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梅花鹿茸快速生长及骨化期相关差异表达蛋白分析

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分析化学 2018年第7期46卷 1152-1162页

作者：幺宝金张梅刘美辰王群刘宇昕赵雨长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心长春中医药大学创新实践中心

采用同位素标记相对定量(iTRAQ)技术、超高效液相色谱-质谱联用技术和生物信息学分析方法对东北梅花鹿快速生长期(60 d)与骨化期鹿茸(90 d)进行比较蛋白质组学研究,共鉴定出127种差异蛋白。与骨化期鹿茸比较,快速生长期鹿茸中显著上调... 详细信息

采用同位素标记相对定量(iTRAQ)技术、超高效液相色谱-质谱联用技术和生物信息学分析方法对东北梅花鹿快速生长期(60 d)与骨化期鹿茸(90 d)进行比较蛋白质组学研究,共鉴定出127种差异蛋白。与骨化期鹿茸比较,快速生长期鹿茸中显著上调的差异蛋白80种,显著下调差异蛋白47种,这些差异表达蛋白主要分布在细胞外基质、核小体、珠蛋白-血红蛋白复合物、肌动蛋白丝、内质网-高尔基中隔室、内质网官腔及核内膜等部位。快速生长期鹿茸显著上调的差异蛋白主要是参与血氧运输、神经生长和再生、软骨和骨组织发育及ATP合成的功能蛋白,而显著下调的差异蛋白主要为参与软骨内骨化过程的功能蛋白,这些蛋白在鹿茸不同生长时期表达量的变化与鹿茸的快速生长和骨化进程密切相关。本研究为系统揭示鹿茸快速生长及骨化的分子机制提供了基础数据,同时对研究鹿茸的药效物质基础及临床应用具有重要的指导意义。

关键词：梅花鹿茸快速生长期骨化期同位素标记相对定量技术蛋白质组学差异蛋白

人参皂苷Re对UVC辐射损伤细胞的保护作用

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 507-511,I0001页

作者：张洪长王恩鹏陈新唐燕王洪鑫王炫策许新长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心药理研究室吉林长春130117 长春中医药大学药学院吉林长春130117

目的:研究人参皂苷Re对短波紫外线(UVC)辐射损伤人胚胎纤维芽细胞RSa的保护作用,探讨人参皂苷Re抗UVC辐射的作用机制。方法:采用不同强度的UVC辐射RSa细胞,在辐射前后给予50mg.L-1的人参皂苷Re(UVC+Re组),同时设UVC模型组和UVC+Rg1组,利... 详细信息

目的:研究人参皂苷Re对短波紫外线(UVC)辐射损伤人胚胎纤维芽细胞RSa的保护作用,探讨人参皂苷Re抗UVC辐射的作用机制。方法:采用不同强度的UVC辐射RSa细胞,在辐射前后给予50mg.L-1的人参皂苷Re(UVC+Re组),同时设UVC模型组和UVC+Rg1组,利用MTT法检测细胞生存率,采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡情况;酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性,集落形成分析法检测SOD抑制剂作用细胞后细胞的生存率。结果:MTT法,与UVC模型组比较,UVC+Re和UVC+Rg1组细胞生存率比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。FCM,不同剂量(5、10和15J.m-2)的UVC辐射可引起RSa细胞早期的凋亡,UVC+Re组细胞凋亡率小于UVC模型组。细胞周期检测,UVC辐射可导致G2期细胞百分比增加(P<0.01),UVC+Re组G2期细胞百分比例明显小于UVC模型组(P<0.01)。UVC+Re组SOD活性明显高于UVC模型组(P<0.01)。结论:人参皂苷Re有较好的抗UVC效果,能够有效提高RSa细胞的生存率,减少UVC辐射引起的细胞早期凋亡,增加RSa细胞内SOD活性。

关键词：人参皂苷Re 紫外线流式细胞术细胞凋亡超氧化物歧化酶

初生期和快速生长期梅花鹿茸蛋白表达谱差异分析

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分析化学 2018年第11期46卷 1732-1738页

