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小沙冬青对干旱胁迫的生理响应和转录组分析

生态学报 2024年

作者：杨瑛斌付国香郝文芳西北农林科技大学生命科学学院博济医药科技股份有限公司

利用分子育种技术培育耐旱植物的过程中，了解植物的抗旱机制和拥有大量的候选基因是必要的。耐旱植物是了解耐旱机制和挖掘耐旱基因的优秀材料。本研究以小沙冬青为材料，通过聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG-6000）模拟干旱胁迫，... 详细信息

利用分子育种技术培育耐旱植物的过程中，了解植物的抗旱机制和拥有大量的候选基因是必要的。耐旱植物是了解耐旱机制和挖掘耐旱基因的优秀材料。本研究以小沙冬青为材料，通过聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG-6000）模拟干旱胁迫，研究胁迫开始后0、1、3、6、12 h的小沙冬青幼苗叶片光合色素、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸（Pro）含量，利用RNA-Seq技术对小沙冬青叶片进行转录组测序。分析结果表明，干旱胁迫下，小沙冬青叶片中可溶性糖、Pro、叶片光合色素含量增加。SOD、POD对干旱响应迅速，活性显著增加，这对消除干旱引起的过量活性氧具有重要作用。而CAT在12h内未对干旱做出有效响应。转录组分析鉴定到15188个差异表达基因，其中共差异表达基因有805个，上调表达的基因数量和下调表达的基因数量相近。在GO富集分析中，这805个基因在“核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶”和“脱落酸激活信号通路的负调控”途径中大量富集。P-value最小的四条通路（“叶绿素结合”、“光系统Ⅱ”、“光合作用”，“光捕捉、光系统Ⅰ”）均与光合作用相关。KEGG分析表明，共差异表达基因主要富集在包括“光合作用-天线蛋白”、“光合生物中的碳固定”在内的6条代谢途径中。在小沙冬青中，7-羟甲基叶绿素a还原酶在干旱胁迫下持续下调表达，抑制了叶绿素的降解，有效保护了光合系统。本研究还重点关注了植物激素的信号转导途径，发现脱落酸信号通路发生明显改变。此外，茉莉酸信号通路中茉莉酸ZIM结构域蛋白（JAZ）的响应相较于其他物种有明显的不同。研究结果为小沙冬青适应干旱环境的生理和分子机制提供新的证据，并为后续抗旱相关候选基因克隆及功能验证奠定了基础。

关键词：小沙冬青干旱胁迫生理特性转录组分析

金磁微粒介导的盐酸克伦特罗多克隆抗体的纯化

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第5期34卷 18-22,26页

作者：汪慧蓉朱宏莉惠文利张志锋陈超崔亚丽西北大学生物芯片研发中心暨国家微检测系统工程技术研究中心陕西西安710069 陕西西大北美基因股份有限公司陕西西安710069

以重氮化法制备盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CBL-BSA)抗原并免疫家兔制备多克隆抗体,将表面固定有BSA的金磁微粒(金磁微粒-BSA)与多克隆抗体反应,抗BSA抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离,利用ELISA法对纯化前后抗CBL及... 详细信息

以重氮化法制备盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CBL-BSA)抗原并免疫家兔制备多克隆抗体,将表面固定有BSA的金磁微粒(金磁微粒-BSA)与多克隆抗体反应,抗BSA抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离,利用ELISA法对纯化前后抗CBL及抗BSA抗体的效价进行测定,确定最佳纯化条件,得到高纯度的抗CBL抗体。结果表明,通过一步反应．可实现载体蛋白BSA在金磁微粒表面的固定化,每毫克金磁微粒固定 BSA的容量可达236 μg;在最佳纯化条件(温度4C,反应时间2h,金磁微粒表面BSA质量与抗体质量比为7:1) 下,金磁微粒-BSA可有效地去除偶联物多克隆抗体中的抗BSA抗体,而纯化前后抗CBL抗体的效价基本保持不变,分离纯化效果较好。该方法可方便、快速地去除多克隆抗体中的无关抗体,对小分子半抗原多克隆抗体的纯化具有重要意义。

关键词：盐酸克伦特罗金磁微粒亲和吸附抗体纯化

hTrx基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 295-297页

作者：李敏杰刘勇赵建军王全颖杨广笑西安交通大学神经科学中心陕西西安710061 西安华广生物有限公司陕西西安710061

目的 :构建携带人Trx(硫氧还蛋白 )基因的逆转录病毒载体。方法 :用DNA重组技术 ,将人Trx基因定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN ,用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行酶切鉴定。以磷酸钙转染法 ,将重组的逆转录病毒载体转染入包装细胞系PA3... 详细信息

目的 :构建携带人Trx(硫氧还蛋白 )基因的逆转录病毒载体。方法 :用DNA重组技术 ,将人Trx基因定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN ,用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行酶切鉴定。以磷酸钙转染法 ,将重组的逆转录病毒载体转染入包装细胞系PA317,并用G4 18筛选的方法测定转染细胞上清中病毒的滴度。结果 :构建了重组逆转录病毒载体 ,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切 ,电泳出现两个条带 ,分别为 0 .3kb和 5 .9kb。转染细胞上清中病毒滴度为 5 .5× 10 9cfu/L。提示构建携带人Trx基因的逆转录载体成功。结论 :携带人Trx基因的逆转录病毒载体成功构建为Trx基因的治疗。

