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草乌甲素对哮喘小鼠治疗作用及其机制研究

中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 441-445,449页

作者：宋乔文许月野郭伟湛孝东赵金红李媛媛徐静云唐小牛皖南医学院医学寄生虫学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室

目的研究草乌甲素对哮喘小鼠的治疗作用及其对气道上皮紧密连接蛋白occludin,claudins以及黏蛋白5AC的影响。方法48只SPF级BALB/c雌鼠以每组12只随机分成4组,阴性对照组(NC组),哮喘组(AS组),草乌甲素(BLA组)和地塞米松阳性对照组(Dex组... 详细信息

目的研究草乌甲素对哮喘小鼠的治疗作用及其对气道上皮紧密连接蛋白occludin,claudins以及黏蛋白5AC的影响。方法48只SPF级BALB/c雌鼠以每组12只随机分成4组,阴性对照组(NC组),哮喘组(AS组),草乌甲素(BLA组)和地塞米松阳性对照组(Dex组)。以粉尘螨提取浸液构建哮喘模型。酶联吸附反应(ELISA)检测血清IgE和肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IFN-γ及黏蛋白5AC(MUC5AC)的含量;苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肺组织病理改变;Western blot和免疫荧光检测肺组织气道上皮紧密连接蛋白occludin和claudins表达;RT-qPCR检测肺组织MUC5AC mRNA的表达。结果ELISA结果表明:与AS组(306.70±46.73)ng/mL相比,BLA组小鼠IgE(142.17±25.66)ng/mL水平显著下降;与AS组(242.35±41.81)pg/mL相比,BLA组小鼠IL-4(166.76±26.32)pg/mL水平显著下降;与AS组(272.34±57.32)pg/mL相比,BLA组小鼠IFN-γ(369.13±51.41)pg/mL水平显著上升;与AS组(1.42±0.34)ng/mL相比,BLA组小鼠MUC5AC(0.66±0.24)ng/mL水平显著下降(均P<0.01)。HE和PAS染色结果表明:与AS组相比,BLA组小鼠气道炎症细胞浸润,杯状细胞增生等病理改变明显缓解。Western blot结果表明:与AS组相比,BLA组小鼠occludin、claudin-1蛋白表达明显上调,claudin-4蛋白表达明显下调(均P<0.05)。免疫荧光结果表明:与AS组相比,BLA组小鼠气道上皮紧密性明显改善。RT-qPCR结果表明:与AS组相比,BLA组小鼠Muc5ac mRNA表达显著抑制(P<0.01)。结论草乌甲素可能通过调节气道上皮紧密连接蛋白和MUC5AC的表达水平改善哮喘小鼠气道上皮屏障功能。

关键词：过敏性哮喘草乌甲素上皮屏障紧密连接蛋白 MUC5AC

微小隐孢子虫GP900^(829~1099)蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 55-62页

作者：杨玲王龙王佳阳周坤铮闫宝龙赵威黄慧聪温州医科大学基础医学院寄生虫教研室浙江温州325035 江苏省扬州市中医院检验科扬州225002

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取... 详细信息

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP^(900^(829~1099))氨基酸序列进行生物信息学分析。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900^(829~1099)基因片段,构建pET-32a-gp900^(829~1099)重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达。纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素。采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用。以0.16、0.80、4.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平。采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平。结果 GP^(900^(829~1099))蛋白二级结构中β转角占比9.23%,无规则卷曲占比64.58%,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的GP^(900^(829~1099))重组蛋白的相对分子质量约为49 000。CCK-8结果显示,GP^(900^(829~1099))对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00μ/g/ml作为作用浓度。流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)%、(18.670±0.657)%、(20.470±1.271)%,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)%(t=3.818、3.872,P <0.05)。qPCR结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050、2.052±0.098和3.284±0.097,均高于对照组的1.010±0.096 (t=3.700、7.595、16.700,均P<0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021和2.378±0.037,后两者均高于对照组1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400±17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940) mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630) mg/L (t=3.193、5.809、3.339,P<0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800±10.540) mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070) mg/L (t=4.125、10.830,P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714±0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的1.0±0.0 (t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P<0.05)。结论不同浓度GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节。

关键词：微小隐孢子虫微线体蛋白GP900 RAW264.7 NF-κB MAPK

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

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多房棘球绦虫分子流行病学研究进展

热带医学杂志 2024年第5期24卷 763-768页

作者：秦俊梅种世桂陈根马慧赵玉敏桂林医学院基础医学院寄生虫学教研室广西桂林541000

泡型包虫病是由多房棘球绦虫的幼虫——多房棘球蚴引起的一类人畜共患性寄生虫病,严重危害患者生命健康。近十年来,随着分子流行病学的发展,多房棘球绦虫流行病学研究有了重大进展。本文将从多房棘球绦虫国内外流行现状、遗传多样性及... 详细信息

