检索结果-南通市图书馆

昆虫神经毒素LqhIT2的表达、抗血清制备及活性分析

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生物工程学报 2008年第10期24卷 1761-1767页

作者：李洪波夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆400030 重庆市杀虫真菌工程技术研究中心重庆400030

根据毕赤酵母密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和... 详细信息

根据毕赤酵母密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,制备了特异性较高的抗血清,抗体滴度超过1:128 000。利用制备的抗血清,采用斑点杂交,筛选得到了较高水平分泌表达重组LqhIT2的酵母转化子,摇摇摇摇下,毒素表达量约9 mg/L。大肠杆菌表达产物没有生物活性,酵母表达产物经注射蝗虫表现出杀虫活性。

关键词：昆虫神经毒素 LqhIT2 抗血清

绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶基因的克隆及表达特征分析

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微生物学报 2011年第3期51卷 360-367页

作者：徐飞彭国雄夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市杀虫真菌农药工程研究中心重庆400030

【目的】克隆绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶(PP5)基因,了解该基因及其编码产物的结构特征和两种产孢模式(微循环产孢和正常产孢)中的表达特征。【方法】通过绿僵菌中PP5基因EST序列与全基因组数据库比对,获得PP5基因DNA序列;通过同源... 详细信息

【目的】克隆绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶(PP5)基因,了解该基因及其编码产物的结构特征和两种产孢模式(微循环产孢和正常产孢)中的表达特征。【方法】通过绿僵菌中PP5基因EST序列与全基因组数据库比对,获得PP5基因DNA序列;通过同源蛋白比对预测PP5基因的DNA结构并设计引物,PCR扩增获取PP5全长cDNA序列;通过在线分析工具及生物软件进行蛋白结构分析。采用实时荧光定量PCR检测PP5基因在两种产孢模式中的表达特征。【结果】PP5基因长2100 bp,含7个外显子和6个内含子;cDNA开放阅读框长为1428 bp(GenBank登录号HQ317137),编码475个氨基酸;一级、二级及三级结构分析均显示较保守的蛋白磷酸酶结构特征。实时荧光定量PCR分析表明,PP5基因在绿僵菌微循环产孢的不同阶段表达水平具有显著性差异,特别是在孢子接种16、24、32 h高表达,而在正常产孢模式下表达量非常少。【结论】克隆了绿僵菌的PP5基因,详细了解了该基因及其编码产物的结构特征,发现了该基因在微循环产孢孢子形成后期高表达的重要特征,为进一步研究该基因在微循环产孢中的功能奠定了基础。

关键词：绿僵菌微循环产孢,Ser/Thr蛋白磷酸酶,实时荧光定量PCR

绿僵菌与高效氯氰菊酯复配对东亚飞蝗的增效作用

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中国生物防治 2010年第4期26卷 442-447页

作者：彭国雄夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心/重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心重庆400030

本研究测定了金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae与高效氯氰菊酯高纯度原药复配后对东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis （Mey.）的增效作用。含0.5%~1.5%（w/v）高效氯氰菊酯的绿僵菌复配制剂的共毒系数（CTC）都高于120,其中复... 详细信息

本研究测定了金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae与高效氯氰菊酯高纯度原药复配后对东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis （Mey.）的增效作用。含0.5%~1.5%（w/v）高效氯氰菊酯的绿僵菌复配制剂的共毒系数（CTC）都高于120,其中复配制剂（1%高氯.1×1010孢子/ml绿僵菌油悬浮剂）的共毒系数在接种后第4、5d分别为268.92和375.93。该复配制剂按1∶2、1∶3比例稀释后室内喷雾接种,第5d蝗虫累计死亡率分别达97.8%和97.3%,显著高于绿僵菌对照组的累计死亡率（52.6%）;田间施药后蝗虫存活率在第6d分别下降到2.4%和4.4%,显著低于绿僵菌对照组药后第9d的存活率（37.7%）。结果表明：绿僵菌复配制剂增效作用明显,作用较快、防效高,克服了绿僵菌悬浮剂难以用于高密度蝗虫防治的缺陷。

