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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第08期 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒（dengue virus type 2, DENV-2）感染小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages, BMDM）的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-3... 详细信息

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒（dengue virus type 2, DENV-2）感染小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages, BMDM）的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应；制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb＿CTL1蛋白（蚊唾液C型凝集素蛋白）的抗原提呈细胞（antigen presenting cell, APC），与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养，取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞，实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化，分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养，通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达，分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示，与未免疫组比较，rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖，刺激指数（stimulation index, SI）>2,P<0.000 1；荷载rAalb＿CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制，荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制（2-ΔΔCT<0.5,P<0.05）；与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后，rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论 rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制，为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P组和灭活DENV-2组(P0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

刚地弓形虫排泄/分泌抗原诱导卵巢癌细胞凋亡的机制探讨

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中国动物传染病学报 2024年

作者：何焱钊高思李佳洁杨勇刘红丽天津市儿童医院山西医科大学医学寄生虫学教研室

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-... 详细信息

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-3细胞凋亡情况及线粒体膜电位和活性氧（ROS）的变化；采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。CCK-8法结果显示，800 μg/mL Tg-ESA作用于SKOV-3细胞抑制细胞增殖（P 组相比，800 μg/mL和1 600 μg/mL浓度的Tg-ESA明显诱导了SKOV-3细胞凋亡（P < 0.05）；进一步研究发现Tg-ESA作用的SKOV-3细胞线粒体膜电位明显下降，而细胞内ROS的含量明显增加（P < 0.01）；Western blot结果显示800 μg/mL、1 600 μg/mL的Tg-ESA可以上调促凋亡蛋白Cleaved Caspase 9、Cleaved Caspase 3和Bax的表达，下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。Tg-ESA通过诱导细胞内活性氧含量升高及线粒体膜电位下降启动了细胞凋亡程序，并通过线粒体凋亡途径诱导SKOV-3细胞凋亡，从而达到抗卵巢癌的效果。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡

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多房棘球绦虫分子流行病学研究进展

热带医学杂志 2024年第5期24卷 763-768页

作者：秦俊梅种世桂陈根马慧赵玉敏桂林医学院基础医学院寄生虫学教研室广西桂林541000

泡型包虫病是由多房棘球绦虫的幼虫——多房棘球蚴引起的一类人畜共患性寄生虫病,严重危害患者生命健康。近十年来,随着分子流行病学的发展,多房棘球绦虫流行病学研究有了重大进展。本文将从多房棘球绦虫国内外流行现状、遗传多样性及... 详细信息

泡型包虫病是由多房棘球绦虫的幼虫——多房棘球蚴引起的一类人畜共患性寄生虫病,严重危害患者生命健康。近十年来,随着分子流行病学的发展,多房棘球绦虫流行病学研究有了重大进展。本文将从多房棘球绦虫国内外流行现状、遗传多样性及流行因素进行综述,了解相关研究技术与方法,以期为泡型包虫病的流行病学调查、防治及监测提供技术参考。

关键词：多房棘球绦虫泡型棘球蚴病人畜共患寄生虫病基因分型

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人体蠕形螨体内细菌群落多样性分析

中国血吸虫病防治杂志 2024年第2期36卷 174-178页

作者：韩忍忍张大存王澜汤非凡曹佳诚王婧璇湛孝东谷生丽皖南医学院医学寄生虫学教研室安徽芜湖241002 山东省九鑫生物工程有限公司安徽省芜湖市螨类检验与防控工程技术研究中心安徽芜湖241002

目的分析人体蠕形螨体内细菌群落多样性,为探究蠕形螨在其所致传染病中的作用提供参考依据。方法2023年6—7月通过透明胶纸法采集芜湖市某高校大学生面部蠕形螨,通过Illumina PE250高通量测序平台扩增16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,1... 详细信息

