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经膀胱颈部分结扎建立膀胱输尿管返流性肾损害动物模型

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四川大学学报（医学版） 2021年第5期52卷 825-831页

作者：王钊颖张朝霞金黎明刘博沈炼桔何大维魏光辉重庆医科大学附属儿童医院儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科重庆400014

目的建立一种膀胱出口梗阻导致的返流性肾损害动物模型。方法取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠60只,随机划分为对照组、假手术组和膀胱颈部分结扎(PBOO)组,每组20只,PBOO组小鼠麻醉后开腹分离膀胱颈,用0.3 mm直径的金属棒引导部分结扎膀胱颈,... 详细信息

目的建立一种膀胱出口梗阻导致的返流性肾损害动物模型。方法取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠60只,随机划分为对照组、假手术组和膀胱颈部分结扎(PBOO)组,每组20只,PBOO组小鼠麻醉后开腹分离膀胱颈,用0.3 mm直径的金属棒引导部分结扎膀胱颈,假手术组仅开腹分离膀胱颈,不结扎,对照组不做处理。术后7 d,每组随机挑选12只存活的小鼠,观察膀胱、输尿管、肾盂和肾脏大体变化,行经膀胱逆行性尿路造影,取肾组织进行组织病理学分析,Western blot、免疫荧光和免疫组化分别检测波形蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果与对照组和假手术组相比,PBOO组小鼠膀胱、输尿管、肾盂明显扩张,膀胱输尿管返流明显,肾脏体积和质量增加(P组织病理学检查可见肾小球萎缩,肾小管扩张,小管间质炎细胞浸润,肾小球基底膜增生,间质纤维化明显;Western blot、免疫荧光和免疫组化分别测得肾组织中波形蛋白、PCNA、α-SMA的表达水平均升高(P研究膀胱出口梗阻导致的肾纤维化病理改变机制及治疗措施的动物模型。

关键词：膀胱颈部分结扎膀胱出口梗阻肾纤维化

IL-2联合IL-15提高肾母细胞瘤患儿外周血NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

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中华小儿外科杂志 2018年第5期39卷 345-350页

作者：石秦林林涛沈炼桔刘丰张德迎陆鹏刘星何大维李旭良魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室、儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室 400014

目的观察肾母细胞瘤（WT）患儿外周血NK细胞经IL-2、ILd5扩增后对肾母细胞瘤SK-NEP-1的杀伤作用.方法以8例WT患儿作为病例组,8例健康体检儿童作为对照组.采集每例外周血4 ml,按Fieoll法分离外周血单个核细胞（PBMC）,流式细胞仪检测... 详细信息

目的观察肾母细胞瘤（WT）患儿外周血NK细胞经IL-2、ILd5扩增后对肾母细胞瘤SK-NEP-1的杀伤作用.方法以8例WT患儿作为病例组,8例健康体检儿童作为对照组.采集每例外周血4 ml,按Fieoll法分离外周血单个核细胞（PBMC）,流式细胞仪检测、分选两组PBMC中CD3＋ CD16＋ CD56＋ NK细胞;另采集病例组和对照组外周血4 ml,分离PBMC后,分两组进行培养[IL-2（100 U/ml）培养组、IL-2（100 U/ml）联合IL-15（10 ng/ml）培养组],流式细胞仪检测、分选培养后CD3-CD16＋ CD56＋ NK细胞.CCK8法检测在不同效靶比（E∶T分别为5∶1、10∶1、20∶1）（效应细胞：NK细胞;靶细胞：SK-NEP-1）情况下,WT患儿外周血NK细胞经IL-2、IL-15扩增后对SK-NEP-1细胞的杀伤作用.western blot检测培养前、IL-2培养组、IL-2联合IL-15组CD3-、CD16＋、CD56＋、NK细胞中TNF-α及TNF-β表达情况.结果病例组和对照组采用IL-2联合IL-15扩增后的NK细胞比例分别增加[（7.3±2.4）％比（21.2±3.2）％],[（4.5±1.6）％比（10.1±3.4）％];数量分别增多（70.60±22.5）,（30.12±33.16）倍,（P＜0.05）.E∶T为10∶1、20∶1时,与单用IL-2扩增比较,IL-2联合IL-15扩增组的NK细胞对肾母细胞瘤细胞的杀伤作用均增强[（16.3±2.1）比（10.5±1.6）]、[（23.9±3.2）比（13.7±2.5）],（P＜0.05）.病例组患儿外周血CD3 CD16＋ CD56＋ NK细胞采用IL-2联合IL-15培养后TNF-α和TNF-β的表达量,较IL-2组、培养前,均显著增加（P＜0.05）.结论 IL-2联合IL-15能够提高患儿外周血NK细胞的比例及数量,增加其分泌TNF的能力,从而提高其对肿瘤的杀伤作用.

