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日本血吸虫精氨酸酶新基因的鉴定及作为疫苗的保护性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第2期24卷 86-91页

作者：李孜余新炳吴忠道胡旭初广州医学院病原生物学教研室广州510182 中山大学基础医学院病原生物学教研室广州510180

目的识别和鉴定日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因,并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。方法通过巢式PCR,从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端,并用生物信息学进行鉴定;将ARG的完整编码序列(CDS)克隆到pE... 详细信息

目的识别和鉴定日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因,并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。方法通过巢式PCR,从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端,并用生物信息学进行鉴定;将ARG的完整编码序列(CDS)克隆到pET30a(+)载体,表达并纯化表达产物后,以鸟氨酸-茚三酮法鉴定酶活性;用蛋白质印迹法(Westernblotting)比较重组ARG蛋白与Sj天然ARG蛋白的免疫学特性,间接免疫荧光法对ARG在Sj成虫中的分布进行组织定位;用纯化重组ARG蛋白免疫小鼠(PBS和SjGST作对照),Sj尾蚴攻击感染后,检测SjARG作为疫苗的免疫保护力。结果扩增并鉴定SjARG基因的完整CDS长为1095bp;重组SjARG具有酶活性,并具有与Sj天然ARG蛋白相同的免疫学特性;ARG定位于Sj成虫的肠壁和生殖器官。重组SjARG蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为55.8%和48.8%。SjGST蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为28.6%和6.89%。结论获取并鉴定了SjARG新基因;SjARG比SjGST具有更高的疫苗保护性。

关键词：日本血吸虫精氨酸酶生物学活性疫苗

鼠伤寒沙门菌中甲基化修饰调控PhoP活性的机制研究

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第8期39卷 827-833页

作者：李建辉苏杨姚玉峰倪进婧上海交通大学基础医学院病原生物学教研室

目的·探究鼠伤寒沙门菌转录调控因子PhoP的甲基化修饰与其活性的相关性,筛选PhoP的甲基转移酶。方法·Westernblotting检测不同培养条件下鼠伤寒沙门菌中PhoP的甲基化水平变化。通过生物信息学预测候选的甲基转移酶,体内过表达预测的... 详细信息

目的·探究鼠伤寒沙门菌转录调控因子PhoP的甲基化修饰与其活性的相关性,筛选PhoP的甲基转移酶。方法·Westernblotting检测不同培养条件下鼠伤寒沙门菌中PhoP的甲基化水平变化。通过生物信息学预测候选的甲基转移酶,体内过表达预测的甲基转移酶后检测phoP及其下游基因的转录水平变化,找到可能的PhoP甲基转移酶,并体外验证该甲基转移酶能否甲基化PhoP。使用real-time PCR检测高浓度Mg^2+、弱酸性等培养条件下,phoP与其甲基转移酶在转录水平的相对表达变化。结果·随着培养基中Mg^2+浓度升高,PhoP甲基化水平上升;而经过弱酸刺激后,PhoP甲基化水平下降。生物信息学预测并筛选到9个甲基转移酶,其中体内过表达STM14_0023后,phoP及其下游基因的转录水平下降且PhoP蛋白水平也下降,但敲除STM14_0023对上述分子的表达无影响。体外甲基化酶促反应显示STM14_0023能够甲基化PhoP,体内过表达STM14_0023后也可提高PhoP的甲基化水平,且在抑制phoP表达的高浓度Mg2+培养条件下STM14_0023的转录水平升高。结论·STM14_0023是PhoP的甲基转移酶,甲基化修饰抑制PhoP活性。

关键词：鼠伤寒沙门菌 PhoP 甲基化修饰 STM14_0023 毒力

结膜吸吮线虫病原学流行病学及遗传多态性研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第1期31卷 86-93页

作者：张玺姜鹏刘若丹龙绍荣崔晶王中全郑州大学基础医学院病原生物学系郑州450052

目前,有3种吸吮线虫可感染人体导致吸吮线虫病:结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda)、加利福尼亚吸吮线虫(T. californiensis)和大口吸吮线虫(T. gulosa)。结膜吸吮线虫主要分布在欧洲和亚洲地区,加利福尼亚吸吮线虫和大口吸吮线虫主要... 详细信息

