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儿童孤独症相关基因NRXN1β启动子功能分析

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遗传 2015年第8期37卷 801-810页

作者：刘静茹孟莎莎周卫辉重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用... 详细信息

Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用检测双荧光素酶报告基因的转录活性以确定NRXN1β基因最小启动子区,进而筛选出相应的显著增强或抑制报告基因活性的功能区;同时,为鉴定顺式作用元件,利用基因定点突变技术对基因功能区内和临近DNA序列进行连续的碱基突变;最后,采用转录因子预测工具对启动子功能区内的转录调控元件进行分析。结果首次发现NRXN1β最小启动子区位于?88^+156 bp,?88~?73 bp和+156^+149 bp可增强启动子活性,+229^+419 bp可抑制启动子活性,且?84~?63 bp为能够显著性增强启动子活性的顺式作用元件,该区域可能存在DBP(Albumin D-site-binding protein,DBP)和ABF1(Autonomously replicating sequence-binding factor 1,ABF1)两个转录因子结合位点。

关键词： NRXN1β 启动子 DBP ABF1 转录因子

siCBP慢病毒降低大鼠原代海马神经元乙酰化组蛋白表达

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生物医学工程学杂志 2015年第4期32卷 838-846页

作者：侯娜丽吴小凤任兰郭敏毕杨刘友学陈洁黄鸿眉李廷玉重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市认知与学习记忆障碍重点实验室重庆400014

本研究目的为构建携带针对大鼠环磷酸腺苷反应元件结合因子的结合蛋白(CBP)基因的siRNA重组慢病毒,感染原代海马神经元并检测其对乙酰化组蛋白表达的抑制作用。本文构建了4种siCBP,并检测其对神经元中CBP表达的抑制作用,选择效果最好的... 详细信息

本研究目的为构建携带针对大鼠环磷酸腺苷反应元件结合因子的结合蛋白(CBP)基因的siRNA重组慢病毒,感染原代海马神经元并检测其对乙酰化组蛋白表达的抑制作用。本文构建了4种siCBP,并检测其对神经元中CBP表达的抑制作用,选择效果最好的一种检测神经元中HAT活性及乙酰化组蛋白Ac-H3、Ac-H4的表达。酶切及测序鉴定证实siCBP正确克隆至慢病毒质粒中,4种siCBP感染原代海马神经元后CBP mRNA和蛋白表达有不同程度降低,效果最佳的GR806对神经元的HAT活性及Ac-H3、Ac-H4表达均有显著抑制作用。本研究为后续应用siCBP阐明CBP依赖的组蛋白乙酰化对海马区学习记忆功能调节的相关分子机制提供了实验工具。

关键词：环磷酸腺苷反应元件结合因子的结合蛋白慢病毒载体 siRNA 海马神经元组蛋白乙酰化

维生素A缺乏影响胶质源性神经营养因子抑制大鼠缺氧缺血脑损伤后细胞增殖的研究

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中国康复医学杂志 2019年第2期34卷 142-146页

作者：杨茂玲肖农陈洁江伟重庆医科大学附属儿童医院康复科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室儿科学重庆市重点实验室

目的:研究体内维生素A水平缺乏通过RARα通路抑制大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞增殖进而影响脑组织功能恢复。方法:将74只SD大鼠随机分为假手术组(CON组)、VA正常(VAN组)及VA缺乏组(VAD组),HIBD建模按经典Rice法。Morris水迷宫... 详细信息

