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核因子E2相关因子2蛋白通过调控铁死亡介导脓毒症相关性肝损伤

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中华危重病急救医学 2024年第5期36卷 491-495页

作者：钟朕欧阳训彦郭起财熊力刘先发赣南医学院第一附属医院急诊科江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院骨科江西赣州341000

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白对小鼠脓毒症相关性肝损伤(SALI)铁死亡的作用。方法按随机数字表法将雄性SD小鼠分成6组,每组6只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建小鼠SALI模型,假手术(Sham)组仅开腹处理。CLP+Fer-1组、CLP+Erastin... 详细信息

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白对小鼠脓毒症相关性肝损伤(SALI)铁死亡的作用。方法按随机数字表法将雄性SD小鼠分成6组,每组6只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建小鼠SALI模型,假手术(Sham)组仅开腹处理。CLP+Fer-1组、CLP+Erastin组、CLP+ML385组、CLP+Curcumin组分别于术后经腹腔注射铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)10 mg·kg^(-1)·d^(-1)、铁死亡激活剂Erastin 20 mg·kg^(-1)·d^(-1)、Nrf2抑制剂ML38530 mg·kg^(-1)·d^(-1)、Nrf2激活剂Curcumin 100 mg·kg^(-1)·d^(-1)进行干预;Sham组、CLP组予生理盐水10 mg·kg^(-1)·d^(-1),均连续给药10 d。术后10 d收集小鼠血清和肝组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),以及肝组织匀浆液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和Fe2+水平;苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织病理学改变;透射电镜下观察肝细胞线粒体形状和长度;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肝组织Nrf2、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、前列腺素-内过氧化物合酶2(PTGS2)的蛋白表达。结果与Sham组比较,CLP组小鼠血清ALT、AST水平明显升高;镜下可见肝索排列紊乱,细胞肿胀、坏死,线粒体长度明显变短;肝组织中MDA、Fe2+水平明显上升,GSH含量明显下降,Nrf2、GPX4蛋白表达下降,PTGS2蛋白表达明显升高。与CLP组比较,CLP+Fer-1组和CLP+Curcumin组血清ALT、AST水平明显降低〔ALT(U/L):80.65±19.44、103.45±20.52比283.50±37.12,AST(U/L):103.33±11.90、127.33±15.79比288.67±36.82,均P<0.05〕;镜下可见肝索欠规整,细胞轻微肿胀,线粒体长度明显增加(μm:1.42±0.09、1.43±0.21比1.07±0.25,均P<0.05);肝组织中MDA、Fe2+水平明显下降,GSH含量明显升高〔MDA(mol/g):0.87±0.23、1.85±0.43比4.47±0.95,Fe2+(μg/g):63.80±7.15、67.48±6.28比134.52±14.32,GSH(mol/g):1.95±0.29、1.95±0.45比0.55±0.29,均P<0.05〕;肝组织Nrf2、GPX4蛋白表达明显升高,PTGS2蛋白表达明显下降(Nrf2/GAPDH:1.80±0.28、2.10±0.43比0.70±0.24,GPX4/GAPDH:0.80±0.06、0.93±0.07比0.48±0.02,PTGS2/GAPDH:0.76±0.05、0.84±0.01比1.02±0.09,均P<0.05);而CLP+Erastin组、CLP+ML385组上述指标结果则相反,血清ALT、AST水平明显升高〔ALT(U/L):344.52±40.79、321.70±21.10比283.50±37.12,AST(U/L):333.50±27.90、333.00±16.67比288.67±36.82,均P<0.05〕;镜下可见肝索排列紊乱,细胞明显肿胀、坏死,线粒体长度明显变短(μm:0.78±0.13、0.67±0.07比1.07±0.25,均P<0.05);肝组织中MDA、Fe2+水平明显升高,GSH含量明显下降〔MDA(mol/g):5.92±1.06、5.62±0.56比4.47±0.95,Fe2+(μg/g):151.40±8.03、151.88±8.68比134.52±14.32,GSH(mol/g):0.25±0.08和0.23±0.11比0.55±0.29,均P<0.05〕;肝组织Nrf2、GPX4蛋白表达明显下降,PTGS2蛋白表达明显升高(Nrf2/GAPDH:0.46±0.09、0.46±0.11比0.70±0.24,GPX4/GAPDH:0.34±0.05、0.40±0.01比0.48±0.02,PTGS2/GAPDH:1.24±0.13、1.16±0.11比1.02±0.09,均P<0.05)。结论CLP诱导的SALI可导致小鼠肝细胞铁死亡,肝组织Nrf2蛋白可通过调节铁死亡介导SALI。

