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基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 104-110页

作者：赖颖蓉赵倩琳姜丽红长春中医药大学中医学院长春130117 长春中医药大学附属医院长春130117

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注... 详细信息

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

关键词：参红通络方心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) Bcl-2相关X蛋白(Bax) 胱天蛋白酶-3(Caspase-3)

通腑泻下颗粒指纹图谱的建立及7种成分的定量分析

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应用化学 2024年第4期41卷 577-585页

作者：朴禹涵马丽婷罗静刘书晗白若冰张若妍越皓郑飞长春中医药大学长春130117

建立通腑泻下颗粒(TongFu XieXia Granules,TFXXG)的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并同时测定大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、厚朴酚以及和厚朴酚的含量。采用Waters Symmetry C18(2.1 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱,以0.1... 详细信息

建立通腑泻下颗粒(TongFu XieXia Granules,TFXXG)的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并同时测定大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、厚朴酚以及和厚朴酚的含量。采用Waters Symmetry C18(2.1 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水溶液(A)和甲醇(B)为流动相梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为30℃;检测波长为254 nm;进样量为10μL。建立10批TFXXG的指纹图谱,并采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)计算相似度;测定大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、厚朴酚以及和厚朴酚的含量。结果表明,10批TFXXG共确定出25个共有峰,相似度均在0.950以上;共指认出12个共有峰,分别为芥子碱硫氰酸盐、咖啡酸、松果菊苷、柚皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚、大黄酚、大黄素以及大黄素甲醚。其中,芦荟大黄素、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚的含量分别为0.1244~0.1304、0.4271~0.4387、3.0479~3.0853、1.2910~1.3039、0.2427~0.2523、0.7718~0.7897和0.5085~0.5249 mg/g。本文所建指纹图谱和定量分析方法重复性好,可操作性强,可用于控制TFXXG的质量。

关键词：通腑泻下颗粒高效液相色谱法指纹图谱含量测定

基于PIgR-CR1介导的“黏膜-肾轴”探析补肾健脾、解毒利咽法防治IgA肾病的研究思路

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：李凡王宏安南赫何鸣宇崔成姬王银萍刘禹彤张守琳长春中医药大学长春中医药大学附属医院

免疫球蛋白A肾病（IgAN）是世界范围内发病率最高的原发性肾小球肾炎，也是导致我国ESRD的主要病因，给社会和家庭带来了沉重的经济负担，中医药在治疗本病上具有一定的优势。中医可将其归属于“虚劳”、“血尿”、“水肿”等范畴，传... 详细信息

免疫球蛋白A肾病（IgAN）是世界范围内发病率最高的原发性肾小球肾炎，也是导致我国ESRD的主要病因，给社会和家庭带来了沉重的经济负担，中医药在治疗本病上具有一定的优势。中医可将其归属于“虚劳”、“血尿”、“水肿”等范畴，传统认为病位在肾，与肺肝脾等密切相关。而国医大师任继学教授认为“肾虚脾亏是IgAN发病之本，而咽喉是发病之源”，提出“喉肾相关”理论，以补肾健脾、解毒利咽法治疗IgAN，疗效显著。研究表明IgAN与黏膜免疫防御功能密切相关，IgAN患者常因黏膜感染而诱发病情反复发作并逐渐加重，而PIgR是黏膜防御功能的重要组成部分，PIgR缺乏导致IgA分子积聚于黏膜固有层，大量进入血液循环，最终沉积于肾脏引起肾损伤，补体调节蛋白CR1存在于红细胞及肾小球上，具有抑制B细胞活化、分化、清除免疫复合物及抑制补体系统过度激活等作用，因此通过PIgR-CR1介导的“黏膜-肾轴”调控机体免疫防御功能将是防治IgAN的重要靶点。该文基于“喉肾相关”理论，探析补肾健脾、解毒利咽法通过调控PIgR-CR1介导的“黏膜-肾轴”进而防治IgAN的作用与分子机制，为中医药基于“喉肾相关”理论防治IgAN提供有效的理论支撑及科学依据。

关键词： IgA肾病黏膜-肾轴多聚免疫球蛋白受体补体调节蛋白CR1 补肾健脾解毒利咽

基于基准关联度和模糊层次分析法-熵权法优化银翘马勃散的提取工艺

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中国新药杂志 2024年第13期33卷 1381-1389页

作者：石羽文刁元元姜孟成刘伟朋李钠贾艾玲长春中医药大学药学院长春130117

目的:为保证古今工艺质量一致,采用基准关联度和模糊层次分析法(fuzzy analytic hierarchy process,FAHP)-熵权法综合权重,结合Box-Behnken响应面实验设计优选银翘马勃散的提取工艺。方法:以银翘马勃散中绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C... 详细信息

