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质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

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临床皮肤科杂志 2004年第3期33卷 148-150页

作者：伍金林韦红吴仕孝刘官信重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所重庆400014

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病... 详细信息

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。

关键词：衣原体,沙眼质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导的胎鼠腭裂腭突组织细胞周期相关分子的表达变化

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中华整形外科杂志 2019年第7期35卷 686-694页

作者：蒋亨袁心刚魏光辉蒲玮傅跃先重庆医科大学附属儿童医院整形外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室400014 重庆医科大学儿科研究所泌尿生殖发育与畸形研究室 400014 成都中医药大学医学技术学院生物教研室 611137

目的检测2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导的胎鼠腭裂模型中腭突组织细胞周期相关分子的表达变化,初步探讨细胞周期相关分子在腭裂发生中的作用机制.方法使用随机数字表法将48只C57BL/6J孕鼠随机... 详细信息

目的检测2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导的胎鼠腭裂模型中腭突组织细胞周期相关分子的表达变化,初步探讨细胞周期相关分子在腭裂发生中的作用机制.方法使用随机数字表法将48只C57BL/6J孕鼠随机分为TCDD处理组与对照组,每组24只.TCDD处理组在胚胎日第10天(the embryonic day10.5,E10.5),按28μg/kg的量(含5μg/mlTCDD的玉米油)给予孕鼠一次性灌胃,对照组等量玉米油灌胃.分别在E13.5、E14.5及E15.5取出各组胎鼠腭突组织,提取总核糖核酸和总蛋白,分别用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测细胞周期相关分子的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平.以不同浓度TCDD(0.01、0.1、0.5和1nmol/L)处理人肾胚293t细胞(HEK293t),并用噻唑蓝(MTT)检测其细胞增殖活力.以IBMSPSS24.0进行统计分析,两样本间均值比较均采用独立样本t检验,所有结果作K-S检验均符合正态分布,方差不齐者采用校正t检验,P0.05).0.1nmol/LTCDD处理1、2、3d,HEK293t细胞增殖活力(0.70±0.05、1.05±0.03、1.39±0.04)均较对照组(0.49±0.04、0.98±0.03、1.55±0.02)增加,差异有统计学意义(t=2.829、1.395、2.692,P=0.0198、0.1320、0.0247).结论TCDD下调Irf6和P21蛋白的表达水平,并干扰细胞周期相关分子正常表达,可能干扰了腭中缝上皮细胞退出细胞周期及增殖活力,细胞周期相关分子在腭发育过程中时空表达的紊乱可能与TCDD诱导腭裂的发生机制有关.

关键词：细胞周期 2,3,7,8-四氯二苯二噁英腭裂腭中缝上皮

转化生长因子β1在环磷酰胺导致大鼠生精细胞凋亡中的表达及意义

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1561-1564页

作者：代江涛李旭良吴春魏光辉林涛何大维重庆医科大学儿童医院胸心外科重庆400014 重庆医科大学儿童医院泌尿外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

目的:初步探讨环磷酰胺(cytoxan,CTX)导致生精细胞凋亡中睾丸组织内转化生长因子β1(transforming growth factorsβ1,TGF-β1)的表达及意义。方法:将CTX作用于9 d龄雄性Wistar大鼠,用药后24 h、4周、8周实验组和对照组分别取材10只,采... 详细信息

目的:初步探讨环磷酰胺(cytoxan,CTX)导致生精细胞凋亡中睾丸组织内转化生长因子β1(transforming growth factorsβ1,TGF-β1)的表达及意义。方法:将CTX作用于9 d龄雄性Wistar大鼠,用药后24 h、4周、8周实验组和对照组分别取材10只,采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,采用RT-PCR技术检测睾丸组织中TGF-β1表达。结果:(1)用药后24 h实验组较对照组生精细胞凋亡无明显差异(F组间=1.25,P=0.924),TGF-β1-m RNA表达无明显差异(F组间=1.59,P=0.339)。(2)用药后4周、8周实验组生精细胞凋亡较对照组明显增多(F组间=126.73,P=0.005),实验组TGF-β1-m RNA表达明显大于对照组(F组间=32.86,P=0.007)。结论:CTX可增加生精细胞凋亡,且伴有TGF-β1表达明显增加,提示CTX引起TGF-β1表达增加可能导致生精细胞凋亡增多。

关键词：环磷酰胺生精细胞凋亡转化生长因子-β1

尿动力学检测在小儿膀胱横纹肌肉瘤术后膀胱功能康复中的评价及临床意义

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中华小儿外科杂志 2014年第9期35卷 656-660页

