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基于UHPLC-MS/MS法分析补肾利咽汤物质基准的特征图谱暨多指标成分的筛选与含量测定研究

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第3期26卷 704-720页

作者：赵威马永璠刘忠义宋丽敏刘艳华张守琳初洪波长春中医药大学药学院长春130117 长春中医药大学第一附属医院长春130021 长春中医药大学第一附属医院实验中心长春130021

目的采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定补肾利咽汤(BSLYT)中化学成分,建立BSLYT物质基准的高效液相色谱指纹图谱及莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷等6种主要成分的含量测定方法,为质量控制提供参考... 详细信息

目的采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定补肾利咽汤(BSLYT)中化学成分,建立BSLYT物质基准的高效液相色谱指纹图谱及莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷等6种主要成分的含量测定方法,为质量控制提供参考。方法利用质谱数据,建立指纹图谱。用外标法计算BSLYT样品中主要成分的含量,并结合化学计量学方法分析不同批次样品的差异。结果质谱共指认出了69种化合物,经过与高效液相色谱比对,共指认出13种化合物。15批BSLYT物质基准特征图谱的相似度在0.90以上,共指认了27个共有峰。聚类分析(CA)将物质基准分为2类,即S1、S2、S5、S8、S9、S13、S15为一类,S3、S4、S6、S7、S10-S12、S16为一类。通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLSDA),筛选出影响物质基准分类的化学成分,分别归属于木蝴蝶、山茱萸和土茯苓。多指标成分含量测定6个成分,分别为莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷含量范围分别在0.31%-0.51%、0.12%-0.22%、0.09%-0.19%、0.09%-0.24%、0.07%-0.18%、0.08%-0.29%。结论本文建立的指纹图谱和多指标含量测定方法准确、稳定,为补肾利咽汤的物质基准及相关制剂的质量控制提供依据。

关键词：补肾利咽汤物质基准超高效液相-质谱指纹图谱含量测定化学计量学

逍遥散治疗大鼠糖尿病性勃起功能障碍的分析及实验

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中国实验方剂学杂志 2024年第17期30卷 122-130页

作者：卯银辉王卓孙军涛魏志涛王明星杨勇长春中医药大学长春130117 长春中医药大学附属医院长春130021

目的:探讨逍遥散治疗大鼠糖尿病性勃起功能障碍(DMED)的作用机制及其主要的活性成分。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,通过海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)的测量及马松染色对逍遥散进行疗效评价。然后,通过网络药理学和... 详细信息

目的:探讨逍遥散治疗大鼠糖尿病性勃起功能障碍(DMED)的作用机制及其主要的活性成分。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,通过海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)的测量及马松染色对逍遥散进行疗效评价。然后,通过网络药理学和分子对接预测逍遥散治疗DMED的主要活性成分、关键靶点和潜在的信号通路。最后,对预测的结果进行体内外实验验证。结果:ICP/MAP和马松染色的检测结果表明,与正常组比较,模型组大鼠的勃起功能显著降低(P实验表明,逍遥散能够显著提高ALB和Akt1在血清中及mRNA的表达,抑制IL-6和TNF-α的表达;显著提高磷酸化(p)-PI3K和p-Akt的蛋白及mRNA的表达,抑制RAGE的表达。细胞热迁移实验(CETSA)结果表明,β-谷甾醇可以显著抑制ALB蛋白的降解。结论:逍遥散可能通过调节ALB、Akt1、IL-6、TNF等靶点及RAGE/PI3K/Akt信号通路恢复糖尿病大鼠的勃起功能,其主要的活性成分可能是β-谷甾醇。

关键词：逍遥散糖尿病性勃起功能障碍网络药理学分子对接细胞热迁移

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3种抑郁症大鼠模型代谢组学的比较

中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 149-159页

作者：刘萌萌路静李唯嘉张文静陈鸿雁王雨辰林贺林喆律广富长春中医药大学长春130117 长春中医药大学附属医院长春130117

目的:通过比较抑郁状态,以及脑、肝、肾组织中的代谢物差异,评价3种不同方式建立的抑郁症大鼠模型,为抑郁症动物模型的制备和抑郁症标准化诊断、治疗及研究提供参考。方法:40只健康雄性大鼠,随机分为空白组(K组)、慢性不可预知组(GY组)... 详细信息

