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解淀粉芽孢杆菌B10抑制黄曲霉生长活性物质克隆表达及作用效果研究

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动物营养学报 2023年第12期35卷 8024-8035页

作者：李天溪龙淼沈阳农业大学动物科学与医学学院农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部)重要家畜疫病研究教育部重点实验室沈阳110000

本试验旨在从解淀粉芽孢杆菌B10中克隆表达出能够抑制黄曲霉生长的活性物质,验证其黄曲霉抑制活性,明确其抗菌作用方式。试验通过克隆表达及亲和层析纯化操作成功得到重组1,3-1,4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(B10-Glu)及抗菌肽LCI(B10-LC... 详细信息

本试验旨在从解淀粉芽孢杆菌B10中克隆表达出能够抑制黄曲霉生长的活性物质,验证其黄曲霉抑制活性,明确其抗菌作用方式。试验通过克隆表达及亲和层析纯化操作成功得到重组1,3-1,4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(B10-Glu)及抗菌肽LCI(B10-LCI),并对二者基本生物学信息进行分析。平板抑菌试验验证抑菌活性后,探究B10-Glu、B10-LCI最小抑菌浓度(MIC)及环境条件对二者抑菌效果的影响。通过电镜观察、细胞膜通透性及线粒体膜电位变化、活性氧(ROS)含量及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测,探究B10-Glu、B10-LCI黄曲霉抑制方式。结果表明:1)B10-Glu及B10-LCI的表观分子质量分别为25及12 ku,与预测分子质量较为接近。B10-LCI最佳诱导条件为16℃诱导16 h,B10-Glu为25℃诱导12 h。2)B10-Glu及B10-LCI对黄曲霉均有清晰明显的抑制效果,抑菌圈半径分别为1.14及1.17 cm。MIC分别为0.94及0.96μg/mL。3)B10-Glu及B10-LCI均能抑制黄曲霉孢子形成;破坏其菌丝形态及细胞内部结构;提高黄曲霉细胞膜通透性,致使细胞内容物流失;破坏线粒体等细胞器,促使ROS积累并降低细胞抗氧化水平。综上所述,B10-Glu及B10-LCI能通过抑制黄曲霉生长繁殖过程、破坏其细胞结构来发挥二者的优良抗黄曲霉作用效果。

关键词：解淀粉芽孢杆菌黄曲霉生长抑制葡聚糖水解酶抗菌肽LCI

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虾青素的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

动物营养学报 2023年第12期35卷 7617-7624页

作者：石阳井锶源王晓萱龙淼沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部)沈阳110161

虾青素是一种广泛存在于海藻、真菌和甲壳类动物中的天然类胡萝卜素,具有广泛的生物学活性,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节和神经保护等。虾青素是一种天然抗氧化剂,能够降低机体患病风险,在无抗、安全和绿色养殖中具有巨大潜力与应... 详细信息

虾青素是一种广泛存在于海藻、真菌和甲壳类动物中的天然类胡萝卜素,具有广泛的生物学活性,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节和神经保护等。虾青素是一种天然抗氧化剂,能够降低机体患病风险,在无抗、安全和绿色养殖中具有巨大潜力与应用前景。目前,对虾青素的研究已经表明其在畜禽生产上的应用潜力。本文主要综述了虾青素的主要生物学功能及其在畜禽生产中应用的研究进展,以期为虾青素作为功能性饲料添加剂在畜牧生产上的研究与应用提供参考。

关键词：虾青素生物学功能动物生产应用

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病毒检测方法研究进展

中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4536-4544页

作者：赵史宇辰汤思淇冯亚莉张莹沈阳农业大学重要家畜疫病研究教育部重点实验室沈阳110866 沈阳农业大学农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部)沈阳110866

