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我国北方地区围产期奶牛乳热症发病率调查及分析

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中国兽医杂志 2021年第6期57卷 92-95页

作者：姜忠玲姜连炜李华涛丰艳妮丛霞曹荣峰田文儒青岛农业大学动物医学院繁殖障碍性疾病研究所山东青岛266109

为了解我国北方地区围产期奶牛乳热症的发生状况及影响因素,本调查通过问卷和现场走访的方式统计了我国内蒙古地区(13个)、东北地区(14个)和山东地区(39个)共66个奶牛场围产期奶牛乳热症的发生情况。结果显示,内蒙古、东北和山东地区围... 详细信息

为了解我国北方地区围产期奶牛乳热症的发生状况及影响因素,本调查通过问卷和现场走访的方式统计了我国内蒙古地区(13个)、东北地区(14个)和山东地区(39个)共66个奶牛场围产期奶牛乳热症的发生情况。结果显示,内蒙古、东北和山东地区围产期奶牛乳热症的发病率分别为1.43%、2.33%和2.10%;878头患病牛中产奶量越高的牛占的比例越大,3~5胎次奶牛多发,一年四季均可发病,且发病牛多继发其他围产期疾病,其中子宫内膜炎、胎衣不下、乳房炎和真胃变位的发病比例分别为24.12%、18.56%、15.26%和14.91%。结果说明,我国内蒙古、东北和山东地区围产期奶牛乳热症发病率较低,其发生主要与胎次、产奶量有关,患病奶牛易诱发围产期其他疾病,从而导致繁殖性能降低。本调查结果为我国北方奶牛场制定奶牛乳热症及围产期其他疾病的防控策略提供重要的数据信息,具有一定的实践指导意义。

关键词：围产期奶牛乳热症发病率调查

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饲喂巧克力对犬临床指标的影响

黑龙江畜牧兽医 2020年第8期 66-69页

作者：李玉芹陈浩杨研逄宾宾冯超杨艳斌曹荣峰青岛农业大学动物医学院/动物生殖障碍性疾病研究所山东青岛266109

为了了解犬在饲喂巧克力后临床指标的变化,给临床上犬巧克力中毒提供有诊断意义的临床指标,试验选取健康比格犬3只,每只饲喂巧克力80 g,在喂前1小时和喂后第2,4,6,12小时检测血常规指标,以及血液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和... 详细信息

为了了解犬在饲喂巧克力后临床指标的变化,给临床上犬巧克力中毒提供有诊断意义的临床指标,试验选取健康比格犬3只,每只饲喂巧克力80 g,在喂前1小时和喂后第2,4,6,12小时检测血常规指标,以及血液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和血糖(GLU)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调磷酸酶(CaN)含量,并记录心率、P(心房除极波)时限、PR(房室传导)间期、QRS(心室除极波)时限、QT(心室除极到复极)间期指标并分析。结果表明:犬饲喂80 g巧克力后,与喂前1小时比,心率在喂后第2,4小时显著加快(P0.05);血液生化指标CK活性在喂后第2小时显著升高(P0.05)。说明犬饲喂一定量的巧克力后心率明显加快,PR间期缩短,QRS时限延长,MCHC、CK活性及MCH、cAMP含量明显升高。

关键词：比格犬巧克力中毒肌酸激酶环磷酸腺苷心电图

肉食兽转铁蛋白受体(TfR)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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农业生物技术学报 2023年第1期31卷 196-202页

作者：张传美崔燕蕾温力森于永乐单虎杨海燕青岛农业大学动物医学院

转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)是一种位于细胞膜上的Ⅱ型跨膜二聚体糖蛋白，是犬(Canis lupus familiaris)、猫(Felinae)等肉食动物细小病毒(Carnivorous parvovirus)侵入宿主细胞的受体。为了建立一种检测肉食兽TfR基因表达... 详细信息

转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)是一种位于细胞膜上的Ⅱ型跨膜二聚体糖蛋白，是犬(Canis lupus familiaris)、猫(Felinae)等肉食动物细小病毒(Carnivorous parvovirus)侵入宿主细胞的受体。为了建立一种检测肉食兽TfR基因表达的TaqMan实时荧光定量PCR方法，并对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达进行检测分析。本研究参考GenBank中公布的犬、猫的TfR胞外区蛋白基因序列设计合成1对引物和1条特异性TaqMan探针，优化qPCR的反应体系和条件，构建阳性质粒，建立标准曲线，进行敏感性、重复性检验，并使用建立的方法对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达水平进行了检测分析。结果表明，本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法线性关系良好，相关系数为0.998 7；敏感性高，最低检测浓度为67 copies/μL；重复性好，批内和批间评价实验变异系数均小于2.0%。本研究建立了一种检测肉食兽TfR的qPCR方法，敏感性和重复性好，可用于肉食兽不同组织和传代细胞中TfR基因表达的检测。

