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Humanin对鱼藤酮诱导的多巴胺神经元毒性的保护作用研究

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陆军军医大学学报 2024年第7期46卷 670-677页

作者：单耀辉张启夫程晋叶枫张玺余文珮王晓刚赵远鹏但国蓉陈明亮赛燕陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系防化医学教研室重庆400038

目的探讨Humanin(HN)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的多巴胺神经元毒性损伤的保护作用和机制。方法构建Rot染毒PC12细胞模型,实验设对照组、Rot染毒组、HN预处理Rot染毒组、单独HN处理组。采用ELISA检测Rot染毒细胞内外HN的含量,CCK-8法... 详细信息

目的探讨Humanin(HN)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的多巴胺神经元毒性损伤的保护作用和机制。方法构建Rot染毒PC12细胞模型,实验设对照组、Rot染毒组、HN预处理Rot染毒组、单独HN处理组。采用ELISA检测Rot染毒细胞内外HN的含量,CCK-8法检测细胞活性,ATP检测试剂盒检测细胞内ATP含量,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,Western blot分别检测线粒体自噬调控蛋白Pink1、Parkin、p-Parkin、p62、LC3,线粒体生物发生调控蛋白PGC1α和分裂/融合调控蛋白OPA1、MFN2、DRP1、p-DRP1以及抗氧化应激调控蛋白Keap1、Nrf2的表达。采用HBAD-mcherry-EGFP-LC3腺病毒转染细胞观察自噬体和自噬溶酶体的数量。结果Rot染毒组PC12细胞内HN浓度显著高于对照组(P<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞活性下降,ATP含量下降,ROS的生成增加,Rot染毒后PC12细胞内Pink1、p-Parkin表达升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62表达下降,细胞线粒体生物发生蛋白PGC1α和线粒体融合蛋白MFN2、OPA1表达下降,而线粒体分裂蛋白p-DRP1表达升高,抗氧化应激蛋白Keap1和Nrf2表达下降(P均<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞中自噬体和自噬溶酶体数量增多(P<0.05),而20μmol/L HN预处理可以改善Rot染毒引起的上述变化(P<0.05)。结论HN通过抑制线粒体自噬和线粒体分裂、促进线粒体生物发生和融合以及抗氧化应激,改善Rot诱导的多巴胺神经元毒性损伤。

关键词： Humanin 鱼藤酮多巴胺神经元线粒体

罗沙司他通过上调HIF-1α减轻热打击诱导的肾小管上皮细胞凋亡与衰老

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陆军军医大学学报 2024年第10期46卷 1092-1099页

作者：宋用为王玲陈文婷张明洋杨学森戴欢子陆军特色医学中心风湿免疫科重庆400042 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系热带医学教研室重庆400038

目的探讨罗沙司他对热打击诱导的肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡与衰老的影响及其机制。方法体外培养HK-2细胞,用不同浓度(10、20、30、40、50μmol/L)的罗沙司他处理24 h,通过CCK-8法确定罗沙司他的最佳干预浓度。将HK-2细胞分为4组(n=... 详细信息

目的探讨罗沙司他对热打击诱导的肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡与衰老的影响及其机制。方法体外培养HK-2细胞,用不同浓度(10、20、30、40、50μmol/L)的罗沙司他处理24 h,通过CCK-8法确定罗沙司他的最佳干预浓度。将HK-2细胞分为4组(n=3):对照组、罗沙司他组(30μmol/L、24 h)、热打击组(43℃、2 h)、热打击+罗沙司他组(30μmol/L罗沙司他处理24 h后热打击2 h)。通过CCK-8检测细胞活力;Western blot检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)、Cleaved Caspase-3、p16、p21蛋白表达量;免疫荧光检测HIF-1α分布;细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测SA-β-Gal活性;TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果用30μmol/L罗沙司他处理的细胞活力最高。与对照组比较,热打击组细胞活力显著降低(P<0.05);HIF-1α、Cleaved Caspase-3、p16、p21蛋白表达量显著增加(P<0.05);SA-β-Gal活性显著增加(P<0.05);TUNEL阳性细胞占比显著增加(P<0.05)。与热打击组比较,热打击+罗沙司他组Cleaved Caspase-3、p16、p21蛋白表达量显著降低(P<0.05);SA-β-Gal活性显著降低[(65.44±5.00)%vs(77.15±2.61)%,P<0.05];TUNEL阳性细胞占比显著降低[(16.73±2.20)%vs(46.40±13.87)%,P<0.05],细胞活力显著增加[(86.33±4.51)%vs(66.33±8.50)%,P<0.05];HIF-1α蛋白表达量进一步增加(P<0.05)。免疫荧光结果显示HIF-1α主要分布在细胞核及细胞核周围。结论罗沙司他通过上调HIF-1α减轻热打击诱导的肾小管上皮细胞凋亡和衰老。

