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过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

载纳米氧化锌定向纤维膜促进肌腱细胞增殖分化的研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第8期51卷 1895-1903页

作者：范佳辜鹏程成锡婷姜强赵雅潘晓芳白燕重庆医科大学药学院重庆400016

目的为模拟肌腱组织的显微结构和力学性能,促进肌腱组织的再生修复,制备负载不同质量分数纳米氧化锌且同时具备取向结构的左旋聚乳酸(PLLA)纤维膜,对其进行理化表征和生物性能评价,探讨其对肌腱细胞增殖分化的影响。方法利用静电纺丝技... 详细信息

目的为模拟肌腱组织的显微结构和力学性能,促进肌腱组织的再生修复,制备负载不同质量分数纳米氧化锌且同时具备取向结构的左旋聚乳酸(PLLA)纤维膜,对其进行理化表征和生物性能评价,探讨其对肌腱细胞增殖分化的影响。方法利用静电纺丝技术制备PLLA纤维支架及含不同质量分数纳米ZnO的PLLA/ZnO纤维支架。通过扫描电镜、力学拉伸、能谱仪(EDS)图谱表征支架的理化性能,并将支架与小鼠肌腱细胞共培养检测其生物相容性及对细胞增殖、分化的调控作用。结果纤维支架均呈取向性排列,锌元素在纤维中均匀分布,PLLA/0.1%ZnO纤维支架拉伸强度和杨氏模量均显著高于PLLA组。PLLA/0.1%ZnO纤维支架表面细胞数量显著高于PLLA组,且活性更好;小鼠肌腱细胞沿纤维排列方向呈定向性黏附和生长。结论取向PLLA/0.1%ZnO纤维支架具有优良的理化性能,并可显著促进肌腱细胞定向生长和增殖分化,未来有望用于肌腱组织的再生修复。

关键词：纳米氧化锌取向纤维肌腱修复

结直肠癌类器官的反应性T细胞受体筛选及功能鉴定

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免疫学杂志 2024年第3期40卷 279-285页

作者：梅瑶瑶王应明韩晓建申美莹李娅魏正强金艾顺重庆医科大学基础医学院免疫学教研室 400016 重庆医科大学肿瘤免疫调节与免疫干预重庆市重点实验室 400016 重庆医科大学附属第一医院乳腺外科 400016 重庆医科大学附属第一医院胃肠外科 400016

目的本研究通过建立基于结直肠癌(colorectal cancer,CRC)类器官模型以及CRC反应性肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)扩增和分离,筛选肿瘤特异性T细胞受体(T cell receptor,TCR)并进行功能验证,为结直肠癌个体化过继... 详细信息

目的本研究通过建立基于结直肠癌(colorectal cancer,CRC)类器官模型以及CRC反应性肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)扩增和分离,筛选肿瘤特异性T细胞受体(T cell receptor,TCR)并进行功能验证,为结直肠癌个体化过继性T细胞免疫治疗的临床转化提供技术平台和研究基础。方法通过体外3D培养技术构建结肠癌患者组织来源的类器官模型,并利用HE染色和免疫组化进行形态学和特征分子表达检测。随后,将CRC类器官与TIL共培养,通过流式细胞技术分选反应性TIL,通过单个T细胞受体基因克隆技术分析反应性TCR克隆特征。进一步通过细胞毒性实验对TCR功能进行验证。结果通过形态学、代表性分子(CK20和CDX2)表达水平验证了结直肠癌类器官与患者肿瘤具有高度相似性。成功筛选到CD137表达上调和IFN-γ分泌增加的结直肠癌反应性T细胞,其中TCR2-T展现出较好的肿瘤反应性和体外肿瘤杀伤功能。结论建立了基于CRC-Org的反应性TCR筛选和功能验证平台,为结直肠癌个体化T细胞治疗转化应用提供技术平台。

关键词：结直肠癌类器官肿瘤反应性T细胞 T细胞受体抗肿瘤

NLRP3炎症小体在感染性疾病中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1371-1376页

作者：高雪涵卫麟娜董品志陈晋柯源张浪浪王海燕覃明罗军敏遵义医科大学基础医学院免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学流行病学与卫生统计学教研室

