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miR-133a-3p负调控NG2参与肌成纤维细胞活化的机制研究

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中国细胞生物学学报 2022年第8期44卷 1570-1578页

作者：张航岳闻慧杨乐李丽英首都医科大学基础医学院细胞生物学系北京100069

该文旨在探讨在肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFs)活化的过程中,微小RNA(microRNA,miRNA)对神经胶质抗原2(neuron-glial antigen 2,NG2;基因名:Cspg4)表达的调控及其分子机制。小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)经miRNA mimics转染和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导后,采用qRT-PCR方法检测Cspg4以及MFs活化标志物的表达;通过双荧光素酶报告基因实验检测Cspg4与miRNA的结合情况。结果显示,MFs活化后,Cspg4的表达以时间和剂量依赖性方式上调,且与MFs的活化标志物呈正相关。敲减Cspg4后,MFs的活化标志物表达下调。在肝损伤模型中,miR-133a-3p表达下调,且与Cspg4呈显著负相关。miR-133a-3p通过与Cspg43ʹ非翻译区(3ʹuntranslated region,3ʹUTR)的特定位点结合,对Cspg4进行转录后调控。miR133a-3p可以抑制TGFβ1诱导的Cspg4和MFs活化标志物的水平升高。总之,miR-133a-3p通过负调控NG2的表达参与了MFs的活化。

关键词：神经胶质抗原2 骨髓间充质干细胞肌成纤维细胞转化生长因子β1 miR-133a-3p

环氧化物水解酶2在肝细胞癌中的表达水平与功能作用

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第4期38卷 505-514页

作者：张文桃胡艳芬吴昊刘铭李莉杜根来朱剑军山西医科大学基础医学院医学细胞生物与遗传学教研室太原030001

本研究通过公共数据和实验数据,全面分析环氧化物水解酶2(epoxide hydrolase 2,EPHX2)在肝细胞癌中的表达情况、功能作用以及预后意义。利用GEO和MitoCarta数据集,筛选肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因;利用TCGA数据库分析EPHX2及... 详细信息

本研究通过公共数据和实验数据,全面分析环氧化物水解酶2(epoxide hydrolase 2,EPHX2)在肝细胞癌中的表达情况、功能作用以及预后意义。利用GEO和MitoCarta数据集,筛选肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因;利用TCGA数据库分析EPHX2及其相关基因在肝细胞癌中的表达水平;运行R包绘制Kaplan-Meier生存曲线和功能富集分析;基于STRING和GSEA构建蛋白质互作网络和基因集富集分析;荧光定量PCR和GEO数据集验证EPHX2在肝细胞癌中的表达水平。本研究共筛选得到15个在肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因。EPHX2在肝细胞癌组织中的表达水平显著降低(P<0.01)。EPHX2表达水平与肝癌患者性别、分期和级别有关,而与年龄、T分期等因素无关。与EPHX2低表达组肝癌患者相比,EPHX2高表达组肝癌患者预后较好。功能富集结果显示,EPHX2与补体途径、脂肪酸降解等信号通路有关。蛋白质互作网络结果显示,EPHX2与HAO1、AGXT、ACOX1、GSTκ1、SCP-2、CAT、CYP2C8,CYP2C9,CYP2B6,和CYP2J2等密切相关。GSEA结果显示,EPHX2低表达组与肝癌细胞增殖、肝癌复发等基因集正相关。荧光定量PCR和GEO数据集验证结果显示,EPHX2在肝细胞癌组织和肝癌细胞株中呈显著低表达。EPHX2在肝细胞癌中呈显著低表达,提示其可能在肝细胞癌发生发展过程中发挥抑癌基因作用,但具体作用机制还需进一步验证。

关键词：肝细胞癌环氧化物水解酶2 公共数据库

雌二醇通过ERβ调控ERK磷酸化影响细胞增殖和凋亡

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南方医科大学学报 2021年第3期41卷 336-343页

作者：张梦颖杨玉有刘敏梁利罗瑞尹丹旸郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016

目的探究雌二醇(E2)结合其重组人雌激素受体β(ESR2)对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法PCR扩增ESR2序列并构建腺病毒重组质粒pAd-ESR2,在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-siRNA处理人正常软骨细胞C28I2,分别设置... 详细信息