目前,有3种吸吮线虫可感染人体导致吸吮线虫病:结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda)、加利福尼亚吸吮线虫(T. californiensis)和大口吸吮线虫(T. gulosa)。结膜吸吮线虫主要分布在欧洲和亚洲地区,加利福尼亚吸吮线虫和大口吸吮线虫主要分布在北美地区。结膜吸吮线虫病主要流行于经济卫生条件较差的地区且当地有大量的家养或野生动物感染,虫种鉴定主要依赖口及生殖器官的特征,果蝇为其传播媒介,在亚洲是冈田绕眼果蝇(Phortica okadai),在欧洲传播媒介则为变色伏绕眼果蝇(P. variegate)。我国是世界上结膜吸吮线虫病例数最多的国家,其他亚洲国家如韩国、日本等也有大量病例报道;欧洲地区病例较少,但在多数国家感染该虫的野生及家养动物较普遍。基于cox1基因,在全球范围内共鉴定出21个单倍型,其中单倍型1(Haplotype1)仅在欧洲不同地区不同宿主之间循环,其他20个单倍型分布于东亚国家(中、韩、日),又以我国的结膜吸吮线虫遗传多态性水平最高。遗传差异性分析表明,亚洲结膜吸吮线虫类群与欧洲类群存在长期地理隔离,且这两个类群在更新世中期已经开始分化。

关键词：结膜吸吮线虫吸允线虫病吸允属病原学流行病学遗传多态性

2005年吉林省野型麻疹病毒的基因特征分析

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中华预防医学杂志 2006年第5期40卷 348-350页

作者：边疆李凡易世红吉林大学基础医学院病原生物学教研室长春130021

目的了解吉林省麻疹病毒流行株的基因型别,探讨控制麻疹发生的措施。方法在2005年1—12月采集吉林省麻疹暴发和散发病人的咽喉拭子和尿液标本共72份,用 CDW_(150)细胞分离到麻疹病毒9株。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从麻疹病毒中扩... 详细信息

目的了解吉林省麻疹病毒流行株的基因型别,探讨控制麻疹发生的措施。方法在2005年1—12月采集吉林省麻疹暴发和散发病人的咽喉拭子和尿液标本共72份,用 CDW_(150)细胞分离到麻疹病毒9株。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从麻疹病毒中扩增出核蛋白(N)基因羧基端450个核苷酸片段,进行核苷酸序列分析和基因分型。结果 9株麻疹病毒均属 H_1基因型,其中H1a7株,H1b2株,H1a 和 H1b 在450个核苷酸片段中的差异为2.0%～3.5%。结论 H_1基因型是吉林省麻疹病毒的优势流行株,是导致2005年吉林省麻疹局部暴发和散发的主要病原体。

关键词：麻疹病毒基因,结构,病毒基因,报告

砂生槐生物碱抗小鼠细粒棘球蚴作用的初步观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第6期23卷 471-472页

作者：包根书史大中马兴铭兰州大学基础医学院病原生物学教研室兰州730000

砂生槐（Sophora moorcroftiana）又名两藏狼牙刺、刺柴，豆科槐属。多年生矮灌木，是西藏高原特有植物，具有极强的抗旱、抗风沙等牛态适应性和防风同沙、保持水土功能。藏医药记载：砂生槐多以种子入药，味苦性凉，消炎解毒、催吐，... 详细信息

砂生槐（Sophora moorcroftiana）又名两藏狼牙刺、刺柴，豆科槐属。多年生矮灌木，是西藏高原特有植物，具有极强的抗旱、抗风沙等牛态适应性和防风同沙、保持水土功能。藏医药记载：砂生槐多以种子入药，味苦性凉，消炎解毒、催吐，主治湿热黄疸、痢疾、赤巴病、虫病等。它是一种宝贵的医用植物资源。为充分开发利用中医药资源，本文试用砂生槐种子提取亲脂性生物碱治疗小鼠继发性细粒棘球蚴病，观察其治疗效果。[第一段]

关键词：继发性细粒棘球蚴病砂生槐生物碱小鼠初步植物资源治疗效果中医药资源豆科槐属西藏高原

布鲁氏菌分泌蛋白BspC的生物信息学分析、多克隆抗体制备及互作蛋白筛选

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中国病原生物学杂志 2025年第1期 34-40+45页

