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miR-20a-5p在M1型小胶质细胞加重氧糖剥夺-复糖复氧神经元损伤中的作用:与MFN2的关系

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中华麻醉学杂志 2022年第8期42卷 974-979页

作者：刘文洁吕海涛王红陈静燕单凯悦陈怀龙王明山张高峰董瑞青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科青岛266034 青岛市第八人民医院麻醉科青岛266121

目的评价miR-20a-5p在M1型小胶质细胞加重氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)后神经元损伤中的作用及其与线粒体融合蛋白2(MFN2)的关系。方法将生长良好的BV2小胶质细胞(M0型)用脂多糖(100 ng/ml)和干扰素-γ(20 ng/ml)诱导小胶质细胞极化为M1表... 详细信息

目的评价miR-20a-5p在M1型小胶质细胞加重氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)后神经元损伤中的作用及其与线粒体融合蛋白2(MFN2)的关系。方法将生长良好的BV2小胶质细胞(M0型)用脂多糖(100 ng/ml)和干扰素-γ(20 ng/ml)诱导小胶质细胞极化为M1表型,并通过qRT-PCR和免疫荧光法进行鉴定。将生长良好的N2a细胞采用随机数字表法分为6组(n=6):对照组(C组)、OGD/R组(OGD/R组)、M0型小胶质细胞共培养组(M0组)、M1型小胶质细胞共培养组(M1组)、转染miR-20a-5p抑制剂组(I组)和阴性对照组(NC组)。C组细胞常规培养;OGD/R组氧糖剥夺3 h,复糖复氧24 h制备N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤模型;M0组氧糖剥夺3 h,复糖复氧时与M0型小胶质细胞共培养24 h;M1组氧糖剥夺3 h后复糖复氧时与M1型小胶质细胞共培养24 h;I组和NC组分别将转染试剂miR-20a-5p抑制剂和阴性对照miRNA转染至M1型小胶质细胞后,将N2a细胞氧糖剥夺3 h,复糖复氧时与转染后的M1型小胶质细胞共培养24 h。采用CCK-8法测定细胞活力,测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用qRT-PCR法检测miR-20a-5p和MFN2 mRNA的表达,采用Western blot法检测MFN2表达。结果与C组比较,其余5组细胞活力降低,LDH漏出量增加,MFN2及其mRNA表达下调,OGD/R组、M0组和M1组miR-20a-5p表达上调,I组miR-20a-5p表达下调(P0.05)。与OGD/R组和M0组比较,M1组细胞活力下降,LDH漏出量增加,MFN2及其mRNA表达下调,miR-20a-5p表达上调(P<0.05);与M1组比较,I组细胞活力增加,LDH漏出量下降,MFN2及其mRNA表达上调,miR-20a-5p表达下调(P<0.05)。结论M1型小胶质细胞加重N2a细胞OGD/R损伤的机制可能与M1型小胶质细胞miR-20a-5p表达上调抑制N2a细胞MFN2表达有关。

关键词：微RNAs 小神经胶质细胞低氧神经元线粒体蛋白质类

M1型小胶质细胞源性外泌体携载miR-20a-5p对氧糖剥夺/复氧后神经元损伤的影响

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中华危重病急救医学 2022年第8期34卷 842-847页

作者：刘文洁尹雪云王红陈静燕单凯悦陈怀龙张高峰王明山董瑞青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科山东青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科山东青岛266034 南京医科大学青岛临床医学院山东青岛266071

目的探讨M1型小胶质细胞源性外泌体(M1-exo)对氧糖剥夺/复氧后神经元损伤的影响,并研究其作用机制。方法取对数期生长的小鼠小胶质细胞BV2,加入100μg/L脂多糖(LPS)和20μg/Lγ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞极化为M1表型,通过蛋白质免... 详细信息

