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脂质体介导哺乳动物细胞转染的改良方法

中国免疫学杂志 2007年第3期23卷 260-262页

作者：尹晓光吴秀丽万敏王艳媚王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫教研室长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室长春130021

目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测... 详细信息

目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测。结果流式细胞术检测显示,通过改良法获得转染pcDNA3-GFP-PSA质粒的B16、RM1和EL4细胞,表达报告蛋白GFP的阳性百分率(26%、24%和40%)高于传统法转染的细胞(16%、16%和18%)。改良法转染的B16、RM1和EL4经过克隆筛选、液氮冻存、水浴复苏和体外连续培养2周后,外源基因报告蛋白GFP表达的阳性百分率分别为77%、69%和83%。在转染流程上,通过改良法获得单克隆转染细胞株的时间明显缩短。结论改良的脂质体转染方法结合细胞克隆技术,能在最短时间内获得高表达外源基因的转染细胞株。

关键词：脂质体改良方法 pcDNA—GFP—PSA 共聚焦显微镜流式细胞术

巴戟天糖链对骨骼肌成肌细胞向心肌样细胞分化的影响

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中国老年学杂志 2014年第23期34卷 6687-6689页

作者：于爽察雪湘吴瑶冯国清郑州大学基础医学院药理学教研室河南郑州450052

目的探讨巴戟天糖链诱导骨骼肌成肌细胞向心肌样细胞分化的作用。方法巴戟天糖链分为大、中、小三个剂量组(500、300和100μg/ml),采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞,观察给药前后成肌细胞对异丙肾上腺素(IP)的正性变时作用;R... 详细信息

目的探讨巴戟天糖链诱导骨骼肌成肌细胞向心肌样细胞分化的作用。方法巴戟天糖链分为大、中、小三个剂量组(500、300和100μg/ml),采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞,观察给药前后成肌细胞对异丙肾上腺素(IP)的正性变时作用;RT-PCR法检测成肌细胞中GATA-4 m RNA的表达。结果巴戟天糖链小剂量组成肌细胞正性变时作用不明显(P>0.05),巴戟天糖链中剂量组和大剂量组成肌细胞正性变时作用显著(P<0.05)。与阳性药5-氮杂胞苷相比,巴戟天糖链诱导后,各剂量组均可显著上调心脏转录因子GATA-4 m RNA的表达(P<0.05)。结论巴戟天糖链具有诱导成肌细胞向心肌样细胞分化的潜在可能,诱导后可出现心脏转录因子GATA-4基因的表达。

关键词：巴戟天糖链成肌细胞心脏转录因子GATA-4

基于网络药理学和体外研究探讨木犀草素抑制食管鳞状细胞癌的分子机制

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中国药物警戒 2023年第9期20卷 992-1001页

作者：杨珍珍常成高娜张晓林宋银森刘颖范天黎河南中医药大学第五临床医学院郑州人民医院河南郑州450003 郑州城建职业学院河南郑州451200 郑州大学基础医学院河南郑州450001

目的采用网络药理学和体外研究探讨木犀草素(luteolin)抑制食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)的分子机制。方法通过构建活性成分和疾病维恩图(Venn图)确定木犀草素和ESCC共同靶点,String数据库将共同靶点进... 详细信息

目的采用网络药理学和体外研究探讨木犀草素(luteolin)抑制食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)的分子机制。方法通过构建活性成分和疾病维恩图(Venn图)确定木犀草素和ESCC共同靶点,String数据库将共同靶点进行可视化,建立蛋白互作网络(PPI)。使用Cytoscape 3.9.1内置插件对Hub基因筛选,并运用R语言进行基因本体(GO)生物过程富集分析及KEGG通路分析。体外试验观察木犀草素对ESCC细胞系(TE-13和KYSE-510)的抑制作用,采用分子对接验证木犀草素和部分Hub基因的结合活性。结果共收集到木犀草素与ESCC共同靶点69个,并筛选出以AKT1、ESR1和SRC为代表的Hub靶基因。靶点主要涉及细胞氧化应激、蛋白质修饰等生物学功能和活性氧、炎症、细胞外基质等信号通路。其中选择PI3K-Akt信号通路验证网络药理分析结果的合理性。体外研究表明,木犀草素可阻止TE-13和KYSE-510细胞增殖、迁移和侵袭的能力,并抑制了FAKSRC-PI3K-Akt通路中磷酸化蛋白的表达。此外,分子对接结果表明,木犀草素对FAK、SRC、Akt蛋白表现出良好的亲和力。结论木犀草素对ESCC的抑制性表现出多靶点多通路的特征,其阻碍了ESCC细胞增殖、迁移和侵袭,这可能与抑制FAK-SRC-PI3K-Akt通路有关。

