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高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

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谷氨酸脱羧酶放射测量法的改良及应用

生物化学与生物物理进展 2001年第1期28卷 118-120页

作者：胡元元何善述同济医科大学基础医学院生物化学教研室武汉430030

用NaOH代替苯乙胺作为14 CO2 的吸附剂 ,改进谷氨酸脱羧酶 (GAD)活性的放射测定方法 ,结果发现NaOH为吸附剂组内变异系数为 9 6 % ,以苯乙胺为吸附剂组内变异系数为 31 9% ;以NaOH为吸附剂 72h后测量其放射活性仍稳定不变 ,以苯乙胺为... 详细信息

用NaOH代替苯乙胺作为14 CO2 的吸附剂 ,改进谷氨酸脱羧酶 (GAD)活性的放射测定方法 ,结果发现NaOH为吸附剂组内变异系数为 9 6 % ,以苯乙胺为吸附剂组内变异系数为 31 9% ;以NaOH为吸附剂 72h后测量其放射活性仍稳定不变 ,以苯乙胺为吸附剂者 1h后放射性活性即下降 47% ,6h后已降低至本底水平 ;14 CO2 重吸收实验亦证明以苯乙胺为吸附剂吸附的14 CO2 6h内已有 80 %以上重新被NaOH吸附 ;以NaOH作为吸附剂测定GAD的活性 ,在 0 39～ 17 8mg脑组织样品范围内GAD量与14 CO2 生成量之间有线性关系 .NaOH代替苯乙胺作为14 CO2 的吸附剂测定GAD的活性其灵敏度提高 1 6 6倍 .用此方法测定组织和细胞内GAD活性证明其具有良好的重复性和稳定性 ,值得推广应用 .

关键词：谷氨酸脱羧酶放射测定法苯乙胺 NAOH 改良

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神经胶质细胞转分化为神经元的研究进展

生物化学与生物物理进展 2022年第11期49卷 2087-2098页

作者：赵晓初罗兆莉杨菲李纤首都医科大学基础医学院北京100069 首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学学系北京100069 首都医科大学基础医学院神经生物学学系北京100069

细胞转分化是通过基因重编程,诱导某种细胞直接转变为另一种细胞,而不经过其他中间状态的过程。神经元丢失是神经系统疾病中常见的病理过程,神经元丢失通常不可逆转,且造成运动、感觉、精神症状。而由于人中枢神经系统神经元再生能力十... 详细信息

细胞转分化是通过基因重编程,诱导某种细胞直接转变为另一种细胞,而不经过其他中间状态的过程。神经元丢失是神经系统疾病中常见的病理过程,神经元丢失通常不可逆转,且造成运动、感觉、精神症状。而由于人中枢神经系统神经元再生能力十分有限,仅有部分区域在神经损伤的刺激下能够新生少量神经元。在这样的背景下,将神经胶质细胞(星形胶质细胞、小胶质细胞和少突胶质前体细胞)在神经元丢失处原位转分化为功能性神经元并整合进神经网络的治疗性策略,受到了广泛关注。近年来,学者通过在神经胶质细胞中将神经元命运决定的重要转录因子过表达或敲减等手段,成功实现其向神经元的转分化,取得多项重大进展,但由于目前研究手段的局限性、判断标准的分歧性、结果和结论间较难自洽等问题,部分研究成果的结论仍存在很大的争议。本文系统地回顾了神经胶质细胞转分化为神经元的发现与发展历程,总结了神经胶质细胞转分化为神经元的重要发现,并进行讨论与展望。

关键词：神经胶质细胞神经元转分化神经再生神经修复

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

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食品科学 2023年第3期44卷 155-161页

作者：肖怡左婕邓艳张礼林王筑婷莫晓川许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测A... 详细信息

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量变化;单核细胞黏附实验检测HUVECs的黏附性。结果:AFYRW明显提高了细胞的生存活力,降低VCAM-1、ICAM-1、IL-6、TNF-α、iNOS蛋白的相对表达量,减少了NO含量和单核细胞对内皮细胞的黏附,抑制NF-κB的活性。结论:AFYRW对LPS诱导的HUVECs炎症具有改善作用,其机制可能与抑制NF-κB的活性有关。

关键词：炎症生物活性肽苦荞脂多糖人脐静脉内皮细胞

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抗生物素蛋白结合蛋白的发现及分离纯化

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1995年第4期27卷 437-442页

作者：彭民唐观甜顾天爵上海医科大学基础医学院生物化学教研室

本文报道了在日本血吸虫感染的兔血清及日本血吸虫虫卵中，存在一种能与抗生物素蛋白（又称亲和素）专一性结合的蛋白质，称为抗生物素蛋白结合蛋白。该蛋白质与亲和素的结合与生物素及亲和素的糖链部分无关。并能在高ｐＨ、高浓度盐及... 详细信息

本文报道了在日本血吸虫感染的兔血清及日本血吸虫虫卵中，存在一种能与抗生物素蛋白（又称亲和素）专一性结合的蛋白质，称为抗生物素蛋白结合蛋白。该蛋白质与亲和素的结合与生物素及亲和素的糖链部分无关。并能在高ｐＨ、高浓度盐及去污剂等条件下与亲和素结合。利用ＤＥＡ－５２离子交换柱及偶联有亲和素的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱，从日本血吸虫感染的兔血清中，分离纯化了该蛋白质。提纯的亲和素结合蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一条蛋白质带。在ＨＰＬＣ上呈单一的蛋白质峰。

