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6株鸽源新城疫病毒广东分离株F、HN基因的克隆及遗传进化分析

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中国家禽 2024年第2期46卷 106-112页

作者：云骜张思远成子强林举攀杨家兴广州市华南农大生物药品有限公司广东广州510300 山东农业大学动物科技学院(动物医学院) 山东泰安271000

为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化... 详细信息

为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化分析。结果显示:共分离到6株鸽源NDV,对幼鸽进行分组攻毒14 d后,发病率均为100%,死亡率为60%~80%;6株毒株的F蛋白裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117/112R-R-R-K-R-F117,具有NDV强毒株的典型分子特征,和分离毒株ICPI的测定结果共同表明6株毒株均为强毒株;6株毒株均为NDV的ClassⅡ基因Ⅵ.2.***.1.2.2型;与传统疫苗株La Sota的同源性较低,且F、HN蛋白氨基酸出现多处位点变异。研究表明,广东省鸽源NDV流行以Class Ⅱ基因Ⅵ.2.***.1.2.2型为主,常用的疫苗株La Sota可能对广东地区流行的鸽源NDV保护效果不佳。

关键词：鸽源新城疫病毒 F基因 HN基因遗传进化分析

西藏那曲市牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及基因组分析

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3105-3118页

作者：刘博华符汉宇王玉恒索朗斯珠牛家强包玉花李家奎徐业芬西藏农牧学院动物科学学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室林芝860000 西藏自治区兽医生物药品制造厂拉萨850000 华中农业大学动物医学院武汉430000

旨在对引起西藏牦牛呼吸道感染的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,明确病原菌的血清型、耐药性和致病性等生物学特性及基因组特征和遗传进化关系。本研究从西藏林芝、拉萨、那曲地区采集牦牛鼻咽拭子和组织病料498份,进行流行病学调查、细... 详细信息

旨在对引起西藏牦牛呼吸道感染的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,明确病原菌的血清型、耐药性和致病性等生物学特性及基因组特征和遗传进化关系。本研究从西藏林芝、拉萨、那曲地区采集牦牛鼻咽拭子和组织病料498份,进行流行病学调查、细菌学分离纯化、生化试验、PCR鉴定、K-B药敏试验、动物致病性试验和分离株全基因组测序,并通过Mauve软件和MEGA 7软件进行基因共线性和系统进化分析。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定,发现在西藏林芝、拉萨、那曲地区巴氏杆菌阳性率为2.61%,且从病死牦牛肺组织中分离出B型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm XZ01”株;药敏试验发现Pm XZ01株对头孢菌素类、喹诺酮类、羧苄西林、丁胺卡那、复方新诺明和氯霉素类抗生素敏感;动物试验发现感染Pm XZ01株的家兔(1.2×10^(8) CFU·mL^(-1))和小鼠(1×10^(7) CFU·mL^(-1))死亡率高达100%,说明在该浓度下Pm XZ01株具有较强的致病性和致死性。全基因组测序获得Pm XZ01株全基因组大小为2331787 bp,GC含量为40.47%,重复序列总长度为3266 bp;含有121个非编码RNA基因,包括59个tRNA基因,19个rRNA基因,43个ncRNA基因;2个假基因,5个基因岛,3个前噬菌体,68个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现101个毒力因子相关基因及663个表型突变基因等;共线性分析发现Pm XZ01株与猪源HB03株(CP003328.1)、HN07株(CP007040.1)和禽源P1702株(CP097616.1)共线性最好,而与牦牛源Tibet-Pm1株(CP072655.1)共线性较差;系统进化树分析发现Pm XZ01株与中国广东牛源GDZQ201401株(KP083466.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了西藏牦牛巴氏杆菌病的流行病学调查,以及牦牛源B性多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、生物学特性和全基因组测序分析,为探索西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌病的流行规律和致病机制以及防控提供了参考。

关键词：牦牛 B型多杀性巴氏杆菌分离鉴定药物敏感性致病性基因组

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基于文献计量学的金莲花研究现状及热点分析

药物评价研究 2024年第4期47卷 862-872页

作者：高婧陈海红王志轩刘杰承德市食品药品检验检测中心河北承德067000 甘肃农垦药物碱厂有限公司甘肃兰州730300

目的总结近20年的金莲花Trollius chinensis Bunge研究现状及热点,分析其研究热点与未来趋势。方法分别检索2003年1月1日—2023年12月1日中国学术期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wanfang Data)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、中国... 详细信息

