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不同炮制程度栀子水提物对斑马鱼模型的急性毒性及肝肾损伤

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中华中医药学刊 2024年

作者：袁士雅叶晨英陈亿婷何婷王敏农桂龙周改莲广西中医药大学

目的：用斑马鱼模型对生栀子及六种不同炮制程度栀子水提物进行急性毒性及肝肾毒性研究，探索炮制程度对栀子毒性的影响。方法：以受精后3天(3 dpf)发育正常的AB系斑马鱼为对象进行急性毒性研究，对生品(sp)及六种不同炮制程度栀子水提... 详细信息

目的：用斑马鱼模型对生栀子及六种不同炮制程度栀子水提物进行急性毒性及肝肾毒性研究，探索炮制程度对栀子毒性的影响。方法：以受精后3天(3 dpf)发育正常的AB系斑马鱼为对象进行急性毒性研究，对生品(sp)及六种不同炮制程度栀子水提物(pz1，pz2，pz3，pz4，pz5，pz6)分别设置6个不同剂量浓度，统计斑马鱼72 h死亡率。用GraphPad Prism 9.0软件制作量-毒曲线，计算半数致死浓度(LC50)和10%致死浓度(LC10)。以受精后4天(4 dpf)发育正常的gz15Tg/+(AB)肝脏荧光蛋白转基因斑马鱼为对象进行肝损伤研究。分别设置低(LC0)、中(LC10)、高(LC20)3个剂量浓度组，设对乙酰氨基酚组，以胚胎水为空白组。给药72 h后观察斑马鱼肝脏形态和荧光面积变化，检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)，肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)活性。结果：急性毒性实验结果显示，生品及六种不同炮制程度栀子水提物LC50分别为0.042、0.049、0.053、0.064、0.050、0.058、0.058 g·L-1；LC10分别为0.024、0.025、0.033、0.038、0.036、0.036、0.039 g·L-1。肝肾损伤实验结果表明，与空白组比较，对乙酰氨基酚组的斑马鱼肝脏形态变形和荧光面积减小(P＜0.01)，ALT和AST活性升高(P＜0.01)，表明对乙酰氨基酚对斑马鱼有肝毒性。sp低、中、高剂量组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积减少(P＜0.01)，ALT和AST活性升高(P＜0.01，P＜0.05)，BUN和Cr活性升高(P＜0.05)，表明生品对斑马鱼有肝肾毒性。pz1、pz2、pz3中、高剂量浓度组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积减少(P＜0.01)，pz1的ALT和AST活性升高(P＜0.01)，BUN和Cr活性升高(P＜0.01，P＜0.05)，pz2、pz3的ALT低、中、高剂量组活性升高(P＜0.05，P＜0.01)，AST中、高剂量组活性升高(P＜0.05，P＜0.01)。pz4、pz5、pz6低、中剂量组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积无明显变化，高剂量组有变化(P＜0.05)。表明pz4、pz5、pz6低、中剂量组对斑马鱼肝脏无明显影响，高剂量组有肝损伤。pz4中、高剂量组ALT、AST升高(P＜0.05，P＜0.01)；pz5、pz6的ALT活性降低无显著影响，AST高剂量组有肝损伤(P＜0.01，P＜0.05)。pz3、pz5高剂量组BUN和Cr活性升高(P＜0.01，P＜0.05)，pz4高剂量组BUN和Cr活性升高(P＜0.01)。表明sp及pz1-pz5不同炮制程度不同剂量浓度对斑马鱼肝脏及肾脏均有不同程度的损伤。pz6的3个剂量浓度组斑马鱼ALT、BUN、Cr及AST低、中剂量组均无肝肾损伤。结论：栀子肝肾损伤与炮制程度和给药剂量有关。生品与不同炮制程度栀子均不同程度地表现出一定的肝肾损伤，规范炮制条件可能是实现栀子用药安全的重要措施。

