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磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化

陕西师范大学学报（自然科学版） 2011年第3期39卷 73-77页

作者：魏丽丽强荣兵张楠楠刘月月侯颖春肿瘤分子细胞生物学实验室陕西师范大学生命科学学院陕西西安710062

为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数：转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细... 详细信息

为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数：转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%~60%汇合率、8μg质粒用量（直径30 mm培养皿）、20~30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调（P〈0.05）.

关键词：磷酸钙转染法细胞转染转染效率肝癌细胞

FAK基因表达对人结直肠癌细胞增殖及运动的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第9期25卷 783-786页

作者：潘宁章蔼然牟茂森侯颖春陕西师范大学生命科学学院肿瘤细胞分子生物学实验室陕西西安710062

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对FAK基因不同靶点设计siRNA序列,构建siRNA重组子,转染Caco-2细胞,以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测FAK mRNA和蛋白表达变化及时间效应,同时检测FAK基因敲低对... 详细信息

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对FAK基因不同靶点设计siRNA序列,构建siRNA重组子,转染Caco-2细胞,以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测FAK mRNA和蛋白表达变化及时间效应,同时检测FAK基因敲低对Caco-2细胞的凋亡、增殖及迁移的影响。结果:FAK siRNA导入Caco-2细胞后,FAK mRNA和蛋白表达水平明显下调,细胞增殖及迁移能力受抑,呈时间依赖关系,FAK mRNA水平下调在转染后48h达到最大。结论:FAK siRNA可有效抑制靶基因表达,FAK表达水平下调后Caco-2细胞的增殖及运动明显受抑制。

关键词：小干扰RNA 结直肠癌 FAK 细胞增殖细胞运动

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LEF-1表达与肿瘤进程研究进展

中国细胞生物学学报 2011年第10期33卷 1152-1157页

作者：葛玉婷杨艳丽李鹏鸽尹田乐侯颖春陕西师范大学生命科学学院肿瘤分子细胞生物学实验室西安710062

淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)属于高迁移组分(HMG)家族,它与TCRα的增强子相互作用形成特定的构象,从而与其它因子结合共同调节基因的表达。LEF-1作为核内的转录因子介导Wnt信号通路,对细胞的增殖、分化和凋亡起... 详细信息

淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)属于高迁移组分(HMG)家族,它与TCRα的增强子相互作用形成特定的构象,从而与其它因子结合共同调节基因的表达。LEF-1作为核内的转录因子介导Wnt信号通路,对细胞的增殖、分化和凋亡起重要作用。近年来,研究显示许多肿瘤的发生与Wnt信号通路的异常有关,而LEF-1在肿瘤的发生发展侵润过程中起重要作用。同时,LEF-1是一个多启动子基因,编码产生致瘤的全长形式的LEF-1和对Wnt信号通路起负向调控作用的截短形式的LEF-1。研究结果表明,肿瘤的发生发展与LEF/TCF各亚型的比例有关。因此,研究LEF-1的结构、功能以及其在细胞增殖、细胞存活、肿瘤的发生发展过程中的作用意义重大。该文就LEF-1的表达以及与肿瘤的关系作一综述。

关键词：淋巴增强因子-1 Wnt信号通路肿瘤发展

生物亲和性壳聚糖-二氧化硅复合纳米粒子的合成及其吸附DNA特性研究

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化学学报 2011年第20期69卷 2486-2492页

作者：张李娜郭志慧郑行望汪绒孟美荣屈颖娟刘全宏姚莎陕西省生命分析化学重点实验室陕西师范大学化学与材料科学学院西安710062 陕西师范大学生命科学学院西安710062

采用反相微乳液法制备了壳聚糖-二氧化硅复合纳米粒子,通过透射电镜(TEM)、红外光谱方法、Zeta电位实验等对所合成的复合纳米粒子的结构和性质等进行了表征.结果显示,基于壳聚糖与silica之间超分子作用所形成的复合纳米粒子呈规则的球形... 详细信息

采用反相微乳液法制备了壳聚糖-二氧化硅复合纳米粒子,通过透射电镜(TEM)、红外光谱方法、Zeta电位实验等对所合成的复合纳米粒子的结构和性质等进行了表征.结果显示,基于壳聚糖与silica之间超分子作用所形成的复合纳米粒子呈规则的球形,粒径为50 nm左右,具有良好的单分散性和微孔结构,Zeta电位测定结果表明复合纳米粒子具有正的ζ(Zeta)电位值.基于复合纳米粒子的微孔结构和显正电性,以小牛胸腺DNA为对象研究了复合纳米粒子对DNA的吸附特性.研究结果表明在pH=6的磷酸盐(PBS)缓冲中,复合纳米粒子不但呈现出对小牛胸腺DNA良好的吸附能力,而且还由于壳聚糖与SiO2纳米材料的复合而展现出优良的抗酶切割能力和细胞亲和性.据此发现,我们发展了一种有望用于向细胞内转载DNA的新材料.