作者：张梅幺宝金杨永刚胡耀中李银清王群赵雨长春中医药大学创新实践中心长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心长春中医药大学附属医院

采用同位素标记蛋白质相对和绝对定量技术、液相色谱-质谱联用技术和生物信息学分析方法对初生期(15 d)和快速生长期(60 d)东北梅花鹿茸进行蛋白表达谱差异分析,共鉴定出127种差异表达蛋白。其中,与快速生长期鹿茸相比,初生期鹿茸中显... 详细信息

采用同位素标记蛋白质相对和绝对定量技术、液相色谱-质谱联用技术和生物信息学分析方法对初生期(15 d)和快速生长期(60 d)东北梅花鹿茸进行蛋白表达谱差异分析,共鉴定出127种差异表达蛋白。其中,与快速生长期鹿茸相比,初生期鹿茸中显著性上调差异表达蛋白49种,显著性下调差异表达蛋白78种。这些差异表达蛋白主要为细胞外基质成分及参与调控神经生长和血液循环进程的功能蛋白。初生期鹿茸主要富含细胞外基质蛋白成分,且在快速生长期鹿茸中表达量显著下调。同时,与初生期鹿茸相比,参与调控神经生长和血液循环的相关蛋白表达量在快速生长期鹿茸中显著上调。这些差异表达蛋白共同参与调控梅花鹿茸的生长速度。本研究结果为进一步揭示鹿茸生长机制提供了基础数据,对研究鹿茸的临床应用具有重要的参考意义。

关键词：梅花鹿茸初生期快速生长期蛋白质表达谱差异分析

人参PgMYB4基因表达载体构建及其对拟南芥的抗旱性分析

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中草药 2016年第17期47卷 3094-3097页

作者：孟祥宇谢红梅才可新王思明张丽轩宋岩张惠长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心吉林长春130117

目的构建人参Pg MYB4基因表达载体,并研究该基因对拟南芥的抗旱功能。方法采用RT-PCR技术克隆人参Pg MYB4基因,构建表达载体,通过农杆菌介导的花序浸蘸法将其转化到拟南芥中,获得转基因拟南芥,以野生型拟南芥作对照,检测植株与抗旱相关... 详细信息

目的构建人参Pg MYB4基因表达载体,并研究该基因对拟南芥的抗旱功能。方法采用RT-PCR技术克隆人参Pg MYB4基因,构建表达载体,通过农杆菌介导的花序浸蘸法将其转化到拟南芥中,获得转基因拟南芥,以野生型拟南芥作对照,检测植株与抗旱相关的生理指标。结果获得的人参Pg MYB4基因全长为735 bp,编码245个氨基酸,预测其相对分子质量为27 914;在干旱胁迫条件下,转基因拟南芥的生长状态明显优于野生型拟南芥,与野生型相比,转基因拟南芥叶片相对叶绿素量降低幅度小、脯氨酸量显著升高、水丢失率较低。结论人参Pg MYB4基因具有抗干旱胁迫的能力。

关键词：人参 PgMYB4基因表达载体构建转基因拟南芥干旱胁迫

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玉米须黄酮提取物对痛风性关节炎大鼠的影响

现代食品科技 2015年第4期31卷 13-16 7,7页

作者：林贺董金香邱智东律广富张婧卓常志达林喆长春中医药大学药学院吉林长春130117 长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心吉林长春130117

研究了玉米须黄酮提取物对尿酸钠所致大鼠痛风性关节炎的影响。给药组大鼠灌胃给予玉米须黄酮提取物(1 g/kg、0.5g/kg、0.25 g/kg),连续8天,空白及模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水,第5天灌胃1小时后于模型及给药组大鼠右踝关节腔内注射... 详细信息