关键词：脓毒症相关性肝损伤铁死亡核因子E2相关因子2

脊柱转移瘤分离术后发生胸腔积液的危险因素分析

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中华骨科杂志 2024年第3期44卷 169-176页

作者：王柯懿曲昊王文姚招浓周晓维姚玉红李恒元林鹏李秀茅严晓波柳萌黄鑫林秾叶招明浙江大学医学院附属第二医院骨科

目的探讨脊柱转移瘤分离术后胸腔积液的危险因素。方法回顾性分析2014年1月至2022年1月于浙江大学医学院附属第二医院骨肿瘤科就诊的脊柱转移瘤患者427例, 男252例、女175例, 年龄(59±12)岁(范围15～87岁)。所有患者均接受脊柱转移瘤... 详细信息

目的探讨脊柱转移瘤分离术后胸腔积液的危险因素。方法回顾性分析2014年1月至2022年1月于浙江大学医学院附属第二医院骨肿瘤科就诊的脊柱转移瘤患者427例, 男252例、女175例, 年龄(59±12)岁(范围15～87岁)。所有患者均接受脊柱转移瘤分离手术。基于术后1个月内的胸部CT, 采用重建软件个性化测量胸腔积液量。将胸腔积液在0～500 ml定义为少量、500～1 000 ml为中等量、1 000 ml以上定义为大量。比较各组患者的基线资料和围手术期临床结果, 将差异有统计学意义的指标纳入二分类logistic回归分析, 确定脊柱转移瘤分离术后发生胸腔积液的独立危险因素。绘制受试者工作特性曲线, 计算各独立危险因素的曲线下面积。结果所有患者均顺利完成手术。427例患者中大量胸腔积液35例、中等量胸腔积液42例、少量胸腔积液350例。大量胸腔积液组与少量及中等量胸腔积液组的肿瘤占位(χ2=9.485, P=0.013)、术中失血量(Z=-2.503, P=0.011)、输血量(Z=-2.983, P=0.003)、术前总蛋白(Z=2.681, P=0.007)、术前白蛋白(Z=1.720, P=0.085)、术后血红蛋白(t=2.950, P=0.008)、术后总蛋白(Z=4.192, P<0.001)、术后白蛋白(t=2.268, P=0.032)的差异有统计学意义。将上述指标纳入logistic回归分析, 结果显示术前白蛋白下降[OR=0.89, P=0.045]和转移瘤位于胸椎[OR=4.01, P=0.039]是导致脊柱转移瘤分离术后出现大量胸腔积液的独立危险因素。受试者工作特性曲线显示术前白蛋白、肿瘤占位及联合指标的曲线下面积及其95%CI分别为0.637(0.54, 0.74)、0.421(0.36, 0.48)、0.883(0.81, 0.92), 联合预测模型的预测价值为良。结论基于胸部CT可个性化定量测量胸腔积液体积。术前白蛋白下降和转移瘤位于胸椎是导致脊柱转移瘤分离术后出现大量胸腔积液的独立危险因素, 二者联合预测具有更好的预测效能。

关键词：脊柱肿瘤转移外科手术危险因素

3D打印金属垫块或胫骨假体重建全膝关节置换和翻修术中的巨大骨缺损

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中华骨科杂志 2024年第4期44卷 243-249页

作者：胡鹏飞吴浩波冉季升包家鹏蒋利锋陈炜平赵翔严世贵吴立东浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的探讨3D打印金属垫块或胫骨假体重建全膝关节置换(total knee arthroplasty,TKA)和膝关节翻修术中巨大骨缺损的临床疗效。方法回顾性分析2018年7月至2023年12月就诊于浙江大学医学院附属第二医院骨科的存在巨大骨缺损的TKA或膝关节... 详细信息

