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病毒转基因植物疫苗研究进展

免疫学杂志 2006年第z1期22卷 10-17页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

病毒转基因植物疫苗是一种新型病毒疫苗。本文综述了19种病毒转基因植物疫苗的构建及其作用机制等方面的研究进展。

关键词：病毒转基因植物疫苗免疫

乳酸乳球菌介导日本血吸虫重组LL-Sj26GST疫苗的构建、鉴定及表达

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中国病原生物学杂志 2023年第12期18卷 1375-1380页

作者：李文桂欧兴坤何爱琳重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的构建以乳酸乳球菌(LL)为载体的日本血吸虫(Sj)rLL-Sj26GST疫苗,并研究其表达效率。方法以pGEX-Sj26GST为模板PCR扩增Sj26GST基因片段,经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受... 详细信息

目的构建以乳酸乳球菌(LL)为载体的日本血吸虫(Sj)rLL-Sj26GST疫苗,并研究其表达效率。方法以pGEX-Sj26GST为模板PCR扩增Sj26GST基因片段,经XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞。抽提质粒,经双酶切鉴定正确后电穿孔转化乳酸乳球菌MG1363株,构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,抽提质粒进行PCR鉴定。结果pMG36e-Sj26GST经双酶切获得预期大小的目的片段,重组质粒构建正确。提取具有罗红霉素抗性的rLL质粒进行PCR,扩增出676 bp的Sj26GST基因片段;SDS-PAGE分析显示rLL可表达26 ku的Sj26GST蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot检测表达蛋白可被Sj感染者血清识别。结论成功构建日本血吸虫rLL-Sj26GST疫苗,表达的Sj26GST蛋白具有反应原性。

关键词：乳酸乳球菌日本血吸虫 Sj26GST 疫苗

pCD-Em10对泡球蚴感染小鼠免疫应答的影响

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中国免疫学杂志 2008年第2期24卷 99-103,109页

作者：李文桂朱佑明王鸿重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的:探讨pCD-Em10免疫对泡球蚴感染小鼠免疫应答的影响。方法:将pCD-Em10肌肉注射免疫BALB/c鼠,免疫后8周用Em原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比;... 详细信息

目的:探讨pCD-Em10免疫对泡球蚴感染小鼠免疫应答的影响。方法:将pCD-Em10肌肉注射免疫BALB/c鼠,免疫后8周用Em原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比;用EmAg或ConA刺激培养脾细胞,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平;流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有BCG和PBS对照。结果:pCD-Em10免疫组的减蚴率为71.17%,脾CD4+T细胞亚群显著增加,IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低,脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组。结论:pCD-Em10可诱导泡球蚴感染小鼠产生一个保护性的免疫反应。

关键词：多房棘球绦虫 pCD-Em10 免疫应答

pIL-12质粒DNA对细粒棘球蚴感染小鼠免疫应答的影响

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中国人兽共患病学报 2007年第8期23卷 779-784页

作者：李文桂朱佑明王鸿重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的探讨pIL-12质粒DNA免疫对细粒棘球蚴感染小鼠免疫应答的影响。方法将pIL-12质粒DNA肌肉注射免疫BALB/c鼠,免疫后8w用Eg原头节进行攻击感染,感染后18w剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚... 详细信息

目的探讨pIL-12质粒DNA免疫对细粒棘球蚴感染小鼠免疫应答的影响。方法将pIL-12质粒DNA肌肉注射免疫BALB/c鼠,免疫后8w用Eg原头节进行攻击感染,感染后18w剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比;用EgAg或ConA刺激培养脾细胞,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平;流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有BCG和PBS对照。结果pIL-12质粒DNA免疫组的减蚴率为44.85%,脾CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加,IL-2、IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低,脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组。结论pIL-12质粒DNA可诱导细粒棘球蚴感染小鼠产生一个保护性的免疫反应。

关键词：细粒棘球绦虫 pIL-12质粒DNA 免疫应答

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泡型棘球蚴病的免疫预防现状

中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 101-106,112页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

多房棘球绦虫感染导致的泡型棘球蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点之一。EmII/3、Em14-3-3、EMY162、TSP3、CRT、EmLDH、GluT1和TPx蛋白是几种常见的疫苗候选分子,Em疫苗的种类有死疫苗... 详细信息