关键词：栀子炮制斑马鱼急性毒性肝肾损伤

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动物源中药材鉴定学发展及面临的问题与挑战

中国医院药学杂志 2024年第8期44卷 973-978,984页

作者：李晶峰孙佳明赵润怀段金廒万德光吴楠杜延佳张辉长春中医药大学吉林省生物肽工程实验室吉林长春130117 长春中医药大学国家教育部中药有效成分重点研究室吉林长春130117 长春中医药大学国家中医药管理局药用动物可持续发展重点研究室吉林长春130117 中国中药有限公司北京100195 南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏南京210023 南京中医药大学中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学国家中医药管理局中药资源循环利用重点研究室江苏南京210023 成都中医药大学中药饮片炮制国家地方联合工程研究中心四川成都611137 成都中医药大学西南道地药材协同创新中心四川成都611137 成都中医药大学四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室四川成都611137 吉林省东北亚生物科技有限公司吉林长春130119

动物源中药材是祖国医药学遗产中的重要组成部分,具有活性成分强、疗效确切等特点。近年来动物源中药材的需求量不断上升,但药用动物的养殖规模远没有达到市场需要,动物源中药材大部分为贵重紧缺药材,市场上混伪品、替代品的不断出现给... 详细信息

动物源中药材是祖国医药学遗产中的重要组成部分,具有活性成分强、疗效确切等特点。近年来动物源中药材的需求量不断上升,但药用动物的养殖规模远没有达到市场需要,动物源中药材大部分为贵重紧缺药材,市场上混伪品、替代品的不断出现给动物源中药材的准确鉴定带来极大困难,严重影响了动物源中药材的应用效果和用药安全。该文综述了从南朝宋到清末动物源中药材鉴定的历史和现代动物源中药材鉴定技术发展成果,以为动物源中药材鉴定从业者提供相关技术方法与总体思路。

关键词：动物源中药材鉴定学发展历程

GC-ECD法测定蜂房药材中17种有机氯类农药残留

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中国卫生工程学 2024年第3期23卷 316-319页

作者：王丹曲涵婷李正刚赵磊王丹彧马彧四平市食品药品检验所中药室吉林四平136000 四平市社会精神病院长春中医药大学药学院

目的建立气相色谱-电子捕获检测检测器法(GC-ECD)检测蜂房中17种有机氯类农药残留。方法样品经水、丙酮、适量氯化钠超声分散,二氯甲烷萃取,离心转移,有机相用无水硫酸钠脱水后减压浓缩至近干,正己烷溶解,硫酸溶液和水除去杂质,采用GC-... 详细信息

目的建立气相色谱-电子捕获检测检测器法(GC-ECD)检测蜂房中17种有机氯类农药残留。方法样品经水、丙酮、适量氯化钠超声分散,二氯甲烷萃取,离心转移,有机相用无水硫酸钠脱水后减压浓缩至近干,正己烷溶解,硫酸溶液和水除去杂质,采用GC-ECD法测定。结果在实验条件下,17种农药组分能很好地分离检测,在测定范围0.76~100.30 ng/ml内线性关系良好,r均大于0.995,检出限在0.0011~0.0018 mg/kg之间,方法的重复性相对标准偏差均小于3.3%,加标回收率在90.7%~98.1%。结论该方法适合测定蜂房中17种有机氯类农药残留。

关键词：蜂房气相色谱法有机氯农药残留

1-甲基海因对哮喘大鼠模型的平喘作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2014年第3期40卷 543-548页

作者：韩冬董雪莲邱智东长春中医药大学药学院临床药学与中药药理教研室吉林长春130017 长春中医药大学药学院药剂与炮制教研室吉林长春130117

目的:探讨1-甲基海因(1-MH)对哮喘及咳嗽动物模型的干预作用,初步阐明其作用机制。方法:选取50只Wistar大鼠,采用卵清蛋白诱发大鼠哮喘后随机分为模型对照组1-MH 20、40、80mg·kg-1剂量组和阳性对照组(氨茶碱60mg·kg-1),另取10只Wista... 详细信息