关键词：人硫氧还蛋白逆转录病毒载体基因重组

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链亲和素-磁性微粒的制备及其应用

中国科学（B辑） 2006年第4期36卷 353-360页

作者：张志锋朱宏莉唐一通崔婷耿婷婷陈超崔亚丽西北大学生物芯片研发中心暨国家微检测系统工程技术研究中心西安710069 陕西西大北美基因股份有限公司西安710069

通过物理吸附和共价作用机制,制备两种链亲和素-磁性微粒,即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒,并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究;采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力;分别以紫外吸收和固相核酸杂... 详细信息

通过物理吸附和共价作用机制,制备两种链亲和素-磁性微粒,即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒,并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究;采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力;分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法,测定两种链亲和素-磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性,并与Dynabeads（R）M-270 Streptavidin进行比较.结果表明：通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒,适用于核酸杂交与检测常用的STE（Tris-NaCl-EDTA）缓冲系统,通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒,适用于STE和磷酸盐（PBS）缓冲系统;1 mg链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素的最大结合容量分别为4950和5115 pmol;对生物素标记寡核苷酸探针（24 mer）的结合容量分别为2839和2978 pmol,测定结果均是Dynabeads（R）M-270 Streptavidin的6～7倍;与FITC-标记互补寡核苷酸的杂交结果表明,固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学活性.

关键词：链亲和素磁性微粒制备应用

应用Real Time PCR方法检测病毒灭活去除效率

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西北大学学报（自然科学版） 2007年第4期37卷 613-616页

作者：黄亮高婧杜燕华但宁陈超河南工业大学生物工程学院河南郑州450052 西北大学国家微检测系统工程技术研究中心陕西西安710069 陕西北美基因股份有限公司陕西西安710069

目的建立检测血液制品中病毒灭活去除效率的模型。方法应用SYBR GREEN I实时荧光定量PCR验证不同方法的病毒去除效率,并用病毒感染力实验验证不同方法的病毒灭活效率。结果以PCR产物为外参的实时荧光定量PCR正确反映出实际核酸含量和检... 详细信息

目的建立检测血液制品中病毒灭活去除效率的模型。方法应用SYBR GREEN I实时荧光定量PCR验证不同方法的病毒去除效率,并用病毒感染力实验验证不同方法的病毒灭活效率。结果以PCR产物为外参的实时荧光定量PCR正确反映出实际核酸含量和检出拷贝数的线性关系,以重组质粒为外参的实时荧光定量PCR实验证明巴氏灭毒法的病毒去除效率低于金磁颗粒法。病毒感染力实验证明巴氏灭毒法灭活效率略高于金磁颗粒法。结论实时荧光定量PCR法联合病毒感染力试验可以有效评价不同方法在病毒灭活和病毒去除方面的差异。

关键词：实时荧光定量PCR 病毒灭活去除效率

掌叶大黄转录因子RpMYB4基因克隆及分子表达特性

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药学学报 2021年第4期56卷 1170-1177页

作者：李元敏张娜李慧张明英彭亮颜永刚李依民张岗陕西中医药大学药学院/陕西省秦岭中草药应用开发工程技术研究中心陕西西安712046 陕西省天芪生物科技有限责任公司陕西榆林718400

MYB转录因子在植物生长发育、次生代谢及逆境胁迫等过程中发挥重要的转录调控作用。本实验在掌叶大黄转录组数据库中筛选一个包含完整开放阅读框(ORF)的MYB家族成员序列,首次克隆获得RpMYB4基因ORF,编码一条245个氨基酸的多肽,分子质量... 详细信息

MYB转录因子在植物生长发育、次生代谢及逆境胁迫等过程中发挥重要的转录调控作用。本实验在掌叶大黄转录组数据库中筛选一个包含完整开放阅读框(ORF)的MYB家族成员序列,首次克隆获得RpMYB4基因ORF,编码一条245个氨基酸的多肽,分子质量为26.99 kDa,N端含有R^(2)R3-MYB亚家族典型的2个DNA保守结合域(HTH-MYB),无信号肽或跨膜域,与其他植物物种MYB转录因子多序列比对均高达61%以上,系统进化分析显示与FtMYB8关系最近,共同聚在S4亚家族。亚细胞定位结果显示RpMYB4-GFP定位在烟草细胞核内。实时荧光定量分析表明RpMYB4的组织表达有差异,叶中表达量最高,依次为叶柄、根茎、根及种子;受200μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)处理,RpMYB4表达在24 h内持续下调,200μmol·L^(-1)水杨酸(SA)处理在12和24 h显著上调,该基因对200μmol·L^(-1)脱落酸(ABA)处理未见明显变化;RpMYB4基因受干旱、高温及损伤胁迫诱导,分别在24、24、3 h处达峰值,低温胁迫抑制其表达,6 h呈谷值,其对盐胁迫响应不显著。首次获得掌叶大黄RpMYB4基因,在叶片和叶柄中表达量高,受激素SA与干旱、高温及损伤胁迫等诱导表达,为后续研究其在大黄次生代谢及逆境胁迫中的分子作用奠定基础。