关键词：肾母细胞瘤自然杀伤性细胞白细胞介素2 白介素15 儿童

肿瘤样干细胞来源的外泌体促进人脐带间充质干细胞的增殖和侵袭

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南方医科大学学报 2018年第12期38卷 1440-1447页

作者：张丹何大维李典唐波胡东郭文浩王璋沈炼桔魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科//儿童泌尿生殖发育与组织工程重庆市重点实验室//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地//儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞(Piwil2-iCSC)来源的外泌体对人脐带间充质干细胞(hucMSCs)肿瘤样生物学行为的影响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标... 详细信息

目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞(Piwil2-iCSC)来源的外泌体对人脐带间充质干细胞(hucMSCs)肿瘤样生物学行为的影响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标志蛋白表达及作用途径。将hucMSCs分为对照组、PBS干预组和外泌体干预组(Exo),CCK-8、细胞划痕实验、Transwell和Western blot检测各组hucMSCs的增殖、迁移、侵袭能力以及基质金属蛋白酶(MMPs)MMP2和MMP9蛋白的表达水平。细胞染色体核型分析检测经Piwil2-iCSCs外泌体长期干预的hucMSCs的染色体结构。结果透射电镜可见Piwil2-iCSCs外泌体大小均匀,直径在50～100 nm,呈形态较规则的圆形或椭圆形囊泡状小体,粒径分析显示外泌体直径分布集中在在100～200 nm;Western blot显示外泌体标志性蛋白CD9、CD63和piwil2蛋白阳性表达;外泌体摄入实验表明外泌体进入细胞发挥作用。与对照组和PBS干预组相比,Exo组细胞增殖数量明显增多(P<0.05),划痕愈合速度加快(24 h,P<0.05;48 h,P<0.01),侵袭细胞数目显著增加(P<0.01)。经Piwil2-iCSCs外泌体干预后的hucMSCs细胞MMP2(P<0.05 vs PBS干预组,P<0.01 vs对照组)、MMP9蛋白水平表达增高(P<0.05),但染色体核型仍是46XY,无异常。结论肿瘤样干细胞Piwil2-iCSC外泌体能促进hucMSCs的增殖、迁移及侵袭,但是未出现肿瘤样异质性改变。

关键词：外泌体肿瘤干细胞人脐带间充质干细胞增殖迁移侵袭

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小儿重复肾血管变异的临床应用解剖

中华泌尿外科杂志 2019年第2期40卷 117-121页

作者：罗今刘星何大维刘丰张德迎华燚陆鹏林涛李旭良魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室400014

目的研究重复肾血管解剖,为手术切除病变肾段提供科学依据。方法回顾性分析2012年2月至2018年4月我院收治的84例上肾重复肾患儿的临床资料。男20例,女64例;年龄0.2~11.8岁,平均2.5岁。患儿因泌尿系感染、漏尿、腹部包块、体检超声检... 详细信息