目的探讨M1型小胶质细胞源性外泌体(M1-exo)对氧糖剥夺/复氧后神经元损伤的影响,并研究其作用机制。方法取对数期生长的小鼠小胶质细胞BV2,加入100μg/L脂多糖(LPS)和20μg/Lγ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞极化为M1表型,通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光法鉴定M1型小胶质细胞。收取M1型小胶质细胞的上清液,用ExoQuick-TCTM试剂盒提取M1-exo,通过透射电镜及纳米颗粒粒径分析(NTA)观察外泌体形态,采用Western blotting法检测外泌体标记蛋白白细胞分化抗原(CD9、CD63)的表达。将生长良好的小鼠神经母细胞瘤细胞N2a分为6组:C组细胞常规培养;O组氧糖剥夺3 h后复糖复氧24 h制备N2a细胞氧糖剥夺/复氧损伤模型;E组的N2a细胞氧糖剥夺3 h后复糖复氧并与M1-exo共培养24 h;NC组、M组和I组分别构建阴性对照、过表达和敲低微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)的M1-exo,通过qPCR检测转染是否成功。NC组、M组和I组N2a细胞氧糖剥夺3 h后,与转染后的M1-exo共培养24 h后检测各项指标。采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用qPCR法检测miR-20a-5p表达。结果与M0型小胶质细胞相比,M1型小胶质细胞特异性标志物CD32和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)荧光强度及其mRNA和蛋白表达均明显升高〔CD32(荧光强度):36.919±1.541比3.533±0.351,CD32 mRNA(2^(-ΔΔCt)):4.887±0.031比1.003±0.012,CD32/β-actin:2.663±0.219比1.000±0.028;iNOS(荧光强度):29.513±1.197比7.933±0.378,iNOS mRNA(2^(-ΔΔCt)):4.829±0.177比1.000±0.016,iNOS/β-actin:1.991±0.035比1.000±0.045;均P<0.01〕,证明M1型小胶质细胞被成功激活。电镜下可见M1-exo为圆形或卵圆形囊泡状小体,并有明显膜性结构,直径范围约100 nm。Western blotting结果显示,M1-exo表达特异性CD63和CD9蛋白。与C组比较,O组N2a细胞活力明显下降,细胞凋亡率和miR-20a-5p的表达明显升高〔细胞活力(A值):0.540±0.032比1.001±0.014,细胞凋亡率:(19.857±0.910)%比(13.508±0.460)%,miR-20a-5p(2^(-ΔΔCt)):5.508±0.291比1.033±0.101,均P<0.01〕。与O组比较,E组N2a细胞活力明显下降,细胞凋亡率和miR-20a-5p表达进一步升高〔细胞活力(A值):0.412±0.029比0.540±0.032,细胞凋亡率:(31.802±0.647)%比(19.857±0.910)%,miR-20a-5p(2^(-ΔΔCt)):8.912±0.183比5.508±0.291,均P<0.01〕,说明M1-exo进一步加重了氧糖剥夺/复氧后N2a细胞的损伤。与E组比较,M组N2a细胞活力明显下降,细胞凋亡率和miR-20a-5p表达明显升高〔细胞活力(A值):0.311±0.028比0.412±0.029,细胞凋亡率:(36.343±0.761)%比(31.802±0.647)%,miR-20a-5p(2^(-ΔΔCt)):32.348±0.348比8.912±0.183,均P<0.01〕;而I组N2a细胞活力明显升高,细胞凋亡率和miR-20a-5p表达明显下降〔细胞活力(A值):0.498±0.017比0.412±0.029,细胞凋亡率:(26.437±0.793)%比(31.802±0.647)%,miR-20a-5p(2^(-ΔΔCt)):6.875±0.219比8.912±0.183,均P<0.01〕。E组与NC组N2a细胞活力、细胞凋亡率和miR-20a-5p的表达比较差异均无统计学意义。结论M1-exo加重氧糖剥夺复氧后神经元的损伤,这一损伤作用可能与其携载的miR-20a-5p有关。

关键词：氧糖剥夺/复氧外泌体实时荧光定量聚合酶链反应 CD63 膜性结构小胶质细胞白细胞分化抗原微小RNA

外泌体在M1型小胶质细胞诱发神经元损伤中的作用

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中华麻醉学杂志 2022年第6期42卷 685-689页

作者：刘文洁刘志林王红董瑞陈静燕单凯悦陈怀龙张高峰王明山青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科青岛266034 南京医科大学青岛临床医学院青岛266071

目的评价外泌体在M1型小胶质细胞诱发神经元损伤中的作用。方法将生长良好的BV2小胶质细胞加入脂多糖100 ng/ml和干扰素-γ20 ng/ml诱导小胶质细胞极化为M1表型。收集M1型小胶质细胞上清液,提取外泌体。将生长良好的N2a细胞采用随机数... 详细信息

