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不同离子浓度和温度对北方马口鱼精子活力的影响

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大连海洋大学学报 2024年第3期39卷 445-453页

作者：莫燕芳骆小年段友健李姣潘敏大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023 辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室辽宁大连116023

为了解中国北方马口鱼(Opsariichthys bidens)精子的生理特征并提高其人工繁殖受精率,以精子快速运动时间(fast movement time,FT)、寿命(life span,LT)和激活率(activation rate,AR)作为精子活力的评价指标,通过显微观察法,检测了用不... 详细信息

为了解中国北方马口鱼(Opsariichthys bidens)精子的生理特征并提高其人工繁殖受精率,以精子快速运动时间(fast movement time,FT)、寿命(life span,LT)和激活率(activation rate,AR)作为精子活力的评价指标,通过显微观察法,检测了用不同浓度的Na^(+)、K^(+)、Ca^(2+)、葡萄糖、Tris、甘油精子激活液及水温等处理对马口鱼精子活力的影响。结果表明:单因子精子激活液中,马口鱼在浓度为34 mmol/L Na^(+)、40 mmol/L K^(+)、17 mmol/L葡萄糖、温度为20℃条件下,精子快速运动时间、寿命均最高;当Tris缓冲剂浓度为33 mmol/L时,精子快速运动时间达到最大值,当Tris缓冲剂浓度为0 mmol/L时,其精子寿命最长,而在Ca^(2+)和甘油溶液中,精子快速运动时间和寿命均小于对照组(0 mmol/L),其对马口鱼精子活力具有抑制作用;在复合因子精子激活液中,马口鱼精子在激活液B(34 mmol/L Na^(+)+40 mmol/L K^(+),二者体积比为1∶1)中的快速运动时间、寿命均最高,精子活力最强。研究表明,适宜浓度的Na^(+)、K^(+)、葡萄糖和Tris因子对马口鱼精子活力有增强效果,马口鱼精子存活的适宜温度为17~25℃;在进行北方马口鱼人工授精时,可使用激活液B(34 mmol/L Na^(+)+40 mmol/L K^(+),二者体积比为1∶1)来提高其精子活力。

关键词：马口鱼精子活力离子非离子温度

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盐度胁迫对大黄鱼肝脏氧化损伤的作用机制

海洋渔业 2024年第3期46卷 334-342页

作者：李莉珍张惠曾霖黄伟卿宋炜中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 浙江海洋大学国家海洋设施养殖工程技术研究中心浙江舟山316000 蚌埠学院食品与生物工程学院安徽蚌埠233030 宁德师范学院海洋学院福建宁德352100

为探讨盐度胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)氧化损伤的作用机制,实验设置3个盐度梯度(12、25、40,分别记为低盐组L组、对照组C组、高盐组H组),对大黄鱼进行盐度胁迫实验,在实验的第1天、第3天和第7天提取肝脏样本,结果显示,低盐组和... 详细信息

为探讨盐度胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)氧化损伤的作用机制,实验设置3个盐度梯度(12、25、40,分别记为低盐组L组、对照组C组、高盐组H组),对大黄鱼进行盐度胁迫实验,在实验的第1天、第3天和第7天提取肝脏样本,结果显示,低盐组和高盐组相比对照组,大黄鱼丙二醛(MDA)与脂质过氧化物(LPO)含量在第1、3和7天时均显著增加(P0.05);溶菌酶(LZM)活力变化与SOD类似;碱性磷酸酶(AKP)活力变化趋势较复杂。铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、CAT、c型溶菌酶(c-type LZM)、g型溶菌酶(g-type LZM)和AKP基因表达水平与对应的酶活力呈正相关(P<0.05);NF-E2相关因子2(Nrf2)和核转录因子-κB(NF-κB)基因表达水平分别与抗氧化酶和非特异性免疫酶基因表达水平呈正相关(P<0.05)。综上所述,大黄鱼可以通过提高抗氧化能力和非特异性免疫能力来抵御盐度胁迫对机体的氧化损伤。