关键词：抗生物素蛋白(亲和素) 抗生物素蛋白结合蛋白

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共价连接的多肽酶联免疫测定法的研究

生物化学与生物物理进展 1999年第6期26卷 609-610,622页

作者：何涛陈曼玲华西医科大学基础医学院生物化学教研室成都610041 华西医科大学基础医学院成都610041

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８），以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），通过不同的洗涤过程对ＣＣＫ８与酶标板相互作用的性质进行研究．结果表明，该包被方... 详细信息

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８），以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），通过不同的洗涤过程对ＣＣＫ８与酶标板相互作用的性质进行研究．结果表明，该包被方法可使ＣＣＫ８通过共价交联的方式稳定地结合于固相载体上，该方法适用于不同来源的酶标板，处理后的酶标板性质稳定，可储存使用，测定的批内及批间变异系数分别为４－７５％和７－８０％，方法稳定可靠，重复性好，便于推广应用．

关键词：多肽共价连接酶联免疫测定法胆囊收缩素

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鼠肝癌淋巴道转移细胞模型的蛋白质组学研究

高等学校化学学报 2009年第3期30卷 517-524页

作者：孙明忠刘淑清唐建武大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室病理学教研室大连116044

对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细... 详细信息

对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P的差异表达蛋白.结果显示,有116个蛋白质点表达水平存在明显差异(p<0.05),在Hca-F中表达上调蛋白质点62个,下调蛋白质点54个.对所有116个蛋白质点进行了电喷雾串联质谱鉴定,共鉴定出109种单一(Unique)蛋白.其中部分蛋白已被报道与不同类型肿瘤的发生、浸润和转移相关,多数蛋白质被首次报道与肝癌的淋巴道转移过程直接相关.

关键词：荧光差异双向凝胶电泳高压液相色谱-电喷雾质谱联用肝癌淋巴结转移

两种分化诱导剂对人肝癌细胞株丝氨酸蛋白激酶的影响

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上海医科大学学报 1994年第3期21卷 170-175页

作者：柴希运陈惠黎上海医科大学基础医学院生物化学教研室

１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）或０．５ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）在体外都可使ＳＭＨＣ－７７２１人肝癌细胞株生长抑制，使增殖指标γ－谷氨酰转肽酶活力下降；而分化指标碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活力上升，故这... 详细信息

１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）或０．５ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）在体外都可使ＳＭＨＣ－７７２１人肝癌细胞株生长抑制，使增殖指标γ－谷氨酰转肽酶活力下降；而分化指标碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活力上升，故这两类化合物都是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂。ＲＡ处理１～３ｄ可引起胞液中蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）上升，而膜性ＰＫＡ下降；但５ｄ后相反，胞液ＰＫＡ明显下降，而膜性ＰＫＡ显著上升，可能与ＰＫＡ在细胞内转位有关。ＲＡ处理１～５ｄ尚可使胞液和膜性蛋白激酶Ｃ活力下降，两亚细胞组分的下降程度接近，提示未发生ＰＫＣ的转位作用。但ｂｄ－ｃＡＭＰ处理１～５ｄ，胞液或膜性的ＰＫＣ均未见明显变化，提示ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ使细胞分化的机制不同，前者可能与ＰＫＣ有关。

关键词：肝癌细胞株分化诱导蛋白激酶

基于分子信标策略的CRISPR/Cas12a荧光传感器用于循环肿瘤DNA的放大检测

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分析化学 2023年第2期51卷 184-193页

作者：张函笑代晓春周亚楠吕旭珍弓韬赵旭华于保锋山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

构建了一种以分子信标（Molecular beacon, MB）为信号探针的CRISPR/Cas12a生物传感器，用于循环肿瘤DNA(Circular tumor DNA, ctDNA)的快速放大检测。MB具有良好的稳定性，其颈部末端分别标记有荧光素（FAM）和四甲基罗丹明（TAMRA）... 详细信息

构建了一种以分子信标（Molecular beacon, MB）为信号探针的CRISPR/Cas12a生物传感器，用于循环肿瘤DNA(Circular tumor DNA, ctDNA)的快速放大检测。MB具有良好的稳定性，其颈部末端分别标记有荧光素（FAM）和四甲基罗丹明（TAMRA）两种荧光基团。ctDNA不存在时，CRISPR/Cas12a体系无活性，无法切割MB，因此MB两端的荧光基团由于形成发夹结构的颈部相互靠近而发生荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET），显示出TAMRA的荧光。当ctDNA存在时，ctDNA特异性识别Cas12a/crRNA二元复合物并激活Cas12a的反式切割活性。由于单链DNA是Cas12a最敏感的底物，因此MB的环部单链首先被切割，继而引起颈部双链的解离而导致两种荧光团彼此远离，无法发生FRET，最终显示出FAM的荧光信号。对MB环部的碱基数目、MB浓度以及crRNA与Cas12a的浓度比例等实验条件进行了优化。在最优条件下，1.7～500 pmol/L范围内，ctDNA浓度与传感器在518 nm处的荧光强度呈线性关系，检出限为0.6 pmol/L(3σ)。将此传感器用于血清样品中ctDNA的检测，回收率在93%～110%之间。

关键词： CRISPR 生物传感器荧光共振能量转移循环肿瘤DNA