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志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak的表达纯化与多克隆抗体的制备及应用

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中国人兽共患病学报 2024年第3期40卷 236-242页

作者：贾雪娇刘梦琦刘洋刘长城李小凤胡屹硕李香雨李润林李永刚赵微锦州医科大学基础医学院病原生物学实验室锦州121001

目的表达轮状病毒感染的乳鼠体内志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak(Hsp70),并制备Dnak多克隆抗体。方法以提取的志贺氏杆菌基因组为模板PCR扩增Dnak片段,与pET-24a(+)和PCDNA3.1分别连接构建原核表达质粒pET24a(+)-Dnak和真核表达质粒PCDNA3.1-Dn... 详细信息

目的表达轮状病毒感染的乳鼠体内志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak(Hsp70),并制备Dnak多克隆抗体。方法以提取的志贺氏杆菌基因组为模板PCR扩增Dnak片段,与pET-24a(+)和PCDNA3.1分别连接构建原核表达质粒pET24a(+)-Dnak和真核表达质粒PCDNA3.1-Dnak;pET24a(+)-Dnak原核表达质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,经镍柱纯化Dnak蛋白。以纯化后的重组蛋白为免疫原免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测效价,Western Blot法检测灵敏度和特异性。利用制备的多克隆抗体在GST Pull-down实验中检测Dnak与轮状病毒非结构蛋白Nsp2的相互作用。真核表达质粒PCDNA3.1-Dnak转染至HEK293T细胞,以制备的DnaK多克隆抗体为一抗,Western blot法检测Dnak在细胞中的表达。利用MEGA11及Genedoc软件分析此志贺氏杆菌与志贺菌属其他细菌Dnak氨基酸序列同源性。结果重组质粒pET24a(+)-Dnak与PCDNA3.1-Dnak经测序比对包含与此志贺氏杆菌(Shigella:PRJNA804371)序列一致的基因,证明质粒构建成功。诱导表达的重组Dnak蛋白主要以可溶性形式存在,相对分子质量约为75 kDa,浓度可达0.62 mg/mL;Dnak鼠多克隆抗体可与重组Dnak蛋白发生特异性反应,效价为1∶32000,至少可以在1∶6000稀释度下检测到Dnak蛋白。GST Pull-down实验可以检测到Dnak与轮状病毒非结构蛋白Nsp2发生相互作用。转染PCDNA3.1-Dnak重组质粒的HEK293T细胞可以表达Dnak蛋白。经MEGA11和Genedoc软件比对PRJNA804371株与宋内志贺菌(Shigella sonnei)、痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)、鲍氏志贺菌(Shigella boydii)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)Dnak氨基酸序列同源性较高。结论成功表达志贺氏杆菌Dnak蛋白,具有良好反应性与免疫原性;制备的鼠多克隆抗体效价及灵敏度较高可满足后续实验需要。

关键词：志贺氏杆菌 Dnak 蛋白表达与纯化多克隆抗体轮状病毒

间充质干细胞来源的外泌体治疗放射性肠炎的疗效与安全性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第4期31卷 359-364页

作者：何晓波虞淦军高晓刚吴艳峰海军军医大学基础医学院免疫学教研室暨免疫与炎症全国重点实验室上海200433 海军军医大学第一附属医院器官移植科上海200433

目的:探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)对人结肠癌CT26细胞体外增殖、迁移的影响及对放射性肠炎(RE)荷瘤小鼠模型的治疗效果及其安全性。方法:利用商品化含MSC-Exo的液体敷料产品(MSC-Exo产品),通过纳米颗粒追踪分析、透射电镜、W... 详细信息