目的评价外泌体在M1型小胶质细胞诱发神经元损伤中的作用。方法将生长良好的BV2小胶质细胞加入脂多糖100 ng/ml和干扰素-γ20 ng/ml诱导小胶质细胞极化为M1表型。收集M1型小胶质细胞上清液,提取外泌体。将生长良好的N2a细胞采用随机数字表法分为4组(n=24):对照组(C组)、M1型小胶质细胞组(M组)、外泌体组(E组)和外泌体抑制剂+M1型小胶质细胞组(G+M组)。C组常规培养24 h;M组加入M1型小胶质细胞上清液培养24 h;E组加入M1型小胶质细胞源性的外泌体培养24 h;G+M组于M1型小胶质细胞加入外泌体抑制剂GW4869培养24 h后,取上清液,加入到N2a细胞中培养24 h。采用CCK-8法检测N2a细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达,Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果与C组比较,其余3组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2及其mRNA表达下调,Bax及其mRNA表达上调(P0.05)。结论M1型小胶质细胞可通过外泌体介导神经元损伤。

关键词：小神经胶质细胞神经元外泌体

五位一体管理模式对学龄期哮喘患儿疾病防控的影响

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中华儿科杂志 2019年第11期57卷 870-875页

作者：路玲林荣军管仁政刘玉娟王修岩青岛大学附属医院综合儿科 266000 青岛市妇女儿童医院营养科 266000 青岛市体育运动学校田径系 266000

目的探讨五位一体管理模式(哮喘规范化治疗、哮喘日记、最大呼气流速(PEF)监测、合理膳食、体育运动)对学龄期哮喘患儿疾病防控的影响。方法采用随机对照研究,选取2018年4月至10月在青岛大学附属医院综合儿科就诊的临床缓解期哮喘患儿7... 详细信息

目的探讨五位一体管理模式(哮喘规范化治疗、哮喘日记、最大呼气流速(PEF)监测、合理膳食、体育运动)对学龄期哮喘患儿疾病防控的影响。方法采用随机对照研究,选取2018年4月至10月在青岛大学附属医院综合儿科就诊的临床缓解期哮喘患儿70例。抽签法随机分为研究组和对照组,每组35例。研究组有5例失访,实际入组30例。对照组有6例失访,实际入组29例。对照组患儿接受常规用药并定期门诊复诊,研究组患儿接受五位一体的哮喘管理模式。分别于首次就诊时、随访3个月及6个月时进行哮喘控制测试评分、用药依从性指数评分,检测肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、PEF],记录随访6个月期间哮喘急性发作急诊就诊次数,并进行家长满意度调查,体重、身高及生化指标检测。哮喘患儿肺功能指标、哮喘控制评分以及超重患儿体质指数比较采用t检验,用药依从性比较采用χ2检验,哮喘急性发作急诊就诊次数、家长满意度比较采用秩和检验。结果纳入的哮喘患儿实际共59例,研究组30例,年龄(8.1±1.5)岁;对照组29例,年龄(9.2±1.1)岁。随访3个月研究组患儿FEV1、PEF、哮喘控制评分分别为(86.3±1.5)%、(83.3±2.4)%、(24.7±2.6)分,对照组分别为(84.4±2.5)%、(82.2±1.9)%、(21.1±1.3)分,研究组高于对照组(t=3.62、1.97、6.64,P均教育改善肺功能,降低哮喘急性发作次数。家长满意度高,值得临床推广。

关键词：哮喘儿童疾病管理

miR-205-3p在氧糖剥夺-复氧复糖星形胶质细胞胀亡中的作用:与AQP4的关系

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中华麻醉学杂志 2022年第6期42卷 734-738页

作者：陈静燕刘志林王红刘文洁单凯悦张高峰陈怀龙王明山董瑞南京医科大学青岛临床医学院青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科青岛266071 大连医科大学研究生院大连116044

目的评价miR-205-3p在氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞胀亡中的作用及其与水通道蛋白4(AQP4)的关系。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组(n=16):对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+miR-205-3p模... 详细信息

目的评价miR-205-3p在氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞胀亡中的作用及其与水通道蛋白4(AQP4)的关系。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组(n=16):对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+miR-205-3p模拟物组(M组)、OGD/R+miR-205-3p抑制剂组(I组)和OGD/R+阴性对照组(NC组)。C组在正常条件下培养,O组于37℃厌氧孵育箱(含94%N_(2)、1%O_(2)和5%CO_(2))氧糖剥夺4 h,于复氧复糖24 h;M组、I组和NC组分别转染miR-205-3p模拟物、抑制剂和阴性对照后,氧糖剥夺4 h,复氧复糖24 h。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞损伤及胀亡情况,qRT-PCR法检测AQP4 mRNA表达,Western blot法检测AQP4及porimin的表达。结果与C组相比,O组miR-205-3p表达下调,细胞活力降低,细胞损伤率及胀亡率升高,AQP4及其mRNA和porimin表达上调(P0.05)。结论miR-205-3p参与了OGD/R星形胶质细胞胀亡的过程,与调控AQP4表达有关。