目的研究重复肾血管解剖,为手术切除病变肾段提供科学依据。方法回顾性分析2012年2月至2018年4月我院收治的84例上肾重复肾患儿的临床资料。男20例,女64例;年龄0.2~11.8岁,平均2.5岁。患儿因泌尿系感染、漏尿、腹部包块、体检超声检查发现重复肾异常等入院。84例中单侧重复肾75例(89.3%),双侧9例(10.7%)。根据术前CT血管造影及术中所见重复肾形态、大小、位置、重复肾段解剖关系重点,结合上肾段动脉血管的分支和走行,描述重复肾上肾段动脉血供情况。分析重复肾上肾段血管数量及走行与性别的关系。结果本组84例共93侧中,68侧(73.1%)上肾段为1支动脉供应,25侧(26.9%)为≥2支动脉供应。基于上肾段供应动脉走行及开口情况,分3类:①提前分支类,共71侧(76.3%),为肾动脉在肾门贴近肾实质处分出2支或多支血管,分别供应上下肾段;②副肾动脉类,共18侧(19.4%),为腹主动脉或其分支发出动脉直接汇入上肾段;③其他类,共4侧(4.3%),包括提前分支加副肾动脉的混合类和肾上腺动脉分支供应重复肾上肾段的情况。在血管变异中,不同性别重复肾上肾段供应血管数量(P=0.19)和血管走行(P=0.83)情况的差异均无统计学意义。结论重复肾上肾段供应动脉数量方面以单一肾动脉分支为主;走行方面以提前分支类为主;供应动脉数量和走行无性别差异。了解重复肾上肾段血管变异情况,可为术中避免出血及误伤正常血管提供依据。

关键词：重复肾血管解剖腹腔镜手术

维甲酸促进隐睾大鼠睾丸生精功能改善的实验研究

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中华小儿外科杂志 2019年第4期40卷 363-369页

作者：周宇彭金普张德迎周玥龙春兰沈炼桔刘星林涛何大维魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室400014

目的探讨维甲酸改善氟他胺诱导隐睾大鼠生精功能的相关机制,为临床预防隐睾患儿发生不育提供动物实验基础。方法30只雌性SD大鼠合笼成功后采用随机数字表法平均分为:对照组10只,孕期第12~20天皮下注射1 mg/ml的玉米油25 mg·kg^-1·d^-1... 详细信息

目的探讨维甲酸改善氟他胺诱导隐睾大鼠生精功能的相关机制,为临床预防隐睾患儿发生不育提供动物实验基础。方法30只雌性SD大鼠合笼成功后采用随机数字表法平均分为:对照组10只,孕期第12~20天皮下注射1 mg/ml的玉米油25 mg·kg^-1·d^-1;氟他胺诱导隐睾组10只,孕期第12~20天皮下注射玉米油配制的氟他胺25 mg·kg^-1·d^-1;维甲酸干预组10只,在氟他胺诱导隐睾组处理基础上,予子代雄鼠生后1~10 d及28~30 d玉米油配制的维甲酸1 mg·kg^-1·d^-1。于生后30 d及60 d观察子代雄鼠睾丸组织病理、精子数量及质量,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测氧化应激水平蛋白、凋亡水平蛋白及血睾屏障相关连接蛋白水平改变。结果对照组无隐睾发生,睾丸重量为(0.56±0.17) g,体积为(0.44±0.12)cm^3,精子数量为(2.25±0.14)个/ml;睾丸组织各级生精细胞排列整齐,层次清楚,可见较多精子细胞;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为0.92±0.02和0.62±0.06、0.93±0.12,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.67±0.06和0.80±0.04,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为1.44±0.07和3.84±0.10。氟他胺诱导隐睾组隐睾发生率为62.50%(20/32),睾丸重量为(0.13±0.03) g、体积为(0.07±0.02)cm^3,精子数量为(0.65±0.17)个/ml,上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P组织各级生精细胞排列紊乱,层次不清,结构破坏;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为1.23±0.07和0.90±0.09、1.70±0.01,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.87±0.01和0.53±0.20,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为0.51±0.07和1.48±0.25,上述指标与对照组比较,差异亦均有统计学意义(P组织各级生精细胞排列相对整齐,整体表现更接近于对照组;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为0.94±0.01、0.76±0.02和0.96±0.02,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.68±0.02和0.76±0.06,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为1.12±0.04和2.07±0.17,与对照组比较,差异无统计学意义,但较氟他胺诱导隐睾组明显降低/升高,且差异均有统计学意义(P组织内的氧化应激及凋亡水平,部分修复已受损的血睾屏障,进而使隐睾大鼠生精功能得到部分改善。