关键词：肉食兽转铁蛋白受体(TfR) TaqMan荧光定量PCR 细小病毒

禽腺病毒4型fiber-2与8b型fiber截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2023年第12期54卷 5162-5170页

作者：迟丽丽王君娜张宇名刘健陈志远李树凡尹燕博徐守振青岛农业大学动物医学院青岛266109

利用原核表达系统表达Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)fiber2和8b型(FAdV-8b)fiber全长蛋白、截短蛋白及二价融合蛋白,并评价其免疫原性。基于FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber抗原性好的截短片段(FP和BP),利用SOE-PCR构建二价融合片段(BP-FP)... 详细信息

利用原核表达系统表达Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)fiber2和8b型(FAdV-8b)fiber全长蛋白、截短蛋白及二价融合蛋白,并评价其免疫原性。基于FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber抗原性好的截短片段(FP和BP),利用SOE-PCR构建二价融合片段(BP-FP),分别对截短蛋白、融合蛋白及全长(FL和BL)在大肠杆菌中进行表达,采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。纯化后的重组蛋白免疫SPF鸡并攻毒,计算各组存活率、间接ELISA检测免疫鸡血清抗体水平、qPCR检测泄殖腔拭子排毒量和肝脏中细胞因子IL-4、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平以及进行组织病理观察。结果显示:构建的重组质粒均在大肠杆菌中成功可溶表达;BP-FP4组存活率为58.3%,其他组存活率均为100%;全长组(FL组和BL组)抗体水平均高于各自片段组(FP组和BP组),但差异不显著(P>0.05);攻毒后3和7 d C8b组排毒量均显著高于免疫组(P0.05);免疫组IL-4、IFN-γ和TNF-αmRNA表达均显著高于阴性对照组(P0.05),BL组IL-4和IFN-γmRNA表达均显著低于BP-FP8b组(P研究表明FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber的全长蛋白和截短蛋白免疫保护效果优于融合蛋白,截短蛋白可替代全长蛋白用于制备禽腺病毒亚单位疫苗。

关键词：禽腺病毒纤突蛋白原核表达亚单位疫苗

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猫疱疹病毒1型的分离鉴定及生物学特性分析

病毒学报 2023年第4期39卷 1053-1061页

作者：陶伟杰刘雪娇宋晓莉程宝钰于永乐单虎张传美青岛农业大学动物医学院青岛266109

为了丰富对猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus⁃1,FHV⁃1)基因组变异情况的研究,并为疫苗研发提供候选毒株,本研究对250份猫眼鼻拭子和肺组织样品进行PCR检测,对FHV⁃1阳性样品进行氨基酸变异和系统发育分析,并进行毒株的分离鉴定及动物回... 详细信息

为了丰富对猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus⁃1,FHV⁃1)基因组变异情况的研究,并为疫苗研发提供候选毒株,本研究对250份猫眼鼻拭子和肺组织样品进行PCR检测,对FHV⁃1阳性样品进行氨基酸变异和系统发育分析,并进行毒株的分离鉴定及动物回归试验。结果显示,250份临床样品中FHV⁃1型阳性率为20.8%(52/250)。测序得到10个毒株的8个囊膜蛋白基因序列,氨基酸序列分析显示9个毒株的gI基因发生非同义突变(M165T),QN⁃1毒株gD基因发生非同义突变(A342T)。系统发育分析表明毒株间变异小、进化距离短。病原分离鉴定获得1株FHV⁃1毒株(命名为FHV/BJ⁃1),病毒滴度为10^(6.65) TCID_(50)/0.1 mL。动物回归试验结果显示,接毒组家猫在8 d内全部死亡,剖检及HE染色发现肺部病变严重,有淤血及炎性细胞浸润,气管缺少上皮细胞,且鼻组织、气管和肺组织的病毒载量最高。上述结果表明,FHV⁃1流行毒株基因保守性好,各毒株之间主要囊膜蛋白变异程度低。分离株FHV/BJ⁃1毒株为强毒株,是疫苗评价的理想毒株,为疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猫疱疹病毒1型序列分析分离鉴定动物回归试验