关键词：微RNAs 低氧星形细胞细胞死亡水通道蛋白质4

应用三维超声诊断婴幼儿发育性髋关节发育不良的可靠性研究

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中国超声医学杂志 2021年第10期37卷 1169-1172页

作者：耿琛琛田树旭展新风王谷子杨柳王慧慧葛玲山东大学齐鲁医院(青岛)超声科青岛市妇女儿童医院

目的探讨初学者应用三维超声进行婴幼儿髋关节发育不良筛查的可靠性研究。方法初学者为3名住院医师,具有1年超声工作经验,但从未进行过髋关节超声检查,于研究开始前接受2 h培训。初学者先对患儿分别进行二维与三维超声检查,测量α、β角... 详细信息

目的探讨初学者应用三维超声进行婴幼儿髋关节发育不良筛查的可靠性研究。方法初学者为3名住院医师,具有1年超声工作经验,但从未进行过髋关节超声检查,于研究开始前接受2 h培训。初学者先对患儿分别进行二维与三维超声检查,测量α、β角度,后由一名具有8年髋关节超声检查经验的专家再次对婴儿进行二维与三维检查。以该专家的诊断结果为参考标准。应用Bland-Altman法,对初学者和专家测量的α角数值进行一致性比较。结果共检查60例婴儿,前30例婴儿髋关节二维超声结果显示初学者组与专家一致性较差,而三维超声具有较好的一致性。后30例婴儿髋关节对比分析显示,二维与三维超声结果在两组间均具有较好的一致性。结论应用三维超声进行髋关节筛查较易被初学者掌握,且具有较高的可靠性。

关键词：三维超声一致性发育性髋关节发育不良

外泌体在M2型小胶质细胞减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用

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中华麻醉学杂志 2022年第8期42卷 985-990页

作者：陈静燕张佳王红董瑞刘文洁单凯悦张高峰陈怀龙王明山南京医科大学青岛临床医学院青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科青岛266034 大连医科大学研究生院大连116044 青岛市第八人民医院麻醉科青岛266121

目的评价外泌体在M2型小胶质细胞减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组(n=14):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)、氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质... 详细信息

目的评价外泌体在M2型小胶质细胞减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用。方法体外培养原代星形胶质细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组(n=14):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)、氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞组(O+M2组)、氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞+GW4869组(O+M2+G组)和氧糖剥夺-复糖复氧+M2型小胶质细胞源性外泌体组(O+M2-E组)。C组在正常条件下培养,O组氧糖剥夺4 h,复糖复氧24 h;O+M2组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入M2型小胶质细胞的上清液2 ml培养24 h;O+M2+G组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入经外泌体抑制剂GW486910μmol/L处理后的M2型小胶质细胞上清液2 ml培养24 h;O+M2-E组氧糖剥夺4 h,复糖复氧时加入M2型小胶质细胞源性外泌体10μg/ml培养24 h。光镜下观察细胞形态变化,采用CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达水平,Western blot法检测AQP4及胀亡蛋白porimin的表达水平。结果与C组相比,其余4组细胞活力下降,AQP4及其mRNA、porimin表达上调(P0.05),细胞水肿程度减轻;与O+M2组相比,O+M2+G组细胞活力下降,AQP4及其mRNA和porimin表达上调(P0.05),细胞水肿程度增强。结论M2型小胶质细胞可通过外泌体减轻星形胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤。

关键词：外泌体小神经胶质细胞星形细胞再灌注损伤

M2型小胶质细胞源性外泌体与小鼠神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤的关系

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中华麻醉学杂志 2022年第10期42卷 1233-1237页

作者：单凯悦李慧敏王红陈静燕刘文洁陈怀龙张高峰王明山董瑞大连医科大学研究生院大连116044 青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科青岛266071 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科青岛266034 南京医科大学青岛临床医学院青岛市市立医院麻醉科青岛266071 南京大学医学院南京210093