作者：刘俊宏高洁林涛何大维刘丰华燚刘星陆鹏魏光辉李旭良重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科重庆400014 儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆400014 儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的通过尿动力学检测评价小儿膀胱横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma，RMS）术后膀胱功能恢复情况，以指导临床用药及膀胱功能训练，促进膀胱功能恢复，减少并发症。方法收集2003年8月至2013年8月间收治的12例膀胱RMS患儿的临床资料及排尿... 详细信息

目的通过尿动力学检测评价小儿膀胱横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma，RMS）术后膀胱功能恢复情况，以指导临床用药及膀胱功能训练，促进膀胱功能恢复，减少并发症。方法收集2003年8月至2013年8月间收治的12例膀胱RMS患儿的临床资料及排尿日记并实施尿动力学检测，依据其检测结果指导膀胱功能训练，包括盆底肌肉训练、尿意习惯训练及指导临床用药，并对影响术后膀胱功能恢复相关因素进行分析。结果本组术后行尿动力学检查并指导膀胱功能训练，除1例复发死亡外，11例中膀胱控尿功能良好9例，白天排尿间隔时间1～3h，夜间排尿0～2次；压力性尿失禁1例，白天排尿间隔时间30～40min，夜间排尿2～3次；另1例尚在膀胱训练治疗中。最后一次尿动力学检测见膀胱内压、最大膀胱测压容量、残余尿量、尿流率、膀胱顺应性均正常9例；1例术后伴压力性尿失禁，通过膀胱功能训练，现最大膀胱测压容量约135ml，为最小膀胱容量估计值的90％，而残余尿量、膀胱内压、尿流率未见明显异常，膀胱控尿功能有所改善；另1例术后6个月，最大膀胱测压容量偏小，膀胱顺应性偏低，正进行膀胱功能训练。结论膀胱RMS患儿术后，虽使用化疗药物，但膀胱功能未受到明显不利影响；尿动力学检测能准确评价膀胱RMS术后膀胱功能恢复情况，用于指导术后膀胱功能训练及用药，对促进术后膀胱功能的康复具有重要的临床意义。

关键词：膀胱横纹肌肉瘤尿动力学

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多西环素治疗恶性实体肿瘤的研究进展

中国抗生素杂志 2023年第11期48卷 1211-1219页

作者：张黄成昊张朝霞田小毛严兵昆明市儿童医院泌尿外科云南省儿科重大疾病重点研究实验室云南省儿童健康与疾病临床医学研究中心昆明市儿童实体肿瘤诊治中心昆明650228 重庆市儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室重庆市儿科重点实验室儿童发育与障碍教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床研究中心中国儿童发展与危重症国际科技合作基地重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科重庆400015

恶性肿瘤是威胁人类生命与健康的重要疾病,严重威胁经济的发展和社会稳定。治疗耐药和远处转移是恶性实体肿瘤死亡的主要原因,也是目前临床治疗的关键难题。近年来,一些具有抑制细胞活性的抗生素被注册为抗肿瘤药物,给临床治疗带来希望... 详细信息

恶性肿瘤是威胁人类生命与健康的重要疾病,严重威胁经济的发展和社会稳定。治疗耐药和远处转移是恶性实体肿瘤死亡的主要原因,也是目前临床治疗的关键难题。近年来,一些具有抑制细胞活性的抗生素被注册为抗肿瘤药物,给临床治疗带来希望。多西环素具有良好的组织穿透性,口服吸收良好,没有明显的组织毒性。并且,多项实验研究表明多西环素具有抗肿瘤作用。但由于效能低、副作用多等局限性,目前暂时未用于临床肿瘤的治疗。因此,本文拟对多西环素治疗恶性实体肿瘤的研究做一综述,总结具体作用、机制和现阶段面临的问题,并对多西环素治疗恶性实体肿瘤的应用前景提出展望。

关键词：多西环素恶性实体肿瘤治疗研究进展

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氟他胺致大鼠隐睾模型的睾丸组织形态改变及其病理基础

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重庆医科大学学报 2017年第8期42卷 953-958页

作者：彭金普张德迎曹希宁周玥沈炼桔龙春兰何大维林涛魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正... 详细信息

