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大鼠大脑皮质胆囊收缩素受体的体外结合分析法研究

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华西医科大学学报 1999年第2期30卷 214-216,221页

作者：项鹏陈曼玲谭天秩史育红华西医科大学基础医学院生物化学教研室

用Ｂｏｌｔｏｎ－Ｈｕｎｔｅｒ试剂联结法标记胆囊收缩素（ＣＣＫ８），得１２５Ｉ－ＢＨ－ＣＣＫ８，其比放射性为３．４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，放射化学纯度大于９６％。取其与自制的大鼠大脑皮质细胞膜进行受体放射分析，发现标记配体与... 详细信息

用Ｂｏｌｔｏｎ－Ｈｕｎｔｅｒ试剂联结法标记胆囊收缩素（ＣＣＫ８），得１２５Ｉ－ＢＨ－ＣＣＫ８，其比放射性为３．４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，放射化学纯度大于９６％。取其与自制的大鼠大脑皮质细胞膜进行受体放射分析，发现标记配体与大鼠大脑皮质ＣＣＫ受体的结合具有温度和时间依赖性，可饱和性，可逆性及特异性。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析获大鼠大脑皮质细胞膜ＣＣＫ受体Ｋｄ值为１．０９８ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｂｍａｘ为１９７．５ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。

关键词： CCK8 放射分析胆囊收缩素受体大鼠

孔雀绿比色法同步测定红细胞溶血液中Ca^（2＋）－ATP酶和Na~＋、K~＋－

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华西医科大学学报 1995年第2期26卷 230-233页

作者：左凤琼李为民王航雁吴兆锋华西医科大学基础医学院生物化学教研室

用孔雀绿比色法可测出０．１μｇ磷，重现性好，变异系数为２．０３％，回收率为９４．４％～１０３．４％，显色稳定，操作简便。红细胞膜Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶和Ｎａ￣＋、Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶经低渗皂素溶血后，在Ｃａ￣（２＋）、... 详细信息

用孔雀绿比色法可测出０．１μｇ磷，重现性好，变异系数为２．０３％，回收率为９４．４％～１０３．４％，显色稳定，操作简便。红细胞膜Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶和Ｎａ￣＋、Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶经低渗皂素溶血后，在Ｃａ￣（２＋）、ＥＧＴＡ或哇巴因的存在下，水解ＡＴＰ释出的无机磷，用孔雀绿法可分别测出其酶活性。

关键词：孔雀绿比色法溶血液腺苷三磷酸酶钙钾钠

金属离子对蛇毒蛋白生物活性及结构效应的影响

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高等学校化学学报 2009年第9期30卷 1773-1778页

作者：刘淑清郭春梅徐跃飞孙明忠辛毅唐建武大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连116044 大连医科大学基础医学院生物技术系大连医科大学病理学教研室大连116044

从旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffii brevicaudus,GBB)蛇毒中纯化得到了3种电泳和质谱纯蛋白活性组分,其酶解肽段采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)进行序列测定,与其它同源性蛇毒蛋白氨基酸序列比对发现,3种蛋白为... 详细信息

从旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffii brevicaudus,GBB)蛇毒中纯化得到了3种电泳和质谱纯蛋白活性组分,其酶解肽段采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)进行序列测定,与其它同源性蛇毒蛋白氨基酸序列比对发现,3种蛋白为新的蛇毒磷脂酶A2、类凝血酶和金属蛋白酶,分别将其命名为GBB-bPLA2,GBB-TLE和GBB-MP.电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测得每个GBB-bPLA2和GBB-MP中含有一个Ca2+;每个GBB-TLE中含有2个Zn2+.Ca2+可分别使GBB-bPLA2和GBB-MP的荧光发射波长向短波方向移动2.0和1.6nm,使二者的荧光发射强度提高14.0%和11.0%;Ca2+的存在可显著提高二者的热稳定性,使GBB-bPLA2和GBB-MP的热变性温度分别提高1.5和2.0℃.Zn2+使GBB-TLE的荧光发射强度增高4.3%,但对GBB-TLE的酯酶水解活性、荧光发射波长和热变性温度无显著影响.金属离子的存在能够不同程度地影响蛇毒蛋白结构热稳定性,但对蛇毒蛋白生物活性的作用则不同.

