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贝莱斯芽胞杆菌ZF514的分离鉴定及其挥发性产物的抑菌活性研究

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植物病理学报 2024年

作者：李娜李磊杨静静石延霞柴阿丽范腾飞李宝聚谢学文中国农业科学院蔬菜花卉研究所蔬菜生物育种全国重点实验室中蔬生物科技(寿光)有限公司青岛农业大学

黄瓜猝倒病是黄瓜苗期主要土传病害之一，随着设施黄瓜栽培面积的扩大，猝倒病的发生与危害在逐年加重。本研究从杭州地区茄子种植地的健康茄子植株根际土壤中分离筛选获得一株细菌ZF514，通过二分皿平板对峙法发现其挥发性物质对瓜果... 详细信息

黄瓜猝倒病是黄瓜苗期主要土传病害之一，随着设施黄瓜栽培面积的扩大，猝倒病的发生与危害在逐年加重。本研究从杭州地区茄子种植地的健康茄子植株根际土壤中分离筛选获得一株细菌ZF514，通过二分皿平板对峙法发现其挥发性物质对瓜果腐霉菌（Pythium aphanidermatum）有明显拮抗效果。根据形态特征、生理生化特性，以及基于多基因（16S rDNA、gyrA和rpoB）的系统发育分析结果，确定ZF514菌株为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillusvelezensis）。ZF514菌株对多种病原真菌具有显著拮抗作用。进一步将模拟微生物熏蒸处理的土壤用于盆栽试验，结果显示，盆栽所用土壤经ZF514菌株熏蒸处理后可显著降低黄瓜猝倒病的发生率，防效达63.69%。综上所述，产抑菌性挥发物质的B. velezensis ZF514菌株在微生物熏蒸防治土传病害方面具有一定的开发潜力。

关键词：黄瓜猝倒病挥发性物质贝莱斯芽胞杆菌微生物熏蒸

牛支原体LRR5蛋白原核表达及其在牛支原体入侵宿主细胞过程中的作用分析

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微生物学报 2024年第5期64卷 1469-1482页

作者：冯雅茹周梦婷张瑜瑜张格高鹏程冉多良许健储岳峰李斌新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆草食动物新药研究与创制重点实验室新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

致病性支原体具有入侵宿主细胞的能力,这是其发挥致病作用的关键。介导支原体入侵宿主细胞的自身功能蛋白可能是一种潜在的药物或疫苗靶标。【目的】克隆表达牛支原体(Mycoplasma bovis)MBOVPG45_0564基因编码蛋白(命名为LRR5蛋白),并... 详细信息

致病性支原体具有入侵宿主细胞的能力,这是其发挥致病作用的关键。介导支原体入侵宿主细胞的自身功能蛋白可能是一种潜在的药物或疫苗靶标。【目的】克隆表达牛支原体(Mycoplasma bovis)MBOVPG45_0564基因编码蛋白(命名为LRR5蛋白),并探究其在***入侵宿主细胞过程中的作用。【方法】利用NCBI数据库对MBOVPG45_0564基因进行同源性分析,用Discovery Studio Client系统对LRR5蛋白进行蛋白结构预测;原核表达LRR5蛋白并制备其小鼠多克隆抗体,利用免疫电镜对LRR5蛋白进行亚细胞定位;通过平板计数、激光共聚焦显微镜观察LRR5抗体封闭后***对胎牛肺(embryonic bovine lung,EBL)细胞入侵率的变化;将LRR5蛋白偶联至荧光微球表面后,以激光共聚焦显微镜及高内涵活细胞成像系统观察微球进入EBL细胞情况。【结果】MBOVPG45_0564基因在牛支原体属中为保守基因,其编码蛋白LRR5为膜相关蛋白,空间构象呈典型的月牙状,多个重复的亮氨酸基序以超螺旋方式组装并形成螺线管蛋白质结构单元。LRR5抗体封闭后,***对EBL细胞的入侵率显著降低(P<0.05),荧光微球偶联LRR5蛋白后,荧光微球可成功进入EBL细胞。【结论】MBOVPG45_0564基因编码的LRR5蛋白定位在***膜上,在***入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用。