目的探究雌二醇(E2)结合其重组人雌激素受体β(ESR2)对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法PCR扩增ESR2序列并构建腺病毒重组质粒pAd-ESR2,在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-siRNA处理人正常软骨细胞C28I2,分别设置对照组(C28I2+DMSO)、E2组(C28I2+E2)、Ad-ESR2组(C28I2+DMSO+Ad-ESR2)、E2+Ad-GFP组(C28I2+E2+Ad-GFP)、E2+Ad-ESR2组(C28I2+E2+Ad-ESR2)、E2+sicontrol组(C28I2转染sicontrol+E2)、E2+ESR2-si1组(C28I2转染ESR2-si1+E2)、E2+ESR2-si3组(C28I2转染ESR2-si3+E2)。免疫印迹测定ER Stress和细胞凋亡相关蛋白表达,qRT-PCR检测增殖相关标志基因的表达,借助EdU试剂盒和流式细胞术测定细胞增殖和凋亡情况。使用ERK通路抑制剂U0126分别设定E2组、E2+U0126组(C28I2+E2+U0126)、E2+Ad-ESR2组、E2+Ad-ESR2+U0126组(C28I2+E2+Ad-ESR2+U0126)。通过免疫印迹实验探究C28I2细胞中E2通过ERβ调控ERK信号通路影响ER stress和凋亡。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR2和靶向ESR2的siRNA;过表达Ad-ESR2能够促进E2处理后IRE1α[1.20±0.06 vs 0.95±0.05,P<0.05]、PERK[1.29±0.04 vs 1.03±0.02,P<0.05]和XBP1s[1.17±0.03 vs 0.82±0.02,P<0.05]的表达,促进凋亡Cleaved Caspase12(P<0.05)、抑制增殖相关标志基因PCNA(P<0.05)、CyclinB1(P<0.05)、CyclinD1(P<0.05)的表达,且ERK磷酸化激活降低(P<0.05);转染ESR2-siRNA后,细胞的内质网应激相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达降低,与细胞增殖相关的基因被上调,且细胞内pERK/ERK比值相对增加。经特异性ERK通路抑制剂U0126处理后,雌二醇结合ERβ促进的内质网应激蛋白及细胞凋亡蛋白的表达被拮抗。结论雌二醇靶向ERβ通过激活ERK通路磷酸化调控内质网应激及凋亡,进而抑制软骨细胞增殖。

关键词：雌二醇重组人雌激素受体β 内质网应激凋亡增殖 ERK信号通路

糖化血红蛋白与颈动脉内膜-中膜厚度的相关性研究

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天津医药 2022年第10期50卷 1061-1065页

作者：李雪敏李卫东时文涛魏凤江天津医科大学基础医学院医学遗传学系 300070

目的研究普通体检人群糖化血红蛋白(HbA1c)水平与颈动脉内膜-中膜厚度(CIMT)的相关性。方法选取9881例普通体检人群为研究对象,其中男7091例,女2790例,采用血管彩色多普勒超声测量CIMT。根据是否有CIMT增厚,分为增厚组(4513例)和正常组(... 详细信息

目的研究普通体检人群糖化血红蛋白(HbA1c)水平与颈动脉内膜-中膜厚度(CIMT)的相关性。方法选取9881例普通体检人群为研究对象,其中男7091例,女2790例,采用血管彩色多普勒超声测量CIMT。根据是否有CIMT增厚,分为增厚组(4513例)和正常组(5368例)。收集2组的一般资料和实验室资料并进行比较。采用Logistic回归分析总人群及不同性别中CIMT增厚的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价HbA1c水平对CIMT增厚的预测效果。结果与正常组相比,增厚组的男性比例、年龄、体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、直接胆红素(DBIL)、球蛋白(GLB)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血糖(GLU)、HbA1c、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均升高,而估算肾小球滤过率(eGFR)、丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,在总人群中高龄,男性,ALB、GLU、LDL-C升高,HbA1c≥5.7%是CIMT增厚的危险因素,GLB、HDL-C升高是CIMT增厚的保护因素。男性人群中高龄,ALB、LDL-C升高,HbA1c≥5.7%是CIMT增厚的危险因素,ALT、GLB、HDL-C升高是CIMT增厚的保护因素;女性人群中SBP、TC升高,HbA1c≥5.6%是CIMT增厚的危险因素,BMI、eGFR、ALB、Scr、HDL-C升高是CIMT增厚的保护因素。ROC曲线结果分析显示,HbA1c在总人群、男性和女性中预测CIMT增厚的最佳截断值均为5.65%,女性中HbA1c对CIMT增厚的预测效能较优。结论在普通人群中HbA1c水平升高为CIMT增厚的危险因素,且在女性人群中,HbA1c对CIMT增厚的影响更大。