目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正常对照组(n=10),Flu隐睾组于妊娠12~21 d给予Flu 25 mg/(kg·d)皮下注射,正常对照组不予任何处理,取各组出生后第60天(postnatal day 60,PND60)的雄性SD大鼠睾丸组织(Flu隐睾组只取隐睾睾丸),HE染色观察睾丸组织形态学的差异,透射电镜观察睾丸支持细胞间的紧密连接结构,TUNEL凋亡染色检测生精细胞凋亡情况,取附睾尾进行精子计数及形态观测,免疫组织化学和Western blot检测睾丸组织中生殖细胞增殖分化指标视黄酸刺激因子8(stimulated by retinoic acid gene 8,Stra8)、联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,SCP3)的表达,采用Q-PCR检测Stra8基因水平。结果:收集正常对照组正常睾丸30只与Flu隐睾组隐睾睾丸22只,HE染色显示隐睾睾丸管腔明显缩窄、生精细胞发育迟缓且排列紊乱、管腔中央无精子形成;TUNEL凋亡检测证实隐睾组有大量生精细胞发生凋亡,精子计数结果为隐睾组(1.99±0.13)×108个/m L,远低于正常对照组[(5.53±0.17)×108个/m L,P=0.000];透射电镜(transmission electron microscope,TEM)可观察到SD大鼠隐睾支持细胞间的紧密连接结构疏松;免疫组织化学显示Stra8在隐睾组织中表达较正常对照组少,SCP 3在正常对照组睾丸生精小管的各级生精细胞胞核中均有表达,而在隐睾组睾丸中表达很弱;Western blot结果显示,Flu隐睾组Stra8蛋白表达量(0.34±0.05)明显低于正常对照组(0.96±0.09),P=0.002;Flu隐睾组SCP3蛋白表达量(0.39±0.03)也明显低于正常对照组(0.97±0.07),P=0.001。Q-PCR结果显示,Flu组SD大鼠睾丸组织内Stra8 m RNA的表达(0.765±0.015)较正常对照组(1.00±0.01)低,P=0.01。结论:Flu诱导的SD大鼠隐睾模型中,睾丸呈明显病理形态学改变,支持细胞间紧密连接结构破坏,Stra8及SCP3表达明显下调,生精细胞凋亡增多,精子数量及质量下降,这可能是导致生精细胞发育障碍的重要原因。

关键词：氟他胺大鼠隐睾睾丸病理改变

联合维生素对邻苯二酸二-（2-乙基己基）酯所致睾丸发育异常的干预作用

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中华小儿外科杂志 2018年第4期39卷 302-306页

作者：唐向亮沈炼桔吴盛德魏仪王养才龙春兰周玥黄方圆李典魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的探讨联合应用维生素E和维生素C对邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯所致的睾丸发育异常的干预作用。方法将新生SD大鼠分为5组，即玉米油对照组、邻苯二酸二-（2-乙基己基）酯（DEHP）暴露组、维生素E干预组、维生素C干预组以及联合维生... 详细信息

目的探讨联合应用维生素E和维生素C对邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯所致的睾丸发育异常的干预作用。方法将新生SD大鼠分为5组，即玉米油对照组、邻苯二酸二-（2-乙基己基）酯（DEHP）暴露组、维生素E干预组、维生素C干预组以及联合维生素E和维生素C干预组。药物剂量：DEHP为500 mg/kg、维生素E为200 mg/kg、维生素C为100 mg/kg，每日灌胃，连续处理30 d，6 d后麻醉并处死，测量肛门生殖器距离和肛门生殖指数，HE染色观察睾丸组织病理形态改变情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测睾丸组织睾酮含量，Western blot检测SOD及Nrf2的蛋白表达水平。结果与对照组相比，DEHP暴露组和维生素C干预组的肛门生殖指数明显降低（P〈0.05），联合干预组的肛门生殖器距离明显增大（P〈0.05）。HE染色发现DEHP暴露后，大鼠睾丸曲细精管结构紊乱，失去极性，上皮严重萎缩，生精细胞数量极少并且脱落，间质增生明显；维生素E或维生素C干预组的睾丸组织形态也有一定程度破坏，生精细胞数量减少，间质部分增生；联合干预组的睾丸曲细精管结构保存尚好。ELISA结果显示联合干预组的睾丸组织中睾酮含量明显增加（P〈0.05）。DEHP暴露组的SOD和Nrf2表达量明显增高（P〈0.05），其中联合干预组的SOD表达水平明显低于其余各组（P〈0.05），而Nrf2在其余各组中差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论联合应用维生素E和维生素C较单独使用其中一种抗氧化剂能够更有效地减轻机体氧化应激压力从而改善环境内分泌干扰物引起的睾丸发育异常，缓解生殖细胞坏死，其中Nrf2信号通路可能起到重要作用。