三株新型鸭源微RNA病毒分离毒株的全基因组序列分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：李继桐朱彤吕俊峰高月花胡峰于可响宋敏训王建琳李玉峰青岛农业大学动物医学院山东省农业科学院家禽研究所

分离新型鸭源微RNA病毒进行全基因组测序并进行遗传进化分析。对本实验室2021年不同来源的种鸭和肉鸭病料进行PCR检测，初步确定存在一种未知分类的新型微RNA病毒感染。取病死鸭病料组织处理后接种SPF鸡胚分离病毒，设计引物对分离到的... 详细信息

分离新型鸭源微RNA病毒进行全基因组测序并进行遗传进化分析。对本实验室2021年不同来源的种鸭和肉鸭病料进行PCR检测，初步确定存在一种未知分类的新型微RNA病毒感染。取病死鸭病料组织处理后接种SPF鸡胚分离病毒，设计引物对分离到的病毒进行PCR检测，通过重叠PCR方法进行全基因组扩增测序。将分离病毒各蛋白氨基酸序列两两比对，同时选取GenBank数据库中微RNA病毒代表毒株序列绘制系统进化树，并对主要蛋白P1、2C、3D序列比对分析。结果显示：共分离到三株微RNA病毒，分别命名为21101株、21016株和21075株（GenBank登录号：OQ927377-OQ927379）。基因组长度分别为7 445、7 445和7 447 bp，均包含一个编码2 141个氨基酸的开放阅读框（ORF），可划分为P1、P2、P3三个部分，符合微RNA病毒序列特征。基于全基因组序列遗传进化分析发现，三株分离病毒与本实验室前期分离的Duck/FC22/China/2017（GenBank登录号：MN102111）毒株及上海兽医研究所分离的Duck/AH15/CHN/2015（GenBank登录号：MT681985）位于同一分支，与鸭甲型肝炎病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV）遗传距离最近。分离的三株鸭源微RNA病毒进行全基因组测序及遗传进化分析发现，与目前已知的两株微RNA毒株为同一类新型鸭源微RNA病毒。

关键词：新型微RNA病毒分离鉴定基因组测序遗传进化分析

山东地区牛病毒性腹泻病毒遗传进化分析及临床毒株分离鉴定

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中国动物传染病学报 2023年

作者：李树凡张宇名陈志远迟丽丽刘健于泽海张玫瑜徐守振青岛农业大学动物医学院

为了解山东地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV）遗传进化情况，本研究采用RT-PCR对2019-2021年山东地区10个地市27家规模化奶牛场收集的76份BVDV阳性样品进行5’UTR及部分阳性样品E2扩增，并构建系统进化树及选取部分阳性样品中... 详细信息

为了解山东地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV）遗传进化情况，本研究采用RT-PCR对2019-2021年山东地区10个地市27家规模化奶牛场收集的76份BVDV阳性样品进行5’UTR及部分阳性样品E2扩增，并构建系统进化树及选取部分阳性样品中的病毒进行分离鉴定。结果显示，76份样品中存在BVDV-1a、1c、1m、1o、1q和1v 6种BVDV 1型亚型；在筛选到的32株代表毒株中优势亚型为BVDV-1m（37.5%），其次为BVDV-1q（25.00%）和1v（15.63%）；济南、德州及烟台地区BVDV亚型流行情况较其他地区复杂；成功分离得到一株致细胞病变型BVDV毒株。结果表明，山东地区规模化奶牛场存在众多BVDV亚型流行，应采取相应措施对该病进行综合防控。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 系统进化树分离鉴定

猫细小病毒的遗传演化及分离毒株的致病性分析

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畜牧兽医学报 2022年第9期53卷 3121-3131页

作者：程宝钰李子荷崔燕蕾李嘉慧杨鑫玮于永乐杨海燕单虎张传美青岛农业大学动物医学院青岛266109

本研究旨在了解猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)流行株的遗传演化情况及分离毒株的致病性。2018—2020年,在山东地区采集54份疑似猫瘟粪便拭子,并通过PCR和VP2基因克隆进行VP2基因全长测序,构建遗传进化树,并推导出氨基酸序列并与... 详细信息