关键词：蛇毒蛋白金属离子活性

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胆囊收缩素酶联免疫测定法的应用

华西医科大学学报 1999年第2期30卷 217-219页

作者：陈曼玲何涛邱明均华西医科大学基础医学院生物化学教研室

对已建立的八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８）酶联免疫吸附试验的应用作初步探索。结果显示：相关肽２Ａｇ、３Ａｇ及ＣＣＫ８之抑制曲线斜率有异，分别为－０．４６、－０．１７、－０．６８；脑组织提取物可被ＣＣＫ８定量抑制；ＣＣＫ８不... 详细信息

对已建立的八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８）酶联免疫吸附试验的应用作初步探索。结果显示：相关肽２Ａｇ、３Ａｇ及ＣＣＫ８之抑制曲线斜率有异，分别为－０．４６、－０．１７、－０．６８；脑组织提取物可被ＣＣＫ８定量抑制；ＣＣＫ８不与其他４种八肽抗血清发生反应，表明该法可用于对ＣＣＫ相关肽进行初步结构分析，亦可用于组织提取物ＣＣＫ成分鉴定及多肽抗血清筛选，因而具有较好的应用前景。

关键词：胆囊收缩素 ELISA CCK8

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副突变及其表观遗传机制的研究进展

生理科学进展 2016年第1期47卷 7-13页

作者：程杉王晓荣丁卫首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系北京100069

经典遗传学的研究方法为许多遗传性疾病和遗传相关性疾病的预防、诊断和治疗提供了在分子水平上的直接线索,然而人类疾病的遗传表现始终存在着经典遗传学法则所不能解释的现象。副突变(paramutation)是上世纪50年代首次在玉米中发现的... 详细信息

经典遗传学的研究方法为许多遗传性疾病和遗传相关性疾病的预防、诊断和治疗提供了在分子水平上的直接线索,然而人类疾病的遗传表现始终存在着经典遗传学法则所不能解释的现象。副突变(paramutation)是上世纪50年代首次在玉米中发现的一种非孟氏遗传模式,其传递的等位基因不存在核苷酸序列的差异,提示了表观遗传机制可能参与了基因表达和表型的可遗传变化。近期的研究发现关于副突变现象的解释可能涉及一种新的表观遗传学调控机制,即由RNA(特别是非编码RNA)引发的基因组改变参与了副突变的发生和维持。其中DNA甲基转移酶II所介导的RNA甲基化发挥了极其重要的作用。对副突变及其机制的研究不仅能够深化人类对遗传和生命本质的认识,还有助于开拓在生物工程和疾病诊疗等应用领域的新思路。本文综述了副突变的分子机制和研究进展,并且探讨了副突变在疾病研究和基因治疗中的应用前景。

关键词：副突变表观遗传学非孟氏遗传重复序列 DNA甲基转移酶

两步超速离心法快速分离大量血浆极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白

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同济医科大学学报 1995年第3期24卷 169-171页

作者：王淳本宗义强吴万生冯友梅邓耀祖冯宗忱同济医科大学基础医学院生物化学教研室

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆... 详细信息

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆只需超速离心５ｈ。所得极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）经琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳（ＰＡＧＥ）及载脂蛋白ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定纯度良好。本文为超速离心分离制备大量血浆ＶＬＤＬ、ＬＤＬ提供了一种快速、经济的新方法。

关键词：超速离心法脂蛋白类低密度脂蛋白

DNA表观遗传修饰的研究进展-基因组的第六碱基

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生理科学进展 2012年第3期43卷 164-170页

作者：邢天禹丁卫首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系北京100069

近期的研究发现,哺乳动物细胞的正常DNA中普遍存在一类新的碱基组成成分,即5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethyl cytosine,5-hmC)。这种刚刚开始被人们深入认识的碱基修饰形式,被称作是基因组的第六碱基。本文主要介绍关于5-hmC的形成机制... 详细信息