目的总结近20年的金莲花Trollius chinensis Bunge研究现状及热点,分析其研究热点与未来趋势。方法分别检索2003年1月1日—2023年12月1日中国学术期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wanfang Data)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、Embase、PubMed以及Web of Science(WOS)7个学术平台收录的学术期刊检索金莲花相关文献,用Endnote X8进行数据整合、去重,用VOS viewer 1.6.18软件进行文献计量和可视化分析。结果金莲花近20年来中英文文献发表量均呈波动上升趋势,总体数量方面中文文献远高于英文文献;关键词聚类分析显示主要研究内容以活性成分与药理作用为主,其次是质量评价与制剂临床应用。结论金莲花研究内容在分子层面的作用机制和药动学方面较少,具有完善与深入挖掘的必要性。

关键词：金莲花短瓣金莲花文献计量学活性成分药理作用质量评价

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六味地黄丸定量分析方法和评价体系的建立

中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 177-184页

作者：陈荣钟水生王亚琼张超陈卫苏州市药品检验检测研究中心江苏苏州215104

目的:建立六味地黄丸14种成分含量测定方法,并应用评分体系对各厂家样品进行评价。方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-QqQ-MS/MS)对市售12个厂家、4种剂型共109批六味地黄丸样品中尿囊素、没食子酸、地黄苷D、獐牙菜... 详细信息

目的:建立六味地黄丸14种成分含量测定方法,并应用评分体系对各厂家样品进行评价。方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-QqQ-MS/MS)对市售12个厂家、4种剂型共109批六味地黄丸样品中尿囊素、没食子酸、地黄苷D、獐牙菜苷、芍药苷等14种成分进行定量分析;同时,参照2020年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)中六味地黄丸含量检测项下方法对莫诺苷、马钱苷、丹皮酚进行定量,根据不同剂型和厂家进行含量分布考察。将各成分(除5-羟甲基糠醛)按含量排名、药味归属及药味的君臣佐使进行赋值,对各厂家样品进行综合评价。结果:建立的六味地黄丸14种成分含量测定方法,各成分在其质量浓度范围内线性关系良好,专属性、重复性、耐用性、准确度良好。评价结果显示,大蜜丸厂家山西B厂和广东E厂基本全部批次为优等,大蜜丸广西D厂、水蜜丸云南I厂、小蜜丸湖南J厂、水丸吉林K厂几乎全部低于70分。大蜜丸B厂和E厂整体质量较好,前者体现在归属熟地黄、泽泻、酒萸肉、茯苓的成分含量较高,后者则在泽泻和熟地黄归属成分上占优。湖南J厂、广西D厂归属熟地黄和泽泻的成分评分较低,提示厂家应重视这2味药材投料的品质,云南I厂归属熟地黄、牡丹皮的有效成分含量低,投料的牡丹皮同时还存在硫熏情况。结论:建立的六味地黄丸定量分析方法和评价体系能直观、系统地区分厂家样品优劣,提示厂家对于现行版《中国药典》中未进行含量监控的药味特别是熟地黄、泽泻,应引起重视,同时需关注投料牡丹皮的硫熏问题。

关键词：六味地黄丸液相色谱-质谱法特征成分熟地黄酒萸肉中药炮制评价体系

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生鲜乳样品及环境中微生物多样性研究

中国乳品工业 2024年第10期52卷 43-46+63页

作者：霍路曼张晓利陈彦丽孙悦川周建颖李春芳董李学唐山市食品药品综合检验检测中心唐山市动物疫病预防控制中心唐山市农业科学研究院

文章研究了生鲜乳样品及奶牛场环境中微生物群落结构及多样性。试验分别采集正常牛乳、乳房炎牛乳、集乳杯、榨乳间平台表面、牛乳房周围、卧床表面及粪污7种样本，采用16S扩增子测序技术对各样本的微生物群落结构及多样性进行分析。结... 详细信息