关键词：金龟子绿僵菌高效氯氰菊酯东亚飞蝗共毒系数

昆虫病原真菌防控草地贪夜蛾的现状、问题与展望

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中国生物防治学报 2019年第5期35卷 674-681页

作者：张维彭国雄夏玉先重庆大学生命科学学院/重庆大学基因工程研究中心/重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心

草地贪夜蛾是世界性重大农业害虫,危害大、防控难。昆虫病原真菌菌种资源丰富,具有易流行、害虫不易产生抗性等突出优点,在草地贪夜蛾防控中应用潜力大。本文综述了昆虫病原真菌在草地贪夜蛾防治中的现状,分析了存在的问题,重点指出了... 详细信息

草地贪夜蛾是世界性重大农业害虫,危害大、防控难。昆虫病原真菌菌种资源丰富,具有易流行、害虫不易产生抗性等突出优点,在草地贪夜蛾防控中应用潜力大。本文综述了昆虫病原真菌在草地贪夜蛾防治中的现状,分析了存在的问题,重点指出了昆虫病原真菌在草地贪夜蛾防治中的发展方向,为进一步发挥昆虫病原真菌在草地贪夜蛾防控中的作用提供参考。

关键词：草地贪夜蛾化学农药抗药性真菌生物农药综合防治

金龟子绿僵菌CQMa421与杀虫剂、杀菌剂的兼容性

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中国生物防治学报 2017年第6期33卷 747-751页

作者：彭国雄谢佳沁夏玉先重庆大学生命科学学院/重庆大学基因工程研究中心/重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心重庆400030

本研究通过测试杀虫剂和杀菌剂在田间使用剂量下对金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae CQMa421孢子萌发率的影响,筛选了与菌株CQMa421兼容的25种防治水稻、蔬菜和茶叶重要害虫的常用杀虫剂和11种防治水稻、蔬菜重要病害的杀菌剂。结果... 详细信息

本研究通过测试杀虫剂和杀菌剂在田间使用剂量下对金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae CQMa421孢子萌发率的影响,筛选了与菌株CQMa421兼容的25种防治水稻、蔬菜和茶叶重要害虫的常用杀虫剂和11种防治水稻、蔬菜重要病害的杀菌剂。结果表明,农药有效成分、浓度影响绿僵菌CQMa421孢子萌发率外,制剂组成也是重要影响因素,不同厂家的同一有效成分的杀虫剂对菌株CQMa421活性影响存在差异,研究结果为活体微生物农药与其他杀虫剂、杀菌剂的联合使用提供了依据。

关键词：金龟子绿僵菌化学杀虫剂、杀菌剂兼容性

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丝状真菌基因功能研究的方法

应用与环境生物学报 2007年第2期13卷 284-288页

作者：曹月青何正波王中康殷幼平彭国雄夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心/重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆400044

近年来不少丝状真菌全基因组测序已完成或正在进行,基因功能研究成为真菌研究的一个热点.多种基因功能研究方法都已应用到丝状真菌领域,为丝状真菌的基因功能研究提供了许多不同的技术策略.本文总结了目前丝状真菌基因功能研究中常用的... 详细信息

近年来不少丝状真菌全基因组测序已完成或正在进行,基因功能研究成为真菌研究的一个热点.多种基因功能研究方法都已应用到丝状真菌领域,为丝状真菌的基因功能研究提供了许多不同的技术策略.本文总结了目前丝状真菌基因功能研究中常用的方法,如转座子标签法、基因敲除技术、RNA干扰、超表达及酵母杂交系统等,并对各方法在丝状真菌研究中的优缺点进行了阐述.

