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SARS-CoV-2 Omicron变异株多重微滴式数字PCR定量方法的建立及应用

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生物技术通报 2024年第2期40卷 80-89页

作者：郑巧林华徐浩安微薛昌华张婧韩国全成都海关技术中心成都610000 四川农业大学食品学院雅安625014 深圳海关动植物检验检疫技术中心深圳518045

【目的】为建立精准、高效的多重微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量分析检测方法,开发可同时鉴别新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)ORF1ab基因、N基因、E基因以及Omicron变异株S基因的检测体系,提高病毒性传染疾病的诊断效率及传播风险监测能力。【方法】通过筛选保守基因序列并设计特异性引物与探针,优化反应体系和扩增程序,对该方法的特异性、灵敏度及稳定性进行评价。以临床样本为实验材料,利用建立的ddPCR方法进行检测和验证,确定阳性检出率。【结果】多重ddPCR反应体系中,各对引物探针对目的片段均能有效扩增,SARS-CoV-2 ORF1ab基因、N基因、E基因以及Omicron变异株S基因灵敏度检测下限分别为0.59、0.68、1.44、1.03 copies/μL。在20份临床样本的核酸检测中,共检出16份阳性样本,阳性率达80%(16/20),经荧光定量PCR方法复测符合率一致。【结论】研究建立的多重ddPCR方法特异性强、灵敏度高,可实现对临床样本中微量新冠病毒的精确定量检测。

关键词：微滴式数字PCR 新型冠状病毒 Omicron变异株定量

玉米褪绿斑驳病毒RT-PCR检测引物的筛选

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中国植保导刊 2024年第4期44卷 82-88页

作者：李献锋于璇冯黎霞丁钿魏霜龙阳刘海军广州海关技术中心广东广州510623 广州白云机场海关综合技术服务中心广东广州510470 湛江海关技术中心广东湛江524022

收集18对已报道的玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)RT-PCR检测引物,利用MCMV阳性样品和健康样品进行测试,对实际表现较优的引物进一步分析其特异性和灵敏度,再以220份玉米种子样品进行验证。结果显示,在测试的18对引物中,有2对引物MCMV PF7/MCMV ... 详细信息

收集18对已报道的玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)RT-PCR检测引物,利用MCMV阳性样品和健康样品进行测试,对实际表现较优的引物进一步分析其特异性和灵敏度,再以220份玉米种子样品进行验证。结果显示,在测试的18对引物中,有2对引物MCMV PF7/MCMV PR7和M-PCR-F/M-PCR-R对MCMV的检测效果较优,其对7种其他玉米病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达到200 pg/μL;实际样品检测中,应用上述2对引物检测的结果一致,均检出6份阳性样品。根据测试结果,推荐使用引物MCMV PF7/MCMV PR7和M-PCR-F/M-PCR-R用于玉米种子携带MCMV的检测。

关键词：玉米褪绿斑驳病毒 RT-PCR 引物筛选玉米种子检测

9种转基因玉米外源基因核酸质谱检测方法研究

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玉米科学 2024年第7期32卷 40-45页

作者：卢小雨张郁吕文刚郭惠民向才玉郭悠然章桂明深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518010 浙江迪谱诊断技术有限公司杭州311103 佛山海关综合技术中心广东顺德528303

针对目前转基因玉米高通量快速筛查技术缺乏,首次利用飞行时间核酸质谱技术,建立pCaMV35S、pFMV35S、tNOS、NPTII、BAR、PAT、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS和CryIA(b)9种转基因玉米常见外源基因及玉米内源基因ZEIN一次性快速筛查检测方法... 详细信息

针对目前转基因玉米高通量快速筛查技术缺乏,首次利用飞行时间核酸质谱技术,建立pCaMV35S、pFMV35S、tNOS、NPTII、BAR、PAT、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS和CryIA(b)9种转基因玉米常见外源基因及玉米内源基因ZEIN一次性快速筛查检测方法,靶基因检测限最低为20拷贝。研究建立的方法特异性强、稳定性好、灵敏度高,可用于进口玉米及其产品中转基因成分的快速筛查,为缩短检测周期和提高商品通关速度提供便利。

关键词：玉米外源基因质谱分析转基因检测

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声学传感技术在昆虫检测中的应用与前景展望

环境昆虫学报 2024年第5期46卷 1068-1075页

作者：汤怡静黄河清程颖慧高瑞芳汪莹刘海军魏霜向才玉深圳海关动植物检验检疫技术中心深圳518045 深圳市仙湖植物园深圳518000 广州海关技术中心广州510623

