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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2024年第1期45卷 1-6页

作者：刘广阔邹敏吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 青岛易邦生物工程有限公司/科技部动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114 中国动物卫生与流行病学中心/国家动物血清库山东青岛266114

为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 详细信息

为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。

关键词：牛轮状病毒 VP6蛋白原核表达间接酶联免疫吸附试验

PCV2a、PCV2b和PCV2d多重PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 896-904页

作者：谭健梅赵雨欣黄艳玲周小汇陈媛雷磊罗施乐郝裕波杜红梅雷红宇苏建明王乃东湛洋湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室湖南派智生物科技有限公司常德市畜牧水产事务中心

为了建立一种能够快速鉴别PCV2a、PCV2b和PCV2d的方法，本研究针对PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因型分别设计3组特异性引物，通过构建阳性标准质粒，筛选出最适引物组合，建立了一种PCV2分型的多重PCR检测方法，并对该方法进行优化后，... 详细信息

为了建立一种能够快速鉴别PCV2a、PCV2b和PCV2d的方法，本研究针对PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因型分别设计3组特异性引物，通过构建阳性标准质粒，筛选出最适引物组合，建立了一种PCV2分型的多重PCR检测方法，并对该方法进行优化后，开展特异性、灵敏度、重复性试验以及临床样品检测。结果显示，利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法，能特异性扩增出3个目的条带：PCV2a(321bp)、PCV2b(190 bp)和PCV2d(561 bp)，探索出最佳退火温度和循环数分别为60℃和25个，与其他病原（PPV、PRV、PEDV、TGEV、PRRSV、CSFV）无交叉反应；对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数为103copies；同一模板的3次重复性试验结果一致；检测2个猪场流行的PCV2基因型毒株，并通过测序和进化分析进一步验证了该检测方法的准确性。结果表明，本研究建立的多重PCR检测方法有助于开展PCV2a、PCV2b和PCV2d的快速鉴别诊断，为PCV2的防控以及流行病学研究提供了技术支持。

关键词： PCV2a PCV2b PCV2d 共感染多重PCR

非洲猪瘟基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒研究现状及思考

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中国动物检疫 2024年第3期41卷 68-72页

作者：戈胜强沙洲郑辉刘春菊左媛媛胡永新王晓华刘爽魏荣王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室山东青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 山东青岛266032

基因重组在非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组间广泛存在,它是造成ASFV遗传多样性的原因之一。ASFV基因Ⅱ型毒株2018年传入我国,2021年国内又报道发现基因Ⅰ型毒株和基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒。我国分离的ASFV基因Ⅰ型/Ⅱ型重组毒嵌合了两个基因型... 详细信息

基因重组在非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组间广泛存在,它是造成ASFV遗传多样性的原因之一。ASFV基因Ⅱ型毒株2018年传入我国,2021年国内又报道发现基因Ⅰ型毒株和基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒。我国分离的ASFV基因Ⅰ型/Ⅱ型重组毒嵌合了两个基因型序列并部分整合了二者的生物学特性,毒力与基因Ⅱ型强毒株相当,某些致病指标甚至更高;基因Ⅱ型减毒活疫苗株不能对该重组毒株产生有效保护。该重组毒株在国内的流行演变可能会显著影响ASFV的进化方向,并对ASFV疫苗研究带来新的挑战。本文通过对国内ASFV基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒进行综述,就相关研究进展进行总结归纳,以期为我国ASF防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟重组病毒疫苗研发

伪狂犬病病毒gE/gI缺失株CY-6的构建及免疫效力初步研究

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 9-18页

作者：曲信芹魏波徐丽丽刁治君韩成昊蔡青秀丛雁方马爱琴青岛蔚蓝生物股份有限公司青岛266100 青岛动保国家工程技术研究中心有限公司青岛266012 青岛蔚蓝生物制品有限公司青岛266114