目的:为保证古今工艺质量一致,采用基准关联度和模糊层次分析法(fuzzy analytic hierarchy process,FAHP)-熵权法综合权重,结合Box-Behnken响应面实验设计优选银翘马勃散的提取工艺。方法:以银翘马勃散中绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C含量的合计量,连翘苷含量加上出膏率和指纹图谱相似度作为评价指标,采用Box-Behnken响应面实验对加水倍数、提取时间及提取次数进行考察,结合基准关联度和FAHP-熵权法计算综合得分,得到最佳提取工艺,并进行工艺验证。结果:优选出银翘马勃散最优提取工艺为:加8倍处方量的水,提取3次,每次1 h。3批工艺验证结果综合评分均值为87.91,RSD值为0.58%。结论:Box-Behnken响应面实验结合基准关联度和FAHP-熵权法优化银翘马勃散的提取工艺合理稳定,具有可行性。

关键词：银翘马勃散 Box-Behnken响应面法基准关联度模糊层次分析法熵权法提取工艺

基于《雷公炮炙论》的白矾蜂巢制炮制工艺研究

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中草药 2024年第12期55卷 4008-4019页

作者：杨辛欣黄梓骏洪禹昕康爽洪玉书王楚盈于澎长春中医药大学吉林长春130117

目的传承古法,建立白矾蜂巢制的炮制工艺。方法以炮制品外观性状、硫酸铝钾的含量、蜂巢制白矾粉末色度、溃疡损伤程度为指标,采用单因素结合星点设计-响应面法对白矾蜂巢制炮制工艺进行考察。最后采用扫描电镜法和红外光谱法对白矾、... 详细信息

目的传承古法,建立白矾蜂巢制的炮制工艺。方法以炮制品外观性状、硫酸铝钾的含量、蜂巢制白矾粉末色度、溃疡损伤程度为指标,采用单因素结合星点设计-响应面法对白矾蜂巢制炮制工艺进行考察。最后采用扫描电镜法和红外光谱法对白矾、蜂巢制白矾及煅制品枯矾进行鉴别与质量控制。结果确定了白矾蜂巢制的最佳炮制工艺为取白矾样品,置于煅药炉中煅烧,加热温度为(587±5)℃,加热时间为60 min,取出,趁热加入0.6倍量蜂巢,保持温度继续加热180 min,取出晾凉后,研成粉末状,用麻纸包裹,埋于深12~15 cm的土壤中,土壤温度为20~25℃,土壤水分为20%~40%,坑埋时长为12 h,即得。白矾炮制前后微观形态变化显著,炮制品粒子粒度变小,表面结构更粗糙,疏松多孔结构明显,蜂巢制白矾与煅制品枯矾相比表面的碎屑呈圆柱状或椭圆状,加入蜂巢使晶体结构出现融合现象,晶体边缘更加圆钝。白矾的红外光谱特征峰为618、918、1113、1670、3441 cm^(−1),蜂巢制白矾的特征峰为472、617、688、1121、1242、1640、3446 cm^(−1),枯矾的特征峰为477、618、688、1112、1645、3458 cm^(−1),3者峰形和峰强度存在明显差异,且相似度分析和聚类分析结果均显示3者具有显著性差异。结论白矾蜂巢制工艺遵古继承了《雷公炮炙论》中的传统炮制方法,保留了传统煅制的特点,量化了关键操作技术点温度以及前后时间等重要参数,经验证工艺条件稳定、合理、可行性强,为大工业的生产提供了理论基础。扫描电镜和红外光谱分析法可以从微观形态层面和成分结构变化2个方面对白矾生品、蜂巢制白矾和枯矾进行鉴别与质量控制。

关键词：雷公炮炙论白矾蜂巢制炮制工艺星点设计-响应面法扫描电镜红外光谱分析法

基于特征图谱和量值传递评价经典名方保元汤颗粒剂的关键生产工艺

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中国新药杂志 2024年第14期33卷 1472-1481页

作者：李钠刁元元刘伟朋石羽文姜孟成李军鸽邱智东贾艾玲长春中医药大学药学院长春130117

目的:基于特征图谱和4种指标成分的转移率评价经典名方保元汤(Baoyuan Decoction, BYD)颗粒剂的关键生产工艺,确保颗粒剂与基准样品的等效性。方法:建立BYD颗粒剂中人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、甘草酸、甘草苷的含量测定方... 详细信息

目的:基于特征图谱和4种指标成分的转移率评价经典名方保元汤(Baoyuan Decoction, BYD)颗粒剂的关键生产工艺,确保颗粒剂与基准样品的等效性。方法:建立BYD颗粒剂中人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、甘草酸、甘草苷的含量测定方法。以BYD基准样品为参比,建立3批中试样品的特征图谱,评价BYD颗粒剂制备工艺的合理性。结果:建立的4种指标成分含量测定方法稳定可行。与基准样品相比,人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、甘草酸、甘草苷从饮片到颗粒剂平均转移率分别为76.02%,63.50%,66.99%,83.54%,4种成分的转移率均在基准样品的70%~130%范围内,且均存在对应特征峰。结论:通过对特征图谱和指标成分在各环节量值传递的研究,为今后经典名方BYD颗粒剂生产和质量控制提供参考依据。