目的:通过比较抑郁状态,以及脑、肝、肾组织中的代谢物差异,评价3种不同方式建立的抑郁症大鼠模型,为抑郁症动物模型的制备和抑郁症标准化诊断、治疗及研究提供参考。方法:40只健康雄性大鼠,随机分为空白组(K组)、慢性不可预知组(GY组)、肾虚型抑郁症组(SM组)和脾虚型抑郁症组(PM组)。K组正常饲养;GY组采用慢性不可预知性温和刺激(CUMS)联合孤养造模;SM组采用CUMS联合皮下注射氢化可的松(25 mg·kg^(-1))孤养造模;PM组采用CUMS联合腹腔注射利血平(0.5 mg·kg^(-1))孤养造模,造模时间均持续4周。采用行为学实验评估动物抑郁程度;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)的水平;采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOFMS)分别对各组大鼠的脑、肝脏、肾脏组织进行代谢组学分析,并进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA),通过变量重要性投影(VIP)值>1筛选差异代谢物,并进一步通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对各组大鼠脑、肝、肾组织进行通路富集分析。结果:大鼠行为学结果显示,与K组比较,3种模型组大鼠的糖水消耗率均显著下降(P实验中的静止时间显著增加、攀爬次数显著下降(P实验中,运动距离减少,角落活动时间及静止时间增加(P中心区域活动时间显著降低(P中心区域活动时间明显增加(P实验中,与Stranger1接触时间显著减少(P实验中的逃避潜伏期显著增加,逃逸平台滞留时间、平台象限进入次数及平台穿台次数显著下降(P中医证候特点的抑郁症模型。3种抑郁模型大鼠脑、肝、肾组织代谢组学呈明显差异,肾虚型和脾虚型抑郁症模型大鼠的肝、肾差异代谢物均存在相反的变化趋势。可为中医抑郁症研究提供实验基础。

关键词：抑郁症中医证候模型代谢组学差异代谢物模型评价氢化可的松利血平超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)

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中药调控MAPK通路治疗肥胖的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 254-262页

作者：曹雷刘明军吴春炜陈海龙王若琳包扬何泽长春中医药大学长春130117 长春中医药大学附属医院长春130021

伴随着肥胖患病率在全世界范围内的急剧提升,目前已成为全人类需要共同面对的重要公共卫生问题。肥胖以脂肪细胞数量增多及体积扩张为主要特征,并伴有不同程度的代谢紊乱。同时肥胖又是糖尿病、高血压、中风、癌症及心脑血管疾病的危险... 详细信息

伴随着肥胖患病率在全世界范围内的急剧提升,目前已成为全人类需要共同面对的重要公共卫生问题。肥胖以脂肪细胞数量增多及体积扩张为主要特征,并伴有不同程度的代谢紊乱。同时肥胖又是糖尿病、高血压、中风、癌症及心脑血管疾病的危险因素,为社会及家庭带来极大负担。肥胖受生活方式、环境、行为及遗传等因素影响,是多因素相互作用的结果,其病理过程复杂涉及炎症、自噬、肠菌紊乱等多种机制。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应作为信号传导的关键通路,参与到细胞增殖、分化、凋亡及应激反应等多个过程中。国内外研究表明MAPK信号通路可通过多途径调控肥胖,如调控脂肪细胞分化及凋亡、调节食欲、改善炎症等。中药在防治肥胖方面效果显著且存在多靶点、多成分、不良反应小等优势,且研究发现MAPK信号通路亦是其重点调控的主要通路之一,但此领域尚未进行系统总结。故该文通过检索国内外最新研究,简要概述MAPK通路基本结构,重点总结了中药通过干预MAPK通路治疗肥胖的最新研究进展。结果表明,调控脂肪组织生成,分化及产热,降低炎症及氧化应激水平,改善胰岛素敏感性及代谢紊乱似乎为中药调控MAPK通路防治肥胖的主要途径。但后续仍需丰富研究方法,重点探索中药复方基于MAPK通路防治肥胖的潜在机制。