目的探讨3D打印金属垫块或胫骨假体重建全膝关节置换(total knee arthroplasty,TKA)和膝关节翻修术中巨大骨缺损的临床疗效。方法回顾性分析2018年7月至2023年12月就诊于浙江大学医学院附属第二医院骨科的存在巨大骨缺损的TKA或膝关节翻修患者7例(7膝),其中TKA 4例、膝关节翻修术3例。男3例、女4例,年龄(58.7±7.6)岁(范围54~68岁),左膝3例、右膝4例。患者膝关节均存在骨缺损,均为AORIⅢ型,2例仅股骨存在骨缺损,4例仅胫骨存在骨缺损,1例胫骨和股骨均存在缺损,采用3D打印个性化重建治疗。比较手术前后的髋膝踝角、美国膝关节协会评分(Keen Society score,KSS),观察术后并发症情况。结果所有患者均顺利完成手术,手术时间为(189.3±35.5)min(范围125~240 min)。复杂TKA 4例,手术时间分别175、195、210、240 min,翻修术3例,手术时间分别125、180、200 min。术中出血量为(114±24.4)ml(范围100~150 ml)。5例使用3D打印金属垫块,2例使用3D打印一体式胫骨部件。所有患者均获得随访,随访时间分别为2、2、5、6、7、20、57个月。术后3个月5例患者的KSS膝评分分别为56、61、66、56、56分,大于术前的35、44、36、27、41分。术后3个月5例患者的KSS功能评分分别为45、45、45、30、45分,大于术前的30、30、15、20、20分。末次随访时髋膝踝角为181.8°±3.4°(范围177.9°~188.0°),术前为175.8°±12.4°(范围153.3°~192.1°),差异无统计学意义(t=-1.230,P=0.242)。末次随访时3D打印部件与骨面结合良好,假体位置稳固,下肢力线均正常。两组术后无一例出现切口愈合不良、感染、脂肪液化、神经损伤、下肢深静脉血栓形成、膝关节僵硬、假体周围感染及松动等并发症。结论采用3D打印金属垫块或胫骨假体重建全膝关节置换和翻修术中巨大骨缺损早期临床疗效满意,可获得比较满意的关节功能,手术安全性较好。

关键词：关节成形术,置换,膝假体失效打印,三维治疗结果

老年髋部骨折患者术后30 d发生主要并发症的风险预测模型构建及验证研究

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中华创伤骨科杂志 2024年第9期26卷 775-782页

作者：肖向宇万泽东张彦歌张艾迪王帅孔令伟曹海营金宇承德医学院附属医院创伤骨科承德067000 郴州市第一人民医院创伤骨科郴州423000 承德医学院附属医院麻醉科承德067000

目的构建老年髋部骨折患者术后30 d内发生主要并发症的风险预测模型并进行验证。方法回顾性分析2019年6月至2021年12月期间承德医学院附属医院创伤骨科收治的276例老年髋部骨折患者资料。男96例,女180例;年龄(74.5±9.3)岁;骨折类型:股... 详细信息

目的构建老年髋部骨折患者术后30 d内发生主要并发症的风险预测模型并进行验证。方法回顾性分析2019年6月至2021年12月期间承德医学院附属医院创伤骨科收治的276例老年髋部骨折患者资料。男96例,女180例;年龄(74.5±9.3)岁;骨折类型:股骨颈骨折139例,股骨转子间骨折137例。以术后30 d内是否发生主要并发症为研究结局。应用多因素logistic回归分析老年髋部骨折患者术后30 d内发生主要并发症的危险因素。采用向前逐步法及似然比检验进行最佳预测模型的筛选,构建并使用列线图展示模型。采取受试者工作特征曲线(ROC)、Hosmer-Lemeshow拟合优度检验、临床决策曲线和临床影响曲线分析对模型的稳定性和有效性进行评价。结果多因素logistic回归分析结果显示:术前血红蛋白减少(P72 h(OR=3.001,95%CI:1.564~5.758,P4分(OR=3.394,95%CI:1.724~6.680,P2分(OR=2.875,95%CI:1.548~5.339,P=0.001)、手术时间增加(OR=1.016,95%CI:1.006~1.025,P=0.001)、手术出血量>60 mL(OR=2.373,95%CI:1.016~5.540,P=0.046)是老年髋部骨折患者术后30 d内发生主要并发症的危险因素。本次构建的logistic风险预测模型ROC曲线下面积为0.846(95%CI:0.799~0.889),Hosmer-Lemeshow拟合优度检验结果显示:χ^(2)=8.080,P=0.426,临床决策曲线和临床影响曲线提示该模型准确性和有效性较好。结论本研究基于患者术前血红蛋白、入院至手术时间、控制营养状态评分、年龄调整的改良衰弱指数评分、手术时间及手术出血量构建了老年髋部骨折患者术后30 d发生主要并发症的风险预测模型,有助于预测患者术后主要并发症的发生。