关键词：隐睾维甲酸氧化应激凋亡血睾屏障

间充质干细胞向心肌样细胞特异分化过程中Akt与Islet-1/GCN5蛋白质复合体关系的研究

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中国细胞生物学学报 2018年第5期40卷 675-685页

作者：陈雪妮朱静田杰易勤黄月重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室重庆400014

该文研究了Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌样细胞特异分化过程中Akt与Islet-1/GCN5(general control of amino acid biosynthesis protein 5)蛋白质复合体的关系,进一步探讨了间充质干细胞诱导分化的调控机制。该文用过表达Isl... 详细信息

该文研究了Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌样细胞特异分化过程中Akt与Islet-1/GCN5(general control of amino acid biosynthesis protein 5)蛋白质复合体的关系,进一步探讨了间充质干细胞诱导分化的调控机制。该文用过表达Islet-1基因的慢病毒感染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测Islet-1、c Tn T(cardiac troponin T)、Connexin43蛋白质水平,免疫共沉淀技术(Co IP)检测激活或抑制Akt的情况下Islet-1与GCN5的结合情况。结果表明,感染过表达Islet-1基因慢病毒的C3H10T1/2细胞形态出现心肌样变,Islet-1、c Tn T、Connexin43蛋白质水平均高于未感染组。在Islet-1蛋白质高峰的第三周时间点,激活或抑制Akt的情况下,Islet-1与GCN5的结合量分别低于或高于未加药处理的细胞组(P研究结果表明,在诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌样细胞特异分化过程中Akt的活性与Islet-1/GCN5蛋白质的结合量存在相互拮抗的关系。

关键词： Islet-1 Akt GCN5 免疫共沉淀间充质干细胞心肌细胞

胰岛素生长因子-1(IGF-1)通过PI3K/Akt通路抑制骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡

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中国细胞生物学学报 2018年第9期40卷 1456-1465页

作者：黎鑫朱静田杰谭彬崔向荣向中平重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室重庆400014

该研究通过构建高表达胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的异常微环境模型探讨IGF-1对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响及可能的作用机制,为BMSCs作为载体在靶向治疗肿瘤过程中的安... 详细信息

该研究通过构建高表达胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的异常微环境模型探讨IGF-1对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响及可能的作用机制,为BMSCs作为载体在靶向治疗肿瘤过程中的安全应用提供前期实验基础。取分离纯化的大鼠BMSCs,用流式细胞术鉴定BMSCs表面标志,将实验分为4组:BMSCs空白对照组、IGF-1刺激组、IGF-1+LY294002阻断剂组和IGF-1+MK2206阻断剂组。加药处理2周后,CCK-8法检测细胞增殖能力;Hoechst 33342染色观察细胞核形态及凋亡比例;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞线粒体膜电位变化;RT-qPCR检测细胞Akt、Bad、Bcl-xl、c-Myc、STAT3的m RNA水平;Western blot检测细胞Akt、p-Akt、Bad、p-Bad、Bcl-xl、c-Myc、STAT3、p-STAT3的蛋白水平。结果显示:IGF-1刺激组细胞与BMSCs空白对照组比较增殖率升高,凋亡率减低;IGF-1刺激组Bad、Bcl-xl、cMyc、STAT3的mRNA的表达均显著高于BMSCs空白对照组(P<0.05);IGF-1刺激组p-Akt、Bad、p-Bad、Bcl-xl、c-Myc、STAT3、p-STAT3的蛋白表达水平显著高于BMSCs空白对照组(P<0.05)。而阻断剂组细胞(IGF-1+LY294002阻断剂组、IGF-1+MK2206阻断剂组)与IGF-1刺激组比较增殖率均降低,凋亡率增高,相关分子m RNA和蛋白表达水平均明显降低。以上结果表明,IGF-1能通过活化PI3K/Akt通路,激活下游增殖和凋亡相关分子,从而促进BMSCs增殖,抑制BMSCs凋亡。