文章研究了生鲜乳样品及奶牛场环境中微生物群落结构及多样性。试验分别采集正常牛乳、乳房炎牛乳、集乳杯、榨乳间平台表面、牛乳房周围、卧床表面及粪污7种样本，采用16S扩增子测序技术对各样本的微生物群落结构及多样性进行分析。结果表明，7组样本共获得1 420 536条有效序列，产生28 607条ASVs。乳房炎牛乳、奶厅转盘表面及奶牛乳头采样点Chao1指数、Shannon指数显著高于其他样本（P<0.05），卧床和正常牛乳Simpson指数显著低于其他样本（P<0.05）；粪便、集乳杯与转盘表面样本中细菌的优势菌门是厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门，原料乳样本的优势菌门是变形菌门，且也有大量的厚壁菌门，表明牛体及不同环境取样点微生物群落多样性存在统计学差异。环境样本的共同优势菌属是肉杆菌属、UCG-005，牛乳优势菌属为罗尔斯通菌属、假单胞菌属，各采样点微生物群落结构存在一定差异，且菌群结构与丰度明显不同。

关键词： 16S扩增子测序生鲜乳环境微生物多样性

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十溴二苯乙烷对小鼠肝脏和肾脏的毒性研究

动物医学进展 2024年第11期45卷 45-51页

作者：姜玟冀禹彤齐凯歌周淑馨李振民何家康韦英益胡庭俊王蕾于美玲广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 南宁市食品药品检验所广西南宁530007

为探讨作为传统溴系阻燃剂十溴二苯醚(BDE-209)替代品的新型阻燃剂十溴二苯乙烷(DBDPE)暴露对小鼠肝肾功能的影响,将60只雄性小鼠随机分为5组,每天分别给予低、中、高剂量(5、50、500 mg/kg体重)的DBDPE,对照组给予相同体积的玉米油,联... 详细信息

为探讨作为传统溴系阻燃剂十溴二苯醚(BDE-209)替代品的新型阻燃剂十溴二苯乙烷(DBDPE)暴露对小鼠肝肾功能的影响,将60只雄性小鼠随机分为5组,每天分别给予低、中、高剂量(5、50、500 mg/kg体重)的DBDPE,对照组给予相同体积的玉米油,联合染毒组每天给予50 mg/kg体重的DBDPE和BDE-209,每天灌胃1次,连续暴露60 d。试验期间观察小鼠的一般体征,测量小鼠体质量,末次染毒后测定小鼠血清生化指标、肝脏和肾脏系数,通过苏木素-伊红(HE)、油红O和刚果红染色观察小鼠肝脏和肾脏组织病理学变化。结果显示,与对照组相比,染毒组小鼠临床体征未见异常,体质量无显著变化;高剂量组小鼠肝脏系数显著升高(P<0.05),中剂量组小鼠肾脏系数极显著降低(P<0.01)。高剂量组小鼠血清中尿素(UA)含量极显著升高(P<0.01),中剂量组小鼠血清中白蛋白(ALB)含量和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著升高(P<0.01),甘油三酯(TG)含量降低(P<0.05)。组织病理学结果可见,各攻毒组小鼠肝脏细胞均发生不同程度的脂肪变性和坏死,高剂量组小鼠肾脏间质有大量淀粉样物质沉着。结果表明,每天500 mg/kg体重DBDPE暴露导致小鼠肝肾组织结构改变,诱导小鼠肝肾组织细胞代谢紊乱和功能障碍,对肝肾具有毒性效应。

关键词：十溴二苯乙烷毒性肝肾功能小鼠

酸处理·酶制剂对杏鲍菇菌渣还原糖和纤维素降解的影响

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安徽农业科学 2024年第8期52卷 86-91页

作者：王岩于洪敏李娟刘艳江国托大连三仪动物药品有限公司辽宁大连116036

为探究酸处理(酸浓度、时间、温度)、酶制剂(纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶)对杏鲍菇菌渣的影响,以河北采集的杏鲍菇菌渣为原料,以总还原糖含量为研究指标,通过主成分分析方法研究影响杏鲍菇菌渣酸处理的因素;以中性洗涤纤维减少量... 详细信息