目的:探讨1-甲基海因(1-MH)对哮喘及咳嗽动物模型的干预作用,初步阐明其作用机制。方法:选取50只Wistar大鼠,采用卵清蛋白诱发大鼠哮喘后随机分为模型对照组1-MH 20、40、80mg·kg-1剂量组和阳性对照组(氨茶碱60mg·kg-1),另取10只Wistar大鼠作为空白对照组。收集各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),测定白细胞介素5(IL-5)、嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平及嗜酸性粒细胞(EOS)计数;选取40只引喘合格豚鼠随机分为模型对照组,1-MH 15、30和60mg·kg-1剂量组及阳性对照组(氨茶碱50mg·kg-1),记录各组豚鼠哮喘发生潜伏期;选取豚鼠10只,取支气管放于Krebs液中,记录并计算0.25、0.50和1.00g·L-11-MH对抗磷酸组胺的解痉百分率;选取引咳合格小鼠50只,随机分成1-MH 25、50和100mg·kg-1剂量组及阳性对照组(可待因50mg·kg-1),记录各组小鼠咳嗽潜伏期及3min内的咳嗽次数;选取引咳合格豚鼠40只,随机分成1-MH 15、30和60mg·kg-1剂量组及阳性对照组(可待因20mg·kg-1),记录各组豚鼠咳嗽潜伏期及5min内的咳嗽次数。结果:与致敏模型对照组比较,1-MH 40和80mg·kg-1剂量组大鼠BALF中IL-5、Eotaxin水平及EOS计数明显降低(P<0.05或P<0.01);与乙酰胆碱诱导哮喘模型对照组比较,1-MH 30和60mg·kg-1剂量组豚鼠哮喘发生潜伏期明显延长(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比较,1-MH 0.50和1.00g·L-1剂量组豚鼠离体气管平滑肌的解痉百分率明显升高(P<0.01);与小鼠咳嗽模型对照组比较,1-MH 50和100mg·kg-1剂量组小鼠咳嗽潜伏期延长,咳嗽次数减少(P<0.05或P<0.01);与豚鼠咳嗽模型对照组比较,1-MH 30和60mg·kg-1剂量组豚鼠咳嗽潜伏期延长,咳嗽次数减少(P<0.05或P<0.01)。结论:1-MH具有良好的平喘及镇咳作用,平喘作用可能与其抑制气道炎症和直接舒张支气管平滑肌有关。

关键词： 1-甲基海因卵清蛋白嗜酸性粒细胞平喘镇咳

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三苦滴丸成型工艺条件优选

吉林大学学报（医学版） 2011年第6期37卷 1149-1152页

作者：董金香张馨月李兴杰邱智东长春中医药大学药学院中药药剂教研室吉林长春130117

目的:探讨三苦滴丸成型工艺的条件,为近一步开发治疗冠心病和心绞痛的中药新药提供依据。方法:以滴丸的溶散时限、丸重差异及外观(圆整度、硬度、色泽均匀性)作为评价指标,采用单因素考察法对三苦滴丸的冷却剂种类、滴距进行选择,采用... 详细信息

目的:探讨三苦滴丸成型工艺的条件,为近一步开发治疗冠心病和心绞痛的中药新药提供依据。方法:以滴丸的溶散时限、丸重差异及外观(圆整度、硬度、色泽均匀性)作为评价指标,采用单因素考察法对三苦滴丸的冷却剂种类、滴距进行选择,采用正交实验法对2种基质的比例、药物与基质的比例及滴制时药液温度进行优选。结果:三苦滴丸最佳成型工艺条件是以二甲基硅油为冷却剂,PEG4000∶PEG6000=1∶6作为基质,药物与基质的比例为1∶2,药液温度80℃,滴距为5cm,滴速18～20滴.min-1。结论:优选出的成型工艺条件稳定可行,适合于大规模生产。

关键词：三苦滴丸正交实验成型工艺

灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷化学成分变化及其抗肿瘤活性

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吉林大学学报（医学版） 2017年第3期43卷 543-549,I0002页

作者：贾雪巍董金香于洋位鸿王畅贾艾玲长春国家生物产业基地医药中试平台吉林长春130117 长春中医药大学药学院药剂与炮制教研室吉林长春130117 长春中医药大学附属医院新药中心吉林长春130117

目的:研究灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷前后化学成分的生物转化规律,为人参茎叶药性菌质的进一步开发奠定基础。方法:采用灵芝菌种对人参茎叶总皂苷进行液体发酵,薄层色谱法分析发酵前后其化学成分的变化;紫外分光光度法检测发酵前后... 详细信息