随着病毒的不断变异和传播,病毒检测方法的研究也在不断发展和深化,在病毒性疾病暴发时,及时、准确地检测病毒变得尤为重要。传统的病毒检测方法包括病毒分离鉴定、PCR和ELISA等,但这些方法都存在操作繁琐、检测时间长、灵敏度低等问题... 详细信息

随着病毒的不断变异和传播,病毒检测方法的研究也在不断发展和深化,在病毒性疾病暴发时,及时、准确地检测病毒变得尤为重要。传统的病毒检测方法包括病毒分离鉴定、PCR和ELISA等,但这些方法都存在操作繁琐、检测时间长、灵敏度低等问题。近年来,一些新兴技术和优化的方法被应用于各类病毒的检测,带来了更加准确和高效的病毒检测,如基于微滴式数字PCR的病毒检测,其灵敏度可高出实时荧光定量PCR约16倍;基于基因测序技术的病毒检测方法越来越受到关注,其不仅可以检出病毒种类、数量,还能直接准确地获取病毒基因序列,甚至能够发现新病毒。此外,基于CRISPR/Cas、生物传感器、流式细胞术等检测技术在病毒检测领域也受到了广泛应用。虽然这些新技术在特异性和灵敏度等方面存在显著优势,但仍然面对一些考验,如检测成本较高、需要实验室环境等,这些问题限制了病毒检测技术的普及和推广。因此,未来的研究重点将聚焦于提高检测的准确性、实用性并降低成本,研发出更加完善的病毒检测技术。作者将优化后及新兴的检测技术与传统检测技术相对比,并总结其优缺点,以期为病毒检测、病毒性疾病防控提供参考依据。

关键词：核酸检测免疫学检测生物传感器即时检测

cGAS-STING信号通路在先天性免疫中的作用研究进展

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动物医学进展 2022年第4期43卷 87-92页

作者：于思慧单朝萌文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-... 详细信息

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-STING信号通路。而cGAS-STING信号通路的激活可诱导产生干扰素,这是先天性免疫反应至关重要的组成部分。论文综述了cGAS-STING信号通路介导先天性免疫的分子机制及病毒通过该信号通路调控机体先天性免疫的策略,以期为研究cGAS-STING信号通路及其与病毒间的相互作用提供参考。

关键词： cGAS-STING信号通路先天性免疫病毒感染

CRISPR-Cas技术在病毒性传染病诊断中的应用

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动物医学进展 2022年第7期43卷 107-112页

作者：战佳兴文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性... 详细信息

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性病原微生物的分子诊断方面展现出巨大潜力,其与核酸扩增、荧光标记等技术结合建立的检测方法准确、灵敏度高、操作简便,不需要很复杂的设备,适宜用于疫病的现场快速诊断。论文综述了CRISPR-Cas系统Ⅱ型CRISPR-Cas9、Ⅴ型CRISPR-Cas12和Ⅵ型CRISPR-Cas13技术的作用机制及其在病毒性传染病诊断中的应用,以期为病毒性传染病的诊断和防控提供参考。

关键词： CRISPR-Cas技术病毒性传染病分子诊断

刺五加多糖对脂多糖诱导的猪肠上皮细胞外泌体中miRNAs的影响

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饲料工业 2023年第4期44卷 46-54页

作者：杨帆吴月张娇成末谭号韩杰沈阳农业大学动物科学与医学学院东北畜禽疫病教育部重点实验室辽宁沈阳110866

为了明确刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)处理对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的猪肠上皮细胞(IPEC-J2)来源的外泌体中miRNAs表达及功能的影响,试验分组培养IPEC-J2细胞,提取外泌体进行鉴定并对外泌体携带的miRNAs进行生物信息学分析。结果表明,各组提取的外泌体均呈包膜完整的圆形或椭圆形囊泡状,均能表达外泌体标志蛋白CD9。高通量测序结果显示,与LPS处理组相比,ASPS处理组共有277个差异表达的miRNAs(P重要调控作用,且这些miRNAs可能通过靶向自噬相关靶基因的3’UTR或经由相关信号通路来参与该过程的发生发展过程。