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的... 详细信息

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的发生发展中发挥重要作用。因此,本文对NLRP3炎症小体的激活机制以及NLRP3炎症小体在感染性疾病中的研究进展予以综述,旨在为感染性疾病的治疗提供新的靶点。

关键词：固有免疫模式识别受体 NLRP3炎症小体感染性疾病综述

炎症细胞因子与不同特征重性抑郁障碍的相关性

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中国免疫学杂志 2024年第4期40卷 791-795页

作者：闵雪王彦芳姚红张云巧山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室太原030000 山西医科大学第一附属医院精神卫生科太原030000

目的:探讨血清炎症细胞因子与不同特征重性抑郁障碍的相关性。方法:ELISA检测血清炎症细胞因子,比较忧郁/动力不足特征(MPD)组、焦虑/躯体特征(ASD)组和健康对照(HC)组之间血清炎症细胞因子的差异。Spearman法分析炎症细胞因子与HAMD-1... 详细信息

目的:探讨血清炎症细胞因子与不同特征重性抑郁障碍的相关性。方法:ELISA检测血清炎症细胞因子,比较忧郁/动力不足特征(MPD)组、焦虑/躯体特征(ASD)组和健康对照(HC)组之间血清炎症细胞因子的差异。Spearman法分析炎症细胞因子与HAMD-17总分及各项因子分的相关性,二元Logistic回归分析测定不同特征重性抑郁障碍的独立危险因素。结果:与HC组和ASD组比较,MPD组血清IFN-α、IL-6水平升高(P生物标志物。

关键词：炎症细胞因子免疫重性抑郁障碍忧郁/动力不足特征焦虑/躯体特征

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跑步对抑郁大鼠内侧前额叶皮质兴奋性突触的影响

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重庆医科大学学报 2024年第8期49卷 959-966页

作者：杨雯宇肖倩秦露黄杜娟邓宇辉周梅王舜唐勇黄春霞重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的:精确定量研究跑步锻炼对慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)诱导的抑郁模型大鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)内Sp^(+)兴奋性突触数量的影响。方法:选取雄性SD大鼠(54只),经过适应性喂养和糖水基线调整,... 详细信息

目的:精确定量研究跑步锻炼对慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)诱导的抑郁模型大鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)内Sp^(+)兴奋性突触数量的影响。方法:选取雄性SD大鼠(54只),经过适应性喂养和糖水基线调整,在CRS模型建立成功后随机分为对照组、抑郁模型组和模型跑步组,其中模型跑步组大鼠在束缚的第5周开始进行为期4周的跑步锻炼干预。最后,对各组大鼠进行行为学测试,并运用免疫组织化学技术结合现代体视学方法对各组大鼠mPFC内Sp^(+)兴奋性突触变化进行精确定量研究。结果:与对照组[(97.14±2.64)%]相比,抑郁模型组和模型跑步组大鼠糖精偏好百分比[(89.62±6.05)%]减少(P=0.002),体质量的增长减缓,强迫游泳实验中大鼠的不动时间和新环境进食抑制实验的进食潜伏期增加。4周的跑步锻炼可以有效减缓抑郁模型组大鼠糖精偏好百分比的下降[(89.30±5.06)%vs.(97.30±2.08)%,P=0.018],降低强迫游泳实验中抑郁大鼠的不动时间,并在新环境进食抑制实验中缩短抑郁大鼠的进食潜伏期。体视学精确定量分析结果显示,抑郁模型组大鼠mPFC内的Sp^(+)兴奋性突触总量[(9.98±0.35)×10^(8)个]低于对照组[(11.50±1.27)×10^(8)个,P=0.013]。而跑步锻炼则可以逆转抑郁大鼠mPFC内的Sp^(+)兴奋性突触总数的减少[模型跑步组(11.30±1.21)×10^(8)个,P=0.003]。结论:跑步锻炼干预后CRS抑郁模型大鼠mPFC的Sp^(+)兴奋性突触数量的改变可能是跑步锻炼发挥抗抑郁作用的神经生物学基础之一。

关键词：跑步锻炼抑郁症兴奋性突触内侧前额叶皮质体视学

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建立稳定敲减MINK1表达的肺腺癌细胞系及对其初步分析

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重庆医科大学学报 2024年第9期 1072-1078页