目的评价M2型小胶质细胞源性外泌体(M2-exo)与小鼠神经元氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的关系。方法体外培养小鼠神经母细胞(N2a细胞)及BV2小胶质细胞,采用20 ng/ml IL-4将BV2小胶质细胞激活为M2型,提取M0型小胶质细胞源性外泌体(M0-exo... 详细信息

目的评价M2型小胶质细胞源性外泌体(M2-exo)与小鼠神经元氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的关系。方法体外培养小鼠神经母细胞(N2a细胞)及BV2小胶质细胞,采用20 ng/ml IL-4将BV2小胶质细胞激活为M2型,提取M0型小胶质细胞源性外泌体(M0-exo)和M2-exo。采用随机数字表法将N2a细胞分为4组(n=23):对照+M0-exo组(C+M0组)、对照+M2-exo组(C+M2组)、OGD/R+M0-exo组(O+M0组)和OGD/R+M2-exo组(O+M2组)。C+M0组和C+M2组分别加入M0-exo和M2-exo(终浓度100μg/ml)孵育24 h,O+M0组和O+M2组于氧糖剥夺3 h时分别加入M0-exo和M2-exo(终浓度100μg/ml),再复糖复氧24 h。采用CCK-8法检测N2a细胞活力,采用LDH释放率评估细胞损伤程度,采用Western blot法及实时q-PCR检测Bax和Bcl-2及其mRNA表达。结果与C+M0组比较,C+M2组N2a细胞活力、LDH释放率、Bax/Bcl-2比值和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值差异无统计学意义(P>0.05),O+M0组N2a细胞活力下降,LDH释放率、Bax/Bcl-2比值和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值升高(P<0.05)。与C+M2组比较,O+M2组N2a细胞活力下降,LDH释放率、Bax/Bcl-2比值和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值升高(P<0.05)。与O+M0组比较,O+M2组N2a细胞活力升高,LDH释放率、Bax/Bcl-2比值和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值降低(P<0.05)。结论M2-exo在小鼠神经元OGD/R过程中发挥内源性保护作用,可能与抑制细胞凋亡有关。

关键词：小神经胶质细胞外泌体神经元再灌注损伤

微创开髓下3种根管消毒方法对粪肠球菌清除效果比较

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上海口腔医学 2022年第1期31卷 17-23页

作者：单晓阳孙莉青王月月杨楠孙慧斌青岛大学附属医院口腔科山东青岛266003 青岛大学口腔医学院山东青岛266003 青岛市妇女儿童医院口腔科山东青岛266000 青岛大学口腔数字医学与3D打印工程实验室山东青岛266003

目的:比较微创和常规开髓下的不同根管消毒方法,获得一种基于微创开髓的高效简便的根管消毒方法。方法:将66颗离体上颌第一磨牙随机分为实验组(计算机辅助引导下开髓)和对照组(常规开髓),均预备至ProTaper Universal F2,建立粪肠球菌感... 详细信息

目的:比较微创和常规开髓下的不同根管消毒方法,获得一种基于微创开髓的高效简便的根管消毒方法。方法:将66颗离体上颌第一磨牙随机分为实验组(计算机辅助引导下开髓)和对照组(常规开髓),均预备至ProTaper Universal F2,建立粪肠球菌感染模型。每组再随机分为NaClO+EDTA冲洗(A)、NaClO+EDTA+超声荡洗(B)、NaClO+EDTA+Er:YAG激光(C)3个亚组,进行根管消毒后取样培养,计算每个样本菌落形成单位(colony-forming units,CFU)值。以F3锉预备并收集牙本质碎屑,稀释培养后,计算CFU值。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:根管内壁表面实验组和对照组CFU结果显示,C组和B组的杀菌效果显著优于A组(P0.05)。实验组内比较,B1、C1组与A1组之间有显著差异(P0.05)。对照组组内比较,B2、C2组与A2组之间有显著差异(P0.05)。实验组和对照组牙本质碎屑细菌量的比较结果显示,C组效果最佳,B组次之,A组最差,各组两两之间均有显著差异(P<0.05)。结论:计算机引导下微创根管治疗,在Er:YAG激光或超声辅助下,可获得与常规根管治疗相仿的消毒效果,且Er:YAG激光对牙本质小管的细菌清除效果优于超声,更适用于微创根管治疗。

关键词：微创根管治疗根管消毒粪肠球菌 Er:YAG激光超声荡洗