关键词：刺五加多糖猪肠上皮细胞外泌体脂多糖 miRNAs

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新型疫苗佐剂研究进展

中国畜牧兽医 2023年第6期50卷 2460-2467页

作者：韩冰汤思淇朱大帷李海玲冯亚莉苏超凡徐艺娜冷昊钰王永涛张月美太晓春张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室辽宁省人畜共患病研究重点实验室沈阳110866 辽宁省农业发展服务中心沈阳110033 高唐县畜牧水产事业中心聊城252800 山东海利生物制品有限公司潍坊262233

佐剂是增强和调节疫苗抗原免疫反应的免疫刺激物,与抗原一起使用能产生更强的免疫反应。佐剂能激活机体的天然免疫系统,当佐剂和抗原同时或预先注射到机体内,可改变抗原的形态并延长抗原在体内的滞留时间,促进单核吞噬细胞对抗原的递呈... 详细信息

佐剂是增强和调节疫苗抗原免疫反应的免疫刺激物,与抗原一起使用能产生更强的免疫反应。佐剂能激活机体的天然免疫系统,当佐剂和抗原同时或预先注射到机体内,可改变抗原的形态并延长抗原在体内的滞留时间,促进单核吞噬细胞对抗原的递呈能力及刺激淋巴细胞增殖分化,从而增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂的发展史长达一百多年,目前使用最广泛的疫苗佐剂是铝佐剂,传统的灭活疫苗在很大程度上依靠以铝盐为主的复合物作为主要佐剂。但近年来,随着基因工程技术和生物技术的飞速发展,重组疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗等新型疫苗逐步被开发出来,这些新型疫苗与传统疫苗相比往往存在免疫应答能力差等问题,早期的抗原不纯导致传统的铝盐佐剂已无法满足需要。为解决新型疫苗免疫原性差的问题,科研人员致力于开发广谱且高效的新型疫苗佐剂用来增强新型疫苗的作用。新型疫苗佐剂种类繁多,功能各不相同且机制较为复杂,可分为新型油乳佐剂、脂质体佐剂、CpG寡核苷酸佐剂、细胞因子佐剂、纳米佐剂、多糖佐剂及复合系统类佐剂等。笔者对疫苗佐剂的发展史、作用机制及新型疫苗佐剂的分类进行分析和评述,以期为新型疫苗佐剂的研制及开发提供参考。

关键词：疫苗佐剂新型佐剂免疫纳米佐剂手性佐剂

豆状囊尾蚴体外培养方法的建立及其分泌产物的分离鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第4期40卷 500-506页

作者：张少华刘婷丽骆学农王帅郭爱疆白雪陈国梁才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046 吉林大学动物医学学院、人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

目的建立豆状囊尾蚴体外长期培养方法,并对其培养分泌产物进行鉴定。方法将豆状带绦虫虫卵经口感染新西兰白兔(2000枚/只),感染后3个月,从感染兔腹腔中收集豆状囊尾蚴。将虫体随机分为PBS组、RPMI 1640组、胆汁组(RPMI 1640+10%兔胆汁)... 详细信息