目的:研究灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷前后化学成分的生物转化规律,为人参茎叶药性菌质的进一步开发奠定基础。方法:采用灵芝菌种对人参茎叶总皂苷进行液体发酵,薄层色谱法分析发酵前后其化学成分的变化;紫外分光光度法检测发酵前后人参茎叶总皂苷水平;高效液相色谱法检测发酵前后人参皂苷Rb1、Rg3、Rd、CK、Re、Rg_1和Rh_1水平。将人肝癌SMMC-7721细胞株分为空白对照组,低、中和高剂量人参茎叶总皂苷组,低、中和高剂量人参茎叶药性菌质组。低、中和高剂量人参茎叶总皂苷和人参茎叶药性菌质组给药剂量分别为5、10和20mg·L^(-1),MTT法检测人参茎叶总皂苷发酵前后SMMC-7721细胞株的生长抑制率(IR)。结果:薄层色谱检测,发酵前后皂苷之间发生了相互转化;发酵前人参茎叶总皂苷水平为749.98mg·g^(-1),发酵后人参茎叶总皂苷水平为602.26 mg·g^(-1)。发酵前人参二醇组皂苷中人参皂苷Rb1、Rg3、Rd和CK水平分别为24.54、2.21、87.22和0mg·g^(-1),人参三醇组皂苷中人参皂苷Re、Rg_1和Rh_1水平分别为151.34、77.02和3.06mg·g^(-1);发酵后人参二醇组皂苷中人参皂苷Rb1水平降低了61.45%,Rg3水平增加了238.91%、Rd水平增加了34.43%、CK水平增加了268.00%,人参三醇组皂苷中人参皂苷Re水平降低了63.75%、Rg_1水平降低了64.41%,Rh_1含量增加了408.88%。中剂量人参茎叶药性菌质组SMMC-7721细胞株的IR高于中剂量人参茎叶总皂苷组(P<0.05),高剂量人参茎叶药性菌质组SMMC-7721细胞株的IR高于高剂量人参茎叶总皂苷组(P<0.01)。结论:以灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷可明显改变其化学成分,发酵后组分对SMMC-7721细胞株具有更强的抗增殖活性。

关键词：灵芝菌人参茎叶总皂苷液体发酵抗肿瘤活性

人参糖蛋白对少弱精症小鼠生精障碍的改善作用

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吉林大学学报（医学版） 2022年第3期48卷 575-583页

作者：单梦瑶王维纲董金香田建明宋莲莲陈英红房晓雪邱智东罗浩铭朱迪夫长春中医药大学药学院中药药剂实验室吉林长春130117 吉林医药学院附属医院中医科吉林吉林132013 吉林省中医药科学院中药二所吉林长春130012 长春中医药大学药学院药物化学与中药化学教研室吉林长春130117 长春中医药大学药学院生物制药与保健食品教研室吉林长春130117

目的:探讨人参糖蛋白(PGG)对少弱精症小鼠生精障碍的改善作用,并初步阐明其作用机制。方法:选取健康雄性小鼠60只,随机分成正常组、模型组、阳性对照组(生精胶囊,700 mg·kg^(-1))、低剂量PGG组(100 mg·kg^(-1) PGG)、中剂量PGG组(200... 详细信息

目的:探讨人参糖蛋白(PGG)对少弱精症小鼠生精障碍的改善作用,并初步阐明其作用机制。方法:选取健康雄性小鼠60只,随机分成正常组、模型组、阳性对照组(生精胶囊,700 mg·kg^(-1))、低剂量PGG组(100 mg·kg^(-1) PGG)、中剂量PGG组(200 mg·kg^(-1) PGG)和高剂量PGG组(400 mg·kg^(-1) PGG),每组10只。除正常组外,其余组小鼠腹腔注射30 mg·kg^(-1)环磷酰胺,制备少弱精症模型。取各组小鼠附睾采集精子,显微镜下观察精子总数、精子活率、精子畸形率和精子活力,观察各组小鼠精子形态,采集各组小鼠睾丸(双)、前列腺+贮精囊(双)、包皮腺(双)和提肛肌,称质量并计算脏器系数,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠睾丸组织病理形态表现,ELISA法测定各组小鼠血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)和催乳素(PRL)水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠精子总数降低(P0.05),生精小管中生精细胞层厚度和生精细胞层横截面面积减小(P0.05),生精小管中生精细胞层厚度和生精细胞层横截面面积增大(P药剂量增加药效增强,PGG能明显改善少弱精症小鼠生精障碍,其机制可能与PGG提高小鼠血清性激素水平有关。

