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豚鼠脂肪干细胞的分离培养与鉴定

中国组织工程研究与临床康复 2007年第7期11卷 1213-1215,I0001页

作者：孙慧如王英董明敏郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科河南省郑州市450052

目的:从成年雄性豚鼠脂肪中分离培养脂肪干细胞,为脂肪干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。成年雄性豚鼠,体质量500～750g。分离培养豚鼠脂... 详细信息

目的:从成年雄性豚鼠脂肪中分离培养脂肪干细胞,为脂肪干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。成年雄性豚鼠,体质量500～750g。分离培养豚鼠脂肪组织,培养三四天后首次换液。倒置显微镜下观察有大量细胞贴壁和漂浮的血细胞,用磷酸缓冲液反复冲洗去除漂浮的细胞,加入DMEM基础培养基+10%胎牛血清培养液。传代前用少量磷酸缓冲液洗涤1次,加入0.25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸2mL,见大部分细胞胞质回缩、形态变圆,加入2mL含血清的DMEM培养液终止消化,收集细胞悬液、计数,以2×104/cm2细胞密度接种于新的培养皿内。二三天达到融合状态,继续传代培养。四甲基偶氮唑蓝测定第1、3、10代脂肪干细胞生长曲线,流式细胞仪检测脂肪干细胞表面标志。结果:①原代培养显示培养的脂肪间充质干细胞2d左右开始贴壁,7d左右可达90%融合,基本上为梭形成纤维样细胞形态。②生长曲线显示,豚鼠脂肪干细胞在1～3代增值能力较强,以第1代细胞最强,10代以后增殖能力减弱,细胞生长进入平台期。经消化传代后的第1、3、10代细胞均经历24～48h的潜伏期,此后为3～5d对数生长期,逐渐进入生长平台期。14代以前具有活跃的增殖能力。③脂肪干细胞标志CD105,CD44呈阳性表达,而造血干细胞标志CD34阴性表达。结论:成功地建立了一种分离培养豚鼠脂肪间充质干细胞的方法,其生长稳定、增殖较快,可作为干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。

关键词：脂肪组织干细胞细胞培养流式细胞仪

嗅黏膜中Caspase-3的表达对嗅神经细胞凋亡的影响

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重庆医科大学学报 2015年第11期40卷 1434-1437页

作者：谢天飞娄卫华河南医学高等专科学校耳鼻咽喉科郑州451191 郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科郑州450052

目的:探讨大鼠急性鼻窦炎时嗅黏膜中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达对嗅神经细胞(olfactory receptor neurons,ORNs)凋亡的影响。方法:将70只成年SD大鼠,按照配对设计,分成对照组和炎症组,造模后于不同时间取材,采用免疫组... 详细信息

目的:探讨大鼠急性鼻窦炎时嗅黏膜中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达对嗅神经细胞(olfactory receptor neurons,ORNs)凋亡的影响。方法:将70只成年SD大鼠,按照配对设计,分成对照组和炎症组,造模后于不同时间取材,采用免疫组织化学方法检测嗅黏膜Caspase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记(TUNEL)法观察ORNs凋亡变化。结果:免疫组化结果,对照组ORNs中Caspase-3未见明显表达,炎症组ORNs中Caspase-3的表达在接种细菌后第2天开始升高,第5天明显升高(P0.05)。细菌接种后第2、21天,炎症组TUNEL阳性细胞计数与对照组相比没有统计学意义(P>0.05),第5、8、14天差异有统计学意义(P一。

关键词：急性鼻窦炎半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 嗅神经元细胞凋亡

电诱发听觉脑干反应对人工耳蜗术后听功能的评估价值

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第13期11卷 2494-2497页

作者：王亮董明敏郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科河南省郑州市450052

目的:以电诱发听觉脑干反应对人工耳蜗术后听功能进行评估,测试人工耳蜗植入者的电诱发听觉脑干反应波形特点及正常数值,并评价患者听觉传导通路功能。方法:测试于2002-07/2004-06在郑州大学第一附属医院测听室进行。对53例Nucleus24型... 详细信息