关键词：热打击罗沙司他 HIF-1α 细胞凋亡细胞衰老

基于肠道菌群的帕金森病早期预测模型建立及生物信息分析

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中华疾病控制杂志 2024年第09期 1096-1103页

作者：何长颖韦雨婷陈佳陆军军医大学军事预防医学系军队卫生统计学教研室

目的探究基于肠道菌群对人群未来患帕金森症(parkinson′s disease, PD)的早期预测模型进行构建与评价，并对肠道菌群宏基因KO组进行功能分析，探讨PD的潜在治疗靶点。方法基于Zenodo数据库，一方面对肠道菌群相对丰度数据进行标准分... 详细信息

目的探究基于肠道菌群对人群未来患帕金森症(parkinson′s disease, PD)的早期预测模型进行构建与评价，并对肠道菌群宏基因KO组进行功能分析，探讨PD的潜在治疗靶点。方法基于Zenodo数据库，一方面对肠道菌群相对丰度数据进行标准分数标准化及ZicoSeq降维，采用基于自适应最小绝对收缩和选择算法(least absolute shrinkage and selection operator, LASSO)变量选择的logistic回归算法建立预测模型，使用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线下面积(area under curve, AUC)和校准曲线评价模型预测效能，采用临床决策曲线(decision curve analysis, DCA)进行临床使用价值的评价；另一方面，对肠道菌群宏基因KO组数据使用limma包鉴定差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),对DEGs进行基因本体(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析。通过结合蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction networks, PPI)、支持向量机-递归特征消除(support vector machine-recursive feature elimination, SVM-RFE)和随机森林(random forest, RF)对DEGs进行筛选。结果基于自适应LASSO变量选择的logistic回归分析模型的ROC曲线以及校准曲线显示模型预测效果良好。DCA结果显示模型净收益较大。通过PPI网络分析及机器学习方法，最终筛选出6个核心DEGs,即阿拉伯糖转运系统渗透蛋白(L-arabinose operon Q, araQ)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶，Ⅱ型、dCTP脱氨酶(dCTP deaminase, dcd)、颗粒19 kDa蛋白(signal recognition particle 19, SRP19)、加工前体5,核糖核酸酶P/MRP亚基(芽殖酵母)[processing of precursor 5, ribonuclease P/MRP subunit (S. cerevisiae), POP5]、肌醇-3-磷酸合酶1(inositol-3-phosphate synthase 1, ISYNA1)。结论基于自适应LASSO变量选择的logistic回归分析模型对PD的预测具有优势，从而实现对PD患者的早发现、早干预、早治疗；相关核心基因的发现为PD的治疗提供科学指导和帮助。

关键词：帕金森病肠道菌群机器学习生物信息学分析

热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元的损伤作用

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陆军军医大学学报 2024年第18期46卷 2029-2035页

作者：李萍罗雪罗珍何根林王泽泽申婷婷刘晓倩谭雨龙杨学森陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系热带医学教研室重庆400038

目的探究热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元损伤的影响。方法热刺激BV2小胶质细胞后收集上清,通过不同的超速离心速度获取细胞外大囊泡和小囊泡。利用纳米粒度分析仪检测粒径,利用Western blot检测囊泡上TSG101、CD63和flotillin-1... 详细信息

目的探究热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元损伤的影响。方法热刺激BV2小胶质细胞后收集上清,通过不同的超速离心速度获取细胞外大囊泡和小囊泡。利用纳米粒度分析仪检测粒径,利用Western blot检测囊泡上TSG101、CD63和flotillin-1的表达。PKH67标记BV2来源的囊泡后与N2a细胞共孵育,检测神经元对小胶质细胞细胞外囊泡的摄取情况。分别将热刺激后BV2来源的大囊泡和小囊泡与N2a共孵育,通过CCK-8、细胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、台盼蓝染色和TUNEL染色法评价热刺激后N2a的损伤情况。结果小囊泡粒径介于30~120 nm,高表达TSG101和CD63,大囊泡粒径介于90~1000 nm,高表达flotillin-1;BV2来源的细胞外囊泡可被N2a细胞摄取并参与热刺激对N2a细胞损伤的调节,其中CCK-8检测结果表明小胶质细胞来源的大小囊泡均能降低热刺激后N2a细胞的活力(P<0.05)。LDH检测、台盼蓝染色及TUNEL检测结果表明大囊泡(P<0.05)和小囊泡(P<0.01)均能显著提高热刺激后N2a细胞LDH的释放水平、N2a细胞的蓝染水平及凋亡程度,且小囊泡处理组中N2a细胞的LDH释放水平、蓝染和凋亡水平高于大囊泡处理组。结论热刺激后小胶质细胞通过细胞外囊泡加剧了神经元的损伤。