关键词：掌叶大黄转录因子 MYB 基因表达胁迫

生物素标记重组猪圆环病毒2d基因型毒株感染性克隆的构建与鉴定

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中国兽医杂志 2022年第5期58卷 16-21,28页

作者：林小枫刘梅雪袁玮艺张琼歌朱磊杜谦西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 杨凌金海生物技术有限公司陕西杨凌712100

本试验旨在获得临床上逐渐增多的猪圆环病毒2d基因型毒株(PCV2d),并对其引入生物素标记。首先从陕西咸阳某临床发病猪场采集了2头发病仔猪和15头未发病仔猪的组织样本,对其进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测,并对阳性样本进行测序及序列比对... 详细信息

本试验旨在获得临床上逐渐增多的猪圆环病毒2d基因型毒株(PCV2d),并对其引入生物素标记。首先从陕西咸阳某临床发病猪场采集了2头发病仔猪和15头未发病仔猪的组织样本,对其进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测,并对阳性样本进行测序及序列比对,将获得的PCV2d基因型毒株基因组orf 2中226~246 bp序列替换为生物素受体肽(BAP)编码序列并克隆入质粒载体,同时稳定构建表达原核生物素连接酶(BirA)的PK15细胞系,将替换有BAP的PCV2d基因组酶切并环化后转染稳定表达BirA的PK15细胞,连续盲传5代后鉴定获得的重组病毒。结果显示,检测的组织样本中共有5头仔猪的样本为PCV2阳性,其中1份样本为PCV2d基因型,4份样本为PCV2b基因型;在获得BAP序列替换的PCV2d,构建重组质粒T-PCV2d-BAP和稳定表达BirA的PK15细胞系后,将环化的PCV2d-BAP转染稳定表达BirA的PK15细胞并盲传5代,经PCR和Western blot检测均为PCV2阳性,且能被链酶亲和素识别。本试验成功获得的生物素标记重组PCV2d基因型毒株为后续探究PCV2d基因型毒株免疫逃避机制提供一个非常有效的工具。

关键词：猪圆环病毒2型原核生物素连接酶-生物素受体肽系统基因型感染性克隆

D16S539基因座中检出三带型等位基因及遗传分析

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2015年第2期36卷 143-145页

作者：宋晓丽赵奇刘晓云王继华才蕾广州万孚生物技术股份有限公司广东广州510641 广州正孚检测技术有限公司广东广州510663 陕西北美法医司法鉴定所陕西西安710069

目的:在亲子鉴定案件中检出的D16S539基因座三带型.方法:提取个体不同组织样本DNA,经两种扩增试剂盒检测及DNA测序分析.结果:被检母亲D16S539基因座分型结果为9/10/11,阴阳性对照分型结果准确.结论:D16S539三带型非常罕见,该个体为正常... 详细信息

目的:在亲子鉴定案件中检出的D16S539基因座三带型.方法:提取个体不同组织样本DNA,经两种扩增试剂盒检测及DNA测序分析.结果:被检母亲D16S539基因座分型结果为9/10/11,阴阳性对照分型结果准确.结论:D16S539三带型非常罕见,该个体为正常成年女性,推测此三带型突变来源于杂合子局部的染色体重排或非整倍染色体.

关键词：短串联重复序列(STR) 三带型等位基因 D16S539 遗传分析

猪圆环病毒及疫苗研究进展和猪圆环病毒病的防控措施

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河南畜牧兽医（市场版） 2018年第10期39卷 32-35页

作者：汤建立王雅婷李进明曾松林武汉科前生物股份有限公司湖北武汉430000 陕西中科基因检测技术有限公司唐山联强畜牧药业有限公司

猪圆环病毒病(PCVD)是由Ⅱ型猪圆环病毒(PCV-2)感染引起的,主要以猪免疫力下降、生长迟缓、繁殖障碍、呼吸障碍、皮肤疾病等为特征的一类严重危害养猪业健康发展的传染性疾病。根据其感染猪只生长阶段及临床表现的不同可以分为一系列的... 详细信息

猪圆环病毒病(PCVD)是由Ⅱ型猪圆环病毒(PCV-2)感染引起的,主要以猪免疫力下降、生长迟缓、繁殖障碍、呼吸障碍、皮肤疾病等为特征的一类严重危害养猪业健康发展的传染性疾病。根据其感染猪只生长阶段及临床表现的不同可以分为一系列的症候群,包括:断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪繁殖障碍综合征(SRDS)等。

关键词：猪圆环病毒病断奶仔猪多系统衰竭综合征繁殖障碍综合征猪呼吸道疾病综合征猪皮炎肾病综合征防控疫苗 PCV-2