多房棘球绦虫感染导致的泡型棘球蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点之一。EmII/3、Em14-3-3、EMY162、TSP3、CRT、EmLDH、GluT1和TPx蛋白是几种常见的疫苗候选分子,Em疫苗的种类有死疫苗、DNA疫苗、重组抗原、表位肽和载体介导疫苗等。本文将对这方面的研究现状进行综述。

关键词：泡型棘球蚴病多房棘球绦虫疫苗综述

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的动态观察

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免疫学杂志 2010年第7期26卷 579-584页

作者：叶艳菊李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫应答。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,再用无菌双蒸水将叶蛋白提取液的浓度配制成20μg/μl。88只Balb/c小鼠随机分为2组,分别用100μl灌胃和10... 详细信息

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫应答。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,再用无菌双蒸水将叶蛋白提取液的浓度配制成20μg/μl。88只Balb/c小鼠随机分为2组,分别用100μl灌胃和10μl滴鼻免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2个月。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,眼球取血,常规酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IgG及其亚类和IgE水平;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪(flow cytometr,FCM)检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,体外经脾细胞悬液或加入Eg粗抗原(EgAg)、伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫鼠脾T淋巴细胞增殖情况,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果在末次免疫后4～6周,2组免疫小鼠的血清IgG及其亚类和IgE水平升高,脾T淋巴细胞增殖水平升高,CD4+和CD8+T细胞亚群百分比分别升高,脾细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别升高。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗在免疫早期(4～6周)可诱导免疫鼠脾T淋巴细胞增殖,产生Th1和Th2混合型免疫应答,CD4+和CD8+T细胞亚群在细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护性免疫机制中起重要作用。

关键词：细粒棘球绦虫转基因植物苜蓿细胞因子脾T细胞亚群

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗免疫小鼠脾细胞因子的动态观察

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免疫学杂志 2012年第2期28卷 142-146,151页

作者：张宁李文桂向进平重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的探讨日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum,Bb）（pGEX-Sj14-3-3）疫苗免疫Balb/c小鼠后脾细胞因子的动态变化。方法重组疫苗分别经口服灌胃及鼻腔粘膜接种小鼠;在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16... 详细信息

目的探讨日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum,Bb）（pGEX-Sj14-3-3）疫苗免疫Balb/c小鼠后脾细胞因子的动态变化。方法重组疫苗分别经口服灌胃及鼻腔粘膜接种小鼠;在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20和22周各剖杀4只小鼠,取脾及分离脾细胞;脾细胞分别经未刺激、SjAWA和ConA刺激培养;收集培养的上清液,双抗体夹心ELISA法测定培养上清液的细胞因子水平。结果口服组小鼠脾细胞IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2~12、6~8、2~12和2~8周显著升高,分别在免疫后8、8、6和4周达最高水平;鼻腔黏膜接种组小鼠脾细胞IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2~20、2~10、2~16和2~16周显著升高,分别在免疫后2、2、4和4周达最高水平。结论重组Bb（pGEX-Sj14-3-3）疫苗能够诱导免疫小鼠产生有效的免疫应答。

关键词：日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗细胞因子

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日本血吸虫Sj26GST疫苗研究进展

中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 1008-1013页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

血吸虫病(schistosomiasis)是由日本血吸虫(Schistosoma japonicum,SJ)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,是国家卫生部规划防治的五大寄生虫病之一。该病在我国主要流行于湖南、湖北、江西、江苏和安徽的江湖洲滩地区及四... 详细信息

血吸虫病(schistosomiasis)是由日本血吸虫(Schistosoma japonicum,SJ)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,是国家卫生部规划防治的五大寄生虫病之一。该病在我国主要流行于湖南、湖北、江西、江苏和安徽的江湖洲滩地区及四川和云南的大山区,郝阳等(2007)报道我国现症患者67.12万人,病牛2.48万头,钉螺面积38.01亿平方米,受威胁人口4000万以上。随着三峡建坝、南水北调、农田水利建设、退田还湖、平垸行洪和移民建镇等水利工程的实施,导致钉螺的迁移扩散,有可能引起血吸虫病的潜在流行。[第一段]

关键词： Sj26GST疫苗日本血吸虫人兽共患寄生虫病农田水利建设血吸虫病钉螺面积国家卫生部人类健康

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察

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中国人兽共患病学报 2014年第10期30卷 1028-1032,1038页

作者：张丽李文桂谭建蓉重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，... 详细信息

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。

关键词：日本血吸虫重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗脾细胞增殖 T细胞亚群脾细胞凋亡