关键词：骨髓间充质干细胞 IGF-1 p-Akt 凋亡

儿童肾盂输尿管连接处梗阻伴感染的手术时机选择

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陆军军医大学学报 2022年第12期44卷 1261-1265页

作者：韦超张德迎杨银王萱钟庆涛刘星华燚林涛何大维李旭良钟朝晖魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室重庆400014 重庆医科大学公共卫生学院重庆400016

目的探讨不同手术时机对儿童肾盂输尿管连接处梗阻伴感染的围手术期基本情况及并发症、手术效果的影响。方法采用回顾性队列研究设计,收集2010年1月至2020年12月重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科收治的46例肾盂输尿管连接处梗阻伴感... 详细信息

目的探讨不同手术时机对儿童肾盂输尿管连接处梗阻伴感染的围手术期基本情况及并发症、手术效果的影响。方法采用回顾性队列研究设计,收集2010年1月至2020年12月重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科收治的46例肾盂输尿管连接处梗阻伴感染患儿的病例资料,按照感染控制后距手术时间分为早期手术组(≤1周,n=30)和延迟手术组(≥2个月,n=16),比较两组围手术期基本情况(手术时间、术中出血量、术后住院时间)及并发症(发热、腰痛、腹胀、血尿、高血压、尿外渗、尿路感染)、手术效果(术后6个月肾积水程度、肾皮质改变、再手术)等差异。结果早期手术组和延迟手术组围手术期基本情况及并发症、再手术情况差异均无统计学意义。两组术后肾积水程度均较术前显著改善(P儿童肾盂输尿管连接处梗阻伴感染早期或延迟行肾盂输尿管成形术对围手术期基本情况、并发症及再手术无显著影响;延迟手术肾积水程度改善略优于早期手术,但肾实质厚度改善却明显不及早期手术,提示早期手术解除梗阻有利于肾实质恢复,可避免进一步肾损伤。

关键词：肾盂输尿管连接处梗阻上尿路感染手术时机儿童

MiR-155-5p:在肾母细胞瘤中表达下调并抑制肾母细胞瘤细胞的增殖、迁移及促进细胞凋亡

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南方医科大学学报 2019年第12期39卷 1476-1481页

作者：罗鑫董军君何兴跃沈炼桔龙春兰刘丰刘星林涛何大维魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室

目的探讨miR-155-5p在肾母细胞瘤中的表达及其对肾母细胞瘤细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。方法收集40例肾母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相对应的瘤旁组织,瘤旁组织作为正常对照组,应用RTq PCR检测肾母细胞瘤组织和正常瘤旁肾脏组织中mi... 详细信息

目的探讨miR-155-5p在肾母细胞瘤中的表达及其对肾母细胞瘤细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。方法收集40例肾母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相对应的瘤旁组织,瘤旁组织作为正常对照组,应用RTq PCR检测肾母细胞瘤组织和正常瘤旁肾脏组织中miR-155-5p的表达水平;在肾母细胞瘤细胞株G401中,运用脂质体转染技术过表达及抑制miR-155-5p;采用CCK-8实验检测肾母细胞瘤细胞增殖能力的变化;划痕实验检测肾母细胞瘤细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞凋亡能力的变化。结果RTq PCR结果显示肾母细胞瘤肿瘤组织中miR-155-5p的表达水平显著低于正常肾脏组织,且miR-155-5p的表达与肾母细胞瘤的临床分期呈负相关,差异有统计学意义(P组织中表达显著下调,且其表达量与临床分期呈负相关;miR-155-5p可抑制肾母细胞瘤细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡;miR-155-5p有望成为肾母细胞瘤诊断、治疗和预后评估的一个新的潜在标志物。

关键词：肾母细胞瘤 miR-155-5p 增殖迁移凋亡