关键词：大黄鱼盐度胁迫抗氧化非特异性免疫

内源营养负荷对4种常见沉水植物生长、形态和资源分配策略的影响

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水生生物学报 2024年第3期48卷 426-435页

作者：庞伟程付贵萍沈哲文孙尚省马巾华兆晖丑庆川深圳大学生命与海洋科学学院海洋生物资源与生态环境重点实验室深圳518055 上海海洋大学环境DNA技术与水生态健康评估工程中心上海201306 中国科学院水生生物研究所淡水生态和生物技术国家重点实验室武汉430072

为探明内源营养负荷对沉水植物生长、形态和资源分配的影响,研究通过控制沉积物的营养浓度,探究4种常见沉水植物苦草(Vallisneria natans)、黑藻(Hydrilla verticillata)、穗状狐尾藻(Myriophyllum spicatum)和竹叶眼子菜(Potamogeton w... 详细信息

为探明内源营养负荷对沉水植物生长、形态和资源分配的影响,研究通过控制沉积物的营养浓度,探究4种常见沉水植物苦草(Vallisneria natans)、黑藻(Hydrilla verticillata)、穗状狐尾藻(Myriophyllum spicatum)和竹叶眼子菜(Potamogeton wrightii)的多种功能性状对沉积物营养浓度的响应。结果表明:(1)内源营养负荷的增加促进了4种沉水植物的生长,其中苦草的种群数量和总生物量均高于其他沉水植物。然而,当沉积物营养含量过高时(C:73.33 mg/g;N:4.94 mg/g;P:0.68 mg/g)4种沉水植物的种群数量均有所下降。(2)沉水植物形态特征对沉积物营养含量变化的响应趋势并不一致,所有物种株高均逐渐升高,根长则无显著变化规律;苦草和竹叶眼子菜的单株鲜重持续升高,黑藻和穗状狐尾藻的单株鲜重先升高后降低。(3)内源营养物质含量的变化使4种植物的资源分配发生了显著变化,随着沉积物营养含量上升4种沉水植物的地上生物量占比显著升高(根冠比显著下降),光合色素含量显著升高,但过高的营养含量对光合色素合成产生负效应。总之,本研究结果表明苦草对沉积物营养负荷变化的适应能力最强,因此在富营养化水体的生态修复中选择苦草作为先锋种能有效提高沉水植物的修复效率。

关键词：沉水植物内源营养负荷形态特征资源分配

双荧光标记的人高骨转移肺腺癌细胞株的建立及其转录组学特征分析

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中国肺癌杂志 2024年第4期27卷 257-265页

作者：陆悦仇荣邓妍刘星羽杜玉珍上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海交通大学医学院附属第六人民医院医学检验科上海201306

背景与目的骨是肺腺癌常见的转移部位,但肺腺癌骨转移的机制尚不明确。目前肺腺癌骨转移机制研究缺乏易于示踪且稳定高骨转移的肺腺癌细胞模型,因此,本研究旨在建立绿色荧光蛋白(green f luorescent protein,GFP)和萤火虫荧光素酶(firef... 详细信息

背景与目的骨是肺腺癌常见的转移部位,但肺腺癌骨转移的机制尚不明确。目前肺腺癌骨转移机制研究缺乏易于示踪且稳定高骨转移的肺腺癌细胞模型,因此,本研究旨在建立绿色荧光蛋白(green f luorescent protein,GFP)和萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,LUC)双标记的人高骨转移肺腺癌细胞株,为肺腺癌骨转移的研究提供新的实验工具。方法人肺腺癌细胞系A549-GFP-LUC经左心室注射至裸鼠体内构建骨转移模型,经连续3次体内驯化,获取人高骨转移肺腺癌细胞株A549-GFP-LUC-BM3;CCK-8(cell counting kit-8)、克隆形成实验比较A549-GFP-LUC-BM3细胞株和亲本细胞的体外增殖能力,划痕实验、Transwell实验以及Western blot比较迁移和侵袭能力;并进一步将A549-GFP-LUC-BM3细胞和亲本细胞行测序转录组学分析。结果成功建立人高骨转移肺腺癌细胞A549-GFP-LUC-BM3,相较于亲本细胞,该细胞骨转移发生率显著提高,且体外增殖、迁移和侵袭能力显著增强。转录组学测序结果显示,相较于亲本细胞,A549-GFP-LUC-BM3细胞中共筛选到差异基因2954个,其中1021个基因上调,1933个基因下调;基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集显示差异基因主要定位于细胞外周、质膜以及细胞外基质等细胞组分,分子功能主要富集在信号受体结合、钙离子结合和细胞外基质结构成分等,生物过程富集在细胞黏附和生物黏附等;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析显示差异基因在细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)对外源性物质的代谢、视黄醇代谢、细胞黏附分子、CYP对药物代谢、类固醇激素的生物合成以及核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路上显著富集。结论成功建立GFP和LUC双标记的人高骨转移肺腺癌细胞株,该细胞株在生物学行为水平和转录组测序水平均提示具有高骨转移潜能。