构建针对伪狂犬病病毒gE和gI基因缺失的重组转移质粒pBL-gI-gE,将PRV-CY-ΔgI/gE-GFP病毒、pBL-gI-gE转移载体和Lipofectamin 2000转染试剂共转染BHK-21细胞,蚀斑筛选纯化法得到重组病毒PRV-CY-ΔgI/gE,命名为CY-6株。将CY-6株C1代在BHK-21细胞增殖并传至10代,测定生长曲线、病毒含量、基因鉴定、特异性、纯净、毒力和免疫原性。结果CY-6株的生长曲线与亲本CY株无明显变化,C1~C10代毒的病毒含量为10^(8.17)~10^(8.68) TCID50/mL,基因鉴定显示gE基因无366 bp的目的条带,gD基因有1条217 bp的目的条带,gI基因无331 bp的目的条带,特异性检验显示均能被伪狂犬病病毒特异性阳性血清中和;纯净检验该毒种无菌、支原体及外源病毒污染;毒力试验试验猪均5/5健活,免疫原性试验免疫组5/5保护,CY株攻毒对照组5/5发病,其中3/5死亡。以上结果表明伪狂犬病病毒CY-6株符合生产用毒种的初步要求,为研制新型伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗奠定基础。

关键词：伪狂犬病病毒基因缺失免疫效力

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越南非洲猪瘟疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)研究工作分析与思考

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中国动物检疫 2024年第2期41卷 36-41页

作者：戈胜强沙洲左媛媛初薛霏徐天刚张永强李金明王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室山东青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 山东青岛266032 山东农业大学山东泰安271018

非洲猪瘟(Afcrian swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。近日,越南正式将经临床试验验证的非洲猪瘟弱毒疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)在其全国推广使用。本文对越南非洲猪瘟弱... 详细信息

非洲猪瘟(Afcrian swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。近日,越南正式将经临床试验验证的非洲猪瘟弱毒疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)在其全国推广使用。本文对越南非洲猪瘟弱毒疫苗ASFV-G-ΔMGF相关研究数据进行了总结分析,分别从ASFVG-ΔMGF株攻毒保护能力评价、传代细胞培养株临床动物实验、野猪口服接种试验、毒力返强验证等方面,结合国内相关ASFV基因缺失株试验数据进行了分析。总结分析发现:越南上市的ASFV-G-ΔMGF疫苗株,二次免疫接种后攻毒保护效果更好,但在对野猪的口服接种评价中,其口鼻接种效果存在不确定性;随着疫苗株在动物体内的不断传代,其存在毒力返强和毒株变异风险,导致接种猪只临床症状明显;ASFV-G-ΔMGF株虽然有较好的攻毒保护能力和可靠的生产优势,但仍缺乏相关研究数据,特别是在垂直传播、交叉保护、基因突变等方面。后续仍需对ASFV-G-ΔMGF株的临床应用效果进一步评价。

关键词：非洲猪瘟减毒活疫苗越南 ASFV-G-ΔMGF疫苗株

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

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中国家禽 2023年

作者：郭婷婷赵佳马爽陈杨樊鹏程毕涛旭楚电峰郭梦娇吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体（MS）活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果，研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测，其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗（MS-H株... 详细信息

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体（MS）活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果，研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测，其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗（MS-H株），B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示：三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致，HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似，但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性，qPCR可以最早发现MS野毒感染，且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示：在条件允许的情况下，qPCR可以作为MS首选的监测方法；当检测条件受限时，上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况，但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响，在结果判断时应进行综合分析。

关键词：鸡滑液囊支原体血凝抑制试验血清平板凝集试验酶联免疫吸附试验 qPCR

鸡源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

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家畜生态学报 2023年

作者：杨少艳刘红祥蔡联燊张玉杰李彬宋姗姗孙娜娜赵成龙李明勇刘东动物基因工程疫苗国家重点实验室青岛易邦生物工程有限公司青岛康大兔业发展有限公司

为探究山东、安徽、河北、宁夏等地区育成阶段蛋鸡群出现的一种以输卵管干酪物为主要病理特征的疾病病因,该研究对临床病理样本进行细菌分离培养,并对分离菌株进行形态学、分子生物学、血清学、动物回归试验和药敏试验等方面的研究与分... 详细信息