为探究酸处理(酸浓度、时间、温度)、酶制剂(纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶)对杏鲍菇菌渣的影响,以河北采集的杏鲍菇菌渣为原料,以总还原糖含量为研究指标,通过主成分分析方法研究影响杏鲍菇菌渣酸处理的因素;以中性洗涤纤维减少量和酸性洗涤纤维减少量为响应值,开展正交试验,分析酶制剂对其的影响。结果表明:40℃条件下,2%和3%酸浓度处理随时间的延长会降解总还原糖;60℃条件下,酸浓度的增加可以减缓总还原糖的降解;80℃条件下,1%和2%酸浓度处理可以促进多糖的降解,提高总还原糖含量。根据主成分分析结果可知,温度与总还原糖含量呈正相关,是影响杏鲍菇菌渣多糖降解的最主要因素。正交试验结果表明,木聚糖酶添加量和纤维素酶添加量是影响中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维降解的最主要因素,最优酶解配方为纤维素酶85 U/mL、木聚糖酶220 U/mL、葡聚糖酶40 U/mL,说明菌渣经酸、酶处理后可作为反刍饲料。

关键词：杏鲍菇菌渣酸处理酶制剂还原糖纤维素

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基于网络药理学和主成分分析的痢泻灵片质量标志物研究

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中国医院药学杂志 2024年第15期44卷 1771-1777页

作者：张茜茜于密密曾亚力吴伟虞心逸李雪梅曹春然北京市药品检验研究院/国家药品监督管理局创新药物安全研究与评价重点实验室北京102206 北京市药品检验研究院/国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室北京102206 北京市药品检验研究院/中药成分分析与生物评价北京市重点实验室北京102206

目的:预测评价痢泻灵片的质量标志物。方法:采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术,对痢泻灵片化学成分进行鉴定。通过SwissADME平台对化学成分进行ADME预测,结合化合物药理作用、对照品的可集性以及成分可测性综合分析得到先导成分;采用PharmMap... 详细信息

目的:预测评价痢泻灵片的质量标志物。方法:采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术,对痢泻灵片化学成分进行鉴定。通过SwissADME平台对化学成分进行ADME预测,结合化合物药理作用、对照品的可集性以及成分可测性综合分析得到先导成分;采用PharmMapper数据库预测先导成分作用靶点;利用GeneCards、OMIM、CTD和DisGenet数据库获取疾病靶点;构建韦恩图获取交集靶点作为痢泻灵片治疗的潜在作用靶点;利用Metascape平台将潜在作用靶点导入进行富集分析,得到痢泻灵片干预疾病的潜在作用通路;采用Cytoscape构建“成分-靶点-通路”网络图,判断核心靶点及主要活性成分。通过主成分分析对活性成分组合物和痢泻灵片的等效性在正常动物中进行评价。结果:网络药理学预测得出痢泻灵片的10个活性成分,包括穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、儿茶素、绿原酸、氧化槐果碱、氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱、槐定碱和没食子酸。主成分分析结果显示活性成分组合物与痢泻灵片对正常动物具有相似的代谢调控作用。结论:通过网络药理学和主成分分析预测评价痢泻灵片的质量标志物,由10个活性成分组成的组合物在一定程度上与原制剂具有等效性。

关键词：痢泻灵片质量标志物网络药理学主成分分析

表达PEDV S蛋白重组PRV的构建与生物学特性评价

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 657-663页

作者：侯晓璇穆永王同燕颜世君王孟月谭菲菲田克恭河南农业大学动物医学学院河南郑州450046 国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000

将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中,构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段AS-K-B。利用Red同源重组技术将线... 详细信息

将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中,构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段AS-K-B。利用Red同源重组技术将线性同源重组片段电转化至含有pPRVBac-GFPTK-gE-gI-11k-28k-的感受态中获得重组pPRVBac-S,最后拯救获得重组病毒rPRV-S。PCR及IFA鉴定结果显示,S胞外区基因成功转录且表达,生物学特性评价结果表明重组病毒能够稳定遗传,为研制猪流行性腹泻病毒活载体疫苗提供了思路。

关键词： PEDV S蛋白 Red同源重组重组PRV