关键词：肺肿瘤骨转移动物模型细胞株转录组学分析

不同培养条件对蒙古裸腹溞种群密度及水质的影响

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海洋科学前沿 2024年第2期11卷 21-33页

作者：常尚龙姜玉声屈佳乐吴元浩杜世瀛王成杰赵思博大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连大连市虾蟹繁育与健康养殖重点实验室辽宁大连大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连

蒙古裸腹溞(Moina mongolica)为水产养殖重要的生物饵料,为了探究高效、低成本的培养方法,本试验在室内水温21~26℃,盐度为15,裸腹溞初始接种密度为40 ind./L,进行了2个验,1) 投喂微拟球藻(Nannochloropsis salina,A1)、对虾尾水沉积物(... 详细信息

蒙古裸腹溞(Moina mongolica)为水产养殖重要的生物饵料,为了探究高效、低成本的培养方法,本试验在室内水温21~26℃,盐度为15,裸腹溞初始接种密度为40 ind./L,进行了2个验,1) 投喂微拟球藻(Nannochloropsis salina,A1)、对虾尾水沉积物(B1)、微拟球藻对虾尾水沉积物(C1)、微拟球藻+ 有机酸(D1)、对虾尾水沉积物有机酸(E1);2) 以仅投喂微拟球藻为对照组(A2),向养殖水体中添加1000 mg/L (5 mL) (B2)、2000 mg/L(10 mL) (C2)、3000 mg/L (15 mL) (D2)浓度的有机酸。连续培养22 d,结果表明:1) A1组蒙古裸腹溞最高密度、日均增长量、日均增长率和最终增长倍数均最高,分别为4203 ind./L、189.2 ind./(L·d)、21.2%/d和105倍。第22 d,该组水体中氨氮(TAN)和亚硝酸氮(NO2−-N)浓度最高,分别为2. 45 mg/L、0.53 mg/L,显著高于其他各组(P P 2−-N浓度最低,分别为2.08 mg/L、0.46 mg/L,显著低于其他各组(P P < 0.05)。本试验条件下,投喂微拟球藻有利于蒙古裸腹溞种群增长,添加有机酸能够进一步改善水质,增强培养效果。

关键词：蒙古裸腹溞投喂有机酸种群密度水质

我国沿海5个地区冬季养殖仿刺参体表微生物多样性比较分析

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水产科技情报 2024年第3期51卷 159-168页

作者：潘美利党慧凤黄宇希王晓航黎睿君丁君大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023

为探究仿刺参(Apostichopus japonicus)体表微生物在仿刺参疾病发生与环境交互中的作用,采用Illumina HiSeq高通量测序技术对来自大连、营口、唐山、威海、宁德等5个沿海地区的养殖仿刺参体表微生物进行了多样性分析。结果显示,地域差... 详细信息

为探究仿刺参(Apostichopus japonicus)体表微生物在仿刺参疾病发生与环境交互中的作用,采用Illumina HiSeq高通量测序技术对来自大连、营口、唐山、威海、宁德等5个沿海地区的养殖仿刺参体表微生物进行了多样性分析。结果显示,地域差异对仿刺参体表微生物组成影响明显,其中福建省宁德市霞浦县(ND)养殖仿刺参的体表微生物组成与其他4个地区差异最明显。在门水平上,各地区的最优势菌门均为变形菌门(Proteobacteria),其中ND组相对丰富度(76.16%)最低;在目和科水平上,ND组的最优势微生物分别属于柄杆菌目(Caulobacterales)和生丝单胞菌科(Hyphomonadaceae),所占比例分别为14.48%、14.34%;在属水平上,ND组仿刺参体表微生物中不动杆菌属(Acinetobacter)、副球菌属(Paracoccus)、毛螺菌属(Lachnospira)等所占的比例与其他各组存在显著差异(P生物多样性在属水平上的相对丰富度最高,该组副球菌属所占比例与其他地区均存在显著差异(P生物多样性与环境适应进化研究以及养殖仿刺参病害防治提供参考。