关键词：牛支原体 MBOVPG45_0564基因入侵蛋白表达生物学功能

牛轮状病毒微滴式数字RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国草食动物科学 2024年

作者：谢世斌郑辉沙洲房琳琳尼博张慧董雅琴魏荣崔进青岛农业大学兽医学院中国动物卫生与流行病学中心农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)

本研究旨在建立更加灵敏的牛轮状病毒（Bovine rotavirus，BRV）检测方法，为BRV 的病原学调查及畜牧养殖行业疫病防控提供更加准确和灵敏的技术支持。根据BRV VP6基因组序列，利用Oligo7.56软件设计并合成特异性引物与探针，通过优化... 详细信息

本研究旨在建立更加灵敏的牛轮状病毒（Bovine rotavirus，BRV）检测方法，为BRV 的病原学调查及畜牧养殖行业疫病防控提供更加准确和灵敏的技术支持。根据BRV VP6基因组序列，利用Oligo7.56软件设计并合成特异性引物与探针，通过优化反应条件，建立检测BRV的微滴式数字RT-PCR方法，同时开展特异性、敏感性和重复性试验，并将建立的方法应用于14份临床样品的检测。结果表明，本研究所建方法的最低检测限为1.83 copies/μL，具有良好的可重复性，与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型均无交叉反应。对14份临床样品进行检测，检测出4份阳性样品，阳性率为28.57%，检测结果与实时荧光定量RT-PCR检测结果的符合率为100.00%。综上说明，本研究建立的BRV微滴式数字RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床样本的检测，为BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。

关键词：牛轮状病毒 VP6基因微滴式数字RT-PCR

寄生虫抗药性及其对水产动物寄生虫病药物防治的启示

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水生生物学报 2024年第2期48卷 351-360页

作者：李文祥王浩习丙文李明聂品王桂堂中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072 上海海洋大学上海201306 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心无锡214081 青岛农业大学青岛266109

抗药性是病原体在药物作用下发生生理变化和遗传变异而获得的能经受住药物毒性的一种能力。随着水产养殖集约化程度提高和药物长期大量使用,寄生虫抗药性越来越普遍和严重,不仅影响寄生虫病的防治效果,还带来环境污染和食品安全问题。... 详细信息

抗药性是病原体在药物作用下发生生理变化和遗传变异而获得的能经受住药物毒性的一种能力。随着水产养殖集约化程度提高和药物长期大量使用,寄生虫抗药性越来越普遍和严重,不仅影响寄生虫病的防治效果,还带来环境污染和食品安全问题。文章通过对陆生动物抗寄生虫药物、寄生虫抗药性机制、抗药性主要测定方法、抗药性控制策略及水产动物寄生虫抗药性的研究现状进行综述,为我国水产养殖中寄生虫抗药性研究提供思路,同时为减缓寄生虫抗药性提供科学的防控策略。

关键词：寄生虫杀虫药物抗药性水产动物

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奶牛乳房炎的研究进展

当代畜禽养殖业 2024年第1期44卷 36-38页

作者：冯浩强艾俊杰宋林卿王利敏王彦斌万政良戴小华新疆农业大学新疆乌鲁木齐830052 新疆草食动物新药研究与创制重点实验室新疆乌鲁木齐830052

乳用牛产业迅速发展,推动了地方经济增长。随着奶牛养殖规模的扩大,乳房炎的发病率也不断升高,产业发展遭到了打击,对养殖业造成较大的经济损失。引发奶牛乳房炎的原因主要有三大类(生物因素、环境因素和自身因素),不同原因导致的乳房... 详细信息

