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国际多中心COLOR Ⅳ研究的质量控制

中华外科杂志 2025年第1期63卷 68-71页

作者：姚宏伟魏鹏宇高加勒吴偲舒文龙孟聪赵翰铮宋建宁吴国聪张忠涛首都医科大学附属北京友谊医院普通外科国家消化系统疾病临床医学研究中心消化健康全国重点实验室首都医科大学结直肠肿瘤临床诊疗与研究中心北京

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一。2022年我国结直肠癌新发病例和死亡病例分别约为59.2万例、30.9万例, 其发病率和病死率分别居癌症谱的第2位、第5位[1, 2]。目前, 外科手术仍是治疗结直肠癌的主要手段。基于循证医学证据与临床实践经验,...

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一。2022年我国结直肠癌新发病例和死亡病例分别约为59.2万例、30.9万例, 其发病率和病死率分别居癌症谱的第2位、第5位[1, 2]。目前, 外科手术仍是治疗结直肠癌的主要手段。基于循证医学证据与临床实践经验, 结直肠癌手术仍在持续改进。在广大结直肠外科医师不断探索的道路上, 高质量的临床研究起到了关键的推动作用。

关键词：

下颌All-on-4种植固定义齿不同咬合接触应力分布的有限元分析

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中国组织工程研究 2025年第28期29卷 6020-6029页

作者：吴正敏李常旭崔艳玮陈溯首都医科大学附属北京友谊医院口腔科北京市100050 首都医科大学口腔医学院特诊特需科北京市100050

背景:All-on-4种植固定义齿的长期修复效果与生物力学问题密切相关,其中咬合设计影响修复体各部位的应力分布,然而,国内外目前有关All-on-4种植固定义齿的生物力学研究较少且无定论。目的:分析不同咬合接触对下颌All-on-4种植固定义齿... 详细信息

背景:All-on-4种植固定义齿的长期修复效果与生物力学问题密切相关,其中咬合设计影响修复体各部位的应力分布,然而,国内外目前有关All-on-4种植固定义齿的生物力学研究较少且无定论。目的:分析不同咬合接触对下颌All-on-4种植固定义齿应力分布的影响。方法:建立下颌All-on-4种植固定义齿的模型,通过改变加载力的大小、方向和加载部位,设置了10种加载工况,模拟正中咬合、侧方咬合和前伸咬合,通过在不同牙位上加载模拟不同的咬合接触类型,分析比较各组模型不同加载工况中模型各部分的应力分布和最大应力值。结果与结论:①各组模型的应力分布云图基本相似,种植体应力主要集中在种植体颈部,周围骨组织的应力主要集中在种植体颈部周围,并且皮质骨的应力明显高于松质骨;基台的应力主要集中在基台与种植体和基台与上部修复体连接的部位,上部修复体中钛支架的应力主要集中在基台与钛支架连接部位,上部修复体中树脂面的应力主要集中在各加载点上;②模拟正中咬合中,末端悬臂不加载时种植体的最大Von-Mises应力值明显增大,说明下颌All-on-4种植固定义齿在正中咬合时末端悬臂区可有咬合接触;③模拟侧方咬合中,在模拟尖牙保护[牙合]工况中模型各部分的最大Von-Mises应力值明显增大;模拟平衡[牙合]工况中模型各部分的最大Von-Mises应力值较组牙功能[牙合]工况略低,说明下颌All-on-4种植固定修复在完成骨整合永久修复时,为了提高咀嚼效率,可选择组牙功能[牙合],种植术后即刻修复时可选择平衡[牙合];④模拟前伸咬合中,只在前牙区加载时模型各部分的最大Von-Mises应力值明显增大;模拟平衡[牙合]工况中,后牙区加载点在悬臂区和在悬壁区前方时模型各部分的最大Von-Mises应力值较小,说明下颌All-on-4种植固定修复义齿前伸运动的咬合接触可选择前伸平衡[牙合]。

关键词：有限元分析 All-on-4 咬合接触应力分布种植修复工程化口腔材料

生长素诱导的蛋白敲减系统在刚地弓形虫Chinese 1虫株中的应用及验证

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第2期38卷 207-212页

作者：闫爱霞贾永根邹洋李晶晶黄敏君谷俊朝首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治北京市重点实验室北京100050