目的分析人体蠕形螨体内细菌群落多样性,为探究蠕形螨在其所致传染病中的作用提供参考依据。方法2023年6—7月通过透明胶纸法采集芜湖市某高校大学生面部蠕形螨,通过Illumina PE250高通量测序平台扩增16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S r RNA)基因V4区以及核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因,将测序结果根据重叠关系进行拼接、过滤得到有效序列,再进行操作分离单元(operational taxonomic units,OTU)聚类。对得到的OTU进行多样性指数分析,并在不同分类水平对细菌菌落结构进行统计分析。结果 16S r RNA测序获得57 483条有效序列,根据不同相似度水平对其进行OTU分类,得到159个OTUs;对其中97%相似水平的OTU进行分类学水平分析,发现人体蠕形螨体内细菌分属于14个门、20个纲、51个目、72个科、94个属。在门分类水平,变形菌门为优势菌门;在属分类水平上,弧菌属、慢生根瘤菌和贪噬菌属为优势菌属。ITS测序共获得56 362条有效序列及147个OTUs,分属于5个门、17个纲、34个目、68个科、93个属;注释到子囊菌门、担子菌门、壶菌属门和毛囊菌门等,子囊菌门为优势菌门,链格孢菌属、附球菌属、青霉菌属和帚枝霉属为优势菌属。结论蠕形螨体内细菌群落组成具有较高多样性,同时微生物种类较多、物种丰度较高。

关键词：人体蠕形螨细菌群落群落多样性 16S核糖体RNA 内转录间隔区

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以疟原虫章节为例的人体寄生虫学课程思政元素挖掘与思考

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热带医学杂志 2024年第08期 1210-1214页

作者：吕芳丽中山大学附属第七医院科研中心中山大学医学院寄生虫学教研室中山大学中山医学院寄生虫学教研室

课程思政的教育目标是立德树人,以严谨的科学精神,培养国家未来的高素质医学人才。疟疾仍然是全球主要的公共卫生安全威胁之一。长期以来,中国加强全球卫生合作,为疟疾的防控和消除工作提供指导与支持。因此,人体寄生虫学的重要性愈加凸... 详细信息

课程思政的教育目标是立德树人,以严谨的科学精神,培养国家未来的高素质医学人才。疟疾仍然是全球主要的公共卫生安全威胁之一。长期以来,中国加强全球卫生合作,为疟疾的防控和消除工作提供指导与支持。因此,人体寄生虫学的重要性愈加凸显,针对本门课程开展课程思政建设意义重大。本文通过挖掘疟原虫章节蕴含的课程思政元素,探讨课程思政的融入点和融入方法,使专业教学和课程思政在教学过程中同向同行,以激发医学生的爱国情怀和责任担当,达到教书育人的目标。

关键词：人体寄生虫学疟原虫课程思政元素

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广州管圆线虫破坏血脑屏障研究进展

热带医学杂志 2024年第1期24卷 146-150页

作者：韦航吕志跃中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510080

血脑屏障严格控制脑血管与脑组织之间的物质交换,维持中枢神经系统微环境的稳态。广州管圆线虫病是由广州管圆线虫Ⅲ期幼虫感染引起的一种危害严重的人兽共患病,Ⅲ期幼虫穿过机体的血脑屏障,在脑部生长发育,从而导致以嗜酸性粒细胞性增... 详细信息

血脑屏障严格控制脑血管与脑组织之间的物质交换,维持中枢神经系统微环境的稳态。广州管圆线虫病是由广州管圆线虫Ⅲ期幼虫感染引起的一种危害严重的人兽共患病,Ⅲ期幼虫穿过机体的血脑屏障,在脑部生长发育,从而导致以嗜酸性粒细胞性增多为特征的脑膜炎或脑膜脑炎。本文主要就广州管圆线虫感染破坏血脑屏障机制研究进展作一综述,为广州管圆线虫病防治提供理论依据。

关键词：血脑屏障广州管圆线虫嗜酸性脑膜炎

胆固醇-25-羟化酶对乙脑病毒复制的影响及机制研究

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中国热带医学 2024年第5期24卷 511-518页

作者：邓东青龙启舟聂映吴家红贵州医科大学人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州省现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025