目的:探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)对人结肠癌CT26细胞体外增殖、迁移的影响及对放射性肠炎(RE)荷瘤小鼠模型的治疗效果及其安全性。方法:利用商品化含MSC-Exo的液体敷料产品(MSC-Exo产品),通过纳米颗粒追踪分析、透射电镜、WB法对其中的MSC-Exo进行鉴定。采用CCK-8法和Transwell小室法检测MSC-Exo产品对结肠癌CT26细胞增殖、迁移的影响。构建CT26细胞荷瘤小鼠模型,连续7 d分别给予400μL MSC-Exo产品、MSC培养基或生理盐水灌胃,评估MSC-Exo产品在体内对肿瘤生长和小鼠生存的影响。构建RE荷瘤小鼠模型,连续7 d分别给予400μL MSC-Exo产品、MSC培养基、生理盐水灌胃治疗,通过小肠组织H-E染色法评估MSC-Exo产品治疗RE的有效性与安全性。结果:纳米颗粒追踪分析、透射电镜、WB法的鉴定结果确证了商品化的液体敷料中含有MSC-Exo有效成分。体外研究表明,MSC-Exo产品成分不会促进结肠癌CT26细胞的增殖和迁移,具有安全性。体内研究结果发现,MSC-Exo产品的灌胃给药并不影响荷瘤小鼠的肿瘤生长和生存期,但RE荷瘤小鼠模型接受MSC-Exo产品灌胃治疗后,荷瘤小鼠血便、黏液便症状得到缓解,H-E染色结果显示小鼠肠壁组织的组织形态完整性相较于对照组有所改善,提示MSC-Exo产品对荷瘤小鼠的RE具有疗效,并且在致瘤性及肿瘤转移方面具有安全性。结论:商品化含MSC-Exo的液体敷料并不促进体外结肠癌细胞的增殖、迁移,对CT26细胞荷瘤小鼠肿瘤生长和生存期无明显影响,但对荷瘤小鼠模型的RE具有治疗作用,改善了肠道组织的损伤。

关键词：间充质干细胞外泌体肿瘤放射性肠炎

β-羟基丁酸改善β淀粉样蛋白1-42诱导小鼠海马神经元HT22细胞的能量障碍

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中国组织工程研究 2025年第13期 2713-2719页

作者：叶育采付朝晶李燕李欣儒柴世凡蔡红艳王昭君山西医科大学基础医学院生理学系细胞生理学教育部重点实验室山西医科大学医学科学院山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室

背景：阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍，近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的：探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)诱导的小鼠海马神经元HT2... 详细信息

背景：阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍，近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的：探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞能量障碍。方法：将HT22细胞分为4组，分别为对照组、β-羟基丁酸组、Aβ1-42组、Aβ1-42+β-羟基丁酸组。使用相应试剂盒检测HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na+K+-ATP酶活性、线粒体膜电位及活性氧水平。结果与结论：与对照组相比，Aβ1-42组HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na+K+-ATP酶活性、线粒体膜电位均显著降低（P生物能量功能和细胞存活率，最终改善了Aβ1-42诱导的HT22细胞能量障碍。

关键词：阿尔茨海默病 HT22细胞 β-羟基丁酸线粒体生物能量功能能量障碍三磷酸腺苷

小鼠流行性乙型脑炎疾病进展中反应性星形胶质细胞活化模式的变化及干预

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 303-310页

作者：周子清李婧王小可思越朱旭东雷迎峰马宏炜张芳琳空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学第一附属医院麻醉与围术期医学科/重症医学科陕西西安710032

目的明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技... 详细信息

目的明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技术(RNA-seq)、实时定量PCR明确流行性乙型脑炎发病不同阶段星形胶质细胞活化模式的变化;最后,通过侧脑室注射鸢尾素(irisin)调控补体C3阳性A1型星形胶质细胞、 S100钙结合蛋白A10(S100A10)阳性的A2型星形胶质细胞活化比例,探索其是否可改善乙型脑炎模型小鼠的体质量、行为学评分及脑组织损伤情况。结果流行性乙型脑炎模型组小鼠的M1、 M2等运动皮层脑区和海马组织中NS3蛋白显著增加。上述区域胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞的数目和体积较对照组也显著增加,其中JEV感染后与A1/A2型星形胶质细胞活化相关的基因均显著升高。侧脑室或者腹腔注射irisin虽不能改善流行性乙型脑炎预后,但可在一定程度上抑制A1型星形胶质细胞活化,减轻神经炎症。结论 JEV主要感染小鼠的运动皮质和海马神经元,且星形胶质细胞异常激活导致神经炎症损伤。Irisin可能抑制A1型星形胶质细胞激活,减轻JEV感染后的神经炎症。