关键词：小胶质细胞细胞外囊泡热刺激神经元损伤

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高原军人健康素养现况调查及影响因素分析

陆军军医大学学报 2024年第11期46卷 1306-1315页

作者：金鹏荣红辉张玲郑传芬陈济安陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系军队健康教育教研室重庆400038

目的了解高原军人的健康素养水平,并分析其影响因素。方法采用《全国居民健康素养监测调查问卷》(2015版),通过查阅文献设计人口学资料,加入心理弹性量表、简易应对方式量表、正性负性情绪量表3种心理问卷,采用“问卷星”对2516名高原... 详细信息

目的了解高原军人的健康素养水平,并分析其影响因素。方法采用《全国居民健康素养监测调查问卷》(2015版),通过查阅文献设计人口学资料,加入心理弹性量表、简易应对方式量表、正性负性情绪量表3种心理问卷,采用“问卷星”对2516名高原军人健康素养进行现况调查并分析其影响因素。结果调查显示,2516名高原军人的总体健康素养水平为20.03%。基本知识和理念、健康生活方式与行为、健康技能素养水平分别为31.08%、26.23%、26.63%;科学健康观、传染病防治、慢性病防治、安全与急救、基本医疗、健康信息素养水平依次为40.58%、19.36%、9.62%、82.75%、29.61%、45.03%。多元非条件Logistic回归分析结果显示:高原军人健康素养水平的影响因素为工作年限(OR=1.857,95%CI:1.391~2.479;OR=4.657,95%CI:3.297~6.578)、民族(OR=0.394,95%CI:0.251~0.620)、婚姻(OR=0.609,95%CI:0.430~0.861)、独生子女(OR=0.759,95%CI:0.585~0.985)、家庭所在地(OR=0.545,95%CI:0.359~0.827)、吸烟(OR=1.579,95%CI:1.254~1.988)、文化程度(OR=3.638,95%:1.500~8.822)、每周网络游戏时间(OR=0.517,95%CI:0.365~0.731;OR=0.351,95%CI:0.172~0.716)、每年体检次数(OR=3.251,95%CI:1.359~7.778;OR=4.545,95%CI:1.841~11.221)、父亲职业(OR=5.185,95%CI:1.800~14.933;OR=3.229,95%CI:1.261~8.270)、母亲职业(OR=0.221,95%CI:0.086~0.568;OR=0.218,95%CI:0.081~0.587;OR=0.046,95%CI:0.018~0.118)、积极应对(OR=1.052,95%CI:1.033~1.072)、消极应对(OR=0.950,95%CI:0.929~0.972)。结论该部队高原军人健康素养水平整体较低,相关部门应根据健康素养的影响因素,积极探索有效的干预措施,全面提升其健康素养。

关键词：高原健康素养现况调查影响因素

18种中药多糖与Siglec-9的亲和力测试及其抗炎作用研究

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陆军军医大学学报 2024年第5期46卷 410-418页

作者：刘瑶瑶刘娟娟秦怡玉李瑾刘红梅贾乙陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系重庆400038

目的比较18种中药多糖与唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec-9)的亲和力以及抗炎能力,探讨中药多糖发挥抗炎作用的新机制。方法选择18种不同药性的中药用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法... 详细信息

