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TPA处理牛精子后蛋白激酶C(α及β)的膜向转移及活性变化

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中国医科大学学报 2000年第S1期29卷 4-5,8页

作者：刘莹武迪迪宗志宏张杰于秉治中国医科大学基础医学院生物化学教研室沈阳110001

目的 :研究 TPA处理牛精子后 ,蛋白激酶 C(α、β)的膜向转移及活性变化。方法 :TAP处理后采用 West-ern blotting观察 PKC的两种亚型 (α、β)的膜、浆各部分含量变化 ,并测定 PKC在浆、膜的活性变化。结果 :以 0 .1,1,10 ,10 0 ng/ m... 详细信息

目的 :研究 TPA处理牛精子后 ,蛋白激酶 C(α、β)的膜向转移及活性变化。方法 :TAP处理后采用 West-ern blotting观察 PKC的两种亚型 (α、β)的膜、浆各部分含量变化 ,并测定 PKC在浆、膜的活性变化。结果 :以 0 .1,1,10 ,10 0 ng/ ml不同浓度 TPA处理牛精子后 ,浆中 PKC(α、β)逐渐减少 ,而膜中的则逐渐增多 ;相同浓度的 TPA在处理不同时间的条件下 ,免疫印迹可见浆中的 PKC逐渐增加 ,而膜中的 PKC逐渐减少 ;10 0 ng/ ml的 TPA处理牛精子 5 min后 ,浆内 PKC比活性降低 ,膜部分 PKC比活性升高。结论 :TPA处理牛精子后 ,PKC的两种亚型 (α、β)的含量具有膜向转移 ,并有时间和浓度依赖性 ,同时也有活性的改变。

关键词：佛波酯TPA 蛋白激酶C 牛精子

染铅鼠脑海马神经原长时程增强过程中Ca^(2+)浓度及PKC活性的研究

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中国医科大学学报 1997年第5期26卷 456-459页

作者：孙黎光刘素媛邢伟时利德蔡葵滕国玺蔡原郭纳新刘秋芳万伯健沈阳中国医科大学基础医学院生物化学教研室110001

为探讨中枢神经系统铅中毒的生化机制，以慢性染铅鼠为动物模型，用高频刺激诱发海马区产生长时程增强后，以Ｆｕｒａ－２为Ｃａ２＋指示剂，测定海马神经元Ｃａ２＋浓度。以放射性［ｒ－３２Ｐ］－ＡＴＰ掺入外源性底物方法测定神经元... 详细信息

为探讨中枢神经系统铅中毒的生化机制，以慢性染铅鼠为动物模型，用高频刺激诱发海马区产生长时程增强后，以Ｆｕｒａ－２为Ｃａ２＋指示剂，测定海马神经元Ｃａ２＋浓度。以放射性［ｒ－３２Ｐ］－ＡＴＰ掺入外源性底物方法测定神经元胞浆及胞膜ＰＫＣ活性。结果：染铅组长时程增强过程中Ｃａ２＋浓度明显升高（２３６．４８±６１．８３ｎｍｏｌ／Ｌ），与对照组比较有统计学意义（Ｐ＜０．００１）。ＰＫＣ活性亦升高（胞浆：１．８７±０．３５ｎｍｏｌ／ｍｇ．ｍｉｎ－１；胞膜１．５２±０．４０ｎｍｏｌ／ｍｇ．ｍｉｎ－１），与对照组比较有统计学意义（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．００１）。说明海马长时程增强过程中，铅作为钙的类似物可使Ｃａ２＋浓度升高激活ＰＫＣ，进而干扰长时程增强过程。证明Ｃａ２＋－ＰＫＣ系统对铅有高度敏感性，可能是铅致神经毒性作用的关键中介物。

关键词：钙离子蛋白激酶C 铅中毒长时程增强神经毒性

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肝癌组织中GD3合成酶的纯化

生物化学与生物物理学报 1994年第4期26卷 351-356页

作者：夏霞娟谢天培顾天爵上海医科大学基础医学院生物化学教研室

ＧＤ３合成酶（ＣＭＰ－ＮｅｕＡｃ：ＧＭ３唾液酸转移酶，ＳＴ２）是膜嵌合蛋白，定位于高尔基体。经过制作微粒体、Ｔｒｉｔｏｎ增溶、ＡＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓ亲和层析等步骤，二乙基亚硝胺诱发大鼠... 详细信息