关键词：血红蛋白A,糖基化颈动脉回归分析颈动脉内膜-中膜厚度普通人群

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《人体寄生虫学》课程思政的实践与思考

中国血吸虫病防治杂志 2019年第4期31卷 431-433页

作者：陈琳徐志鹏季旻珺吴观陵南京医科大学基础医学院病原生物学系

为实现"思政课程"和"课程思政"的有机结合,对医学基础课程《人体寄生虫学》授课进行了实践和思考。在提高教师队伍修养、坚持立德树人为根本、明确专业课程育人导向的基础上,探索课程思政在医学教育中的实施路径。将课程中所蕴含的思政... 详细信息

为实现"思政课程"和"课程思政"的有机结合,对医学基础课程《人体寄生虫学》授课进行了实践和思考。在提高教师队伍修养、坚持立德树人为根本、明确专业课程育人导向的基础上,探索课程思政在医学教育中的实施路径。将课程中所蕴含的思政要素贯穿于整个专业课教学过程,建立融入课程思政的新教学模式,专业院所与高校加强融合助推课程思政,努力形成专业课教学与思政同向同行的育人格局,将《人体寄生虫学》打造为一门课程思政的"金课"。

关键词：人体寄生虫学医学教育课程思政

二甲双胍对Ⅰ型成骨不全小鼠间充质干细胞成骨分化的影响及疗效探讨

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天津医药 2023年第8期51卷 830-834页

作者：王娟赵玉霞茹雅维汪子涵付婷李光天津医科大学基础医学院遗传学系 300070

目的研究二甲双胍对Ⅰ型成骨不全小鼠(oim)脂肪间充质干细胞(oimADSCs)向成骨细胞分化的影响并初步探讨二甲双胍在oim中的治疗效果。方法从oim中分离培养oimADSCs,通过观察细胞形态,碱性磷酸酶(ALP)染色和油红O染色对其分化能力进行鉴定... 详细信息

目的研究二甲双胍对Ⅰ型成骨不全小鼠(oim)脂肪间充质干细胞(oimADSCs)向成骨细胞分化的影响并初步探讨二甲双胍在oim中的治疗效果。方法从oim中分离培养oimADSCs,通过观察细胞形态,碱性磷酸酶(ALP)染色和油红O染色对其分化能力进行鉴定;将oimADSCs分组进行诱导培养,通过观察ALP染色、检测ALP活性和实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测几种成骨分化相关分子的表达情况,分析二甲双胍对oimADSCs向成骨细胞分化的影响;利用微计算机断层扫描技术(Micro-CT)分析股骨的骨骼微观结构,观察二甲双胍在oim模型小鼠中的治疗效果。结果在二甲双胍处理oimADSCs后,ALP染色显著加深、ALP活性显著提高,骨钙素(Bglap)、Ⅰ型胶原(Col1a1)、Runt相关转录因子2(Runx2)以及骨形成蛋白2(BMP2)的mRNA表达水平升高;Micro-CT分析发现oim模型小鼠经过二甲双胍治疗后,股骨骨小梁的骨体积/总体积增加,股骨骨小梁数目增多、厚度增加。结论二甲双胍能够促进oimADSCs向成骨细胞分化,改善oim的骨骼生长情况。

关键词：成骨不全间质干细胞二甲双胍 Ⅰ型成骨不全脂肪间充质干细胞成骨分化

雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

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南方医科大学学报 2019年第2期39卷 134-143页