目的:研究体内维生素A水平缺乏通过RARα通路抑制大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞增殖进而影响脑组织功能恢复。方法:将74只SD大鼠随机分为假手术组(CON组)、VA正常(VAN组)及VA缺乏组(VAD组),HIBD建模按经典Rice法。Morris水迷宫评估空间记忆力,EDU细胞增殖检测VAN、VAD组HIBD后细胞增殖,更深入剖析皮质组织RA受体、神经标志物的基因水平。结果:Morris水迷宫实验提示HIBD后恢复晚期VAN组空间记忆力明显强于VAD组(P<0.05);EDU结果显示,VAN组新生细胞增殖明显强于VAD组(P<0.05);RARα是各RA受体表达的优势受体。VAN组巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋(GFAP)及胶质源性神经营养因子(GDNF)的基因水平明显高于VAD组(P<0.05)。结论:VA缺乏抑制HIBD后脑组织功能恢复,推测是VA信号下调GDNF从而抑制NSE、Nestin及GFAP表达,进而影响细胞增殖及功能修复。

关键词：缺氧缺血脑损伤维生素A 神经修复空间记忆学习细胞增殖

儿童Williams-Beuren综合征九例临床分析

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中国全科医学 2018年第18期21卷 2238-2241页

作者：黄琴蓉肖农陈玉霞刘玲江伟侯雪勤冯英张婷重庆医科大学附属儿童医院康复科儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆市400014

本文选取2016年3月—2017年2月重庆医科大学附属儿童医院收治的9例Williams-Beuren综合征患儿为研究对象,对其临床资料进行回顾性分析,发现儿童Williams-Beuren综合征的高危因素包括母亲孕期感冒、羊水异常、足月小样儿、孕期过长、剖... 详细信息

本文选取2016年3月—2017年2月重庆医科大学附属儿童医院收治的9例Williams-Beuren综合征患儿为研究对象,对其临床资料进行回顾性分析,发现儿童Williams-Beuren综合征的高危因素包括母亲孕期感冒、羊水异常、足月小样儿、孕期过长、剖宫产、前置胎盘及宫内发育迟缓。患儿均有特殊面容,且生长、智力、运动及语言均发育迟缓。肌张力异常4例,癫痫4例,高血钙症状3例;合并先天性心脏病7例。颅脑MRI检查结果异常2例,腰骶部MRI检查结果异常1例,消化系统异常1例,颅缝早闭8例,行为异常6例。综上,儿童Williams-Beuren综合征高危因素较多,且患儿临床特点较为多样,应引起重视。

关键词：威廉斯综合征儿童发育障碍肌张力

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关于早产儿床旁视频脑电图监测方法的探讨

重庆医科大学学报 2015年第5期40卷 716-720页

作者：徐娜黄志唐夕琴曹洁冯成功重庆医科大学附属儿童医院神经内科、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆400010

目的:探讨更适合新生儿、早产儿床旁视频脑电图(video electroencephalogram,VEEG)监测的导联方法。方法:对22例不同受孕龄的早产儿同时采用单极、平均参考、双极导联进行VEEG监测。将同一时段中产生的伪迹进行分类,并计数每种伪迹,同... 详细信息

目的:探讨更适合新生儿、早产儿床旁视频脑电图(video electroencephalogram,VEEG)监测的导联方法。方法:对22例不同受孕龄的早产儿同时采用单极、平均参考、双极导联进行VEEG监测。将同一时段中产生的伪迹进行分类,并计数每种伪迹,同时从组成早产儿脑电图背景活动的各要素及畸形波形态进行比较分析。结果:单极导联与平均参考及双极导联存在统计学差异的有同化现象(P=0.000、0.000)、电极伪迹(P=0.000、0.000)、环境伪迹(P=0.000、0.001)、心电伪迹(P=0.000)、线路/交流电伪迹(P=0.002、0.004)。而各种脑波的波幅在3种导联中无统计学差异(P=0.172、0.099、0.145),频率均同步一致。另外,平均参考导联记录的脑波形态、位相以及空间分布更接近真实情况,优于双极导联。结论:平均参考导联记录的EEG不仅伪迹较少,而且能更清晰、可靠的反映出早产儿背景活动及异常波的形态。

关键词：视频脑电图早产儿单极导联双极导联平均参考导联新生儿重症监护病房

Caspase-1活化在胆红素诱导的大鼠海马神经元损伤中的作用

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南方医科大学学报 2018年第5期38卷 567-571页