泡型包虫病是由多房棘球绦虫的幼虫——多房棘球蚴引起的一类人畜共患性寄生虫病,严重危害患者生命健康。近十年来,随着分子流行病学的发展,多房棘球绦虫流行病学研究有了重大进展。本文将从多房棘球绦虫国内外流行现状、遗传多样性及流行因素进行综述,了解相关研究技术与方法,以期为泡型包虫病的流行病学调查、防治及监测提供技术参考。

关键词：多房棘球绦虫泡型棘球蚴病人畜共患寄生虫病基因分型

刚地弓形虫排泄/分泌抗原诱导卵巢癌细胞凋亡的机制探讨

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中国动物传染病学报 2024年

作者：何焱钊高思李佳洁杨勇刘红丽天津市儿童医院山西医科大学医学寄生虫学教研室

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-... 详细信息

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-3细胞凋亡情况及线粒体膜电位和活性氧（ROS）的变化；采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。CCK-8法结果显示，800 μg/mL Tg-ESA作用于SKOV-3细胞抑制细胞增殖（P < 0.05）；流式细胞术结果显示，与对照组相比，800 μg/mL和1 600 μg/mL浓度的Tg-ESA明显诱导了SKOV-3细胞凋亡（P < 0.05）；进一步研究发现Tg-ESA作用的SKOV-3细胞线粒体膜电位明显下降，而细胞内ROS的含量明显增加（P < 0.01）；Western blot结果显示800 μg/mL、1 600 μg/mL的Tg-ESA可以上调促凋亡蛋白Cleaved Caspase 9、Cleaved Caspase 3和Bax的表达，下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。Tg-ESA通过诱导细胞内活性氧含量升高及线粒体膜电位下降启动了细胞凋亡程序，并通过线粒体凋亡途径诱导SKOV-3细胞凋亡，从而达到抗卵巢癌的效果。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡

广西来宾市2017—2023年101例粪类圆线虫感染的诊断和分析

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中国热带医学 2024年

作者：韦新艳陆燕韦凤妮阮贵香潘菊花吕佳音石云良刘登宇来宾市兴宾区人民医院广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的分析来宾市2017—2023年诊断的101例粪类圆线虫感染患者的临床特征，为粪类圆线虫病防治提供资料。方法收集来宾市兴宾区人民医院2017—2023年确诊感染粪类圆线虫101例患者的临床资料，对患者的年龄、性别、职业、受教育程度和临... 详细信息

目的分析来宾市2017—2023年诊断的101例粪类圆线虫感染患者的临床特征，为粪类圆线虫病防治提供资料。方法收集来宾市兴宾区人民医院2017—2023年确诊感染粪类圆线虫101例患者的临床资料，对患者的年龄、性别、职业、受教育程度和临床症状及贫血情况等进行统计分析。结果 101例粪类圆线虫感染病例中男性79例，女性22例，男女性比为3.6∶1。患者大部分来自农村地区，以务农为主，且文化程度较低，年龄（65.32±12.48）岁，>60岁老年患者67例。首发有消化道腹痛、黑便和血性腹泻症状分别有16、12和6例，合并肺部感染、高血压、痛风和风湿性关节炎、糖尿病和恶性肿瘤分别29、25、18、13和12例。实验室检查显示，出现贫血、大便隐血阳性和嗜酸性粒细胞增高分别59、63和51例。结论来宾市兴宾区的粪类圆线虫感染患者多发于文化程度低的农村老年人，男性多于女性。粪类圆线虫患者中仅部分出现腹痛、腹泻等肠道症状，但大部分患者合并有肺部感染、高血压、痛风性、风湿性关节炎、糖尿病、恶性肿瘤等疾病，合并感染有加快和加剧疾病进程的风险，应加强当地粪类圆线虫的防控。

关键词：粪类圆线虫贫血消化道症状农村地区

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人体蠕形螨体内细菌群落多样性分析

中国血吸虫病防治杂志 2024年第2期36卷 174-178页

作者：韩忍忍张大存王澜汤非凡曹佳诚王婧璇湛孝东谷生丽皖南医学院医学寄生虫学教研室安徽芜湖241002 山东省九鑫生物工程有限公司安徽省芜湖市螨类检验与防控工程技术研究中心安徽芜湖241002

目的分析人体蠕形螨体内细菌群落多样性,为探究蠕形螨在其所致传染病中的作用提供参考依据。方法2023年6—7月通过透明胶纸法采集芜湖市某高校大学生面部蠕形螨,通过Illumina PE250高通量测序平台扩增16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,1... 详细信息