声学传感技术作为一种简单、实用且有效的技术手段,广泛应用于农业(作物、树木)和食品安全(谷物、鲜果、干果等)相关领域,在害虫检测、监测预警、生物学研究以及防控方面取得了显著进展,并开发出了一些声测设备。本文综述了近年来几种... 详细信息

声学传感技术作为一种简单、实用且有效的技术手段,广泛应用于农业(作物、树木)和食品安全(谷物、鲜果、干果等)相关领域,在害虫检测、监测预警、生物学研究以及防控方面取得了显著进展,并开发出了一些声测设备。本文综述了近年来几种应用于昆虫检测的声学传感技术,包括碰撞声检测技术、压电传感器技术和超声波检测技术等,并对其应用前景进行了探讨,旨在为声学传感技术在昆虫检测领域的研究及应用提供参考。

关键词：传感器昆虫声学技术研究进展

基于热重分析的再造烟叶热稳定性评价方法研究与应用

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中国烟草学报 2024年

作者：叶仲力李茂毅梁晖陈昆焱顾茜蔡国华林艳苏明亮刘泽春马鹏飞李巧灵福建中烟工业有限责任公司技术中心

【目的】准确评价批次间再造烟叶的热稳定性，建立一种基于热重分析法判定不同批次再造烟叶热稳定性的方法。【方法】采用正交试验方法对样品形态、进样量、取样重量及升温速率、环境气氛、气体流速进行优化，在优化条件下对参照再造烟... 详细信息

【目的】准确评价批次间再造烟叶的热稳定性，建立一种基于热重分析法判定不同批次再造烟叶热稳定性的方法。【方法】采用正交试验方法对样品形态、进样量、取样重量及升温速率、环境气氛、气体流速进行优化，在优化条件下对参照再造烟叶样品进行热分析测试，定义DTG曲线的差异度阈值(RTH)及各温度段DTG曲线的差异度阈值。【结果】（1）方法的优化结果为：再造烟叶样品质量大于35 g，研磨成小于60目，进样量为（15±1） mg，升温速率20 K/min，环境气氛为氮气，其流速为40 mL/min。（2）各温度段的差异度阈值可作为再造烟叶热稳定性的评价依据并揭示质量波动原因。【结论】该方法可有效监测不同批次再造烟叶的热稳定性，且方法操作简单、准确度高，适用于相同规格批次间再造烟叶热稳定性波动的评价。

关键词：热重分析法 DTG曲线再造烟叶热稳定性差异度阈值

烟草苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL的克隆及功能分析

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中国烟草学报 2024年

作者：许力许永向海英黄海涛米其利陈钰栋蒋佳芮李雪梅高茜云南中烟工业有限责任公司技术中心

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金... 详细信息

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金元中克隆了苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL，利用生物信息学方法分析NtPAL蛋白结构和进化关系。采用CRISPR/cas9基因编辑技术获得NtPAL基因编辑植株PAL-KO，在植株成熟期测定多酚含量和苯丙氨酸解氨酶活性。利用本氏烟草瞬时表达系统，进行NtPAL亚细胞定位分析。【结果】烟草NtPAL基因的全长CDS序列为2016bp，编码一个由671个氨基酸组成的PAL蛋白。NtPAL含有典型的苯丙氨酸解氨酶结构域PLN02457，是一个新的烟草NtPAL基因。亚细胞定位实验表明NtPAL定位在细胞核区域。与对照植株相比，编辑植株PAL-KO对烟草花叶病毒（TMV）的抗性降低，成熟期叶片中新绿原酸、莨菪亭、隐绿原酸、绿原酸及芸香苷等5种多酚含量均显著升高，苯丙氨酸解氨酶活性降低。【结论】烟草NtPAL通过调控多酚含量与苯丙氨酸解氨酶活性响应烟草花叶病抗性。该研究结果为深入阐明NtPAL在烟草抗病性增强和遗传改良方面的潜力奠定了理论基础。

关键词：烟草 NtPAL 亚细胞定位基因功能抗病性

蒸汽处理对上部白肋烟重要香味物质的影响研究

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中国烟草学报 2024年

作者：吴键赵路灿戴路胡安福夏倩肖卫强王骏陈震李林洪夏骏黄华蒋健浙江中烟工业有限责任公司技术中心

【目的】考察蒸汽处理对上部白肋烟重要香味物质的影响。【方法】利用动态水分吸附脱附仪，在95%相对湿度下，研究蒸汽处理温度和处理时长对上部白肋烟非酶棕色化反应产物、苯丙氨酸类降解产物、类胡萝卜素降解产物和西柏烷类降解产物... 详细信息