关键词：经典名方保元汤特征图谱量值传递关键生产工艺

昆布多糖的复合酶法提取工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

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食品工业科技 2024年第3期45卷 197-206页

作者：张涵殷澳张会佳侯相竹高阳徐多多长春中医药大学人参科学研究院吉林长春130117 长春中医药大学药学院吉林长春130117

优化复合酶提取昆布多糖的工艺参数,并考察其抑制α-葡萄糖苷酶的能力。以昆布多糖得率为评价指标,通过正交试验确定复合酶配比,采用响应面法评价酶解时间、pH、液料比和温度对昆布多糖得率的影响。采用体外酶抑制实验测定昆布多糖对α... 详细信息

优化复合酶提取昆布多糖的工艺参数,并考察其抑制α-葡萄糖苷酶的能力。以昆布多糖得率为评价指标,通过正交试验确定复合酶配比,采用响应面法评价酶解时间、pH、液料比和温度对昆布多糖得率的影响。采用体外酶抑制实验测定昆布多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,复合酶最佳添加量为纤维素酶100 mg、果胶酶90 mg、木瓜蛋白酶55 mg,最佳酶法提取工艺为酶解时间1.8 h、酶解温度49.4℃、pH6.1、液料比59:1 mL/g,最佳工艺条件下昆布多糖预测得率18.183%,实测多糖得率18.19%±1.04%,其中性糖、酸性糖、蛋白质及硫酸根含量分别52.72%、11.76%、2.66%、19.49%;在1~5 mg/mL范围内其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用随浓度增加而升高,最大抑制率为79.04%±3.17%,IC50为1.443 mg/mL。复合酶法提取的昆布多糖得率高,其对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制作用。

关键词：昆布多糖复合酶提取工艺 α-葡萄糖苷酶活性

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解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 95-103页

作者：张琦肖洋徐菁晗刘添娇王丽朴春丽广州中医药大学深圳医院(福田) 广东深圳518000 长春中医药大学长春130117

目的:探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路靶向NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法:选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组(3.6... 详细信息

目的:探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路靶向NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法:选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组(3.6、7.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1)),8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖(FBG),并在末次给药后,进行口服糖耐量实验(OGTT),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)并计算β细胞功能稳态指数(HOMA-β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素(Insulin)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降(P<0.01);OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低(P<0.01)。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1) mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。

关键词：解毒通络调肝方胰岛β细胞胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路 NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体

人参醇溶蛋白提取工艺优化、结构表征及体外抗氧化活性分析

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食品工业科技 2024年第8期45卷 1-10页

作者：郭浩白雪媛陈宇宋文博刘那王思明长春中医药大学东北亚中医药研究院吉林长春130117

为探讨人参中醇溶蛋白提取工艺,结构表征及体外抗氧化活性,本文以人参为研究对象,采用单因素实验和响应面试验探索人参醇溶蛋白的最佳提取工艺,以紫外吸收光谱法、红外分光光度分析法、氨基酸组成、微观结构观察等方法对人参醇溶蛋白进... 详细信息

为探讨人参中醇溶蛋白提取工艺,结构表征及体外抗氧化活性,本文以人参为研究对象,采用单因素实验和响应面试验探索人参醇溶蛋白的最佳提取工艺,以紫外吸收光谱法、红外分光光度分析法、氨基酸组成、微观结构观察等方法对人参醇溶蛋白进行结构表征,并对其在不同pH条件下的体外抗氧化活性开展一系列研究。通过测定DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力、铁离子还原能力,评价人参醇溶蛋白的体外抗氧化活性。结果表明,人参中醇溶蛋白最佳提取工艺为:提取时间2 h、提取料液比1:10 g/mL、提取pH为7,此时人参醇溶蛋白得率为0.319%,蛋白含量为75%。通过紫外吸收光谱法、红外分光光度分析法、氨基酸组成成分分析试验结果表明,人参醇溶蛋白氨基酸总量为82.3 g/100 g,其中人体必需氨基酸含量为26.46 g/100 g,药用氨基酸含量为30.51 g/100 g,验证了该人参醇提物主要成分确为蛋白质,分子量约为3.3 kDa,SEM扫描电镜结果显示,该人参醇溶蛋白结构完整,表面稀疏且有不规则的脊形凸起以及少量孔隙,蛋白质颗粒呈现蜂窝聚集状态,具有稳定有序的网状结构。体外抗氧化试验结果表明,该蛋白在强酸性条件下具有较强的体外抗氧化活性,当pH=1时,人参醇溶蛋白对DPPH自由基的清除率为96%,对羟基自由基的清除率为79%,对铁离子的还原能力为0.86。

关键词：人参醇溶蛋白响应面结构表征抗氧化活性

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