率[89.6%(509/568)对比69.0%(260/377)]均高于A组(均P<0.001),而术后脑脊液漏的发生率[0.5%(10/2 110)对比5.1%(71/1 394)]、术后颅内感染发生率[2.4%(50/2 110)对比4.2%(58/1 394)]、术后腰大池置管率[0.3%(6/2 110)对比3.6%(50/1 394)]均低于A组(均P<0.05).其中,功能性PitNET术后的生物学治愈率方面,A组患者低于B组[52.3%(203/388)对比83.6%(475/568),P<0.001].结论 PitNET手术策略的改进可明显提高手术治疗效果,并且能够减少相关并发症的发生.

关键词：垂体肿瘤神经外科手术治疗结果手术后并发症手术策略

表皮生长因子受体在胰腺腺鳞癌中的表达及临床意义

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中华肝胆外科杂志 2024年第1期30卷 38-43页

作者：付永纯赵昕吕少诚胡志朝贺强北京怀柔医院肝胆外科北京101400 首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆外科北京100020

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在胰腺腺鳞癌(PASC)中的表达及临床意义。方法:收集2016年1月至2021年12月于首都医科大学附属北京朝阳医院接受手术治疗的60例胰腺癌组织标本和8例正常胰腺组织标本。回顾性分析这60例患者的临床病理资... 详细信息

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在胰腺腺鳞癌(PASC)中的表达及临床意义。方法:收集2016年1月至2021年12月于首都医科大学附属北京朝阳医院接受手术治疗的60例胰腺癌组织标本和8例正常胰腺组织标本。回顾性分析这60例患者的临床病理资料,包括男性23例,女性37例,年龄(62.7±10.2)岁,其中病理结果为PASC的20例,通过倾向性匹配同期胰腺导管腺癌(PDAC)40例。免疫组织化学染色(IHC)检测EGFR表达的积分光密度(IOD)值,荧光定量聚合酶链反应检测EGFR mRNA的表达差异,根据EGFR的IOD值中位数将20例PASC样本分为高、低表达两组,Kaplan-Meier生存分析比较EGFR表达对PASC患者预后的影响。结果:PASC组的癌组织IOD值为29.2(25.7,35.1),高于PDAC组的IOD值9.5(5.5,13.0),且均高于正常组织的2.4(1.7,3.1),差异均有统计学意义(均 P<0.001)。PASC组EGFR mRNA表达水平高于PDAC组[3.0(1.8,3.5)比1.2(0.8,1.2)],差异有统计学意义( P=0.0 079)。EGFR高表达组相较于低表达组生存时间更短( P=0.002)。PASC组血管侵犯率高于PDAC组[40.0%(8/20)比17.5%(7/40)],差异有统计学意义( P=0.002)。PASC组的中位生存时间为16.00(9.25,25.25)个月,低于PDAC组的21.50(11.25,40.75)个月,差异有统计学意义( P=0.033)。PASC组术后累积生存率低于PDAC组,差异有统计学意义( P<0.028)。结论:PASC组织中EGFR表达显著升高,且PASC患者预后不良。

关键词：胰腺肿瘤胰腺腺鳞癌表皮生长因子受体靶向治疗

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液体活检在胰腺癌早期诊断中应用的研究进展

中华医学杂志 2024年第8期104卷 625-629页

作者：王灼印郭旭朱斌首都医科大学附属北京世纪坛医院普通外科，北京100038

胰腺癌恶性程度极高,且缺乏典型的早期症状和高效的诊断方法,绝大多数患者在确诊时已丧失手术机会,预后极差。早期诊断对于改善胰腺癌预后至关重要,液体活检旨在通过检测各种体液中的肿瘤相关标志物,如循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA和外泌... 详细信息

胰腺癌恶性程度极高,且缺乏典型的早期症状和高效的诊断方法,绝大多数患者在确诊时已丧失手术机会,预后极差。早期诊断对于改善胰腺癌预后至关重要,液体活检旨在通过检测各种体液中的肿瘤相关标志物,如循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA和外泌体等,达到胰腺癌早期诊断的目的。液体活检具有非侵入性、取样方便以及全面反映肿瘤异质性等优势,已展现出巨大的临床应用价值。因此,本文重点讨论液体活检在胰腺癌早期诊断中应用的研究现状、局限性及发展前景。

关键词：胰腺肿瘤液体活检循环肿瘤细胞循环肿瘤DNA 外泌体早期诊断

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动静脉移植物内瘘的构建及技术要点探讨

中华医学杂志 2024年第32期104卷 2975-2979页

作者：郁正亚谭正力首都医科大学附属北京同仁医院血管外科北京

血液透析目前仍然为终末期肾病患者的主要肾脏替代治疗方案, 当浅静脉耗竭, 或因其他原因无法建立自体动静脉内瘘时, 应选择动静脉移植物内瘘作为患者的永久透析通路。本文对动静脉移植物内瘘的构建及技术要点进行阐述, 涵盖术前评估、... 详细信息

血液透析目前仍然为终末期肾病患者的主要肾脏替代治疗方案, 当浅静脉耗竭, 或因其他原因无法建立自体动静脉内瘘时, 应选择动静脉移植物内瘘作为患者的永久透析通路。本文对动静脉移植物内瘘的构建及技术要点进行阐述, 涵盖术前评估、手术方案设计、移植物血管选择、术前准备及手术操作等诸多技术环节, 关系到手术结局、并发症和远期通畅率。

关键词：血液透析动静脉移植物内瘘终末期肾病