作者：印双红刘虹燕邓肖玉杜昌青刘阳李寅翠孙馨王书利张俊波铜仁学院大健康学院湖南医药学院基础医学院铜仁学院农林工程与规划学院铜仁学院贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室商丘师范学院生物与食品学院

目的本研究旨在探究BspC蛋白在布鲁氏菌感染中的作用机理。方法通过在线预测软件分析BspC蛋白的生物学功能，通过化学合成法构建pET-28a-BspC原核融合表达载体并转化大肠埃希菌BL2感受态细胞，经IPTG诱导后大量表达和纯化BspC蛋白。... 详细信息

目的本研究旨在探究BspC蛋白在布鲁氏菌感染中的作用机理。方法通过在线预测软件分析BspC蛋白的生物学功能，通过化学合成法构建pET-28a-BspC原核融合表达载体并转化大肠埃希菌BL2感受态细胞，经IPTG诱导后大量表达和纯化BspC蛋白。利用纯化的蛋白进行动物免疫并收集抗血清，通过ELISA检测抗血清效价。纯化抗体并通过Western blot进行鉴定。构建RAW264.7细胞的cDNA文库和BspC蛋白的诱饵质粒，对诱饵质粒自激活和毒性进行检测，筛选与BspC互作的宿主蛋白，利用回交验证实验对互作蛋白进行验证。结果 BspC蛋白具有信号肽，有6个抗原决定簇，二级结构以α-螺旋为主；成功构建pET-28a-BspC载体，且诱导表达后重组蛋白大小约为16.7 ku; ELISA检测发现兔抗血清效价为1:512 000;Western blot检测结果显示制备的多克隆抗体可以特异性结合体外表达的BspC蛋白；利用NCBI的BLAST对7个阳性克隆测序结果比对分析，获得潜在互作宿主蛋白FDX1、DNAJA1、HSPA5、PTPN2。结论本研究成功制备BspC多克隆抗体和筛选获得BspC蛋白的互作蛋白，为进一步研究BspC蛋白在布鲁氏菌感染过程中的功能和机制奠定基础。

关键词：布鲁氏菌分泌蛋白BspC 生物信息学分析多克隆抗体酵母双杂交互作蛋白

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钩端螺旋体基因组学及蛋白组学研究进展

上海交通大学学报（医学版） 2012年第9期32卷 1135-1140页

作者：郭晓奎秦金红何平朱泳璋上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

钩端螺旋体(简称钩体)可以引起严重的人兽共患病,是威胁人类健康的传染病之一。课题组率先开展了对中国主要致病流行株56601的全基因组测序工作,测序结果显示钩体有两条染色体,共编码4 727个基因,后经重新注释为3 718个基因。基于56601... 详细信息

钩端螺旋体(简称钩体)可以引起严重的人兽共患病,是威胁人类健康的传染病之一。课题组率先开展了对中国主要致病流行株56601的全基因组测序工作,测序结果显示钩体有两条染色体,共编码4 727个基因,后经重新注释为3 718个基因。基于56601株的参考序列,对其减毒株IPAV的测序结果表明,除了有101个基因出现突变之外,IPAV株基因组的大小及基因结构组成与56601株相同。基于基因组序列,课题组设计并合成了钩体的基因组芯片,开展了比较基因组学及转录组学的研究。比较基因组学研究结果显示,钩体的核心基因有2 917个,变异基因有275个,并首次发现钩体基因组中存在2个基因岛。模拟体内外钩体生长的温度条件进行转录组学分析,共发现106个基因差异表达,分属9类不同的功能;对有毒株56601及减毒株IPAV进行转录组学分析,发现了差异上调表达的22 kb的类噬菌体片段。对体外培养的56601株进行蛋白组学分析,鉴定出2 540个蛋白,进一步对这些蛋白进行磷酸化、乙酰化及甲基化的修饰进行分析,发现了32个磷酸化位点、46个乙酰化位点和155个甲基化位点。通过分析发现,钩体蛋白的很多修饰方式类似于真核生物,提示钩体在进化上比较特殊。比较毒力株56601与减毒株IPAV的蛋白组异同,一致表达的蛋白1 627个,差异表达的蛋白402个。基于以上基因组学及蛋白组学研究,课题组进一步开展了对钩体相关功能基因的研究,这些研究均为揭示钩体的致病机制、开发钩体的疫苗及诊断试剂、最终防控钩体病奠定了基础。