关键词：木犀草素食管鳞状细胞癌网络药理学分子对接信号通路作用机制

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CD59-CD2对T细胞信号转导的作用

免疫学杂志 2011年第9期27卷 773-776,780页

作者：高美华钟丹丹张蓓青岛大学医学院免疫学教研室 266071

目的将构建的CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体在Jurkat细胞中稳定表达,研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用,探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体,脂质... 详细信息

目的将构建的CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体在Jurkat细胞中稳定表达,研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用,探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体,脂质体法转染Jurkat细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,免疫酶法检测转染细胞表面CD59的表达,Western blot检测转染细胞中CD59蛋白的表达;用CD59单克隆抗体作用于各组Jurkat细胞,使用激光共聚焦显微镜检测细胞浆内的Ca2+,ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化,比较各组差异。结果经酶切鉴定证实携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒扩增成功;免疫酶法和Western blot证实CD59在转染细胞中稳定表达,且转染组L-Jurkat细胞比正常组Ju-rkat细胞CD59表达量增加,二者比较其差别有统计学意义(P学意义(P基础。

关键词： CD59基因 CD2基因融合基因 Jurkat细胞细胞信号转导

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大鼠眼组织中水通道蛋白-4的表达

郑州大学学报(医学版) 2009年第2期44卷 304-306页

作者：董敬民张金嵩胡军韩志强郑州大学第一附属医院眼科郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州大学第一附属医院内科学教研室

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠眼虹膜睫状体及视网膜组织中的分布。方法:取6只正常Wist-ar大鼠眼组织切片,行免疫组织化学染色,光镜下观察AQP4的分布。结果:睫状体上皮细胞AQP4呈阳性表达,睫状体及虹膜内血管内皮细胞均有AQP4阳性... 详细信息

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠眼虹膜睫状体及视网膜组织中的分布。方法:取6只正常Wist-ar大鼠眼组织切片,行免疫组织化学染色,光镜下观察AQP4的分布。结果:睫状体上皮细胞AQP4呈阳性表达,睫状体及虹膜内血管内皮细胞均有AQP4阳性表达,视网膜内核层及神经节细胞层也可见AQP4阳性表达。结论:AQP4在大鼠睫状体上皮细胞及视网膜内核层、神经节细胞层分布,可能参与房水调节及神经节水代谢功能调节。

关键词：大鼠水通道蛋白-4 虹膜睫状体视网膜

宿主蛋白RPSA在非洲猪瘟病毒复制过程中的作用研究

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中国兽医科学 2024年

作者：邵程祥张忠辉孙华林赵亚茹杨吉飞关贵全殷宏武军元牛庆丽塔里木大学动物科学与技术学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家非洲猪瘟区域实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)复制的影响，以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒PcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞，通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位... 详细信息

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)复制的影响，以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒PcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞，通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位，通过免疫共沉淀(Co-IP)验证它们之间的相互关系。通过荧光定量PCR和Western blot分析ASFV感染IPAM细胞在不同时间点RPSA的表达差异。此外，通过在IPAM细胞中过表达或干扰RPSA的表达，分析RPSA对ASFV复制的影响。研究结果表明，ASFV感染IPAM细胞后，RPSA蛋白的表达随时间延长而逐渐增加，表明RPSA蛋白可能在病毒感染中发挥作用。通过过表达RPSA可抑制病毒复制，而干扰RPSA则导致病毒复制增强，进一步表明RPSA在ASFV复制过程中发挥重要作用。最后，Co-IP和亚细胞定位结果证明病毒蛋白B602L与宿主蛋白RPSA之间存在相互作用。总上所述，本研究揭示了宿主蛋白RPSA在ASFV复制过程中的作用，为进一步研究病毒与宿主之间的相互作用机制奠定了基础，也有助于深入了解ASFV的感染机制为疾病控制提供新的线索。

关键词：非洲猪瘟病毒 B602L RPSA 相互作用

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基于物联网的变电站智能监控系统研究

机械工程与自动化 2024年第4期 185-186页

作者：付川南韩茜茜张新英朱小培郑州经贸学院智慧制造学院河南郑州451191 中原工学院电子信息学院河南郑州451191

针对传统变电站存在的自动化系统结构复杂、自检功能不完善、灵活性差、安全性能不可靠、远程控制能力弱、协调配合能力低、信息处理的速度及准确性差等弊端,在智能变电站的架构设计中,结合先进的物联网技术,在分析与研究物联网技术原... 详细信息