关键词：乙型脑炎病毒星形胶质细胞 A1型星形胶质细胞 A2型星形胶质细胞 C3 S100A10

基于微信公众平台开展医学微生物学课程思政与健康融合教育的实践意义

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黑龙江医学 2024年第11期48卷 1356-1358页

作者：龚光明秦洁轩小燕潘卫东郑怀信王鹏刘萍萍郑州大学基础医学院微生物学与免疫学系河南郑州450000 郑州大学第一附属医院神经内三科河南郑州450052

研究表明微信公众平台能显著提高大学生健康教育和课程思政教育的效果。通过医学微生物学课程思政与健康融合教育微信公众平台,将课程思政与校园健康教育有机统一起来,以提高医学生的健康、人文素养和医学微生物学课程的学习效果。微信... 详细信息

研究表明微信公众平台能显著提高大学生健康教育和课程思政教育的效果。通过医学微生物学课程思政与健康融合教育微信公众平台,将课程思政与校园健康教育有机统一起来,以提高医学生的健康、人文素养和医学微生物学课程的学习效果。微信公众平台作为校园思政、健康与课程融合教育创新模式,对完善课程思政与健康的融合、协同式教育的长效机制,形成人人都积极参与建设“健康中国”的校园和社会合力,共同促进新时代医学教育事业的改革与创新,建设中国特色社会主义和实现中华民族伟大复兴的目标等都具有重要实践意义。

关键词：医学微生物学课程思政健康教育融合教育微信公众平台传染病

β-羟基丁酸改善β淀粉样蛋白1-42诱导小鼠海马神经元HT22细胞的能量障碍

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中国组织工程研究 2024年

背景：阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍，近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的：探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞能量障碍。方法：将HT22细胞分为4组，分别为对照组、β-羟基丁酸组、Aβ1-42组、Aβ1-42+β-羟基丁酸组。使用相应试剂盒检测HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na+K+-ATP酶活性、线粒体膜电位及活性氧水平。结果与结论：与对照组相比，Aβ1-42组HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na+K+-ATP酶活性、线粒体膜电位均显著降低(P 生物能量功能和细胞存活率，最终改善了Aβ1-42诱导的HT22细胞能量障碍。

关键词：阿尔茨海默病 HT22细胞 β-羟基丁酸线粒体生物能量功能能量障碍三磷酸腺苷

3xTg-AD转基因小鼠抑郁模型的建立及认知相关病理改变与比较

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神经解剖学杂志 2024年第2期40卷 162-170页

作者：唐静荣余小雨郭权宪魏亚诺田家欣武胜昔项捷空军军医大学基础医学院神经生物学教研室西安710032 空军军医大学基础医学院学员四大队西安710032 空军军医大学基础医学院学员五大队西安710032

目的:为分析抑郁状态对阿尔茨海默病(AD)小鼠病理变化的影响,对3xTg-AD小鼠进行慢性社交挫败应激(CSDS)与慢性温和不可预知性应激(CUMS)刺激,建立早期AD诱发抑郁小鼠模型,并检测小鼠认知行为改变、海马区小胶质细胞的活化及神经元的丢... 详细信息

目的:为分析抑郁状态对阿尔茨海默病(AD)小鼠病理变化的影响,对3xTg-AD小鼠进行慢性社交挫败应激(CSDS)与慢性温和不可预知性应激(CUMS)刺激,建立早期AD诱发抑郁小鼠模型,并检测小鼠认知行为改变、海马区小胶质细胞的活化及神经元的丢失情况。方法:3xTg-AD小鼠3月龄时交替进行为期8 d的应激刺激,通过行为学评估小鼠抑郁状态并制订评价标准,进行认知行为的检测及分析,取海马部位脑组织切片进行免疫荧光染色,观察β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积和微管相关蛋白(tau)的聚集情况、小胶质细胞活化及神经元的丢失情况。结果:抑郁相关行为学结果提示CSDS+CUMS组小鼠出现抑郁相关表型。认知行为检测发现CSDS+CUMS组小鼠的新物体识别指数明显降低(P免疫荧光染色结果显示CSDS+CUMS组小鼠海马区4月龄出现Aβ沉积,小胶质细胞的活化增加(P学习记忆能力下降,海马区神经元AD相关病理沉积增多,并伴随小胶质细胞活化及神经元丢失。