目的:以电诱发听觉脑干反应对人工耳蜗术后听功能进行评估,测试人工耳蜗植入者的电诱发听觉脑干反应波形特点及正常数值,并评价患者听觉传导通路功能。方法:测试于2002-07/2004-06在郑州大学第一附属医院测听室进行。对53例Nucleus24型人工耳蜗植入术后患者3,10,20电极进行电诱发听觉脑干反应测试,刺激率≤100Hz,脉冲宽度:25,50,75μs/相。结果:53例均进入结果分析。①交替极性刺激较单一极性伪迹小。对侧记录较同侧记录的电诱发听觉脑干反应伪迹小。②随刺激频率增加,电诱发听觉脑干反应各波潜伏期逐渐延长。改变高截止频率,Ⅴ波潜伏期缩短缩短(1.5～3kHz)或保持不变(3～25kHz);改变低截止频率(100～0.002Hz),Ⅴ波潜伏期保持稳定。③电诱发听觉脑干反应阈值随刺激脉宽增加渐降低,在20电极较3,10电极低(P0.05)。④电诱发听觉脑干反应Ⅲ波、Ⅴ波潜伏期在3电极较10,20电极长(P<0.01);在10电极较20电极长(P<0.01)。⑤电诱发听觉脑干反应测试波形出现率为96.22%。结论:①建立了合适的电诱发听觉脑干反应测试模式。②刺激耳蜗不同部位电极时电诱发听觉脑干反应R阈值、潜伏期存在差异。③电诱发听觉脑干反应是对人工耳蜗植入者听功能进行客观评价的有效方法。

关键词：电诱发听觉脑干反应人工耳蜗听功能

人工耳蜗术后客观调机过程中电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位和电诱发蹬骨肌反射的指导作用

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第9期11卷 1713-1715页

作者：王亮董明敏郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科河南省郑州市450052

目的:探讨使用电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位和电诱发蹬骨肌反射指导人工耳蜗术后客观调机的可行性。方法:测试于2002-07/2004-06在郑州大学第一附属医院测听室进行。①对53例Nucleus24型人工耳蜗植入者进行主观阈值以... 详细信息

目的:探讨使用电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位和电诱发蹬骨肌反射指导人工耳蜗术后客观调机的可行性。方法:测试于2002-07/2004-06在郑州大学第一附属医院测听室进行。①对53例Nucleus24型人工耳蜗植入者进行主观阈值以及最大舒适阈值测试,同一天进行电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位和电诱发蹬骨肌反射测试。②将主观阈值和最大舒适阈值与电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位阈值间进行相关性分析;同时将根据电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位阈值推测得出的主观阈值和最大舒适阈值与实际值进行相关性分析。结果:53例受试者均进入结果分析。①电诱发听觉脑干反应阈值和电诱发听神经复合动作电位阈值与主观阈值和最大舒适阈值相关(r=0.585,0.555,0.592,0.630,P<0.001)。②3种检测的阈值在不同患者间变异均较大。但所有电诱发听觉脑干反应阈值和电诱发听神经复合动作电位阈值均大于主观阈值,所有电诱发蹬骨肌反射阈值均低于不舒适阈值。③由电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位阈值推测得出的主观阈值和最大舒适阈值与实际值均显著相关(r=0.918,0.924,0.934,0.883,P<0.001)。结论:电诱发听觉脑干反应、电诱发听神经复合动作电位和电诱发蹬骨肌反射测试可用于指导人工耳蜗植入者主观阈值和最大舒适阈值的调试。

关键词：人工耳蜗言语处理器调试电诱发听觉脑干反应电诱发听神经复合动作电位电诱发镫骨肌反射

河南地区不明原因感音神经性聋95例SLC26A4基因热点突变筛查

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2008年第22期22卷 1026-1027,1031页

作者：朱运华能玲玲李梅生蕫明敏商丘市第一人民医院耳鼻咽喉科河南商丘476100 河南省武警总队医院耳鼻咽喉科郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科

目的：调查河南地区不明原因感音神经性聋病因学情况，探明本地区大前庭水管综合征（large vestibular aqueduct syndrome，LVAS）基因SLC26A42168A〉G的突变率。方法：收集河南地区聋校、聋儿康复中心及2005年2月-2006年5月至郑州大学... 详细信息

目的：调查河南地区不明原因感音神经性聋病因学情况，探明本地区大前庭水管综合征（large vestibular aqueduct syndrome，LVAS）基因SLC26A42168A〉G的突变率。方法：收集河南地区聋校、聋儿康复中心及2005年2月-2006年5月至郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科门诊的感音神经性聋患者95例，进行耳聋病因问卷调查、听力学测试，抽取患者血样提取基因组DNA，运用直接测序法对突变热点2168A〉G进行筛查。对突变阳性者行颞骨CT检查。结果：热点突变基因检测显示，2168A〉G在不明原因感音神经性耳聋患者的突变率为6．32％，对所有检测到突变的患者行颞骨CT检查，其前庭导水管扩大率为83．3％。结论：河南地区不明原因感音神经性耳聋患者中存在较高的2168A〉G遗传性耳聋发生率；通过聋病分子诊断，可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。