作者：张涛张莲张春冬重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的：构建稳定敲减Misshapen/NIK-related kinase(MINK1)表达肺腺癌细胞系，并检测稳定敲减其表达后对细胞增殖、迁移运动及顺铂治疗的影响。方法：利用肺腺癌A549和PC-9细胞，基于pLKO.1-shRNA慢病毒基因敲减表达系统构建稳定敲减MINK... 详细信息

目的：构建稳定敲减Misshapen/NIK-related kinase(MINK1)表达肺腺癌细胞系，并检测稳定敲减其表达后对细胞增殖、迁移运动及顺铂治疗的影响。方法：利用肺腺癌A549和PC-9细胞，基于pLKO.1-shRNA慢病毒基因敲减表达系统构建稳定敲减MINK1表达细胞系，分别通过qRT-PCR和Western bolt在mRNA和蛋白水平检测敲减效率。CCK-8和Transwell检测稳定敲减MINK1表达对细胞增殖和迁移运动的影响，流式细胞检测细胞周期与凋亡变化情况；分析稳定敲减MINK1表达对顺铂治疗敏感性变化情况，并通过免疫荧光染色DNA损伤标志物γH2AX检测细胞DNA损伤水平。结果：qRT-PCR和Western bolt分析结果显示2个特异shRNA均可显著下调MINK1表达。稳定敲减MINK1表达的肺腺癌细胞增殖能力降低，迁移运动能力下降；且敲减MINK1表达明显增强化疗药物顺铂对癌细胞杀伤作用，并诱导DNA损伤水平增加。结论：利用肺腺癌A549和PC-9细胞成功构建稳定敲减MINK1肺腺癌细胞系，而稳定敲减其表达可抑制癌细胞增殖及迁移运动，且可能通过调节DNA损伤修复过程促肺癌细胞耐药。

关键词：肺腺癌 MINK1 细胞增殖迁移运动 DNA损伤修复

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KIAA0753减缓糖尿病抑制的成骨细胞糖代谢和能量代谢

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陆军军医大学学报 2024年第20期 2291-2300页

作者：李梦雪王吉春李乐泰汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体，实验分为对照组、高... 详细信息

目的探讨KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1糖代谢及能量代谢的影响。方法由基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)获取Joubert综合征患者基因表达数据集GSE182286并对其进行分析。构建KIAA0753过表达载体，实验分为对照组、高糖组和高糖+过表达KIAA0753组，采用Western blot检测在高糖条件下KIAA0753对MC3T3-E1细胞糖代谢相关蛋白糖原合酶1(glycogen synthase 1, GYS1)、糖原磷酸化酶L(glycogen phosphorylase L, PYGL)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter type 4, GluT4)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase muscle, PFKM)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶1(pyruvate dehydrogenase phosphatase 1, PDP1)、乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylase α, ACACA),以及线粒体相关蛋白过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α, PGC-1α)、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1, NRF1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, TFAM)的影响；通过检测细胞培养基中葡萄糖含量、细胞内的糖原含量和乳酸含量评估KIAA0753对糖代谢中间产物的影响；采用细胞免疫荧光和ATP含量检测KIAA0753对线粒体活性及功能的影响；采用EdU染色检测KIAA0753对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。结果 KIAA0753在Joubert综合症患者和高糖条件下表达下调(P<0.05)。高糖抑制蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达，促进蛋白PDP1和PYGL的表达，减少糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗，促进乳酸生成，而过表达KIAA0753后减缓了高糖的作用，促进蛋白GYS1、ACACA、PFKM、GluT4、PGC-1α、TFAM和NRF1的表达，抑制蛋白PDP1和PYGL的表达，增加糖原生成和细胞外葡萄糖的消耗，抑制乳酸生成(P<0.05)。与高糖组相比，过表达KIAA0753在高糖条件下显著提升MC3T3-E1细胞线粒体的活性和膜电位，促进ATP的合成(P<0.05),促进MC3T3-E1细胞的增殖(P<0.05)。结论 KIAA0753能够促进成骨细胞的糖代谢并提升线粒体活性和功能，从而为机体提供更多能量。

关键词： Joubert综合征成骨细胞 KIAA0753 糖代谢线粒体 ATP