针对传统变电站存在的自动化系统结构复杂、自检功能不完善、灵活性差、安全性能不可靠、远程控制能力弱、协调配合能力低、信息处理的速度及准确性差等弊端,在智能变电站的架构设计中,结合先进的物联网技术,在分析与研究物联网技术原理的基础上,提出基于物联网技术的变电站设备跟踪架构。系统以数据服务为中心、IEC61850为标准,建立了一个能够满足智能变电站设备跟踪发展需要的通用性强、兼容性高的体系,用于提高变电站日常运维与管理的智能化水平。

关键词：物联网变电站智能监控系统设备跟踪

绝经后女性和成年男性缺铁性贫血患者胃肠癌患病率

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中国老年学杂志 2022年第16期42卷 3975-3977页

作者： Dilip Dhakal 赵悦荣贾琳琳广州喜鹊医药有限公司广东广州510663 佳木斯大学附属第一医院血液科佳木斯大学基础医学院生理教研室佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室

目的检测绝经后女性和成年男性缺铁性贫血(IDA)患者胃肠癌的患病率。方法收集IDA的住院绝经后女性和成年男性患者100例,提取详细病历、病史、实验室检查(全血细胞计数、血清铁、血清铁蛋白和血清总铁结合力)、胃镜检查、结肠镜检查及活... 详细信息

目的检测绝经后女性和成年男性缺铁性贫血(IDA)患者胃肠癌的患病率。方法收集IDA的住院绝经后女性和成年男性患者100例,提取详细病历、病史、实验室检查(全血细胞计数、血清铁、血清铁蛋白和血清总铁结合力)、胃镜检查、结肠镜检查及活检结果进行统计学分析。结果患者平均年龄为61.8岁,56%为男性,44%为绝经后女性;胃肠道病变(上消化道60%和下消化道27%)患病率为87%,13%没有任何异常表现;最常见的病变是溃疡(24%)、糜烂性胃炎(15%)、胃癌(13%)、结肠癌(9%)和结肠息肉(9%),恶性肿瘤占22%;男性胃肠道病变发生率明显高于绝经后女性(P=0.001);年龄>50岁患者下消化道病变明显高于≤50岁患者(P=0.02);绝经后女性中下胃肠道的病变发生率高于50岁以上男性(P=0.04)。结论绝经后女性和成年男性IDA患者消化道病变是IDA的主要病因,要警惕消化道病变的发生,特别是胃肠道肿瘤。

关键词：缺铁性贫血胃肠癌绝经后女性

医养结合机构老年慢性病人群中医药服务获得感评价研究

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中国卫生事业管理 2024年第3期41卷 355-360页

作者：王剑锋王献竹司建平王先菊河南中医药大学管理学院河南郑州450046 河南中医药大学马克思主义学院

目的:了解医养结合机构老年慢性病人群中医药服务获得感现状及其影响因素,为提升中医药服务获得感提供借鉴和参考。方法:于2023年7月,将HONGYY等编制的《社区老年人中医药服务获得感量表》转化为相应的问卷条目;于2023年8~9月,运用典型... 详细信息

目的:了解医养结合机构老年慢性病人群中医药服务获得感现状及其影响因素,为提升中医药服务获得感提供借鉴和参考。方法:于2023年7月,将HONGYY等编制的《社区老年人中医药服务获得感量表》转化为相应的问卷条目;于2023年8~9月,运用典型抽样法、简单随机抽样法在我国东、中、西部地区三家医养结合机构抽取690名60岁及以上患有慢性病老年人进行问卷调查;于2023年10月,采用统计描述、卡方检验、二元Logistic等统计学方法,对医养结合机构老年慢性病人群中医药服务获得感及影响因素进行分析。结果:共发放调查问卷690份,有效回收637份,有效回收率为92.32%(637/690)。医养结合机构老年慢性人群中医药服务获得感平均得分为3.99±0.58分,其中有效度、满意度和回应度及其8个条目得分均低于4分。获得感主要受户籍、患慢性病数量、接受中医药服务的情况、主要解决的健康问题等因素的影响,P<0.05。结论:医养结合机构老年慢性人群中医药服务获得感总体处于较高水平,今后应进一步加强有效度、满意度、回应度相关内容的工作力度,促进获得感五个维度的均衡发展。

关键词：医养结合机构老年慢性病人群中医药服务获得感评价