目的应用生长素诱导的蛋白敲减(AID)系统调控刚地弓形虫Chinese 1虫株中荧光蛋白的表达。方法人工合成3′端融合有标签FLAG的植物生长素受体--运输抑制剂响应蛋白1(TIR1)的核苷酸序列TIR1-FLAG,将其连接至pTub-e GFP-CAT载体中,构建pTub... 详细信息

目的应用生长素诱导的蛋白敲减(AID)系统调控刚地弓形虫Chinese 1虫株中荧光蛋白的表达。方法人工合成3′端融合有标签FLAG的植物生长素受体--运输抑制剂响应蛋白1(TIR1)的核苷酸序列TIR1-FLAG,将其连接至pTub-e GFP-CAT载体中,构建pTub-TIR1-FLAG-CAT表达质粒;表达质粒经电穿孔转染至弓形虫Chinese 1虫株TgCtwh3,经氯霉素筛选和极限稀释后筛选单克隆虫株。PCR扩增及蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测单克隆虫株中TIR1基因的插入和相应蛋白的表达,将验证正确的阳性克隆命名为TIR1虫株。构建表达荧光蛋白mCherry-Ty-AID报告基因的表达质粒pTub-mCherry-Ty-AID-DHFR,并通过电穿孔转染将其整合至TIR1虫株基因组中,乙胺嘧啶筛选后极限稀释筛选获得稳定表达mCherry-AID的虫株,命名为TIR1:m Cherry-AID虫株。将TIR1:mCherry-AID虫株的虫体分为吲哚乙酸(IAA)调控组和对照组,IAA调控组加IAA至终浓度500μmol/L,对照组加等量乙醇,培养3 h后,分别以抗TgGAP45和抗Ty-1抗体为一抗,间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting分析IAA调控下mCherry荧光蛋白的表达情况。结果PCR扩增结果显示,在1816 bp处有一条特异性扩增条带。Western blotting分析结果显示,抗FLAG-Tag抗体可识别TIR1虫株中相对分子质量(Mr)约70000的蛋白;Ty-1抗体可在TIR1:mCherry-AID虫株的对照组中检测到约Mr58000的特异性条带,与理论上C端融合了AID的mCherry-Ty蛋白大小相同;在IAA调控组中未检测到特异性条带。IFA结果显示,TIR1:mCherry-AID虫株对照组可见红色荧光蛋白,IAA调控组未检测到mCherry蛋白。结论应用AID系统可成功调控弓形虫Chinses 1虫株中mCherry荧光蛋白的表达。

关键词：刚地弓形虫吲哚乙酸生长素诱导的蛋白敲减系统 mCherry荧光蛋白

基于CRISPR/Cas9技术对刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第2期37卷 150-154,160页

作者：贾永根闫爱霞黄敏君邹洋谷俊朝首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治北京市重点实验室北京100050

目的鉴定刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420在速殖子阶段的功能及其蛋白N端序列的亚细胞定位作用。方法在线设计针对TGGT1_310420的sgRNA,通过定点突变弓形虫CRISPR/Cas9载体pSAG1::CAS9-GFP-U6::sgUPRT上的sgRNA序列获得针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体。利用CRISPR/Cas9编辑技术将含有荧光蛋白mCherry和弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)的PCR片段m CherryTy_HXGPRT插入至TGGT1_310420内源基因编码N端前20个氨基酸残基之后。通过PCR鉴定片段是否正确插入;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析检测融合蛋白的表达情况。间接免疫荧光分析和共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位;空斑实验检测基因缺失株虫体表型的变化。结果 PCR和测序结果显示,成功构建了针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体, mCherry-Ty_HXGPRT序列定点插入至靶点位置。蛋白质印迹分析结果显示, mCherry融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为36 000;间接免疫荧光实验表明mCherry融合蛋白与弓形虫滑行相关蛋白45 (Tg GAP45)共定位于虫体的表膜。空斑实验检测结果显示, TGGT1_310420的缺失并未引起虫体出现可测的表型变化。结论 TGGT1_310420编码蛋白前20个氨基酸残基序列具有定位到弓形虫表膜的功能, TGGT1_310420在弓形虫速殖子阶段为非必需基因。