关键词：中药肥胖丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路研究进展机制

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 104-110页

作者：赖颖蓉赵倩琳姜丽红长春中医药大学中医学院长春130117 长春中医药大学附属医院长春130117

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注... 详细信息

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

关键词：参红通络方心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) Bcl-2相关X蛋白(Bax) 胱天蛋白酶-3(Caspase-3)

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鹿茸水溶性蛋白的结构表征与抗疲劳活性研究

中国医院药学杂志 2024年

作者：潘黛安刘那王思明白雪媛唐晓雷刘诗超长春中医药大学附属医院实验中心长春中医药大学东北亚中医药研究院长春中医药大学药学院

目的：本研究旨在探索鹿茸水溶性蛋白的结构特征，分析其抗疲劳的作用功效。方法：以梅花鹿鹿茸为原料，通过碱提酸沉法提取了鹿茸水溶性蛋白，通过SDS-PAGE凝胶电泳结合考马斯亮蓝染色法检测其分子量分布，通过高效液相色谱法分析其氨... 详细信息

目的：本研究旨在探索鹿茸水溶性蛋白的结构特征，分析其抗疲劳的作用功效。方法：以梅花鹿鹿茸为原料，通过碱提酸沉法提取了鹿茸水溶性蛋白，通过SDS-PAGE凝胶电泳结合考马斯亮蓝染色法检测其分子量分布，通过高效液相色谱法分析其氨基酸组成，采用紫外光谱、圆二色光谱、红外光谱、内源荧光光谱等光谱学方法，以及扫描电子显微镜检测其结构特征和微观分子形态，利用大鼠力竭游泳实验评价其抗疲劳活性。结果：鹿茸水溶性蛋白的主要分子量分布为（80～43）×103，以及小于14.4×103，其中含有丰富的谷氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和亮氨酸，以及丰富的必需氨基酸。鹿茸水溶性蛋白具有明显的蛋白质特征结构，包含丰富的α-螺旋结构，具有良好的蛋白稳定性，微观形态多呈片状和无规则树枝状。其能够明显延长大鼠的力竭游泳时间，降低血液中尿素氮和乳酸的含量，增加肝糖原和肌糖原的累积，提高乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性，降低丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结论：鹿茸水溶性蛋白的分子特征可能是其具有良好抗疲劳活性的结构基础。

关键词：鹿茸蛋白结构表征抗疲劳

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 208-215页

作者：李薇雷诗卉王瑾茜刘林杨蕙湖南中医药大学第一附属医院医学创新实验中心湖南长沙410000

探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸的调控以及神经炎症的影响。建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为4组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组以及左归降糖解郁方低、高剂量组,另设空白组,每组8只。随后... 详细信息

探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸的调控以及神经炎症的影响。建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为4组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组以及左归降糖解郁方低、高剂量组,另设空白组,每组8只。随后,对大鼠进行抑郁样行为检测;采集脑脊液检测促炎性细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],采集血清检测下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)相关蛋白[促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)]和葡萄糖代谢。收集各组肠道内容物,进行肠道菌群16S rRNA测序分析和短链脂肪酸(SCFAs)测序。结果提示,左归降糖解郁方不仅可以改善糖尿病并发抑郁症大鼠糖代谢(P<0.01),缓解抑郁样行为(P<0.05)和HPA轴亢进(P<0.05或P<0.01),还可以改善脑内炎症反应,表现为脑脊液中促炎性细胞因子显著降低(P<0.05或P<0.01);并改善肠道菌群,使糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群趋于空白组发展,表现为提高糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群中厚壁菌门Firmicutes的丰度;并能够显著提高SCFAs(乙酸、丁酸、戊酸和异戊酸)的含量(P<0.01)。因此推测,左归降糖解郁方可有效改善肠道菌群紊乱,并调控SCFAs,从而改善糖尿病并发抑郁症糖代谢紊乱和抑郁样行为。

关键词：糖尿病抑郁症左归降糖解郁方肠道菌群短链脂肪酸

趁鲜与传统切制人参饮片标准汤剂量值传递规律分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 132-140页