关键词：人参糖蛋白少弱精症生精障碍精子活力性激素

龙胆生品及龙胆酒制品给药后龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布

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吉林大学学报（医学版） 2020年第2期46卷 254-259页

作者：吴晓燕孙紫薇侯晓琳宿莹刘战孙金姜雨昕翁丽丽长春中医药大学药学院中药鉴定教研室吉林长春130117

目的:探讨龙胆酒制前后龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布,为进一步研究龙胆药材的炮制方法与其功效的相关性提供科学依据。方法:将60只大鼠随机分为龙胆生品组和龙胆酒制品组,分别灌胃给药龙胆生品及龙胆酒制品(0.63 g·kg^-1),... 详细信息

目的:探讨龙胆酒制前后龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布,为进一步研究龙胆药材的炮制方法与其功效的相关性提供科学依据。方法:将60只大鼠随机分为龙胆生品组和龙胆酒制品组,分别灌胃给药龙胆生品及龙胆酒制品(0.63 g·kg^-1),于6个不同时间点(15、30、60、120、240和360 min)处死大鼠,每时间点每组各5只大鼠。采用液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法测定各组不同时间点龙胆苦苷在大鼠心、肝、脾、肺、肾和脑组织中的质量浓度。结果:龙胆苦苷在50~20000μg·L^-1范围内线性关系良好(r≥0.9969);该方法的精密度和稳定性相对标准偏差(RSD)均小于15%;回收率为77.4%~87.2%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则;HPLC-MS法检测,龙胆苦苷在大鼠体内分布比较广泛,在大鼠心、肝、脾、肺、肾和脑等组织中均有分布;30 min时龙胆生品及酒制品中龙胆苦苷质量浓度在大鼠心脏组织中达到峰值,60 min时在肝、脾和肺组织中达到峰值;与龙胆生品组比较,龙胆酒制品组龙胆苦苷在大鼠肝、肺和肾组织中的药-时曲线下面积(AUC 0→360 min)明显增加(P<0.01),在脑组织中小幅增加(P<0.01),在心和脾组织中稍有降低(P<0.05)。结论:龙胆酒制后能够促进龙胆苦苷在肝和肾等器官中的吸收利用,改变龙胆苦苷在大鼠主要器官组织中的浓度分布。

关键词：龙胆龙胆苦苷液相色谱-质谱联用龙胆酒制品

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人羊膜成纤维细胞的分离和鉴定

吉林大学学报（医学版） 2018年第4期44卷 845-848,894页

作者：张啸环段明华闫玉礼潘新李海清周长龙赵天倚长春中医药大学药学院中药炮制教研室吉林长春130107 空军航空大学吉林长春130022

目的:建立人羊膜成纤维细胞的体外培养方法,通过细胞的形态特征和免疫组织化学进行鉴定,从而获得人羊膜成纤维细胞,为后续的干细胞研究奠定基础。方法:从足月分娩人胎盘剥离羊膜,胰蛋白酶和胶原酶消化后分离人羊膜成纤维细胞,采用含表... 详细信息

目的:建立人羊膜成纤维细胞的体外培养方法,通过细胞的形态特征和免疫组织化学进行鉴定,从而获得人羊膜成纤维细胞,为后续的干细胞研究奠定基础。方法:从足月分娩人胎盘剥离羊膜,胰蛋白酶和胶原酶消化后分离人羊膜成纤维细胞,采用含表皮生长因子(EGF)的DMEM培养基进行培养。显微镜下观察细胞形态表现,采用HE染色和免疫组织化学染色分析细胞特征,采用流式细胞术(FCM)分析人羊膜成纤维细胞的纯度。结果:采用胰蛋白酶和胶原酶先后消化获得人羊膜成纤维细胞,显微镜下观察,细胞呈放射状或旋涡状生长。免疫组织化学染色,人羊膜成纤维细胞明显表达成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin),不同程度地表达S100钙结合蛋白A4(S100A4),不表达上皮细胞标志物角蛋白19(CK19)。流式细胞术分析,人羊膜成纤维细胞的纯度为86.1%。结论:成功建立了人羊膜成纤维细胞分离和鉴定方法,获得的细胞具有成纤维细胞的特异标志和表型特征。

关键词：人羊膜成纤维细胞 HE染色免疫组织化学流式细胞术