关键词：刚地弓形虫 TGGT1_310420 钙离子依赖性的蛋白激酶 CRISPR/Cas9

应用生物素标记与蛋白质组学方法分离鉴定弓形虫表面蛋白和分泌蛋白

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第1期31卷 6-11页

作者：刘媛薛峰黄敏君甘绍伯谷俊朝首都医科大学附属北京友谊医院、北京热带医学研究所北京100050 热带病防治研究北京市重点实验室北京100050

目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的... 详细信息

目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的弓形虫表面蛋白和分泌蛋白。对分离得到的蛋白进行浓缩和密度梯度凝胶电泳。将电泳条带分段切胶,回收蛋白后,酶切,应用液相色谱和两级质谱联用技术(LC-MS/MS)进行蛋白鉴定。结果共鉴定出785种弓形虫蛋白,其中81种为基因组注释的表面或分泌蛋白,占10.3%。785种蛋白中,检测到同一种蛋白多肽的次数(PSM值)>10的蛋白有65种,其中43种为基因组注释的表面蛋白或分泌蛋白,占66%,余22种为预测的未知蛋白。结论应用生物素标记和亲和素层析分离了弓形虫表面蛋白和分泌蛋白,并初步鉴定了一批潜在的弓形虫新表面蛋白和分泌蛋白。

关键词：刚地弓形虫表面蛋白分泌蛋白生物素标记液相色谱和两级质谱联用技术

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北京市6例输入性曼氏血吸虫病临床特点分析

中国血吸虫病防治杂志 2017年第2期29卷 150-154页

作者：邹洋王磊李小丽田小军李威安亦君齐志群李晶晶王非黄敏君首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室北京100050

目的分析6例输入性曼氏血吸虫病患者的临床特点,为提高临床医师的诊治水平提供资料依据。方法收集2009年1月-2016年7月确诊的6例输入性曼氏血吸虫病患者的临床资料,并进行分析。结果 6例输入性曼氏血吸虫病患者均有明确的流行病学史。... 详细信息

目的分析6例输入性曼氏血吸虫病患者的临床特点,为提高临床医师的诊治水平提供资料依据。方法收集2009年1月-2016年7月确诊的6例输入性曼氏血吸虫病患者的临床资料,并进行分析。结果 6例输入性曼氏血吸虫病患者均有明确的流行病学史。主要临床表现为发热和嗜酸性粒细胞增高,50%患者伴有腹泻;肠黏膜组织压片均可以找到曼氏血吸虫卵,但日本血吸虫IgG抗体阳性率仅为33.3%。所有患者CD3^+CD8^+T细胞比例明显下降,B细胞比例明显上调,血免疫球蛋白以IgG抗体为主;16.6%的患者腹部超声见腹腔积液或脾脏增厚,16.6%患者磁共振检查见肝脏出现多发小结节或肠壁增厚,所有患者电子结肠镜检查均可见结肠炎,其中66.6%的患者合并多发溃疡,肠黏膜病理学均可见大量嗜酸性粒细胞浸润。6例患者经吡喹酮治疗后均达到临床治愈标准。结论本文通过系统总结6例输入性曼氏血吸虫病患者的流行病学史、临床和实验室多方面资料,为提高临床医师对该病的认知及诊治水平提供依据。

关键词：曼氏血吸虫病嗜酸性粒细胞病原学检测吡喹酮输入性病例北京市

乙酰吉他霉素干混悬剂对肺炎支原体的体外抗菌作用

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中国新药杂志 2023年第6期32卷 625-628页

作者：史大伟袁青涂鹏田秀君窦海伟辛德莉首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室北京100050

目的:探讨乙酰吉他霉素干混悬剂对肺炎支原体(MP)的体外抗菌作用。方法:选择2016—2019年本实验室保存的呼吸系统感染患者的MP临床分离株51株,以阿奇霉素、红霉素对照药物,采用微量倍比稀释法测定乙酰吉他霉素干混悬剂对MP的体外最低抑... 详细信息

目的:探讨乙酰吉他霉素干混悬剂对肺炎支原体(MP)的体外抗菌作用。方法:选择2016—2019年本实验室保存的呼吸系统感染患者的MP临床分离株51株,以阿奇霉素、红霉素对照药物,采用微量倍比稀释法测定乙酰吉他霉素干混悬剂对MP的体外最低抑菌浓度(MIC)。结果:51株临床分离株中,43例耐药株,含23SrRNA 2063位点突变,8例敏感株,无耐药相关位点突变。微量倍比稀释法的结果显示:乙酰吉他霉素干混悬剂对MP标准株FH和M129的MIC值均为0.125 mg·L^(-1),对MP临床耐药株的MIC值为8~32 mg·L^(-1),MIC_(50)为16 mg·L^(-1),MIC_(90)为32 mg·L^(-1);对MP临床敏感株的MIC值为0.063~0.125 mg·L^(-1),MIC_(50)和MIC_(90)均为0.125 mg·L^(-1)。红霉素对MP临床耐药株MIC范围为256~1024 mg·L^(-1),MIC_(50)和MIC_(90)分别为512和1024 mg·L^(-1);阿奇霉素对MP临床耐药株MIC范围为64~512 mg·L^(-1),MIC_(50)和MIC_(90)分别为256和512 mg·L^(-1);红霉素和阿奇霉素对MP临床敏感株的MIC值均研究。