作者：张雪晶徐梦丹刘小康邵娟鲁梦琪谢晓燕蔡广知贡济宇长春中医药大学药学院长春130117 长春中医药大学附属第三临床医院长春130118

目的:通过对人参趁鲜切制与传统切制饮片标准汤剂的量值传递规律进行分析,为人参趁鲜切制饮片的质量控制及应用开发研究提供参考。方法:经标准工艺分别制备10批具代表性的人参趁鲜与传统切制饮片及其标准汤剂,采用Agilent EC-C18色谱柱(... 详细信息

目的:通过对人参趁鲜切制与传统切制饮片标准汤剂的量值传递规律进行分析,为人参趁鲜切制饮片的质量控制及应用开发研究提供参考。方法:经标准工艺分别制备10批具代表性的人参趁鲜与传统切制饮片及其标准汤剂,采用Agilent EC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,2.7μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~23 min,18%~21%A;23~35 min,21%~28%A;35~80 min,28%~32%A),检测波长203 nm,建立标准汤剂的指纹图谱,并进行相似度评价、主成分分析(PCA)及偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),以变量重要性投影(VIP)值>1筛选差异成分,对筛选出的已知差异成分进行定量分析,结合出膏率、转移率等指标,探讨人参趁鲜切制与传统切制饮片标准汤剂的量值传递规律差异。结果:人参趁鲜切制饮片与传统切制饮片标准汤剂指纹图谱相似度均>0.950,分别确定了18个共有峰,指认了其中9个共有峰;PCA及PLS-DA结果表明,2种饮片标准汤剂中指标成分的含量存在一定差异,人参趁鲜切制饮片中人参皂苷Rg_(1)、Re、Ro含量高于传统切制饮片,而人参皂苷Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rd含量低于传统切制饮片,人参趁鲜切制饮片标准汤剂中人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Ro含量高于传统切制饮片标准汤剂,而人参皂苷Rc、Rb_(2)、Rd在2种饮片标准汤剂中的含量相当。人参趁鲜切制饮片标准汤剂中人参皂苷Rg_(1)、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)平均转移率均明显高于传统切制饮片标准汤剂(P<0.05);人参皂苷Re、Rd平均转移率有所升高,但差异无统计学意义;人参皂苷Ro平均转移率差异无统计学意义,趁鲜切制饮片标准汤剂的出膏率明显高于传统切制饮片标准汤剂(P<0.05)。结论:趁鲜切制饮片标准汤剂的出膏率、指标成分含量及转移率均优于传统切制饮片标准汤剂,可为趁鲜切制饮片后续临床应用提供数据支持。

关键词：人参趁鲜切制标准汤剂量值传递转移率人参皂苷出膏率质量标准

国医大师王烈运用补肾培元法治疗儿科疾病稳定期经验

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中华中医药杂志 2024年第4期39卷 1800-1803页

作者：陈慧丹杨福双孙丽平王烈(指导) 长春中医药大学长春130117 长春中医药大学附属医院儿童诊疗中心长春130021

基于小儿“肾常不足”的生理特性,王烈教授认为小儿在疾病恢复期多呈肾虚状态,将其责之于先天禀赋、他脏所累或久病损肾。故提倡以补肾培元法以扶正固本,以期达到未病先防、瘥后防复之目的。总结王烈教授临证运用补肾培元法治疗儿科疾... 详细信息

基于小儿“肾常不足”的生理特性,王烈教授认为小儿在疾病恢复期多呈肾虚状态,将其责之于先天禀赋、他脏所累或久病损肾。故提倡以补肾培元法以扶正固本,以期达到未病先防、瘥后防复之目的。总结王烈教授临证运用补肾培元法治疗儿科疾病稳定期经验,分别在哮喘稳定期用自拟固哮方以补肾培元,抑痰防哮;反复呼吸道感染稳定期用自拟固防饮以补肾培元,固表实卫;抽动障碍稳定期用自拟滋肾散以补肾培元,安脑充髓;过敏性紫癜稳定期用自拟补肾方以补肾培元,扶正固络。

关键词：儿科疾病王烈补肾培元稳定期名医经验