本研究旨在了解猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)流行株的遗传演化情况及分离毒株的致病性。2018—2020年,在山东地区采集54份疑似猫瘟粪便拭子,并通过PCR和VP2基因克隆进行VP2基因全长测序,构建遗传进化树,并推导出氨基酸序列并与疫苗株进行比对,分析遗传变异情况。用F81细胞分离培养1株FPV毒株,命名为FPV-QDC20,经电镜观察、间接免疫荧光、血凝试验、TCID测定、全基因测序及动物回归试验研究该毒株生物学特性。结果表明,采集样品中16份样品VP2基因全长测序成功,其中,15份为FPV,1份为猫源犬细小病毒(CPV)。构建系统进化树显示,本研究的FPV毒株均处于同一大分支,与中国其他地区已发表的FPV毒株亲缘关系较近,与欧洲分离株以及疫苗株亲缘关系较远。氨基酸序列分析表明,某些关键位点的改变可能导致宿主范围和感染性的改变,有可能导致免疫失败情况发生。毒株QDBL2毒株中出现了80、93、103三个FPV保守位点的变异,或许与犬猫细小病毒的共感染和重组有关。动物回归试验表明,毒株FPV-QDC20有较强致病性,试验猫出现典型的临床症状和病理变化,并最终死亡。本研究有助了解我国FPV毒株遗传演化方向,为将来的疫病监控和疫苗研究提供参考。

关键词：猫细小病毒 VP2基因遗传演化致病性

青岛地区鸭源四环素类耐药大肠杆菌流行情况调查及耐药基因分析

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中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4681-4692页

作者：崔艳丽马策崔云昊高轶豪田慧莹高梦婷宋茜刘德俊张启迪刘志海青岛农业大学化学与药学院青岛266109 青岛农业大学动物医学院青岛266109 天津农学院动物医学院天津300384 中国农业大学动物医学院北京100193 河南农业大学动物医学院郑州450000

【目的】通过对山东青岛地区鸭源样品进行四环素类耐药大肠杆菌的分离鉴定,了解其流行分布规律。对耐药菌株进行药敏检测及耐药基因鉴定,研究四环素类耐药大肠杆菌多重耐药率及耐药基因携带情况,为抗生素的合理应用提供理论依据。【方... 详细信息

【目的】通过对山东青岛地区鸭源样品进行四环素类耐药大肠杆菌的分离鉴定,了解其流行分布规律。对耐药菌株进行药敏检测及耐药基因鉴定,研究四环素类耐药大肠杆菌多重耐药率及耐药基因携带情况,为抗生素的合理应用提供理论依据。【方法】以肉鸭泄殖腔拭子及盲肠样本为试验材料,通过四环素选择培养基分离大肠杆菌。采用琼脂稀释法测定耐药菌株对12种抗菌药物的敏感性,通过PCR检测四环素类耐药大肠杆菌携带耐药基因情况,进一步通过接合试验评估tet(X)基因的可转移性,进而对部分tet(X)基因阳性菌株进行全基因组测序,同时探究tet(X)耐药基因的遗传环境特征。【结果】采集的63份样品经分离鉴定,获得48株四环素耐药大肠杆菌,分离率为76.19%。药敏试验结果显示,所有菌株对四环素和土霉素耐药,对多西环素和氟苯尼考耐药率分别为93.75%和89.59%,且对多黏菌素、替加环素及美罗培南耐药率分别为64.58%、16.67%和4.17%;所有菌株均存在多重耐药现象,其中以耐7种药物最多。耐药基因检测结果与耐药情况基本相对应,耐药率高的药物相应耐药基因呈现较高携带率;其中floR、tet(A)、qnrS、mcr-1、bla CTX-M基因流行率较高,依次为93.75%、83.33%、79.17%、77.08%和47.92%。8株替加环素耐药菌中,仅2株携带了已知基因tet(X4),其中1株tet(X4)基因具有可转移性;2株美罗培南耐药菌中仅1株检测到了碳青霉烯耐药基因bla NDM,其他菌株均未检测到已知耐药基因,表明这些菌株中可能存在未知替加环素/碳青霉烯类耐药机制。与之相反的是,37株mcr-1基因阳性菌株中,6株对多黏菌素仍表现敏感,表明这些菌中的mcr-1基因的耐药功能并未成功发挥。【结论】四环素类耐药大肠杆菌已在肉鸭中广泛流行,多重耐药基因介导的多重耐药现象已十分严峻,且耐药机制复杂多样;进一步增加了食品安全风险,威胁人类健康。因此,应加强鸭源耐药菌的监测及研究,提高养殖业合理用药水平。

关键词：肉鸭四环素耐药大肠杆菌 tet(X4)基因