【目的】考察蒸汽处理对上部白肋烟重要香味物质的影响。【方法】利用动态水分吸附脱附仪，在95%相对湿度下，研究蒸汽处理温度和处理时长对上部白肋烟非酶棕色化反应产物、苯丙氨酸类降解产物、类胡萝卜素降解产物和西柏烷类降解产物含量的影响，分析这4类重要香味物质在不同处理条件下的变化趋势。【结果】在实验范围内，提高处理温度或增加处理时长会使非酶棕色化反应、类胡萝卜素降解、西柏烷类降解三类产物的含量先增加后减少，而苯丙氨酸类降解产物的含量则呈下降趋势。在60℃处理3h时，上部白肋烟这4类重要香味物质的总含量增加了12.53%，且香气和杂气等感官品质指标明显提高。【结论】蒸汽处理可作为一种有效调控上部白肋烟香味物质和感官品质的方法。

关键词：上部白肋烟蒸汽处理香味物质处理时长处理温度

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基于多方法优势组合的烟叶配方模块组合分类

中国烟草学报 2024年

作者：蒋佳磊廖付郝贤伟汤晓东陈晓水朱书秀赵振杰浙江中烟工业有限责任公司技术中心

为深入研究卷烟品牌烟叶配方分组方法和原则，基于457个烟叶样品的12种感官评吸指标比较了4种判别分析和4种机器学习方法对4种烟叶分类的建模集正确率（R）、验证集正确率（r）和平均正确率（m），并基于分类方法选择和权重分配构建了... 详细信息

为深入研究卷烟品牌烟叶配方分组方法和原则，基于457个烟叶样品的12种感官评吸指标比较了4种判别分析和4种机器学习方法对4种烟叶分类的建模集正确率（R）、验证集正确率（r）和平均正确率（m），并基于分类方法选择和权重分配构建了一种高精度的组合分类方法。结果表明：①与判别分析相比，机器学习的R显著提高，而r显著下降，且LS-SVM的R最高（92.8%），FDA和F-BDA的r最高（80.2%），但m无显著性差异；②优化选择M-BDA、FDA、ANN和KNN四种方法，按精度赋权建立的组合分类方法同时提高了R（95.3%）和r（89.0%），且m由低于84%提高到92.2%，并通过理论计算和实际结果验证了组合分类方法的普遍有效性；③组合分类方法Kappa系数均大于0.8，方法可靠，一致性程度高，验证集m-F1度量显著提升21.2%，模型泛化能力大为增强；④优雅感、杂气、余味、润感和清晰度5项指标对分类起主要作用，符合利群品牌的风格特征；⑤误判样品（6.5%）指标评分与其模块真实类别的不匹配归因于对库存、成本和质量的平衡，基本符合烟叶配方的调整空间。

关键词：烟叶组合分类判别分析机器学习感官评吸配方模块

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地下水环境监测网建设现状与展望

环境科学研究 2024年第2期37卷 371-378页

作者：李海祥郇环周爱霞杨洋胡尊芳宋宗中生态环境部土壤与农业农村生态环境监管技术中心北京100012

地下水环境监测是地下水污染防治的重要环节,我国地下水环境监测网建设基础较为薄弱.对比欧美发达国家地下水监测网建设和运行模式,分析国家地下水监测工程、“十四五”国家地下水质量考核点位、国家级化工园区和北京市地下水环境监测... 详细信息

地下水环境监测是地下水污染防治的重要环节,我国地下水环境监测网建设基础较为薄弱.对比欧美发达国家地下水监测网建设和运行模式,分析国家地下水监测工程、“十四五”国家地下水质量考核点位、国家级化工园区和北京市地下水环境监测网的建设情况,归纳出监测网在区域背景值点位布设,在线监测设备研发,以及监管平台建设、数据共享和应用服务等方面存在的问题.基于监测网建设现状,依托新兴技术在水质监测领域的应用,总结其发展趋势集中于在线监测设备换代升级、监测点位物联互通、多样数据解析可视、信息传输安全保真四个方面.最后结合我国监测井建设现状与管理模式提出以下发展建议:①整合现有点位,衔接国家地下水监测工程和“十四五”地下水考核点位,统筹构建国家级、省级地下水环境监测网络体系.②加快新一代水质在线监测设备研发,降低故障率,提高监测精度;探索基于地球物理探测、卫星遥感解译、无人机航测和埋设传感器等技术的新型监测方式.③国家级地下水环境监测网与地表水监测网、大气污染监测网、土壤监测网等进行多网融合.这为我国地下水环境监测网建设奠定了基础.

关键词：地下水环境监测网地下水污染防治地下水环境监管平台国家地下水监测工程