关键词：阿尔茨海默病慢性社交挫败应激慢性不可预知温和刺激 β-淀粉样蛋白 tau蛋白海马区小鼠

类泛素化激活酶抑制剂PEV通过细胞衰老提高结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

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中国细胞生物学学报 2024年第6期46卷 1100-1111页

作者：花雨昕倪梦珍孙晴晴翟潇晴潘巍巍浙江中医药大学基础医学院杭州310000 嘉兴大学医学院细胞生物学教研室嘉兴314001

细胞衰老与肿瘤细胞增殖减缓密切相关,细胞衰老抑制了许多癌基因的激活,因此诱导细胞衰老是现阶段一种干扰肿瘤细胞增殖过程的潜在策略,或许可以成为治疗肿瘤的有效途径。PEV(Pevonedistat)又称MLN4924,是NEDD8激活酶(NAE)抑制剂,可以... 详细信息

细胞衰老与肿瘤细胞增殖减缓密切相关,细胞衰老抑制了许多癌基因的激活,因此诱导细胞衰老是现阶段一种干扰肿瘤细胞增殖过程的潜在策略,或许可以成为治疗肿瘤的有效途径。PEV(Pevonedistat)又称MLN4924,是NEDD8激活酶(NAE)抑制剂,可以通过阻断Cullin类泛素化使Cullin-RING E3泛素连接酶(CRL)失活。PEV可以抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡、细胞衰老。5-氟尿嘧啶(5-FU)是结肠癌治疗中的一线化疗药物。PEV是否可以通过促进细胞衰老增强化疗药物5-FU的敏感性,提高结肠癌的治疗效果尚未可知。该研究对结肠癌细胞HCT116、HT29分别进行PEV单药处理、5-FU单药处理以及PEV与5-FU联合处理,通过β-半乳糖苷酶染色、Western blot、细胞3天连续计数、CCK-8实验、裸鼠皮下成瘤实验、免疫组化等实验对结肠癌细胞的衰老与增殖情况进行探究。结果提示,与溶媒组相比,PEV处理组与PEV、5-FU联合处理组半乳糖苷酶活性增加,P21、P27、PAI-1、P62等衰老相关蛋白表达水平增加以及细胞核形态标志物LaminB1缺失。同时与PEV单药处理组相比,PEV、5-FU联合处理组细胞衰老程度增加,对细胞增殖的抑制效果更为显著。该研究揭示类泛素化激活酶抑制剂PEV促进细胞衰老提高结肠癌对5-FU的敏感性,从而加剧细胞衰老、抑制细胞增殖。

关键词：类泛素化细胞衰老结肠癌化疗药物敏感性

m^(6)A甲基化修饰在重度抑郁症中的作用

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生理科学进展 2024年第2期55卷 185-190页

作者：曲智段东晓郑州大学基础医学院生理学与神经生物学系郑州450001

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA中常见且可逆的mRNA修饰,属于表观遗传学修饰之一。在甲基转移酶、去甲基化酶及阅读蛋白的调控下,m^(6)A修饰通过介导RNA转录、剪接、翻译等过程来影响相关蛋白质的表达,调... 详细信息

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA中常见且可逆的mRNA修饰,属于表观遗传学修饰之一。在甲基转移酶、去甲基化酶及阅读蛋白的调控下,m^(6)A修饰通过介导RNA转录、剪接、翻译等过程来影响相关蛋白质的表达,调控机体的生理生化过程。重度抑郁症(major depressive disorder,MDD)作为一种发病率高,治愈率低且极易复发的精神类疾病,其致病因素诸多,如遗传因素、环境因素和表观遗传学因素等,但其发病具体机制尚不清楚。近期研究发现m^(6)A修饰与MDD发病之间存在密切关系,并逐渐成为研究MDD发病机制的热点。本文通过对m^(6)A甲基化修饰过程及相关酶类在MDD患者中枢神经系统的表达及作用进行综述,以期为重度抑郁症的研究和治疗提供新的思路及药物靶点。

关键词： N^(6)-甲基腺苷重度抑郁症甲基化 m^(6)A甲基转移酶 m^(6)A去甲基化酶