ＧＤ３合成酶（ＣＭＰ－ＮｅｕＡｃ：ＧＭ３唾液酸转移酶，ＳＴ２）是膜嵌合蛋白，定位于高尔基体。经过制作微粒体、Ｔｒｉｔｏｎ增溶、ＡＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓ亲和层析等步骤，二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌组织中的ＳＴ２被纯化了３１５９７倍，得率为０．３５％。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染色呈１条蛋白着色带，分子量为５５ｋｄ．

关键词：肝癌 GD3合成酶纯化

亚硝胺诱发大鼠肝癌不同细胞组分中三类蛋白激酶的变化

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上海医科大学学报 1994年第3期21卷 176-181页

作者：汤华陈惠黎上海医科大学基础医学院生物化学教研室

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）、蛋白檄酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液... 详细信息

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）、蛋白檄酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液＞膜结构＞胞核，而ＰＫＣ则为膜结构＞胞液＞胞核。在胞液的三类蛋白激酶中，ＰＫＣ＞ＰＫＡ＞ＴＰＫ；膜结构为ＰＫＣ＞ＴＰＫ＞ＰＫＡ；而胞核却以ＴＰＫ特别高，ＰＫＡ和ＰＫＣ的含量甚微。ＤＥＮ诱发大鼠肝癌１８周后，膜性和胞核ＴＰＫ升高，尤以膜性ＴＰＫ升高明显。但膜性ＰＫＡ则降低而胞核ＰＫＡ升高，胞液中ＴＰＫ和ＰＫＡ均无明显变化；而ＰＫＣ和ＴＰＫ相反，胞液中显著升高，膜性及胞核变化不大。其中ＰＫＣ的增高不是激活剂含量上升的结果。

关键词：亚硝胺肝肿瘤细胞组分蛋白激酶

慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽的影响

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解剖学报 2009年第2期40卷 193-198页

作者：邢安凤任乐荣王珏李良首都医科大学燕京医学院组织学胚胎学教研室北京101300 首都医科大学基础医学院病理学教研室北京100069

目的研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽（Aβ）及淀粉样前体蛋白（APP）表达和分布的影响。方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分... 详细信息

目的研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽（Aβ）及淀粉样前体蛋白（APP）表达和分布的影响。方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分布;刚果红染色检测血管的淀粉样变;放射免疫分析法检测手术后10d、30d、90d和180d大鼠脑皮质及海马的Aβ含量;免疫印迹法检测大脑皮质和海马的APP含量。结果免疫组织化学染色显示低灌注90d模型组海马CA1区APP、Aβ1-40的表达较对照组明显增加（两者均P〈0.05）,低灌注180d模型组皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40和Aβ1-42的表达均增加（除皮质Aβ1-40P〈0.01外,其余均P〈0.05）;Aβ1-40阳性反应产物均匀分布于胞质内,Aβ1-42阳性反应产物在神经元胞质内呈颗粒状聚集。刚果红染色显示,术后180d脑实质内小血管发生淀粉样改变。放射免疫分析法和免疫印迹法结果显示,大鼠术后90d海马Aβ和APP含量开始增高（两者均P〈0.05）,180d皮质Aβ和APP的含量增高（AβP〈0.05,APPP〈0.01）。结论慢性脑血流低灌注可引发大鼠脑内Aβ含量的升高,可能在阿尔茨海默病（AD）早期发病过程中有重要意义。

关键词：慢性脑血流低灌注阿尔茨海默病 β-淀粉样肽淀粉样前体蛋白免疫组织化学免疫印迹法放射免疫法大鼠

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1翻译后修饰及其在免疫治疗中的应用前景

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第2期37卷 182-188页

作者：崔宇琦邹朝霞高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)结合,抑制T淋巴细胞... 详细信息

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)结合,抑制T淋巴细胞的激活,发挥免疫抑制性功能。基于这一原理所开发的PD-1/PD-L1免疫阻断疗法,已在临床广泛应用于多种实体瘤的治疗,使诸多病人受益。与此同时,随着对PD-L1调控机制研究的深入,PD-L1的多种翻译后修饰形式陆续得到了鉴定,包括糖基化、磷酸化、泛素化和棕榈酰化等。研究表明,这些翻译后修饰过程可影响PD-L1的蛋白质稳定性与生理功能。因此,翻译后修饰成了PD-L1研究新的切入点。目前,PD-L1翻译后修饰靶向药物已在免疫治疗中展现出良好的应用前景。通过靶向PD-L1翻译后修饰过程,进而调控由PD-L1介导的肿瘤免疫逃逸,成了提高免疫治疗应答率的新思路和新策略。本文将对PD-L1翻译后修饰的研究进行系统总结,并陈述其在免疫治疗领域中的应用前景,希望为未来针对PD-L1翻译后修饰的研究提供理论支持。