关键词：耳聋大前庭水管综合征基因突变

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协同编辑器CoEditor的设计与实现

计算机工程 2000年第7期26卷 100-101,118页

作者：孟广魁刘刚河南医科大学第一附属医院郑州450052 河南医科大学护理学院郑州450052

ＣｏＥｄｉｔｏｒ是一个以人为中心、支持时空分布的人们通过协作共同完成电子文档的编辑、讨论及修改文稿全过程的协同编辑器。该文首先阐述了ＣｏＥｄｉｔｏｒ的以人为中心的设计思想，然后就该编辑器实施中的４层文档库设计、人－人... 详细信息

ＣｏＥｄｉｔｏｒ是一个以人为中心、支持时空分布的人们通过协作共同完成电子文档的编辑、讨论及修改文稿全过程的协同编辑器。该文首先阐述了ＣｏＥｄｉｔｏｒ的以人为中心的设计思想，然后就该编辑器实施中的４层文档库设计、人－人交互界面构造、对用户透明且加锁粒度可变的并发控制机制、跟踪闭环链的检测和解除以及以人为中心的检索等问题的实现方法进行了论述。

关键词：协同编辑器 CoEditor 设计

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中国突发性聋分型治疗的多中心临床研究

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013年第5期48卷 355-361页

作者：无余力生杨仕明韩东一郑虹张榕王海波郑亿庆任基浩林鹏王军高志强吴皓韩德民陈锡辉殷善开董明敏张劲柯星星胡国华赵晓埝姜学钧孙建军许珉邱建新邱建华孙敬武王宁宇刘月辉郭玉芬周慧芳迟放鲁孔维佳黄魏宁刘稳潘滔中国突发性聋多中心临床研究协作组北京大学人民医院耳鼻咽喉科 100044 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科北京110853 四川大学华西医院耳鼻咽喉科成都610041 福建医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科福州350005 山东省立医院集团眼耳鼻喉医院耳鼻咽喉头颈外科济南250021 中山大学孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉科广州510120 中南大学耳科研究所湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科长沙410011 天津市第一中心医院耳鼻咽喉科 300192 北京大学第一医院耳鼻咽喉科 100034 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院耳鼻咽喉科 100730 上海交大医学院附属新华医院耳鼻咽喉头颈外科 200092 首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科 100730 中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科广州510080 上海市第六人民医院耳鼻咽喉科 200233 郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科 450052 新疆维吾尔自治区人民医院耳鼻喉一科乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院耳鼻喉二科乌鲁木齐830001 重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科 400016 南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 210029 中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科沈阳110001 海军总医院全军耳鼻咽喉头颈外科中心北京100037 西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 710004 安徽医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科合肥230022 第四军医大学西京医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032 安徽省立医院耳鼻咽喉头颈外科合肥230001 首都医科大学附属北京朝阳医院耳鼻咽喉科 100020 南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006 兰州大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科 730030 天津医科大学总医院耳鼻咽喉科 300052 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳神经颅底外科上海200031 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022 卫生部北京医院耳鼻咽喉科 100730 徐州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科 221006 北京大学第三医院耳鼻咽喉科 100083

目的探讨突发性聋分型治疗的必要性。方法采用国际通用的标准化临床研究方法，统一设计、统一方案进行前瞻性临床多中心研究。收集年龄在18～65周岁之间，病程在2周以内，未经任何相关医疗处理的突发性聋患者，按照听力曲线分为低中频... 详细信息