关键词：睾丸氧化应激维生素E 维生素C

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经尿道膀胱镜下切开术治疗小儿输尿管囊肿

中国微创外科杂志 2017年第3期17卷 213-215页

作者：刘华章石秦林林涛吴盛德何大维李旭良魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014

目的探讨经尿道膀胱镜下切开术治疗小儿输尿管囊肿的效果。方法 2007年2月~2015年4月对42例小儿输尿管囊肿行经尿道膀胱镜下切开术,单纯型:在囊肿前壁下方,膀胱颈部上方,做一横行切口;异位型:纵行切开位于尿道内的囊肿,切口自囊肿远端... 详细信息

目的探讨经尿道膀胱镜下切开术治疗小儿输尿管囊肿的效果。方法 2007年2月~2015年4月对42例小儿输尿管囊肿行经尿道膀胱镜下切开术,单纯型:在囊肿前壁下方,膀胱颈部上方,做一横行切口;异位型:纵行切开位于尿道内的囊肿,切口自囊肿远端经膀胱颈延伸至膀胱内。结果 39例一次性切开减压成功,3例术后1年内二次切开减压成功。8例术前存在膀胱输尿管反流(Ⅱ~Ⅲ度7例,Ⅳ度1例),3例因尿路感染未控制行输尿管再植术,术后尿路感染控制;余5例随访1~3年,4例反流消失,1例仍存在反流(Ⅱ度),口服小剂量抗生素无尿路感染发生。5例术后出现患侧囊肿相连肾/半肾段膀胱输尿管反流(Ⅱ~Ⅲ度4例,Ⅳ度1例),1例(Ⅳ度)因尿路感染未控制行输尿管再植术,术后尿路感染控制;余4例术后随访1~4年,3例反流消失,1例仍存在反流(Ⅱ度),口服小剂量抗生素无尿路感染发生。余29例术后随访6个月~5年,平均1年10个月,临床症状均控制,无反流发生,未行重建手术治疗。结论经尿道膀胱镜下切开术简单、微创,不仅可用于解除尿路梗阻,而且可降低复杂尿路手术实施的可能性。

关键词：输尿管囊肿内镜

腹腔镜下肾盂成形术治疗小儿肾盂输尿管连接部梗阻所致巨大肾积水及术后引流方式的研究

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中国微创外科杂志 2018年第1期18卷 15-19页

作者：习林云何大维成彦遐肖哲思魏春曾玉佩苟云鹏重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014

目的评估腹腔镜下Anderson-Hynes肾盂成形术治疗小儿肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)所致巨大肾积水的可行性,探讨术后肾盂尿液引流方式的选择。方法 2008年4月~2015年5月采用经腹腔入路腹腔镜下Anderso... 详细信息

目的评估腹腔镜下Anderson-Hynes肾盂成形术治疗小儿肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)所致巨大肾积水的可行性,探讨术后肾盂尿液引流方式的选择。方法 2008年4月~2015年5月采用经腹腔入路腹腔镜下Anderson-Hynes肾盂成形术治疗83例UPJO所致巨大肾积水,术后连续B超检测肾集合系统扩张分离的前后径(anterior-posterior,AP),评价术后肾积水缓解情况。术后采用内引流和外引流2种肾盂尿液引流方式,按引流方式分为2组,比较2组手术时间、并发症、术后住院时间。结果 83例均在腹腔镜下顺利完成Anderson-Hynes肾盂输尿管成形术,无中转开放手术。术后随访3~24个月,平均16个月,术后3、6、12、24个月外引流组和内引流组分别随访33、47例,30、44例,27、32例,12、16例,术后肾积水均缓解,2组均无统计学差异(P>0.05),无再手术。外引流组和内引流组手术时间无统计学差异[(161.9±23.8)min vs.(164.0±24.7)min,t=-0.388,P=0.699]。术中均未发生与气腹有关的并发症,无肠道及脏器损伤。术后2组出现并发症18例(21.7%,18/83),其中14例(16.9%,14/83)为ClavienⅠ级,4例(4.8%,4/83)为ClavienⅡ级,2组术后并发症发生率无明显差异[14.3%(5/35)vs.27.1%(13/48),χ~2=2.408,P=0.661]。外引流组和内引流组术后住院时间有显著性差异[(9.8±1.3)d vs.(7.8±1.2)d,t=7.239,P=0.000]。结论腹腔镜下Anderson-Hynes肾盂成形术治疗UPJO引起的小儿巨大肾积水是安全、有效的可选择方式,2种引流方式的疗效均良好。

关键词：腹腔镜手术巨大肾积水肾盂输尿管连接处梗阻