关键词：程序性细胞死亡蛋白配体-1 翻译后修饰免疫治疗

登革病毒-2感染人脐静脉内皮细胞的磷酸化蛋白质组学分析

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南方医科大学学报 2023年第1期43卷 29-38页

作者：胡盼程瑶王远迎苟小琴刘华左丽吴宁贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院实验教学中心贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫教研室贵州贵阳550004

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通... 详细信息

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通过串联质谱标签(TMT)法对磷酸化蛋白质进行定性与定量分析,对鉴定到的差异磷酸化蛋白质进行氨基酸保守基序分析、亚细胞定位分析、蛋白质结构域分析、GO富集分析、KEGG通路分析和蛋白质互作(PPI)等生物信息学分析。利用Western blot检测JUN、MAP2K2和AKT1磷酸化蛋白的表达。结果共检测到1385个差异蛋白质上的2918个修饰肽段,其中有1346个修饰肽段显著上调(FC>1.2,P生物合成过程、吞噬体和白细胞跨内皮迁移处富集。对上调和下调的差异磷酸化蛋白分别进行蛋白质互作—KEGG联合分析,结果发现上调和下调的差异磷酸化蛋白质共富集到15条通路,且通过Western Blot检测与自噬途径相关的3个差异磷酸化蛋白质即JUN、MAP2K2和AKT1的表达,结果显示DENV-2组与空白组相比,p-JUN表达显著下调(1.48±0.01 vs 1.23±0.01,P<0.0001);p-AKT1表达显著上调(0.87±0.02 vs 1.01±0.01,P<0.001);p-MAP2K2表达显著上调(1.10±0.02 vs 1.29±0.05,P<0.01)。结论DENV-2感染HUVEC存在较多差异表达蛋白,p-JUN的下调、p-MAP2K2和pAKT1的上调提示3个能够调节自噬的磷酸化蛋白可能与DENV-2感染机制有关。

关键词：磷酸化组学登革病毒-2 人脐静脉内皮细胞

去卵巢大鼠海马CA1／CA2区ERK1／2的基础活性和诱导活性降低

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中国应用生理学杂志 2009年第3期25卷 411-415页

作者：张若楠宋士军李芳芳马俊骥李怡秋河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室河北石家庄050017 河北医科大学基础医学院生理教研室河北石家庄050017

目的:观察去卵巢大鼠空间学习记忆能力的变化与海马中胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的关系。方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,饲养4个月后采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,于测试前将各组组内又分为训练组和非训练... 详细信息

目的:观察去卵巢大鼠空间学习记忆能力的变化与海马中胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的关系。方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,饲养4个月后采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,于测试前将各组组内又分为训练组和非训练组,训练组用于测定经学习记忆训练诱发的ERK1/2的诱导活性,非训练组用于测定未经学习记忆训练时的ERK1/2的基础活性,Western blot方法检测海马CA1/CA2区p-ERK1/2蛋白及Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的变化。结果:①与假手术组比较,去卵巢组大鼠的空间学习记忆能力明显下降(P基础和诱导活性降低以及该通路的抑制蛋白RKIP的表达增加有关。

关键词：雌激素缺乏海马学习记忆胞外信号调节激酶1/2 Raf激酶抑制蛋白

白细胞酸性β-1,4葡萄糖苷酶的荧光测定法

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遗传与疾病 1989年第2期6卷 97-99页

作者：王建枝何善述同济医科大学基础医学部生物化学教研室

白细胞中含有两种β-1,4葡萄糖苷酶(GB):酸性β-1,4葡萄糖苷酶(GBA)和中性β-1,4葡萄糖苷酶(GBN),前者是Gaucher病(GD)的特异性缺陷酶,因此,测定白细胞GBA活性是GD的临床确诊指标。在测定该酶过程中必须加入牛磺胆酸钠(TC)或脱氧牛磺胆... 详细信息

白细胞中含有两种β-1,4葡萄糖苷酶(GB):酸性β-1,4葡萄糖苷酶(GBA)和中性β-1,4葡萄糖苷酶(GBN),前者是Gaucher病(GD)的特异性缺陷酶,因此,测定白细胞GBA活性是GD的临床确诊指标。在测定该酶过程中必须加入牛磺胆酸钠(TC)或脱氧牛磺胆酸钠 (TDC)。

关键词：白细胞葡萄糖苷酶荧光测定法