关键词：乙酰吉他霉素干混悬剂肺炎支原体抗菌最低抑菌浓度耐药

弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与宿主巨噬细胞蛋白的相互作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第5期32卷 352-356页

作者：薛峰洪彩玲黄敏君孙岚甘绍伯谷俊朝首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所北京100050 北京市热带病防治研究重点实验室北京100050

目的鉴定与弓形虫GRA7致密颗粒蛋白相互作用的宿主巨噬细胞蛋白组分,并研究蛋白相互作用与感染过程的相关性。方法建立基于人源THP-1单核巨噬细胞系的弓形虫-巨噬细胞感染模型。以含GST标签的GRA7全长重组蛋白为诱饵,采用GST沉降体外蛋... 详细信息

目的鉴定与弓形虫GRA7致密颗粒蛋白相互作用的宿主巨噬细胞蛋白组分,并研究蛋白相互作用与感染过程的相关性。方法建立基于人源THP-1单核巨噬细胞系的弓形虫-巨噬细胞感染模型。以含GST标签的GRA7全长重组蛋白为诱饵,采用GST沉降体外蛋白相互作用方法 ,捕获与诱饵相互作用的人THP-1单核巨噬细胞系成分,采用液相色谱-两级质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定宿主靶蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)方法验证其体内的相互作用。采用人碳酸酐酶1(h CA1)抗血清为一抗的蛋白质印迹(Western blotting)验证捕获蛋白为宿主h CA1蛋白组分。采用pc DNA3.1(+)真核质粒过表达宿主靶蛋白的方法研究蛋白相互作用与弓形虫感染巨噬细胞的相关性。结果 GST沉降实验捕获的THP-1细胞蛋白组分主要为相对分子质量为Mr29 000的蛋白,质谱鉴定为h CA1。Co-IP实验证明弓形虫GRA7蛋白与宿主h CA1蛋白在感染过程中具有显著体内相互作用。THP-1巨噬细胞内过表达h CA1基因可显著增强弓形虫的繁殖速度和纳虫泡形成速度,但不影响最终繁殖数量。结论弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与THP-1巨噬细胞的h CA1蛋白具有显著蛋白相互作用,且该相互作用与弓形虫在THP-1巨噬细胞内的繁殖速度呈正相关。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白人碳酸酐酶1 蛋白相互作用纳虫泡

脑囊虫病患者细胞因子表达不平衡——系统性回顾及Meta分析（英文）

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中国人兽共患病学报 2016年第2期32卷 137-147页

作者：陈小华王非邹洋田小军谷俊朝首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室北京100050

脑囊虫病可能导致患者中枢和外周免疫系统的功能障碍,然而,在个别研究中细胞因子表达特征的结果是相互矛盾的。本研究目的是系统地分析囊尾蚴感染状态下脑囊虫病患者细胞因子表达特征研究结果,整合中枢和外周细胞因子变化的证据。我们... 详细信息

脑囊虫病可能导致患者中枢和外周免疫系统的功能障碍,然而,在个别研究中细胞因子表达特征的结果是相互矛盾的。本研究目的是系统地分析囊尾蚴感染状态下脑囊虫病患者细胞因子表达特征研究结果,整合中枢和外周细胞因子变化的证据。我们进行了一项meta分析,针对脑囊虫病患者中枢及外周细胞因子浓度与对照组比较的研究。该研究纳入14个研究,共518例脑囊虫病和386个对照包括在内。总体而言,干扰素-γ(IFN-γ)的浓度(P值=0.000 5)和IL-2(P研究支持。这项分析提示TH1/TH2细胞因子表达失衡可能参与脑囊虫病患者发病机理。

关键词：细胞因子脑囊虫病 Meta分析炎症生物标志物