关键词：髋骨折手术后并发症危险因素老年人预测模型列线图

术后早期应用唑来膦酸对骨质疏松性股骨转子间骨折高龄患者预后的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2024年第7期44卷 891-898页

作者：王北辰杨耀琦鲍其远温竣翔张伟滨万荣上海交通大学医学院附属瑞金医院骨科上海200025

目的·探究在接受防旋股骨近端髓内钉(proximal femoral nail antirotation,PFNA)手术治疗的骨质疏松性股骨转子间骨折高龄患者中,术后早期应用唑来膦酸对骨折愈合的影响,以及其他可能的相关因素。方法·回顾性分析2016年1月至2022年2... 详细信息

目的·探究在接受防旋股骨近端髓内钉(proximal femoral nail antirotation,PFNA)手术治疗的骨质疏松性股骨转子间骨折高龄患者中,术后早期应用唑来膦酸对骨折愈合的影响,以及其他可能的相关因素。方法·回顾性分析2016年1月至2022年2月于上海交通大学医学院附属瑞金医院行PFNA手术的80岁及以上的股骨转子间骨折患者174例,根据术后是否早期接受唑来膦酸治疗将患者分为实验组(n=26)和对照组(n=148),所有患者完成术后6周和12周2次随访。运用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)法将实验组与对照组患者按照1∶3的比例进行匹配,匹配因素包括年龄、性别、骨折分型以及体质量指数(body mass index,BMI)。比较2组患者匹配后的一般资料,以及2次随访时的骨折愈合和功能恢复情况。采用Logistic回归分析探究患者术后12周骨折愈合的相关因素。结果·PSM法匹配后得到实验组患者25例和对照组患者65例,2组患者一般资料间差异均无统计学意义。实验组患者术后6周和12周的骨折愈合率分别为16.0%和96.0%,均显著高于对照组(分别为1.5%和73.8%,均P<0.05);实验组患者术后12周时Harris髋关节功能评分显著高于对照组(P=0.019)。Logistic回归分析结果显示,良好的手术复位(OR=12.52,95%CI 2.67~58.74,P=0.001)、术后早期使用唑来膦酸(OR=10.14,95%CI 1.01~102.09,P=0.049)和更高的血清白蛋白水平(OR=1.15,95%CI 1.02~1.29,P=0.025)为骨折愈合的促进因素,而不稳定型骨折(OR=0.10,95%CI 0.03~0.31,P=0.000)为不利因素。结论·对于接受PFNA手术的骨质疏松性股骨转子间骨折高龄患者,术后早期使用唑来膦酸可以促进骨折愈合且使患者获得更好的功能恢复;除此之外良好的术中复位、更高的血清白蛋白水平是促进骨折愈合的有利因素,而不稳定型骨折为骨折愈合的阻碍因素。

关键词：股骨转子间骨折唑来膦酸骨质疏松高龄

磁共振IDEAL-IQ和IVIM-DWI在脊柱转移瘤和骨髓瘤鉴别中的价值

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临床放射学杂志 2024年第7期43卷 1175-1180页

作者：王帅娜巴义文闫瑞芳周凤梅李政韩东明新乡医学院第一附属医院磁共振科卫辉453100 新乡医学院第一附属医院骨科卫辉453100

目的探索磁共振水脂分离成像(IDEAL-IQ)和体素内不相干运动成像(IVIM)在脊柱转移瘤和骨髓瘤鉴别中的价值。方法共45例脊柱转移瘤和26例骨髓瘤患者接受了IDEAL-IQ和IVIM扫描,分别测量并对比脊柱转移瘤组与骨髓瘤组间脂肪分数(FF)、R_(2)^... 详细信息