关键词：丝状真菌基因功能 RNA干扰同源重组基因沉默

绿僵菌孢子活性的MTT比色法快速检测技术研究

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菌物学报 2006年第4期25卷 651-655页

作者：赵云王中康彭国雄夏玉先重庆大学基因工程研究中心重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心重庆市高校功能基因调控技术重点实验室 400045

通过比较孢子浓度、MTT终浓度、反应温度、反应时间、MTTf提取时间以及pH值等因素对孢子活性检测的影响,优化了MTT比色法杀蝗绿僵菌孢子活性检测条件,建立起稳定、灵敏、可靠的生化检测体系,适用于绿僵菌等真菌农药原药与制剂中活孢率... 详细信息

通过比较孢子浓度、MTT终浓度、反应温度、反应时间、MTTf提取时间以及pH值等因素对孢子活性检测的影响,优化了MTT比色法杀蝗绿僵菌孢子活性检测条件,建立起稳定、灵敏、可靠的生化检测体系,适用于绿僵菌等真菌农药原药与制剂中活孢率的快速测定,为真菌农药研制提供了新的质量分析方法。

关键词：脱氢酶活性光密度标准曲线

绿僵菌微循环产孢基因Pyk的克隆及RNA干扰分析

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微生物学通报 2011年第6期38卷 853-859页

作者：徐飞彭国雄夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市杀虫真菌农药工程研究中心重庆400030

微循环产孢是真菌遭遇逆境时发生的一种产孢机制,具有繁殖快速及抗逆性强等诸多优点。研究绿僵菌的微循环产孢机制并加以利用,对增强该菌在生物防治中的应用效果具有重要的意义。采用绿僵菌基因组数据库与NCBI数据库中同源蛋白比对获得... 详细信息

微循环产孢是真菌遭遇逆境时发生的一种产孢机制,具有繁殖快速及抗逆性强等诸多优点。研究绿僵菌的微循环产孢机制并加以利用,对增强该菌在生物防治中的应用效果具有重要的意义。采用绿僵菌基因组数据库与NCBI数据库中同源蛋白比对获得Pyk基因DNA序列;分析Pyk基因结构并设计引物,通过RT-PCR扩增克隆Pyk全长cDNA序列。序列分析显示该基因cDNA全长1 934 bp,开放阅读框长为1 752 bp(GenBank登录号:HQ153828),编码产物为583个氨基酸的丙酮酸激酶,该酶与子囊菌门中其他真菌具有较高的相似性(57%-77%)。构建Pyk基因的RNAi载体,基因枪转化野生型绿僵菌获得3个突变菌株,RT-PCR证实3个干扰突变菌株中Pyk基因的干扰效率分别为:51%、56%、33%。对突变菌株的微循环产孢模式做了进一步分析,结果显示:与野生菌株相比,突变菌株产生更多的孢子形态类型,菌落周边的白色菌丝也相对较少。

关键词：虫生真菌微循环产孢丙酮酸激酶 RNA干扰

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昆虫病原真菌致病机制的研究进展

贵州农业科学 2012年第3期40卷 130-135页

作者：高明景姚秀清重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心重庆400030

为深入了解昆虫病原真菌的致病机制,为杀虫真菌的基因工程改良、高毒力的生防工程菌株的选育提供理论依据,并为动、植物真菌病害的致病机理研究和控制提供理论参考,从真菌侵染宿主过程中不同阶段的分子生物学行为方面综述了国内外对昆... 详细信息

为深入了解昆虫病原真菌的致病机制,为杀虫真菌的基因工程改良、高毒力的生防工程菌株的选育提供理论依据,并为动、植物真菌病害的致病机理研究和控制提供理论参考,从真菌侵染宿主过程中不同阶段的分子生物学行为方面综述了国内外对昆虫病原真菌的致病机制研究的最新进展,探讨了研究中存在的问题,并展望了昆虫病原真菌未来的研究发展趋势。

关键词：昆虫病原真菌致病机制分子生物学