乳用牛产业迅速发展,推动了地方经济增长。随着奶牛养殖规模的扩大,乳房炎的发病率也不断升高,产业发展遭到了打击,对养殖业造成较大的经济损失。引发奶牛乳房炎的原因主要有三大类(生物因素、环境因素和自身因素),不同原因导致的乳房炎类型不同,诊断和治疗也有所差别。本文从奶牛乳房炎的发病原因、分类、诊断以及预防与治疗等方面进行概述,以期为乳房炎的相关研究拓宽思路。

关键词：奶牛乳房炎诊断预防治疗

猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白抗原表位研究进展

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中国兽医科学 2024年

作者：李云涛董雅琴刘晓君曲倩亿盖文燕张慧肖啸魏荣云南农业大学动物医学院中国动物卫生与流行病学中心青岛农业大学山东畜牧兽医职业学院甘肃农业大学动物医学院

猪流行性腹泻（PED）是影响养猪业发展的重要疫病之一，其病原为猪流行性腹泻病毒（PEDV）。该病毒基因型众多，毒株变异较快，不同基因型毒株交叉保护效果差，增加了疫病的防控难度。对病毒抗原表位的深入研究有助于治疗性抗体、疫苗... 详细信息

猪流行性腹泻（PED）是影响养猪业发展的重要疫病之一，其病原为猪流行性腹泻病毒（PEDV）。该病毒基因型众多，毒株变异较快，不同基因型毒株交叉保护效果差，增加了疫病的防控难度。对病毒抗原表位的深入研究有助于治疗性抗体、疫苗或诊断试剂的研发。笔者对PEDV主要结构蛋白抗原表位研究现状进行综述，以期为PED药物、疫苗及诊断试剂的研发提供参考。

关键词： PEDV 结构蛋白抗原表位

产气荚膜梭菌α-毒素基因数字PCR方法的建立及其在标准物质研制方面的应用

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山东农业科学 2024年第1期56卷 156-163页

作者：张铭洋张喜悦赵格曲志娜高宏伟孙敏程慧敏徐佳微王君玮邹明青岛农业大学动物医学院山东青岛266000 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 青岛海关技术中心山东青岛266000

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L... 详细信息

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L,退火温度为60℃。利用建立的ddPCR方法检测单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌的DNA,结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。合成产气荚膜梭菌α-毒素基因,制成DNA标准品,选取3个稀释梯度的标准品进行重复试验,组内和组间变异系数均小于5%,证明该方法具有较好的重复性。采用7个稀释梯度的标准品进行重复检测,计算出该方法的检测限为12.39 copies/μL,定量限为33.97 copies/μL。通过对68份临床样品进行检测,证实该方法可用于临床,且用于检测质粒DNA时无明显的基质效应。应用ddPCR方法对标准品进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室进行定值,最终获得了国家市场监督管理总局颁发的标准物质证书(GBW(E)091237)。α-毒素基因ddPCR方法的建立和DNA标准物的研制,为产气荚膜梭菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。

关键词：产气荚膜梭菌 ddPCR α-毒素基因标准物质特异性灵敏度可重复性定值

森林根际土壤细菌的分离、鉴定及生物活性筛选

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生物技术通报 2024年第1期40卷 294-307页

作者：冯路遥赵江源施竹凤莫艳芳杨童雨申云鑫何飞飞李铭刚杨佩文云南大学资源植物研究院昆明650504 云南省农业科学院农业环境资源研究所昆明650205 云南大学云南省微生物研究所昆明650504 云南农业大学植物保护学院昆明650201

【目的】从无量山国家级自然保护区森林根际土壤发掘具有多种生物活性的功能菌株,探究其开发应用潜力。【方法】采集无量山地区25个区域植物的根际土壤,采用选择培养基,分离鉴定磷酸盐溶解、固氮、溶锌和拮抗等活性菌株,进一步测定菌株... 详细信息