为探究山东、安徽、河北、宁夏等地区育成阶段蛋鸡群出现的一种以输卵管干酪物为主要病理特征的疾病病因,该研究对临床病理样本进行细菌分离培养,并对分离菌株进行形态学、分子生物学、血清学、动物回归试验和药敏试验等方面的研究与分析。结果显示,13株分离菌株均为鸭疫里默氏杆菌,以血清型7型为主,其Omp A基因已进化为2大分支,动物回归试验可复制出相同临床症状,药敏试验显示分离菌株对氟苯尼考、多西环素、大观霉素、头孢类药物较为敏感。该研究结果为鸭疫里默氏杆菌从不同易感宿主上的分离鉴定及菌株的遗传进化分析提供了理论基础,对家禽感染鸭疫里默氏杆菌的预防与控制提供了参考依据。

关键词：鸡鸭疫里默氏杆菌分离鉴定生物学特性输卵管干酪物

诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选

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动物医学进展 2022年第4期43卷 12-18页

作者：刘源马卓媛樊港楚电峰张仕强王妍西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 动物基因工程疫苗国家重点实验室/青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266000

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因此其表达调控的研究备受关注。为了探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)、白介素3(IL-3)和地塞米松(dexamethasone)及其组合对PAM中CD163受体表达的促进作用,通过RT-qPCR和免疫荧光染色在原代PAM中从mRNA和蛋白水平对不同因子及其组合中CD163受体的表达情况进行检测。结果显示,M-CSF、GM-CSF、TGF-β1、IL-10、IL-3和dexamethasone都能在一定范围内促进CD163受体的表达,通过组合发现dexamethasone+IL-10对于CD163受体表达的促进作用最为显著,为进一步开展CD163的表达调控研究奠定了基础。

关键词：肺泡巨噬细胞 CD163 地塞米松白介素10 猪

2019—2021年我国29个省级行政区鸡传染性支气管炎流行病学调查

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中国动物检疫 2022年第4期39卷 19-25页

作者：李彬韩晓青刘红祥宋姗姗于静范庆增张宇龙谭鹏杜元钊刘东青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266032

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统... 详细信息

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统计分析。结果显示:共检出6436份IBV阳性样本,阳性检出率为16.7%。2019—2021年的IBV阳性检出率分别为12.5%、16.4%、21.0%,呈逐年增长趋势:阳性检出率呈现一定的季节性变化特点,7—9月检出率(11.3%~15.4%)较低,而3—6月(17.3%~19.3%)和10—12月(17.5%~19.0%)较高。全国29个省级行政区中有27个检出阳性样品,其中东部和中部家禽养殖密集区阳性检出率较高,而西部和北部地区较低。白羽肉鸡阳性检出率最高(28.9%),肉种鸡阳性检出率最低(5.0%),0~6周龄阶段IBV感染较为严重。共检出5种基因型,其中QX型(66.5%)、GVI型(27.7%)占比较高,为当前流行的优势基因型;不同品种鸡群中流行的基因型存在一定差异,白羽肉鸡群中以QX和GVI型为主,而其他鸡群中流行的基因型较为复杂;QX型0~3周龄(33.2%)、GVI型3~6周龄(66.4%)阳性检出数量占比较高,6周龄以后占比均较低(基因型复杂,以QX型和GVI型多见。结果提示,我国的IB防控面临较大压力与挑战,需要加强优势基因型疫苗的研发,重点做好小日龄鸡群的IB防控。

关键词：鸡传染性支气管炎基因型流行病学调查