关键词：钩端螺旋体基因组蛋白组

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鼠伤寒沙门菌中假定转录调控因子的筛选

上海交通大学学报（医学版） 2018年第10期38卷 1174-1180页

作者：刘舒婷姚玉峰倪进婧上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

目的·基因组信息学分析结合分子生物学实验对鼠伤寒沙门菌中假定转录调控因子进行筛选,以期发现新的转录调控因子和调控机制。方法·通过沙门菌基因组信息分析筛选得到30个假定转录调控因子,利用λ-Red同源重组系统敲除各目的基因。酸... 详细信息

目的·基因组信息学分析结合分子生物学实验对鼠伤寒沙门菌中假定转录调控因子进行筛选,以期发现新的转录调控因子和调控机制。方法·通过沙门菌基因组信息分析筛选得到30个假定转录调控因子,利用λ-Red同源重组系统敲除各目的基因。酸耐受实验检测各敲除株在对数期酸耐受应答中的差异;细胞感染模型检测各敲除株上皮细胞入侵能力和巨噬细胞内复制能力;利用realtimePCR检测突变株中pho P及其下游基因的转录水平。结果·成功构建30个敲除株。ΔSTM14_0739、ΔSTM14_2717和ΔSTM14_1646对数期酸耐受能力较WT增强,ΔSTM14_1878、ΔSTM14_4338和ΔSTM14_1965则较WT减弱。ΔSTM14_0739和ΔSTM14_2717对He La细胞的入侵率降低,ΔSTM14_1878和ΔSTM14_2717在RAW264.7细胞内的24 h复制率提高。Realtime-PCR结果显示STM14_2717敲除并不影响pho P转录。结论·研究发现了新的转录调控因子,为深入研究沙门菌致病机制提供新的方向。

关键词：鼠伤寒沙门菌转录调控因子酸耐受细胞入侵及胞内复制

苦参碱联合阿苯达唑治疗小鼠继发性棘球蚴病效果观察

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中国地方病学杂志 2009年第6期28卷 597-600页

作者：殷祎隆聂蕾傅宣英王琪景涛西北民族大学医学院病原生物学与免疫学教研室兰州730030 甘肃省中医学院病原生物学与免疫学教研室兰州大学基础医学院病原生物学教研室

目的评价中药苦参碱单独及联合阿苯达唑使用治疗小鼠继发性棘球蚴病的效果。方法将感染棘球蚴的昆明小鼠分为4组：苦参碱组、阿苯达唑组、联合用药组、对照组，每组10只。在对小鼠进行药物治疗90d后，检测各组小鼠棘球蚴湿重、抑囊率，... 详细信息

目的评价中药苦参碱单独及联合阿苯达唑使用治疗小鼠继发性棘球蚴病的效果。方法将感染棘球蚴的昆明小鼠分为4组：苦参碱组、阿苯达唑组、联合用药组、对照组，每组10只。在对小鼠进行药物治疗90d后，检测各组小鼠棘球蚴湿重、抑囊率，并利用光镜、电镜对棘球蚴组织进行形态结构和超微结构观察。结果苦参碱组、阿苯达唑组、联合用药组、对照组棘球蚴湿重分别为（0．32±0．12）、（O．31±0．10）、（0．05±0．03）、（1．16±0．43）g，苦参碱组及联合用药组对小鼠棘球蚴的抑囊率分别达到72．4％和95．7％，显示联合用药组明显优于苦参碱组（P〈0．05）。上述4组包囊组织Ⅲ级病理损伤率分别为40．9％（9／22）、43．5％（10／23）、91．3％（21／23）、9．5％（2／21）。与对照组比较，其他3组包囊组织Ⅲ级病理损伤率明显增高（P均〈0．01），且联合用药组最为明显。结论苦参碱对小鼠棘球蚴的增长有明显的抑制作用，尤其联合阿苯达唑使用治疗效果较好，说明两种药物具有协同治疗作用。

关键词：细粒棘球绦虫苦参碱阿苯达唑治疗