目的探讨突发性聋分型治疗的必要性。方法采用国际通用的标准化临床研究方法，统一设计、统一方案进行前瞻性临床多中心研究。收集年龄在18～65周岁之间，病程在2周以内，未经任何相关医疗处理的突发性聋患者，按照听力曲线分为低中频下降型，中高频下降型；平坦型和全聋型四种类型。每种类型有四种不同治疗方案，根据统一设计的随机表，随机选取其中一种方案进行治疗。其中低中频下降型为银杏叶提取物（金纳多）、泼尼松、巴曲酶（东菱迪芙）及其组合；中高频下降型为利多卡因、泼尼松、金纳多及其组合；平坦型或全聋型为东菱迪芙、金纳多、泼尼松及其组合。结果2007年8月至2011年10月全国33家医院共收集符合入组条件的单侧突发性聋患者1024例，其中男性492例（48．05％），女性532例（51．95％）。年龄为19—65岁，平均（41．2±12．8）岁。按照听力曲线分型，低中频下降型205例（20．02％），高频下降型141例（13．77％），平坦型402例（39．26％），全聋型276例（26．95％）。各种类型的总有效率：低中频下降型最高，为90．73％；平坦型次之，为82．59％；全聋型为70．29％；中高频下降型为65．96％；各型之间总有效率比较，差异具有统计学意义（X2=231．58，P=0．000）。1024病例中，痊愈378例（36．91％），显效229例（22．36％），有效198例（19．34％），无效219例（21．39％）；总有效率为78．61％。糖皮质激素对各型突聋均有效，联合用药优于单独用药。结论不同听力曲线类型的突发性聋患者预后差异很大，根据听力曲线进行分型选择不同的治疗方案具有重要意义。低中频下降型疗效最好，平坦型次之，中高频下降型和全聋型效果不佳。

关键词：听觉丧失突发性测听法纯音随机对照试验药物疗法

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头颈部鳞癌端粒酶活性的定量检测

临床耳鼻咽喉科杂志 2000年第9期14卷 393-395页

作者：张松志董明敏滕学敬陈铁河张松新乡医学院第三附属医院耳鼻咽喉科河南新乡453003 河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科上海海军医学研究所

目的 :了解头颈部鳞癌及其颈淋巴结转移癌端粒酶的表达情况 ,探讨端粒酶活性定量分析在头颈部鳞癌诊断中的价值。方法 :采用端粒重复序列液体闪烁计数法检测端粒酶活性。共检测取自 2 5例头颈部鳞癌患者的组织样本 5 5份 ,其中 7例患者... 详细信息

目的 :了解头颈部鳞癌及其颈淋巴结转移癌端粒酶的表达情况 ,探讨端粒酶活性定量分析在头颈部鳞癌诊断中的价值。方法 :采用端粒重复序列液体闪烁计数法检测端粒酶活性。共检测取自 2 5例头颈部鳞癌患者的组织样本 5 5份 ,其中 7例患者同时取有原发癌及其颈淋巴结转移癌两份样本 ,以 2 3份正常组织作为对照。结果 :132份原发鳞癌组织中端粒酶活性 (cpm值 )在 10 0 0以上的 2 8份 ,除 2份外 ,均明显高于正常组织 ;2 3份正常组织的端粒酶活性均在 10 0 0以下 ,除 1份外均低于所有鳞癌组织 (P 0 .0 5 )。结论 :1液体闪烁定量分析方法检测头颈部鳞癌端粒酶活性敏感性较高 ,对头颈部恶性肿瘤的辅助诊断具有一定价值。 2转移癌细胞同样具有较高的端粒酶活性。

关键词：端粒酶头颈部肿瘤鳞状细胞癌 TRAP 定量检测

出生后大鼠耳蜗不同发育阶段connexin26蛋白的表达

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郑州大学学报(医学版) 2009年第2期44卷 323-325页

作者：叶放蕾刘晓燕郝少娟郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科

目的:研究缝隙连接蛋白26(cx26)在出生后大鼠耳蜗不同发育阶段的分布。方法:采用免疫组织化学SP法检测cx26在36只大鼠(1周龄组、3周龄组和9周龄组各12只)耳蜗的表达。结果:cx26在3组均有较强的表达,阳性表达主要分布于耳蜗外侧壁血管纹... 详细信息

目的:研究缝隙连接蛋白26(cx26)在出生后大鼠耳蜗不同发育阶段的分布。方法:采用免疫组织化学SP法检测cx26在36只大鼠(1周龄组、3周龄组和9周龄组各12只)耳蜗的表达。结果:cx26在3组均有较强的表达,阳性表达主要分布于耳蜗外侧壁血管纹和螺旋韧带,Corti氏器中的支持细胞间以及毛细胞和支持细胞间,螺旋缘以及螺旋神经节细胞。cx26在大鼠耳蜗外侧壁、Corti氏器与螺旋神经节的阳性细胞平均积分光密度3组间两两比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:大鼠耳蜗发育过程中cx26的表达趋于稳定,没有随着听力的发展而变化。

关键词：缝隙连接蛋白26 听性脑干反应大鼠耳蜗