关键词：仿刺参冬季体表微生物多样性差异

稳定表达T7 RNA聚合酶的草鱼鳍条和草鱼性腺细胞系的建立与鉴定

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微生物学通报 2024年

作者：康漪张奇亚柯飞大连海洋大学水产与生命学院中国科学院水生生物研究所水产品种创制与高效养殖重点实验室

【背景】T7噬菌体来源的T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)因其特异性高和高效启动转录的特点，在生物学研究中得到广泛应用。目前已有多株稳定表达T7 RNAP的细胞系被构建用于进行RNA病毒的反向遗传学研究。草鱼是中国淡水养殖产量最高的鱼类，但... 详细信息

【背景】T7噬菌体来源的T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)因其特异性高和高效启动转录的特点，在生物学研究中得到广泛应用。目前已有多株稳定表达T7 RNAP的细胞系被构建用于进行RNA病毒的反向遗传学研究。草鱼是中国淡水养殖产量最高的鱼类，但其易受草鱼呼肠孤病毒(一种双链RNA病毒)的侵害。该病毒的反向遗传操作系统尚未建立，影响了对其的深入研究。稳定表达T7 RNAP的草鱼细胞系将有助于建立草鱼呼肠孤病毒的反向遗传操作系统。【目的】使用Tol2转座子系统，构建稳定表达T7 RNAP的草鱼鳍条(grass carp fin， GCF)和草鱼性腺(grass carp ovary， GCO)细胞系，并鉴定其活性，以期为创建草鱼呼肠孤病毒的反向遗传操作系统提供细胞工具。【方法】利用PCR从大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)基因组中扩增出T7 RNAP基因，通过同源重组的方法使其插入Tol2转座子载体。同时也构建T7 RNAP的N端或C端连接核定位序列(nuclear localization signal， NLS)的重组Tol2转座质粒。将含有上述基因的重组转座质粒与表达Tol2酶的辅助质粒分别共转染两种草鱼细胞，使用潮霉素B进行筛选。对所筛选出的细胞进行蛋白免疫印迹(Western Blot， WB)检测。进一步使用由T7启动子驱动的EGFP报告质粒进行功能验证，并比较添加核定位信号(NLS)对T7 RNAP表达和功能的影响。【结果】成功构建了携带T7 RNAP基因的3种Tol2转座重组质粒，转染两种细胞筛选后获得了相应的6株细胞系。WB结果显示筛选后的细胞中均有明显的T7 RNAP表达条带，表明T7 RNAP在细胞中成功表达。使用由T7启动子驱动的EGFP质粒对细胞进行转染，观察到EGFP在转染细胞中高效表达，实验结果表明这6株细胞中的T7 RNAP均有转录活性。另外，携带NLS序列的T7 RNAP在GCO细胞中显示出更高的表达及转录活性，尤其是在T7 RNAP C端添加NLS时效果最佳。但在GCF细胞中未观察到明显差异。这一结果表明NLS可以通过促进T7 RNAP向细胞核的转运来提高其在核内的积累和转录效率，但其效果可能因细胞的类型不同而有所区别。【结论】本文通过使用Tol2转座子系统构建了稳定表达T7 RNAP的GCF和GCO细胞系，能驱动T7启动子控制的外源基因的高效转录和表达，添加NLS可进一步增强其表达和转录活性。这些结果为T7 RNAP在草鱼呼肠孤病毒研究中的应用提供了基础。

关键词： T7 RNA聚合酶草鱼细胞系稳定表达转座子核定位信号

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不同衣藻光合作用响应汞胁迫的比较研究

水生生物学报 2024年第6期48卷 1040-1050页

作者：夏亦雪艾晓寒朱飞霞毕永红中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点试验室武汉430072 中国科学院大学北京100049 大连海洋大学水产与生命学院大连116023