研究了玉米须黄酮提取物对尿酸钠所致大鼠痛风性关节炎的影响。给药组大鼠灌胃给予玉米须黄酮提取物(1 g/kg、0.5g/kg、0.25 g/kg),连续8天,空白及模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水,第5天灌胃1小时后于模型及给药组大鼠右踝关节腔内注射尿酸钠溶液2.5 mg/m L,诱导痛风性关节炎的发生,72小时后测定大鼠踝关节肿胀度及血浆中白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)及基质金属蛋白酶1(MMP-1)的水平,并进行大鼠右踝关节病理组织学检查。与模型对照组比较,给予玉米须黄酮提取物后,其高、中剂量组(1 g/kg、0.5 g/kg)的踝关节肿胀度均明显降低(P<0.01),血浆IL-1α、IL-6、TNF-α及血浆ICAM-1、MMP-1水平明显降低(P<0.05),并且可以改善造模大鼠关节滑膜组织的病理改变。提示玉米须黄酮提取物具有较好的抗痛风性关节炎的作用。

关键词：玉米须黄酮提取物痛风急性关节炎炎症细胞因子

雷公藤多苷对强直性脊柱炎患者成纤维细胞中BMP-2表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1187-1191页

作者：张洪长张莹刘明昕唐燕张鹏飞潘志长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心药理研究室吉林长春130117 吉林大学药学院药理研究室吉林长春130021 长春中医药大学图书馆参考咨询部吉林长春130117

目的:探讨雷公藤多苷(LGTDG)对骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路及BMP-2表达的影响,阐明LGTDG抗强直性脊柱炎(AS)骨化的作用机制。方法:体外培养的AS成纤维细胞分为对照组与0.5、1.0、1.5和2.0 mg·L-1给药组,检测各组细胞内碱性磷酸酶(... 详细信息

目的:探讨雷公藤多苷(LGTDG)对骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路及BMP-2表达的影响,阐明LGTDG抗强直性脊柱炎(AS)骨化的作用机制。方法:体外培养的AS成纤维细胞分为对照组与0.5、1.0、1.5和2.0 mg·L-1给药组,检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性及最佳药物浓度;CCK-8法检测1.0mg·L-1给药组的细胞增殖率;生化检测法定量检测对照组与1.0 mg·L-1给药组BMP-2表达水平;Western blotting法检测对照组与1.0mg·L-1给药组BMP-2和Cbfal蛋白表达。结果:各给药组细胞中ALP活性均低于对照组,其中以1.0mg·L-1给药组细胞的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,1.0mg·L-1给药组AS成纤维细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),LDTDG诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期后细胞的增殖率开始下降。生化检测法和Western blotting法检测,1.0mg·L-1给药组BMP-2的蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论:LGTDG通过对BMP信号转导通路的影响有效地抑制AS成纤维细胞内BMP-2表达,延缓细胞向成骨型分化导致AS骨化发生。

关键词：雷公藤多苷强直性脊柱炎骨形态发生蛋白 2 成纤维细胞 bone morphogenetic protein-2

电喷雾质谱结合化学计量学方法快速筛选玛咖促睾丸间质细胞增殖活性成分

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分析化学 2016年第11期44卷 1735-1741页

作者：孙佳明田淋淋何忠梅孟令文孙慧阚俊明张辉长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心吉林农业大学中药材学院长春中医药大学研究生院

应用电喷雾串联质谱法(ESI-MS/MS)对云南和秘鲁产玛咖样品中低极性化学成分进行检测,获得各样品的一级质谱指纹谱图和各离子峰的二级质谱数据,并测定各样品促进大鼠睾丸间质细胞增殖活性,采用化学计量学方法主成分分析(PCA)、偏最小二乘... 详细信息

应用电喷雾串联质谱法(ESI-MS/MS)对云南和秘鲁产玛咖样品中低极性化学成分进行检测,获得各样品的一级质谱指纹谱图和各离子峰的二级质谱数据,并测定各样品促进大鼠睾丸间质细胞增殖活性,采用化学计量学方法主成分分析(PCA)、偏最小二乘法(PLS)和灰色关联度分析(GRA)对所获得的一级质谱数据进行处理后,可有效区分玛咖的不同产地,且筛选出其中具有促大鼠睾丸间质细胞增殖活性的可能成分,进而通过二级质谱数据分析得到可能活性成分的结构。实验结果表明,玛咖低极性成分具有很好的促大鼠睾丸间质细胞增殖活性,其中活性较强的主要为N-benzylhexadecanamide和N-benzy-(9Z,12Z,15Z)-octadecatrienamide。本方法为简单、快速分析中药中促睾丸间质细胞增殖活性成分筛选方法提供了借鉴。