作者：刘敏谢巍伟郑维尹丹旸罗瑞郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室//发育生物学与模式动物平台重庆400016

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处... 详细信息

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因(PCNA)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达ESR1能够促进E2处理后LC3和ATG7的表达,促进LC3和LAMP1在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleavedcaspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论 E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖,其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。

关键词： ESR1 自噬凋亡增殖 ERK信号通路雌二醇

弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2022年第2期34卷 149-157,171页

作者：张戎邵天业邵晨璐邱竞帆王勇南京医科大学基础医学院基础医学实验教学中心江苏南京211166 南京医科大学基础医学院病原生物学系、江苏省现代病原生物学重点实验室江苏南京211166

目的观察弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞(uterine natural killer cells,uNK cells)比例、数量、分化和功能的影响,探讨uNK细胞在弓形虫感染致早孕流产中的作用。方法妊娠第6.5天给予孕鼠腹腔注射弓形虫速殖子,建立孕早期弓形虫... 详细信息

目的观察弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞(uterine natural killer cells,uNK cells)比例、数量、分化和功能的影响,探讨uNK细胞在弓形虫感染致早孕流产中的作用。方法妊娠第6.5天给予孕鼠腹腔注射弓形虫速殖子,建立孕早期弓形虫感染致流产小鼠模型,妊娠第9.5天分离小鼠子宫淋巴细胞。取人正常妊娠孕早期流产新鲜蜕膜组织,分离人子宫淋巴细胞,与弓形虫RH株速殖子体外共培养48 h(弓形虫与子宫淋巴细胞比例分别为0.5∶1、1∶1、2∶1)。采用流式细胞术检测小鼠u NK细胞表型(CD122、NK1.1、DX5)、人u NK细胞表型(CD3、CD56、CD11b、CD27)及胞内细胞因子γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平。磁珠分选小鼠和人uNK细胞,以小鼠YAC-1或人K562细胞作为靶细胞、以小鼠或人uNK细胞作为效应细胞,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测效应细胞/靶细胞比例分别为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时uNK细胞的杀伤功能。结果妊娠第9.5天,弓形虫感染组小鼠流产率较对照组显著上升(83.02%vs.3.51%;χ^(2)=71.359,P0.05]。弓形虫感染组小鼠uNK细胞表现出较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时,感染组uNK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性分别为2.30%、4.32%、8.12%和12.65%,对照组分别为1.21%、1.63%、2.51%和3.22%。将人子宫淋巴细胞与弓形虫RH株速殖子共培养48 h后,弓形虫感染组人uNK细胞在子宫淋巴细胞中所占比例较对照组显著降低[弓形虫2∶1组vs.对照组:(6.61±1.75)%vs.(17.48±4.81)%;F=7.307,P0.05]、CD56^(dim)CD16^(+)杀伤型NK细胞亚群比例增加[弓形虫2∶1组vs.对照组:(11.15±2.15)%vs.(7.09±2.24)%,F=2.992,P>0.05],两者比值显著降低[弓形虫2∶1组vs.对照组:(2.37±0.92)vs.(5.58±2.39);H=8.228,P0.05]、TNF-α表达水平无显著改变[弓形虫2∶1组vs.对照组:(54.76±10.02)%vs.(50.33±3.67)%;F=0.415,P>0.05]。弓形虫感染组人uNK细胞具有较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时,感染组uNK细胞对K562细胞的杀伤活性分别为11.90%、28.11%、49.91%和73.35%,对照组分别为11.21%、21.63%、33.51%和48.22%。结论弓形虫感染对小鼠和人u NK细胞分化和分泌功能产生了不同影响,但均可引起小鼠和人uNK细胞绝对数量减少、杀伤功能增强。

关键词：刚地弓形虫子宫自然杀伤细胞母胎界面流产妊娠

CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用

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解放军医学杂志 2024年第4期49卷 387-395页

作者：张昕彤吴昊胡艳芬张文桃畅靖嘉朱剑军李莉刘铭山西医科大学基础医学院医学细胞生物与遗传学教研室山西太原030001

目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达... 详细信息

目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。

关键词：肝细胞癌细胞色素P450家族27亚家族A成员1 恶性生长