作者：韦倩冯洁何春梅华子瑜重庆医科大学附属儿童医院新生儿科//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地//认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆400014

目的研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)活化及VX-765在胆红素诱导大鼠海马神经元损伤中的作用。方法原代培养大鼠海马神经元分为胆红素组、对照组、VX-765组;胆红素组给予胆红素(50μmol/l),对照组给予同体积药物溶剂二甲基亚砜(... 详细信息

目的研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)活化及VX-765在胆红素诱导大鼠海马神经元损伤中的作用。方法原代培养大鼠海马神经元分为胆红素组、对照组、VX-765组;胆红素组给予胆红素(50μmol/l),对照组给予同体积药物溶剂二甲基亚砜(DMSO),VX-765组在胆红素干预前1 h给予VX-765(50μmol/l);Western blot检测NlRP3、活化caspase-1表达,改良MTT、乳酸脱氢酶(lDH)释放率及台盼蓝染色检测细胞相对存活率及死亡率,ElISA法检测原代培养上清Il-18水平。结果胆红素诱导原代培养大鼠海马神经元3、6 h,NlRP3、活化caspase-1蛋白表达明显高于对照组(PlDH释放率为(10.780±1.577)%,明显低于胆红素组(P<0.05),高于对照组(P<0.05);VX-765组台盼蓝染色阳性率为(5.580±1.234)%,明显低于胆红素组(P<0.05),高于对照组(P<0.05)。结论在原代培养的大鼠海马神经元中,caspase-1活化参与胆红素神经毒性的发生,VX-765抑制其活化发挥神经保护作用。

关键词：胆红素神经毒性海马神经元 caspase-1 VX-765

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48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应

基因组学与应用生物学 2018年第9期37卷 3792-3798页

作者：廖丹徐云飞孟莎莎周卫辉重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地

为了研究48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应以及寻找可能消除边缘效应的方法措施。本研究用常规方法培养人胚肾细胞HEK293,运用脂质体转染试剂lipofectamin 2000将荧光素酶报告基因质粒p Gl4.13Z和内参质粒p Rl-TK共转染入48孔板中的H... 详细信息

为了研究48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应以及寻找可能消除边缘效应的方法措施。本研究用常规方法培养人胚肾细胞HEK293,运用脂质体转染试剂lipofectamin 2000将荧光素酶报告基因质粒p Gl4.13Z和内参质粒p Rl-TK共转染入48孔板中的HEK 293细胞。转染后24 h用荧光素酶报告基因实验检测试剂测量细胞的荧光素酶活性,比较角落孔、边缘孔以及中间孔测定值的差异,以及内参照海肾荧光素酶活性校准后的差值,并通过细胞计数来观察此种差异是否与细胞数目和转染效率相关。在此基础上,寻找可能减小边缘效应的方法,如细胞种植入48孔板后将其室温静置、48孔板重叠、放弃使用边缘孔。运用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验存在边缘效应,边缘孔与中间孔的荧光素酶活性测定值有显著的差异且有统计学意义（p〈0.05）,而边缘效应的产生与细胞数目和转染效率无明显关联。细胞种植入48孔板后将其室温静置1.5 h、或重叠一个48孔板以及空置边缘孔都不能减弱边缘效应;然而将48孔板四周边缘孔填充液体（磷酸盐缓冲液（1＊PBS）,水）,可以削弱边缘效应。用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验会产生边缘效应,并可能造成对实验结果的误判;48孔板四周边缘孔填充相应的液体可以削弱边缘效应。

关键词：荧光素酶报告基因实验边缘效应 48孔板

全反式视黄酸通过RARα抑制缺氧缺糖引起的原代神经元凋亡

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重庆医科大学学报 2016年第1期41卷 8-13页

作者：郭敏江伟侯娜丽谷燕黄鸿眉陈洁李廷玉重庆医科大学附属儿童医院营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的 :探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡。方法 :采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养原代神经... 详细信息