目的探究胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制的影响及其作用机制,为抗JEV药物的研发提供靶标分子及理论支撑。方法通过实时荧光定量PCR验证CH25H能否在人... 详细信息

目的探究胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制的影响及其作用机制,为抗JEV药物的研发提供靶标分子及理论支撑。方法通过实时荧光定量PCR验证CH25H能否在人的肾细胞HEK293T中被Ⅰ型干扰素及JEV诱导表达。用不同浓度的α干扰素(interferonα,IFN-α)处理HEK293T细胞,12 h后收取细胞,通过实时荧光定量PCR检测CH25H的表达情况;使用不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的JEV感染HEK293T细胞,24 h后收取细胞,通过实时荧光定量PCR检测CH25H mRNA表达水平的变化。利用分子克隆技术构建真核表达质粒pcDNA3.1-CH25H-3×HA,在HEK293T细胞中过表达CH25H,通过实时荧光定量PCR、病毒空斑实验分析CH25H对JEV复制的影响;通过CCK8实验获得CH25H的酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)在HEK293T、BHK21及Vero细胞中的合理使用浓度,并在上述细胞中利用实时荧光定量PCR、病毒空斑实验、免疫荧光实验、病毒吸附实验进一步研究25HC在JEV复制中的作用及其对JEV生命周期的影响;利用点突变的方法构建CH25H酶活性缺失的突变体CH25HM,并转染至HEK293T细胞中,JEV感染24 h后,通过qPCR、病毒空斑实验揭示CH25H影响JEV复制是否依赖于其酶活性。结果CH25H可在HEK293T细胞中被IFN-α诱导表达,但在JEV感染后,细胞中CH25H mRNA表达水平被下调。在HEK293T细胞中过表达CH25H显著的抑制JEV复制。CH25H的酶活性产物25HC在HEK293T、BHK21及Vero细胞中均明显抑制JEV的复制;病毒吸附实验结果显示,25HC可通过影响病毒吸附过程,进而抑制JEV复制;在HEK293T细胞中过表达酶活性缺失的突变体CH25HM,也能显著的抑制JEV复制。结论JEV感染下调干扰素刺激基因CH25H的表达,而CH25H以依赖于酶活性及非酶活性方式发挥抗JEV复制的作用。

关键词：乙型脑炎病毒胆固醇-25-羟化酶 25-羟基胆固醇干扰素刺激基因病毒复制

微小隐孢子虫GP900^(829~1099)蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 55-62页

作者：杨玲王龙王佳阳周坤铮闫宝龙赵威黄慧聪温州医科大学基础医学院寄生虫教研室浙江温州325035 江苏省扬州市中医院检验科扬州225002

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取... 详细信息

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP^(900^(829~1099))氨基酸序列进行生物信息学分析。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900^(829~1099)基因片段,构建pET-32a-gp900^(829~1099)重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达。纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素。采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用。以0.16、0.80、4.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平。采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平。结果 GP^(900^(829~1099))蛋白二级结构中β转角占比9.23%,无规则卷曲占比64.58%,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的GP^(900^(829~1099))重组蛋白的相对分子质量约为49 000。CCK-8结果显示,GP^(900^(829~1099))对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00μ/g/ml作为作用浓度。流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)%、(18.670±0.657)%、(20.470±1.271)%,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)%(t=3.818、3.872,P 组RAW264.7细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050、2.052±0.098和3.284±0.097,均高于对照组的1.010±0.096 (t=3.700、7.595、16.700,均P组1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P组IL-6的表达水平分别为(535.400±17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940) mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630) mg/L (t=3.193、5.809、3.339,P组的(324.200±11.070) mg/L (t=4.125、10.830,P组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714±0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的1.0±0.0 (t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节。

关键词：微小隐孢子虫微线体蛋白GP900 RAW264.7 NF-κB MAPK