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大黄素对裸鼠体内K562细胞移植瘤的抑制作用及其与调控Caspase-3和Caspase-9表达的关系

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中草药 2010年第5期41卷 751-756页

作者：王春光刘北忠金丹婷王翀朱丹吴燕钟梁重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨大黄素对K562细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与Caspase-3和Caspase-9表达变化的关系。方法建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量(25、50、100mg/kg)3个实验组,以及模型组和羟基脲(120mg/kg)阳性对照... 详细信息

目的探讨大黄素对K562细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与Caspase-3和Caspase-9表达变化的关系。方法建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量(25、50、100mg/kg)3个实验组,以及模型组和羟基脲(120mg/kg)阳性对照组,每组5只,ip连续给药12d,测量各组裸鼠肿瘤体积,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中caspase-3和caspase-9mRNA表达水平。Western blotting法检测肿瘤组织中proCaspase-3和proCaspase-9蛋白的表达。结果大黄素低、中、高剂量组肿瘤相对体积(RTV)分别为5.23±0.24、4.38±0.17、3.57±0.31;与模型组(10.45±0.47)相比,大黄素处理组肿瘤体积明显缩小,具有统计学意义(P<0.01)。光镜和电镜结果表明大黄素能够诱导K562细胞发生明显的凋亡。RT-PCR结果表明不同剂量的大黄素能够引起caspase-3和caspase-9mRNA的表达上调且有剂量依赖性。与模型组相比,大黄素处理组的proCaspase-3和proCaspase-9蛋白均出现明显的下调。结论大黄素能够明显抑制人K562细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与激活Caspase-3和Caspase-9信号转导通路有关。

关键词：大黄素 K562 移植瘤裸鼠细胞凋亡 Caspase-3 Caspase-9

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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中草药 2011年第9期42卷 1773-1778页

作者：田文霞张曦文王晓飞唐浩党微旗罗奕孔嵌蚺陈婷梅重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖... 详细信息

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G2/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加(P<0.01),抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子(p-STAT3)以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

关键词：联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒人乳腺癌 MDA-MB-231 凋亡侵袭迁移

川楝素提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

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中草药 2010年第3期41卷 426-431页

作者：刘小玲王进张伶易钢何於娟重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法... 详细信息

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化;比色法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9相对活性的改变;RT-PCR检测凋亡相关基因p21、bcr/abl、H-rasmRNA表达水平的改变。结果川楝素提取物显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用72h的IC50值为20nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和Annexin V/PI双标记检测表明川楝素提取物可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNAladder;处理组细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA表达上调,bcr/abl mRNA表达下调。结论川楝素提取物对K562细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与Caspase信号途径的活化有关。

关键词：川楝素提取物 K562细胞细胞凋亡

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响

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中国中药杂志 2008年第13期33卷 1612-1617页

作者：吕纯芳罗春丽冀慧莹赵培重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的变化,筛选差异表达基因。RT-PCR和免疫细胞化学验证上调基因p21^(WAF1)和下调基因cyclinD1。结果:MTT实验结果显示3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h的抑制率与对照组相比有显著意义(P系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异2倍以上的基因共836个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,最为明显的是与细胞生长调节相关的细胞周期调节基因、细胞凋亡调控基因、DNA复制相关基因等类型。RT-PCR检测其中的细胞周期调节相关基因p21^(WAF1)和cyclinD1,结果与基因芯片相符。同时免疫细胞化学结果从蛋白表达水平上佐证p21^(WAF1)和cyclinD1变化与芯片结果一致。结论:藏花素可以诱导T24细胞基因表达谱广泛的改变,并可能通过调控细胞周期相关基因的表达来抑制T24细胞的增殖。

关键词：藏花素膀胱移行细胞癌基因表达谱芯片

肺炎链球菌ply基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第11期30卷 993-997页

作者：李忱炜袁军王虹贺潇董杰崔瑾姜慧张雪梅胥文春何於娟重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室400016

目的构建肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）溶血素基因（pneumolysin,ply）缺陷菌株,并对其毒力作初步研究,为进一步探索宿主对溶血素的防御应答奠定基础.方法采用长臂同源多聚酶链反应（LFH-PCR）技术将ply基因替换为红霉... 详细信息

目的构建肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）溶血素基因（pneumolysin,ply）缺陷菌株,并对其毒力作初步研究,为进一步探索宿主对溶血素的防御应答奠定基础.方法采用长臂同源多聚酶链反应（LFH-PCR）技术将ply基因替换为红霉素耐药基因（erm）后同源重组于肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出ply缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,观察体外缺陷菌株生长情况,并在小鼠体内感染模型研究其毒力侵袭变化.结果 PCR结果显示ply基因完全被erm基因所替代,构建ply缺陷菌成功单个菌落培养基生长情况表明ply基因缺陷并未对细菌的体外生长造成影响但在小鼠鼻腔感染模型中,缺陷菌株入血时间（6 h）明显晚于野生菌株（2 h）,且各时间点的菌量均显著低于野生菌株,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）小鼠腹膜感染模型显示野生菌株半数致死时间为3 d,而缺陷菌株半数致死时间为18d,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论采用LFH-PCR技术作基因突变完全替代ply基因,方法简便快捷 ply的缺陷不影响细菌在体外的生长,但可显著降低细菌在宿主体内的毒力和侵袭.

关键词：肺炎链球菌溶血素长臂同源多聚酶链反应毒力

Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

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肿瘤 2009年第2期29卷 113-117页

作者：刘靳波余晓林文阳安姜习新李朴杨细媚涂植光重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FC... 详细信息

目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响。结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖。半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6h后线粒体膜电位较0h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显。结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用。

关键词：肝肿瘤, 实验性细胞凋亡 Cyclopamine

酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白

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中华血液学杂志 2008年第6期29卷 388-392页

作者：王东生王翀刘北忠夏乾峰郝坡刘畅金丹婷钟梁重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白，研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能。方法构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V，利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列，并通过酵母回转试验与GS... 详细信息

目的利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白，研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能。方法构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V，利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列，并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证。结果成功构建诱饵质粒，且没有毒性、渗漏和自激活现象；利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质；经酵母回转试验得到8个阳性克隆；并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用。结论在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用，白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关。

关键词：白血病酵母双杂交系统技术蛋白质相互作用图 RARα-V蛋白

带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证

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第二军医大学学报 2010年第5期31卷 468-471页

作者：吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活... 详细信息

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。

关键词：维甲酸受体α 核定位信号谷氨酸氨连接酶蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀

带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验

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四川大学学报（医学版） 2009年第3期40卷 382-384,402页

作者：王翀王东生刘北忠郝坡刘畅金丹婷钟梁王春光重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NL... 详细信息

目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用。结果NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白。结论利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用。

关键词： NLS-RARα JTV1 酵母双杂交免疫共沉淀蛋白质相互作用