关键词：壳聚糖-二氧化硅复合纳米粒子反相微乳液法小牛胸腺DNA

棉花NLP(NIN-Like Protein)基因家族的全基因组鉴定及表达分析

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中国农业科学 2023年第19期56卷 3723-3747页

作者：丁国华肖光辉竺丽萍陕西师范大学生命科学学院

【目的】全基因组范围内探究棉花NLP转录因子的结构特点及进化特征，深入了解棉花NLP转录因子表达模式，为后续NLP的功能研究和利用奠定基础。【方法】采用BLASTP和HMMsearch 2种策略进行搜索，鉴定亚洲棉、雷蒙德氏棉、海岛棉、陆地棉... 详细信息

【目的】全基因组范围内探究棉花NLP转录因子的结构特点及进化特征，深入了解棉花NLP转录因子表达模式，为后续NLP的功能研究和利用奠定基础。【方法】采用BLASTP和HMMsearch 2种策略进行搜索，鉴定亚洲棉、雷蒙德氏棉、海岛棉、陆地棉4种棉花全基因组范围内的NLP转录因子家族成员。对确认后的棉花NLP家族成员进一步展开生物信息学分析，利用在线软件Expasy对分子量、理论等电点等理化性质进行预测；使用MEGA 7软件构建系统进化树；通过网站MEME进行蛋白保守基序分析；运用在线软件GSDS 2.0分析基因结构；TBtools进行染色体定位绘制；McscanX进行棉花NLP家族复制基因分析；利用PlantCARE网站预测棉花NLP基因家族启动子元件；通过TBtools绘制不同组织及非生物胁迫下棉花NLP基因表达热图，分析组织表达特性和响应非生物胁迫的特征。通过RT-qPCR分析缺氮和复氮处理后棉花NLP基因的表达情况。【结果】从亚洲棉、雷蒙德氏棉、海岛棉、陆地棉蛋白数据库中分别筛选出11、11、21和22个NLP转录因子成员，家族蛋白序列长度为693—996个氨基酸，相对分子质量为76.92—110.02 kDa，理论等电点为5.13—7.77，亚细胞定位几乎均定位于细胞核中，NLP基因启动子区发现大量激素响应和逆境响应顺式作用元件。系统进化分析将棉花NLP蛋白分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组，基因复制分析发现片段复制是NLP基因在棉花中扩张的主要方式。Ka/Ks均小于1显示棉花中NLP基因进化主要经历纯化选择。表达分析结果也证实棉花GHNLPs响应氮饥饿和复氮过程。【结论】从亚洲棉、雷蒙德氏棉、海岛棉、陆地棉中分别鉴定获得11、11、21和22个NLP转录因子成员，它们之间具有较高的保守性，又有一定程度的差异。陆地棉GHNLPs在缺氮及复氮处理过程中表达量发生显著变化，可能在棉花响应硝酸盐过程中具有一定作用。

关键词：棉花 NLP转录因子氮信号生物信息学

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多功能蛋白Geminin的研究进展

生物化学与生物物理进展 2007年第9期34卷 915-924页

作者：杨宁柳惠图张伟北京师范大学生命科学学院细胞增殖与调控生物学教育部重点实验室北京100875

Geminin是一种定位于核内的多功能小分子蛋白,具有相对复杂的结构模式,在细胞增殖、胚胎发育及肿瘤发生等多方面均发挥重要作用.它通过调节细胞周期时相中的重要事件作用于细胞增殖:经多种途径参与DNA复制的调节;抑制中心体重复复制;推... 详细信息

Geminin是一种定位于核内的多功能小分子蛋白,具有相对复杂的结构模式,在细胞增殖、胚胎发育及肿瘤发生等多方面均发挥重要作用.它通过调节细胞周期时相中的重要事件作用于细胞增殖:经多种途径参与DNA复制的调节;抑制中心体重复复制;推进G2/M期和维持正常胞质分裂等.在不同发育阶段,Geminin可作为抑制因子或是诱导因子参与胚胎发育的调节,特别是在神经形成方面.通过与同源异型盒基因或蛋白Six3及Hox等的相互作用,Geminin分别在眼睛发育及胚胎发育过程中起调节作用,并且表现出在细胞增殖与分化中协调因子的功能.近年来Geminin在肿瘤中的作用已成为研究的重点,它可作为评价肿瘤发生进程和预后的标志分子,并可望是一个新的肿瘤治疗的作用靶点.对Geminin活性的调节主要表现在转录水平和转录后水平,转录后水平的调节可能占主要地位.