为筛选耐受汞胁迫的衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)藻株,研究不同衣藻光合作用过程响应汞胁迫的差异,比较了不同汞浓度下11株衣藻的生长、叶绿素a含量及叶绿素荧光活性。结果表明,随着汞离子浓度升高,叶绿素a含量显著下降且生长受抑制... 详细信息

为筛选耐受汞胁迫的衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)藻株,研究不同衣藻光合作用过程响应汞胁迫的差异,比较了不同汞浓度下11株衣藻的生长、叶绿素a含量及叶绿素荧光活性。结果表明,随着汞离子浓度升高,叶绿素a含量显著下降且生长受抑制,叶绿素荧光活性参数W_(k)、V_(j)和M_(o)快速增加,ψ_(o)和φEo快速下降,表明光合系统Ⅱ(PSⅡ)反应中心的供体侧和受体侧的电子传递受阻,光合活性被抑制。在11株衣藻中,衣藻FACHB-889(EC_(50)为0.762 mg/L)对汞耐受能力最弱,衣藻FACHB-2217对汞耐受能力最强(EC_(50)为2.848 mg/L)。与对照相比,在低浓度汞(1.0 mg/L)胁迫下,衣藻FACHB-889光合活性受抑制,单位面积活性反应中心数量(RC/CS_(o))显著下降(P<0.05),单位活性反应中心吸收的能量(ABS/RC)持续增加,单位反应中心耗散的能量(DIo/RC)和单位反应中心捕获的用于电子传递的能量(ET_(o)/RC)呈下降趋势,表明吸收的能量不能被光合作用有效利用,且无法通过热耗散释放,导致能量的非正常积累,使细胞失活甚至死亡;衣藻FACHB-2217单位活性反应中心吸收的能量(ABS/RC)、用于还原Q_(A)的能量(TR_(o)/RC)及用于电子传递的能量(ET_(o)/RC)均显著升高,细胞通过有活性的单位反应中心光合能力的增强,有效转化吸收的能量,消除部分反应中心失活的负面影响。研究表明,光合活性及其能量分配的差异是衣藻对汞敏感/耐受的重要原因。

关键词：汞光系统Ⅱ 毒性效应衣藻

禾本科植物内生真菌研究 22：Epichlo? festucae E2368基因组中非核糖体肽合成酶编码基因的挖掘与分析

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南京农业大学学报 2024年

作者：纪燕玲韩魁茅冬梅陈永敢王志伟海南热带海洋学院水产与生命学院南京农业大学生命科学学院

[目的]Epichlo?内生真菌能够产生抵御牲畜和害虫啃食的生物碱，其中部分生物碱由非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetase，NRPS）合成。本研究拟分析E. festucae基因组内的NRPS编码基因，并预测其功能。[方法]以E. festuca... 详细信息

[目的]Epichlo?内生真菌能够产生抵御牲畜和害虫啃食的生物碱，其中部分生物碱由非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetase，NRPS）合成。本研究拟分析E. festucae基因组内的NRPS编码基因，并预测其功能。[方法]以E. festucae E2368菌株基因组数据为对象，综合运用HMMER和全局比对等分析方法以及ClustScan、NRPS/PKS analysis和NCBI等数据库进行信息比对。[结果]确认了E2368基因组中含有至少19个候选NRPS基因，其中11个未在Epichlo?内生真菌中报道。序列比对结果表明候选基因均为真菌中已报道的序列，但其中8个基因的功能未知；同时E2368基因组中存在环孢菌素合成酶基因扩增现象。构建候选NRPS基因所有A结构域氨基酸序列发育树，发现不同NRPS基因的A结构域会聚到同一分枝，而相同NRPS基因的A结构域则分散于不同分枝，说明采用简并引物扩增NRPS基因存在一定的局限性。[结论]对E2368基因组中NRPS基因的挖掘，将有助于解析NRPS基因的多样性，促进对新的天然产物的发现和生物合成途径的认识。

关键词： NRPS database 基因挖掘生物碱类似度分析禾本科植物内生真菌