关键词：玛咖不同产地电喷雾串联质谱化学计量学方法促睾丸间质细胞增殖

枸杞多糖对中波紫外线照射HaCaT细胞低氧诱导因子1α、血管内皮细胞生长因子表达的影响

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中华皮肤科杂志 2017年第9期50卷 667-670页

作者：张洪长左立春孙海才律广富李娜林喆长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心 130117

目的探讨枸杞多糖对中波紫外线（UVB）照射HaCaT细胞低氧诱导因子1α（HIF？1α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。方法将常规培养的HaCaT细胞，分为对照组和枸杞多糖给药组（12.5、25.0、50.0、100.0 μg/ml浓度），各组在给... 详细信息

目的探讨枸杞多糖对中波紫外线（UVB）照射HaCaT细胞低氧诱导因子1α（HIF？1α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。方法将常规培养的HaCaT细胞，分为对照组和枸杞多糖给药组（12.5、25.0、50.0、100.0 μg/ml浓度），各组在给药4 h后同时进行不同强度UVB（0、20、40、60 mJ/cm2）照射，培养24 h。用CCK？8法检测细胞生存率。酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性；RT？PCR及Western 印迹检测HIF？1α、VEGF基因及蛋白的表达。结果对照组同照射剂量比，枸杞多糖（12.5 、25.0 、100.0 μg/ml浓度）各组不同程度提高UVB照射损伤细胞的生存率（P 〈 0.05），以50.0 μg/ml 枸杞多糖组升高最明显，差异有统计意义（P 〈 0.01）。枸杞多糖各给药组SOD活性以50.0 μg/ml SOD活性升高最明显，差异有统计学意义（P 〈 0.01）。随着UVB照射剂量（20、40、60 mJ/cm2）增加，HIF？1α、VEGF基因、蛋白的表达也逐渐增高，与对照组相比，50.0 μg/ml 枸杞多糖给药组能够有效降低细胞内HIF？1α、VEGF基因及蛋白的表达，差异有统计意义（P 〈 0.05）。结论枸杞多糖通过对HaCaT细胞内HIF？1α、VEGF基因及蛋白表达的影响，可能参与预防UVB照射损伤的过程。

关键词：紫外线枸杞多糖类内皮生长因子低氧诱导因子1α HaCaT细胞

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鹿茸寡肽的制备及其促成骨细胞的增殖作用

高等学校化学学报 2008年第9期29卷 1791-1796页

作者：王华林喆刘强蔡明军徐力张学忠吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130021 长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心长春130117 吉林大学中日联谊医院长春130033

从梅花鹿鹿茸中提取了天然鹿茸总多肽（VATP）.在进一步分离纯化的过程中,筛选出具有促进成骨细胞增殖的高活性肽组分（VAP-B）,并通过制备型HPLC对其纯化,得到了分子量分布约为200～600的小肽活性组分（VAP-B2）.细胞周期分析结果表明... 详细信息

从梅花鹿鹿茸中提取了天然鹿茸总多肽（VATP）.在进一步分离纯化的过程中,筛选出具有促进成骨细胞增殖的高活性肽组分（VAP-B）,并通过制备型HPLC对其纯化,得到了分子量分布约为200～600的小肽活性组分（VAP-B2）.细胞周期分析结果表明,鹿茸肽VAP-B2组分促进了人成骨肉瘤细胞OS-732的周期转化,使其细胞周期S期细胞指数明显增加,即表现为S期DNA含量明显提高.碱性磷酸酶（ALP）活性检测结果表明,随着鹿茸肽VAP-B2剂量的增加,ALP的活性明显增加.这与成骨细胞增殖分化及成熟过程中,细胞的周期性变化和骨形成标志物碱性磷酸酶水平的明显增高相符.

关键词：梅花鹿鹿茸鹿茸肽分离与纯化生理活性成骨细胞