目的建立豆状囊尾蚴体外长期培养方法,并对其培养分泌产物进行鉴定。方法将豆状带绦虫虫卵经口感染新西兰白兔(2000枚/只),感染后3个月,从感染兔腹腔中收集豆状囊尾蚴。将虫体随机分为PBS组、RPMI 1640组、胆汁组(RPMI 1640+10%兔胆汁)和血清组(RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清),10个/组,37℃、5%CO_(2)培养后5 min、1 h、2 h、12 h、24 h、36 h、48 h及其后每天进行观察,记录豆状囊尾蚴头节翻出情况、虫体活力、体外存活时间及形态改变等,筛选适宜的培养条件。取50个幼虫在细胞瓶(25 cm^(2))中按筛选出的培养条件培养,每隔48小时收集培养液离心浓缩,取上清,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测豆状带绦虫烯醇化酶(Tpeno)和Tp14-3-3蛋白的表达情况。收集豆状囊尾蚴培养上清,提取外泌体,分别与阴性兔血清、CD63抗体、抗Tpeno单克隆抗体1D7和抗Tp14-3-3多克隆抗体孵育45 min,再加入胶体金标记的IgG,透射电镜观察外泌体形态,免疫电镜检测其标记蛋白CD63、Tpeno和Tp14-3-3表达情况。采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析,组间比较采用单因素方差分析。结果培养前的豆状囊尾蚴呈椭圆形,有内凹的点状乳白色头节;PBS组可存活7 d;RPMI 1640组可存活2个月;胆汁组存活时间最短,仅48 h;血清组幼虫存活时间最长,可达3个月以上,高于其他3个组(P<0.05)。存活期内,PBS组、RPMI 1640组、胆汁组和血清组幼虫囊泡长度分别为(1.38±0.39)、(1.30±0.12)、(1.18±0.59)和(1.83±0.10)cm;宽度分别为(0.45±0.10)、(0.68±0.05)、(0.25±0.06)和(0.85±0.05)cm;血清组虫体囊泡长度和宽度与其余3组相比差异均有统计学意义(F_(长度)=7.58、65.93、7.11,F_(宽度)=73.85、29.41、308.57,P<0.05或P<0.01)。培养12 h时,PBS组、RPMI 1640组、胆汁组和血清组幼虫头节翻出率分别为(33.3±5.8)%、(20.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(13.3±5.8)%,其中血清组与PBS和胆汁组头节翻出率差异有统计学意义(F=18.00、676.00,P<0.01)。对各组培养效果比较显示,血清组的培养液(RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清)为最适培养液。SDS-PAGE电泳分析结果显示,利用RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清培养豆状囊尾蚴,可成功提取到虫体的代谢-分泌产物和外泌体蛋白。Western blotting分析结果显示,用特异性抗体检测可见Tpeno和Tp14-3-3阳性条带,相对分子质量(Mr)分别约47000和28000,与预期相符。透射电镜下豆状囊尾蚴外泌体大小不一,直径为50~150 nm,为圆形或椭圆形的囊泡。免疫电镜分析显示,阴性兔血清不能识别外泌体蛋白,未见胶体金颗粒标记;外泌体标志蛋白CD63、虫体特异性蛋白Tpeno和Tp14-3-3均为阳性表达,胶体金颗粒标记明显。结论初步建立了豆状囊尾蚴体外培养体系,可连续培养豆状囊尾蚴至少3个月以上。采用该体外培养方法培养可在培养上清中成功提取豆状囊尾蚴的外泌体。

关键词：豆状囊尾蚴体外培养长期分泌产物免疫电镜

LncRNA调控病原微生物致病作用的研究进展

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中国兽医杂志 2022年第4期58卷 65-69页

作者：严平周媛媛贾永超郭营王临喜尹荣兰郭忠博王欣尹荣焕沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062 辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的RNA。由于它不具有开放阅读框因而缺乏蛋白编码能力,或者仅能编码短的多肽[1]。LncRNA广泛存在于动植物、酵母、原核生物与病毒等多种生物中,并在生物学过程中发... 详细信息

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的RNA。由于它不具有开放阅读框因而缺乏蛋白编码能力,或者仅能编码短的多肽[1]。LncRNA广泛存在于动植物、酵母、原核生物与病毒等多种生物中,并在生物学过程中发挥关键的作用。目前,基因表达调控是病原微生物与宿主关系中的热门研究问题。研究发现,lncRNA在病原微生物感染过程中起着重要的调控作用,与疾病的发生、发展息息相关。

关键词：病原微生物致病作用原核生物基因表达调控热门研究宿主关系