关键词： Geminin 细胞增殖胚胎发育肿瘤

超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜功能的损伤研究

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中国生物医学工程学报 2010年第6期29卷 894-900页

作者：赵向宏王筱冰赵萍李秀娟崔兴业王攀陕西师范大学生命科学学院西安710062

探讨超声结合原卟啉Ⅸ(PPⅨ)对S180肿瘤细胞膜功能的影响及其作用机制。采用频率为1.1 MHz,强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的PPⅨ作用于S180肿瘤细胞,借助于流式细胞仪,采用荧光探针DCFH-DA(2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯)、FD500... 详细信息

探讨超声结合原卟啉Ⅸ(PPⅨ)对S180肿瘤细胞膜功能的影响及其作用机制。采用频率为1.1 MHz,强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的PPⅨ作用于S180肿瘤细胞,借助于流式细胞仪,采用荧光探针DCFH-DA(2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯)、FD500(异硫氰酸荧光素钠标记的右旋糖酐)、DiBAC4(3)和Fluo3-AM分别检测胞内活性氧生成量、细胞膜通透性、质膜电位及胞内游离Ca2+的浓度变化。研究结果表明,超声结合PPⅨ比单纯超声或单纯PPⅨ对细胞膜功能损伤作用都强,这种损伤作用可能与影响质膜功能的活性氧含量、细胞膜通透性、质膜电位以及胞内游离Ca2+浓度变化相关。

关键词：超声原卟啉Ⅸ 细胞膜损伤

原卟啉Ⅸ介导的声动力疗法对S180肿瘤细胞膜损伤研究

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中国生物医学工程学报 2013年第4期32卷 397-402页

作者：薛沁王筱冰刘全宏陕西师范大学生命科学学院西安710062

探讨频率为1.1 MHz、强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的原卟啉Ⅸ(PpⅨ)对S180肿瘤细胞膜结构和功能的损伤作用。超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,通过酸性磷酸酶活力检测细胞生长活力;扫描电子显微镜观测细胞膜表面超微结构;生... 详细信息

探讨频率为1.1 MHz、强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的原卟啉Ⅸ(PpⅨ)对S180肿瘤细胞膜结构和功能的损伤作用。超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,通过酸性磷酸酶活力检测细胞生长活力;扫描电子显微镜观测细胞膜表面超微结构;生化分析方法检测Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性,细胞膜唾液酸(SA)及细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;通过荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位及细胞色素C氧化酶含量。实验结果显示:与对照组(Control)、原卟啉Ⅸ组(PpⅨ)、超声组相比,超声联合PpⅨ处理组的细胞生长明显受到抑制,其酸性磷酸酶活力(OD值)由对照组0.63±0.03下降至0.34±0.01;细胞膜结构严重破坏,表现为微绒毛消失和胞质部分成分流失;膜表面重要成分如Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性明显下降(P细胞膜唾液酸含量及胞内GSH水平急剧降低(P肿瘤细胞后,细胞膜蛋白受到严重破坏,部分膜蛋白流失。研究结果还提示:声动力处理后细胞线粒体膜电位水平显著降低(Rhodamin 123平均荧光强度由对照组14 082.78±840.44下降至7 801.53±409.15);细胞色素C氧化酶活性由对照组的(0.015 6±0.002 0)U/min/mg降低至(0.008±0.000 0)U/min/mg,提示线粒体也可能是超声联合PpⅨ对S180肿瘤细胞的作用靶点。

关键词：聚焦超声原卟啉Ⅸ 细胞膜

通过抑制自噬作用增强声动力学疗法诱导的肿瘤细胞凋亡研究

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中国生物医学工程学报 2015年第1期34卷 62-69页

作者：冯晓兰王攀王筱冰陕西师范大学生命科学学院西安710062

探讨声动力疗法诱导S180细胞凋亡过程中自噬现象的发生及其在细胞凋亡中的作用。用频率为1.1MHz、功率为3 W/cm2的超声,结合1μg/m L原卟啉Ⅸ作用于S180细胞,MTT检测细胞存活率;DAPI染色检测凋亡细胞核形态变化;Rhodamine 123染色检测... 详细信息

探讨声动力疗法诱导S180细胞凋亡过程中自噬现象的发生及其在细胞凋亡中的作用。用频率为1.1MHz、功率为3 W/cm2的超声,结合1μg/m L原卟啉Ⅸ作用于S180细胞,MTT检测细胞存活率;DAPI染色检测凋亡细胞核形态变化;Rhodamine 123染色检测线粒体膜电位;Western blotting检测自噬标记分子LC3由Ⅰ型向Ⅱ型的转化;吖啶橙(AO)活细胞染色观察自噬小体。声动力处理后,S180细胞明显受损,MTT显示存活率为59.3%并且出现了典型的凋亡形态学特征,线粒体膜电位下降至MFI=971.28,LC3-II表达明显升高;利用自噬和凋亡的抑制剂实验结果提示自噬体的形成(1 h)早于细胞凋亡的发生(8 h),自噬抑制剂3-MA和Ba A1增强了SDT对线粒体膜电位的破坏,DAPI染色进一步证实了自噬抑制剂有利于促进SDT诱导的S180细胞凋亡。提示自噬参与了SDT诱导的S180细胞死亡,自噬特异性药物抑制剂增强了SDT诱导的细胞凋亡。

关键词：声动力疗法细胞凋亡细胞自噬 S180细胞