目的探索磁共振水脂分离成像(IDEAL-IQ)和体素内不相干运动成像(IVIM)在脊柱转移瘤和骨髓瘤鉴别中的价值。方法共45例脊柱转移瘤和26例骨髓瘤患者接受了IDEAL-IQ和IVIM扫描,分别测量并对比脊柱转移瘤组与骨髓瘤组间脂肪分数(FF)、R_(2)^(*)、标准表观扩散系数(ADC_(stand))、真性扩散系数(D)、假性扩散系数(D^(*))、灌注分数(f)、分布扩散系数(DDC)和扩散异质性指数(α)值的差异。采用逻辑回归(LR)分析寻找独立预测因子,受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)和DeLong检验分别被用于评估各参数诊断效能以及不同参数AUC间的差异。结果骨髓瘤组的FF、R_(2)^(*)、ADC_(stand)、D、DDC和α值均低于转移瘤组,D^(*)值高于转移瘤组(P均一参数其能更好地对上述疾病进行鉴别。

关键词：脊柱转移瘤骨髓瘤水脂分离技术体素内不相干运动成像

感觉神经元外泌体引起髓核干细胞衰老促进椎间盘退变发生的作用机制

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中华骨科杂志 2024年第8期44卷 532-543页

作者：彭一中刘胜陈松峰李康路浦飞飞吴蔚卿湘城林辉陈烜左邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022 郑州大学第一附属医院骨科郑州450052 武汉市第一医院武汉430030

目的探讨感觉神经元外泌体(sensory neuron-derived exosomes,nExo)介导椎间盘退变的作用及分子机制。方法构建大鼠椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)模型,将nExo注入椎间盘,4周后应用组织学染色评估椎间盘退变程度及... 详细信息

目的探讨感觉神经元外泌体(sensory neuron-derived exosomes,nExo)介导椎间盘退变的作用及分子机制。方法构建大鼠椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)模型,将nExo注入椎间盘,4周后应用组织学染色评估椎间盘退变程度及免疫荧光染色评估组织中髓核干细胞的衰老表型。应用nExo或外源性硫氧还蛋白1(thioredoxin 1,TXN)处理髓核干细胞24 h,利用免疫印迹、流式细胞周期分析、衰老相关β-半乳糖苷酶染色评估细胞的衰老表型。转录组学分析筛选并验证介导nExo调控细胞衰老的关键分子。向大鼠椎间盘退变模型中注入nExo和TXN,4周后评估椎间盘退变程度。结果nExo提高了大鼠椎间盘组织退变等级,IDD组髓核组织中TEK+p16+及TEK+p21+双阳细胞比例分别为36.32%±4.04%和33.69%±4.56%,IDD+nExo组提升至56.41%±5.26%和50.14%±8.49%(t=7.420,P<0.001;t=4.184,P<0.002);nExo促进髓核干细胞的p16及p21蛋白表达,并提高了衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率,自7.32%±1.73%提高至58.22%±11.38%(t=7.658,P=0.002);nExo下调了G2/M期细胞百分比,从18.10%±1.32%下调至1.60%±0.67%(t=19.290,P<0.001)。转录组学分析显示空白对照组和nExo组差异基因与细胞衰老密切相关,与数据库中的衰老基因集交集筛选出关键基因,即TXN。nExo下调髓核干细胞中的TXN,而补充外源性TXN下调了衰老相关蛋白的表达,降低衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率从58.84%±3.99%降低至21.68%±8.16%(t=7.048,P=0.021);将G2/M期细胞百分比从1.21%±0.34%上调至15.26%±2.60%(t=9.259,P=0.001)。TXN降低了椎间盘组织退变等级,nExo组退变组织学评分为(14.33±0.82)分,nExo+TXN组为(8.17±1.17)分,差异有统计学意义(t=10.590,P<0.001);增加细胞外基质的含量,nExo组为(10.94±4.35)μg/mg,nExo+TXN组提高至(50.55±12.16)μg/mg,差异有统计学意义(t=7.512,P<0.001);减少组织中TEK+p16+及TEK+p21+双阳细胞比例,nExo组分别为54.92%±4.21%和60.31%±9.02%,nExo+TXN组下降至27.93%±3.26%和33.75%±8.07%,差异有统计学意义(t=12.430,P<0.001;t=5.375,P<0.001)。结论nExo通过下调髓核干细胞中的TXN,促进细胞衰老和椎间盘退变。

关键词：椎间盘退行性变神经元外泌体干细胞细胞衰老

特立帕肽治疗骨质疏松性骨折中国专家共识(2024版)

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中华医学杂志 2024年第17期104卷 1456-1465页