近期的研究发现,哺乳动物细胞的正常DNA中普遍存在一类新的碱基组成成分,即5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethyl cytosine,5-hmC)。这种刚刚开始被人们深入认识的碱基修饰形式,被称作是基因组的第六碱基。本文主要介绍关于5-hmC的形成机制、组织特异性分布、在细胞分化和表达调控等生理过程中的作用,以及作为表观遗传标志物与肿瘤等疾病的关系方面的研究进展。此外,我们对现阶段关于甲基化及羟甲基胞嘧啶的检测方法在基因组学研究中的进展进行了归纳和总结。

关键词：羟甲基胞嘧啶表观遗传学生物标志物基因表达调控细胞分化

微波辐照对小鼠脑内MDA、DA和NE含量及NOS活性的影响

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基础医学与临床 2004年第3期24卷 350-351页

作者：侯燕芝陈瑞陈安宇于培兰史小苓孙林王锐首都医科大学基础医学院生物化学教研室北京100054 首都医科大学基础医学院生物医学工程系医学仪器教研室北京100054

近年来，微波辐照对人体健康的影响越来越受到医学界的关注。有研究表明2450MHz微波具有较强的生物学效应，为探讨短促但持续多天的微波辐照对机体的损伤机制，我们分别选用了频率2450、900、450和45MHz，功率密度100mW／cm^2的微波，每... 详细信息

近年来，微波辐照对人体健康的影响越来越受到医学界的关注。有研究表明2450MHz微波具有较强的生物学效应，为探讨短促但持续多天的微波辐照对机体的损伤机制，我们分别选用了频率2450、900、450和45MHz，功率密度100mW／cm^2的微波，每日3次，每次1．5s，连续照射小鼠90d，观察了这些条件下微波辐照对小鼠脑内多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。

关键词：微波辐照小鼠脑内MDA DA NE 含量 NOS活性生物学效应损伤机制

苦荞清蛋白酶解物对高糖诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的保护作用

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食品科学 2021年第1期42卷 222-227页

作者：费烨王雍龚仕英田艳王筑婷雷霆雯张礼林汪希兰李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550025

目的:建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型,观察苦荞清蛋白酶解物(tartary buckwheat albumin hydrolysate,TBAH)对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法:采用碱性蛋白酶水解苦荞清蛋白制备TBAH,超滤法截留分子质量小于3 kDa的TBAH;利用高糖高胰岛... 详细信息

目的:建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型,观察苦荞清蛋白酶解物(tartary buckwheat albumin hydrolysate,TBAH)对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法:采用碱性蛋白酶水解苦荞清蛋白制备TBAH,超滤法截留分子质量小于3 kDa的TBAH;利用高糖高胰岛素诱导HepG2细胞36 h建立胰岛素抵抗模型,以2.5、5、10μg/mL的TBAH培养细胞24 h。观察TBAH对HepG2细胞葡萄糖代谢的影响;检测细胞氧化损伤指标(一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和活性氧(reactive oxygen species,ROS))水平;Western blot检测胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路中相关蛋白表达情况。结果:与IR模型组相比,TBAH组葡萄糖消耗量显著增多(P<0.05),且呈剂量依赖性,同时MDA、NO和ROS水平显著降低(P<0.01,P<0.05),SOD活力显著升高(P<0.05),LDH活力显著下降(P<0.05);p-IRS-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),磷酸化Akt、PI3K、葡萄糖转运蛋白4表达水平极显著上升(P<0.01)。结论:TBAH通过抑制氧化应激改善胰岛素抵抗。

关键词：苦荞清蛋白酶解液 HepG2细胞胰岛素抵抗氧化应激胰岛素信号通路