目的比较18种中药多糖与唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec-9)的亲和力以及抗炎能力,探讨中药多糖发挥抗炎作用的新机制。方法选择18种不同药性的中药用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法检测多糖含量,高效液相色谱法检测多糖的单糖组成,红外光谱法检测中药多糖结构。通过竞争性ELISA法检测多糖与Siglec-9的亲和力,并研究中药多糖对LPS诱导巨噬细胞炎症反应以及R848诱导中性粒细胞NETosis的影响,利用髓系细胞特异性敲除Siglec-E(Lyz2-cre:Siglec-E flox/flox)小鼠来源的原代巨噬细胞和腹腔中性粒细胞进一步明确多糖结合Siglec-9产生抗炎作用的机制。结果中药多糖的糖含量均在55%以上,主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等组成,但单糖构成比各不相同。红外光谱检测4种代表性中药多糖均有典型的多糖吸收峰,柴胡和蒲公英多糖具有葡萄糖醛酸结构。枸杞和黄芪多糖与Siglec-9的亲和力,对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和R848诱导的中性粒细胞NETosis反应无显著抑制作用。柴胡和蒲公英多糖与Siglec-9亲和力较强(P<0.01),能够显著抑制上述炎症反应,但其抗炎作用在髓系细胞特异性敲除Siglec-E基因小鼠来源的巨噬细胞和中性粒细胞中消失。结论中药多糖与Siglec-9的亲和力有潜力成为研究中药抗炎作用的新的现代药理学机制。

关键词：中药多糖 Siglec-9 抗炎 NETosis

大面积烧伤患者住院期间血红蛋白最低值与预后的关系

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中华烧伤与创面修复杂志 2024年第6期40卷 543-550页

作者：佐方清苏加庆李阳张丽娟蓝莹莹陈渝龚雅利陈雅洁李俊达彭毅志罗高兴袁志强陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400038 陆军第77集团军医院烧伤整形外科乐山614100 陆军军医大学军事预防医学系军事医学统计教研室重庆400038

目的探讨大面积烧伤患者住院期间血红蛋白最低值与预后的关系,从而探寻大面积烧伤患者输血的血红蛋白预警阈值。方法该研究为回顾性观察性研究。2012年10月-2022年10月,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院收治288例符合入选标准的... 详细信息

目的探讨大面积烧伤患者住院期间血红蛋白最低值与预后的关系,从而探寻大面积烧伤患者输血的血红蛋白预警阈值。方法该研究为回顾性观察性研究。2012年10月-2022年10月,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院收治288例符合入选标准的大面积烧伤患者,其中男243例、女45例,年龄18~65岁。根据患者最终预后,将患者分为死亡组(54例)和存活组(234例),比较2组患者的性别、年龄、体重指数、烧伤总面积、Ⅲ度烧伤面积、伤后第1次手术时间、第1次手术术前凝血酶原时间(PT)与活化部分凝血活酶时间(APTT)及血红蛋白水平、合并吸入性损伤情况、手术次数、总手术面积、总手术时间、总住院时间、住院期间降钙素原最高值和血小板计数最低值及血红蛋白最低值与脓毒症发生情况等临床资料。根据住院期间血红蛋白最低值,将患者分为0.05)。按住院期间血红蛋白最低值分组的4组患者的住院期间病死率与脓毒症发生率、伤后90 d内病死率比较,差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为12.12、15.93、10.62,P0.05)。限制性立方样条模型分析显示,在调整协变量前、后,大面积烧伤患者住院期间血红蛋白最低值与死亡风险均呈近似线性关系(χ^(2)值分别为0.81、0.75,P>0.05)。调整协变量后,logistic回归模型分析显示,当将住院期间血红蛋白最低值作为连续性变量分析时,大面积烧伤患者死亡风险随着血红蛋白的降低而升高(比值比为0.96,95%置信区间为0.92~0.99,P0.05);当同前将患者按住院期间血红蛋白最低值分为4组时,以≥85 g/L组为参考,仅<65 g/L组患者的死亡风险显著升高(比值比为5.37,95%置信区间为1.57~18.29,P<0.05)。结论大面积烧伤患者住院期间血红蛋白最低值与死亡风险呈近似线性相关,当血红蛋白水平下降至65 g/L或更低时,患者的死亡风险显著增加,提示可将65 g/L的血红蛋白水平作为大面积烧伤患者输血的预警阈值。

关键词：烧伤血红蛋白类贫血预后死亡输血预警阈值

一种基于新型传感器的脑出血磁感应相位移检测系统

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生物医学工程学杂志 2024年第3期41卷 455-460页

作者：刘捷闫炼秦明新张海生陈明生陆军军医大学生物医学工程与影像医学系重庆400038

目前基于磁感应相位移技术检测系统的激励线圈产生的主磁场大多为分散场,场强小且抵消效果有待进一步改善,使得检测信号较弱,检测系统难以实现定量检测,阻碍了该技术用于活体实验和临床试验。为改善上述问题,本研究提出了一种新的亥姆... 详细信息