【目的】从无量山国家级自然保护区森林根际土壤发掘具有多种生物活性的功能菌株,探究其开发应用潜力。【方法】采集无量山地区25个区域植物的根际土壤,采用选择培养基,分离鉴定磷酸盐溶解、固氮、溶锌和拮抗等活性菌株,进一步测定菌株分泌铁载体、ACC脱氨酶和吲哚乙酸等生物活性,并验证促番茄种子发芽和生长效果。【结果】分离鉴定得到解磷菌70株,固氮菌27株,解钾菌8株,拮抗镰刀菌的菌株51株。其中,YIM B08401和YIM B08402形态学结合生理生化特性和16S rDNA序列测序,鉴定为白色伯克霍尔德氏菌(Burkholderia alba)和青岛假单胞菌(Pseudomonas qingdaonensis),两个菌株均具有磷酸盐溶解、固氮、溶锌和分泌铁载体的活性,最大可溶性磷含量为(455.63±59.65)mg/L和(878.95±64.78)mg/L;两株菌的促种子发芽试验结果接近,施加稀释10倍、10^(2)倍和10^(3)倍的发酵上清液后,发芽率都维持在82%-93%,明显高于对照组的56%和49%,施加菌株发酵液的处理组相较于空白对照组的长度都有显著增加。盆栽实验证明,两株菌株促生效果最明显的处理组在地上部长度、鲜重、干重、茎粗、根长、根鲜重、根干重方面的数据都显著优于对照组,YIM B08401的上述指标相对于对照组分别显著增加了89%、495%、268%、62%、53%、385%和469%,YIM B08402的上述指标相对于对照组分别显著增加了118%、528%、477%、55%、37%、413%和747%。此外,菌株YIM B08401还具有拮抗病原菌和分泌ACC脱氨酶活性,YIM B08402则还具有分泌吲哚乙酸的活性。【结论】无量山森林根际土壤蕴含具有多种生物活性的功能菌株,白色伯克霍尔德氏菌(B. alba, YIM B08401)和青岛假单胞菌(P. qingdaonensis, YIM B08402)具备开发为新型微生物肥料的应用潜力。

关键词：无量山森林根际土壤可培养微生物白色伯克霍尔德氏菌青岛假单胞菌养分转化拮抗活性生物肥料

养殖环境及贝源溶藻弧菌MLST分型及其毒力基因、耐药性分析

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渔业科学进展 2024年第1期45卷 211-223页

作者：郑玉东张翔姚梦丽谷莉黄博闻辛鲁生白昌明王崇明唐小千中国海洋大学水产动物病害与免疫学实验室山东青岛266003 中国水产科学研究院黄海水产研究所海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室山东青岛266071

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是近年来贝类病害中最常见的细菌性病原之一,对贝类养殖产业的健康发展构成严重威胁。本研究旨在分析不同养殖环境水体和贝类组织中,溶藻弧菌的基因变异、毒力基因、耐药性及其分布规律。对12株溶藻弧菌... 详细信息

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是近年来贝类病害中最常见的细菌性病原之一,对贝类养殖产业的健康发展构成严重威胁。本研究旨在分析不同养殖环境水体和贝类组织中,溶藻弧菌的基因变异、毒力基因、耐药性及其分布规律。对12株溶藻弧菌分离株开展多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、毒力因子以及菌株耐药性分析,结果显示,12株溶藻弧菌的序列型(sequence typing,ST)分型互不相同,7株为Pub MLST数据库已经收录的ST型,5株因管家基因的等位基因位点变化而形成新的ST型,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有较高的遗传多样性。12株溶藻弧菌都携带tlh、fur和collagenase三种毒力基因,但均未检测到tdh、trh、toxR和tcpA毒力基因。溶藻弧菌携带毒力因子的种类和数量受地区分布等因素的影响。不同来源的溶藻弧菌均具有多重耐药特征,对青霉素和氨苄西林产生抗性。本研究表明,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有种群复杂、遗传多样性高的特点;不同来源菌株在毒力基因携带和耐药性方面存在较大差异。本研究通过探究不同区域内不同来源的溶藻弧菌遗传变异及耐药性差异,对贝源溶藻弧菌的有效防控提供一定理论参考。

关键词：溶藻弧菌 MLST 毒力基因耐药性分析

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