作者：中国康复技术转化与发展促进会骨质疏松性骨折加速康复专业委员会中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病委员会骨与关节学组中国医师协会骨科医师分会骨质疏松工作委员会林华徐又佳刘强吕厚辰朱秀芬不详南京大学医学院附属鼓楼医院骨科南京210008 苏州大学附属第二医院骨科苏州215000 山西白求恩医院骨科太原030032 解放军总医院骨科医学部

骨质疏松性骨折是骨质疏松最严重的并发症,是骨骼在骨质疏松病变的基础上发生的一种特殊类型的病理性骨折,具有愈合困难、再骨折风险高、致残致死率高、治疗难度大、治疗时间长的特点,且再骨折具有“级联效应”。各国指南建议,骨质疏松... 详细信息

骨质疏松性骨折是骨质疏松最严重的并发症,是骨骼在骨质疏松病变的基础上发生的一种特殊类型的病理性骨折,具有愈合困难、再骨折风险高、致残致死率高、治疗难度大、治疗时间长的特点,且再骨折具有“级联效应”。各国指南建议,骨质疏松性骨折患者和极高危骨折风险患者应首先考虑促成骨治疗。特立帕肽是中国目前唯一已被批准应用于临床的促成骨类药物,在治疗骨质疏松性骨折时具有促进骨折愈合、降低再骨折风险、改善骨微结构等临床疗效。针对目前特立帕肽临床使用标准与规范的不足,由中国康复技术转化与发展促进会骨质疏松性骨折加速康复专业委员会、中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病委员会骨与关节学组以及中国医师协会骨科医师分会骨质疏松工作委员会联合组织相关学科专家起草制订本共识。本共识制订遵循改良Delphi法,形成8条循证医学推荐意见,旨在提出科学规范应用特立帕肽的方法和注意事项,强调特立帕肽应用对于骨质疏松性骨折患者治疗的重要性。

关键词：骨质疏松骨质疏松性骨折特立帕肽专家共识

外胚层间充质干细胞来源的外泌体通过控制炎症和氧化损伤减少M1型小胶质细胞并促进H2O2处理后PC12细胞的存活

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 119-128页

作者：孙晓鹏史航张磊刘中李克威钱玲玲朱星宇杨康佳付强丁华江苏大学附属人民医院骨科江苏镇江212000 上海交通大学医学院附属第一人民医院骨科上海200080 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的探究外胚层间充质干细胞来源的外泌体(EMSCs-exo)对脊髓继发性损伤的潜在修复作用。方法从大鼠鼻黏膜中分离培养EMSCs,并通过免疫荧光染色鉴定。采用超速离心法获取EMSCs-exo,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Westernblot... 详细信息

目的探究外胚层间充质干细胞来源的外泌体(EMSCs-exo)对脊髓继发性损伤的潜在修复作用。方法从大鼠鼻黏膜中分离培养EMSCs,并通过免疫荧光染色鉴定。采用超速离心法获取EMSCs-exo,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Westernblot进行鉴定。利用差速贴壁法纯化小胶质细胞,并通过免疫荧光染色鉴定。根据BCA法测得的蛋白浓度对EMSCs-exo进行定量分析。设置对照组、含100μg/L脂多糖(LPS)的组和含LPS及37.5mg/L或75mg/LEMSCs-exo的组对小胶质细胞进行处理。设置对照组、含400μmol/LH2O2的组和含H2O2及37.5mg/L或75mg/LEMSCs-exo的组对PC12细胞进行处理。通过Western blot和qRT-PCR测定小胶质细胞各组Arg1和iNOS蛋白和mRNA表达量。通过酶联免疫吸附实验测定上清中IL-6、IL-10和IGF-1的浓度。通过CCK-8和AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测PC12细胞各组的活力和凋亡情况。结果免疫荧光染色显示EMSCs高表达标志物Nestin、CD44、CD105、Vimentin。透射电镜显示EMSCs-exo呈典型的杯状结构,NTA显示其平均粒径为142nm,Westernblot显示其表达外泌体标志蛋白CD63、CD81、TSG101,不表达Vimentin。当小胶质细胞在LPS环境中时,75mg/L的EMSCs-exo能够有效提高其Arg1蛋白量、降低iNOS蛋白量(P一定应用潜能。

关键词：外胚层间充质干细胞外泌体小胶质细胞炎症氧化应激脊髓继发性损伤

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