目前基于磁感应相位移技术检测系统的激励线圈产生的主磁场大多为分散场,场强小且抵消效果有待进一步改善,使得检测信号较弱,检测系统难以实现定量检测,阻碍了该技术用于活体实验和临床试验。为改善上述问题,本研究提出了一种新的亥姆霍兹鸟笼传感器。设计仿真实验从磁场强度和磁场分布两方面分析主磁场,设计不同出血体积和出血速率实验并与传统传感器进行对比评估。结果显示与传统线圈相比,检测目标所在区域磁场强度增大2.5倍,实现了主磁场抵消,10 mL兔血测得的相位差幅值达(–3.34±0.21)°,相位差与出血体积和速率指数拟合调整后R2均达到0.99。本文提出的亥姆霍兹鸟笼传感器具有场强更高的均匀磁场,能够更加精确地定量检测出血量,并且可以监测出血速率的改变,对磁感应技术用于脑出血检测研究具有重要意义。

关键词：脑出血磁感应相位移亥姆霍兹鸟笼传感器

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丁酸钠对低氧寒冷暴露大鼠的保护效应研究

陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 901-911页

作者：郭晓玉谭小玲崔琪谢宏晨黄榆杰孟祥琼蒋雯俊丁宇荆海霞青海大学农牧学院动物医学系西宁810016 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系寒区医学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室重庆400038

目的探究丁酸钠对低氧寒冷暴露下大鼠的保护作用及其机制。方法7~8周、体质量240~260 g雄性SD大鼠随机分为:常氧常温生理盐水对照(normoxia normothermia saline control,NNC,n=10)组、常氧常温丁酸钠(normoxia normothermia sodium but... 详细信息

目的探究丁酸钠对低氧寒冷暴露下大鼠的保护作用及其机制。方法7~8周、体质量240~260 g雄性SD大鼠随机分为:常氧常温生理盐水对照(normoxia normothermia saline control,NNC,n=10)组、常氧常温丁酸钠(normoxia normothermia sodium butyrate,NNB,n=10)组、低氧寒冷生理盐水对照(hypoxia cold saline control,HCC,n=19)组和低氧寒冷丁酸钠(hypoxia cold sodium butyrate,HCB,n=19)组。NNB、HCB组的灌胃剂量为200 mg/kg,NNC、HCC组的灌胃剂量为5 mL/kg。①连续灌胃7 d后,HCC、HCB组大鼠置于低压低氧舱内模拟海拔5000 m、温度8℃暴露7 d,取腹主动脉血进行血气、血常规和血清生化指标检测,ELISA测定血清炎症因子和内分泌激素。NNC、NNB组大鼠在舱外同时喂养,7 d后进行指标检测,评价丁酸对机体的保护效应(n=10)。②监测HCC、HCB组大鼠核心体温,评价丁酸对低氧寒冷暴露大鼠的体热平衡(n=3)。③检测低氧寒冷暴露前后HCC、HCB大鼠的低氧(平原低氧箱,11%O_(2))运动耐力,评价耐缺氧能力(n=6)。结果与NNC组比较,HCC组大鼠动脉血氧饱和度(arterial oxygen saturation,SaO_(2))、动脉血氧分压(arterial oxygen partial pressure,PaO_(2))、IL-4、内分泌激素雌二醇(estradiol,E_(2))、皮质醇(cortisol,F)、核心体温以及低氧暴露下的运动时长显著降低(P<0.05);而红细胞数目(red blood cell,RBC)、血红蛋白浓度(haemoglobin,HGB)、红细胞压积(hematocrit,HCT)、血清心肌钙蛋白(cardiac troponin,CRDAC-T)、尿酸(uric acid,UA)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TCH)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、IL-6以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与HCC组比较,HCB组大鼠动脉SaO_(2)、PaO_(2)、IL-4、E_(2)、F、促肾上皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)显著升高(P<0.05),低氧暴露下的运动时长显著增加(P<0.05);而RBC、HGB、HCT、CRDAC-T、UA、ALT、TCH、LDL、IL-6、GM-CSF、游离甲状腺素(free thyroxine,FT 4)以及核心体温显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丁酸钠对低氧寒冷暴露条件下的大鼠具有保护作用,有利于低氧寒冷的共习服。

关键词：丁酸钠习服低氧寒冷耐缺氧