目的 :探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡。方法 :采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养原代神经元,用神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)鉴定神经元;倒置显微镜观察OGD损伤前后细胞形态变化;流式细胞技术研究OGD损伤后各组原代神经元凋亡水平;Real-time PCR检测视黄酸核受体α(retinoic acid receptor alpha,RARα)、转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转录生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)mRNA表达水平;Western blot印迹检测RARα、TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平。结果 :成功培养原代神经元;原代神经元OGD损伤后,倒置显微镜观察发现OGD组死亡的原代神经元较OGD+ATRA组明显增多,细胞更加杂乱;流式细胞计数发现OGD+ATRA组(26.11±2.96)%细胞凋亡率较OGD组(52.14±5.23)%明显降低(P=0.025);OGD+ATRA组RARαmRNA表达水平(1.52±0.43)和蛋白表达水平(0.22±0.02)较OGD组的m RNA表达水平(0.49±013)和蛋白表达水平(0.10±0.02)均明显增高(P=0.006,P=0.005),而OGD+ATRA组TGF-β1、TGF-β2 m RNA表达水平(0.45±0.10,0.41±0.08)分别较OGD组(0.81±0.15,0.98±0.15)明显降低(P=0.034,P=0.018),而且OGD+ATRA组TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平(0.22±0.04,0.18±0.03)分别较OGD组(0.39±0.05,0.47±0.06)也明显降低(P=0.016,P=0.002),OGD+ATRA组(1.08±0.49)与OGD组(1.00±0.15)Caspase-3 m RNA表达水平无明显差异(P=0.148)。结论 :ATRA可以激活其受体RARα进而下调TGF-β,抑制凋亡因子Caspase-3的表达,最终抑制OGD损伤引起的原代神经元凋亡。

关键词：全反式视黄酸缺氧缺糖损伤原代神经元转录生长因子β 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3

过表达c-Met蛋白诱导内皮祖细胞分布于肺动脉高压大鼠肺组织

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基础医学与临床 2016年第5期36卷 644-650页

作者：杜明成秦廷江夏世辉王朝辉刘赢贝安永重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究教育部重点实验室认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室重庆400014

目的探讨过表达c-Met蛋白对内皮祖细胞(EPCs)在低氧性肺动脉高压(HPAH)大鼠中的分布情况。方法复制HPAH模型,原代培养大鼠骨髓源性EPCs并鉴定,构建带有c-Met基因的腺病毒并转染EPCs,细胞分为对照组、空载病毒组和c-Met过表达组,用real t... 详细信息

目的探讨过表达c-Met蛋白对内皮祖细胞(EPCs)在低氧性肺动脉高压(HPAH)大鼠中的分布情况。方法复制HPAH模型,原代培养大鼠骨髓源性EPCs并鉴定,构建带有c-Met基因的腺病毒并转染EPCs,细胞分为对照组、空载病毒组和c-Met过表达组,用real time PCR和Western blot检测c-Met mRNA和蛋白表达,用CM-Dil活细胞染色剂标记EPCs,通过尾静脉将各处理组EPCs输注到HPAH大鼠模型体内,1周后观察EPCs在主要脏器中的分布。结果对照组、空载病毒组和c-Met过表达组c-Met mRNA表达量分别为:0.19、0.17和1.85;c-Met蛋白的表达量分别为:0.24、0.17和0.82。正常EPCs组中细胞在肺脏、肝脏、脾脏和肾脏的阳性率分别是:1.7%、0.5%、7.9%和9.4%,空载病毒组细胞阳性率分别是:1.5%、0.4%、8.3%和8.5%,c-Met EPCs组细胞阳性率分别为9.3%、0.2%、1.3%和0.3%。c-Met EPCs组中肺脏的细胞阳性率明显升高,在肾脏和脾脏的分布明显下降(P<0.001)。结论过表达c-Met蛋白促进EPCs优势分布于HPAH模型的肺组织。

关键词：低氧性肺动脉高压 c—Met蛋白内皮祖细胞细胞分布