目的分析人体蠕形螨体内细菌群落多样性,为探究蠕形螨在其所致传染病中的作用提供参考依据。方法2023年6—7月通过透明胶纸法采集芜湖市某高校大学生面部蠕形螨,通过Illumina PE250高通量测序平台扩增16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S r RNA)基因V4区以及核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因,将测序结果根据重叠关系进行拼接、过滤得到有效序列,再进行操作分离单元(operational taxonomic units,OTU)聚类。对得到的OTU进行多样性指数分析,并在不同分类水平对细菌菌落结构进行统计分析。结果 16S r RNA测序获得57 483条有效序列,根据不同相似度水平对其进行OTU分类,得到159个OTUs;对其中97%相似水平的OTU进行分类学水平分析,发现人体蠕形螨体内细菌分属于14个门、20个纲、51个目、72个科、94个属。在门分类水平,变形菌门为优势菌门;在属分类水平上,弧菌属、慢生根瘤菌和贪噬菌属为优势菌属。ITS测序共获得56 362条有效序列及147个OTUs,分属于5个门、17个纲、34个目、68个科、93个属;注释到子囊菌门、担子菌门、壶菌属门和毛囊菌门等,子囊菌门为优势菌门,链格孢菌属、附球菌属、青霉菌属和帚枝霉属为优势菌属。结论蠕形螨体内细菌群落组成具有较高多样性,同时微生物种类较多、物种丰度较高。

关键词：人体蠕形螨细菌群落群落多样性 16S核糖体RNA 内转录间隔区

2021—2023年河南省内脏利什曼病病例流行病学特征

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第4期 393-398页

作者：杨成运王丹鲁德岭贺志权纪鹏慧钱丹刘颖寇元静李素华周瑞敏邓艳张红卫河南省疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所河南省寄生虫病原与媒介医学重点实验室

目的分析河南省内脏利什曼病病例流行病学特征，为制定该省内脏利什曼病防控策略提供科学依据。方法在中国疾病预防控制中心传染病报告信息管理系统中，收集2021—2023年河南省报告的内脏利什曼病病例信息和流行病学调查资料，对病例... 详细信息

目的分析河南省内脏利什曼病病例流行病学特征，为制定该省内脏利什曼病防控策略提供科学依据。方法在中国疾病预防控制中心传染病报告信息管理系统中，收集2021—2023年河南省报告的内脏利什曼病病例信息和流行病学调查资料，对病例发病时间、地区分布、人群特征及其诊断情况进行分析。结果 2021—2023年河南省共报告内脏利什曼病病例93例，男女性别比为2.58∶1；外省输入病例2例，本地感染病例91例；3—5月、7—10月发病例数相对较多。病例年龄最小者7个月、最大者74岁，其中0～<10岁组（26例，27.96%）和60～<70岁组（24例，25.81%）病例数较多。病例职业分布以农民（47例，50.54%）和散居儿童（19例，20.43%）为主。91例本地感染病例分布于郑州市、洛阳市、安阳市、鹤壁市、三门峡市和许昌市。2021—2023年河南省内脏利什曼病病例发病-诊断时间中位数（四分位间距）为20(40)d，其中25.81%(24/93)的病例发病-诊断时间≤10 d,38.71%(36/93)的病例在11～30 d、35.48%(33/93)的病例在30 d后才得到诊断。病例诊断单位以省级（60.00%）和地市级医疗机构（28.89%）为主。结论当前河南省内脏利什曼病发病例数逐年增多，发病范围逐渐扩大，应加强病例、犬只和媒介监测，并采取筛查和管理犬只、防蛉灭蛉及健康教育等措施，以控制内脏利什曼病流行。

关键词：内脏利什曼病病例流行病学特征河南省

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加拿大棘球绦虫G7基因型研究进展

中国人兽共患病学报 2024年第6期40卷 548-555页

作者：朱小伟华瑞其邵国庆杨光友四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心成都611130

囊型包虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。作为该病的病原之一,加拿大棘球绦虫G7基因型日渐成为囊型包虫病患者患病的重要病因。近年来,其流行区域有着逐渐扩大的趋势,因而从流行病学角度全面认识其对人和家畜的危害有着... 详细信息

囊型包虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。作为该病的病原之一,加拿大棘球绦虫G7基因型日渐成为囊型包虫病患者患病的重要病因。近年来,其流行区域有着逐渐扩大的趋势,因而从流行病学角度全面认识其对人和家畜的危害有着不容忽视的重要意义。本文全面总结了加拿大棘球绦虫G7基因型的流行特征,并对其生物学特性、线粒体基因组与基因组特征、分子遗传标记及防控进行综述,以期为我国的加拿大棘球绦虫G7基因型的分子流行病学调查和防控措施的制定提供参考。

关键词：加拿大棘球绦虫G7基因型流行特征生物学特性分子遗传标记防控