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弓形虫ROP16蛋白与NKRF互作对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和周期的影响

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 982-992页

作者：周毓宁赵志军李光琪李佳铭党甜甜林永仙于欣宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学检验学院宁夏银川750004

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP1... 详细信息

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。

关键词：非小细胞肺癌 ROP16蛋白刚地弓形虫 NF-κB通路 NF-κB抑制因子

天津市儿童中人偏肺病毒的流行病学及分子特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 588-595页

作者：李蕊郭丽茹孔梅邹明刘小畅王涛高梦雪李晓燕天津医科大学公共卫生学院天津300070 天津市疾病预防控制中心微生物检验检测所天津市传染病病原微生物重点实验室天津300011 天津大学生命科学学院天津300072

目的分析2020年10月—2021年3月以及2021年10月—2022年3月两个流感流行季天津地区人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)的流行病学特点及全基因组特征,丰富我国hMPV的全基因组数据库。方法收集流感样病例(influenza-like illness,I... 详细信息

目的分析2020年10月—2021年3月以及2021年10月—2022年3月两个流感流行季天津地区人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)的流行病学特点及全基因组特征,丰富我国hMPV的全基因组数据库。方法收集流感样病例(influenza-like illness,ILI)患者的咽拭子样本共1040例,采用微流体芯片荧光定量PCR进行检测,对hMPV阳性样本采用RT-PCR扩增其全基因组,全基因组二代测序技术进行序列测定,使用CLC、DNAStar和MEGA等生物信息学软件进行序列组装,分析其核苷酸与氨基酸同源性并绘制系统发育树。结果1040例咽拭子样本中共检出25例hMPV阳性样本,检出率为2.40%,3~5岁年龄组的检出率最高,为3.71%(16/431)。在流感流行季中,hMPV流行高峰在12月份,其检出率为6.67%(12/180)。测序成功的12株序列中有7株为B2型、4株为A2b型、1株为B1型。其中G基因变异最大,有3株A2b型的G基因中存在111nt-dup的核苷酸重复。结论天津地区流感流行季中,hMPV的流行高峰为12月份,流行株以B2型为主,除G基因变异较大之外,其他基因较为稳定。

关键词：人偏肺病毒流行特征系统发育分析呼吸道感染

乳铁蛋白负向调控TLR2激动剂诱导的人肺上皮细胞细胞因子分泌

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免疫学杂志 2019年第9期35卷 780-784页

作者：曹二龙谭潇刘选梅肖非马婷贺印旎邵阳学院医学检验学院医学检验技术教研室

目的观察乳铁蛋白对Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3CSK4刺激人肺上皮细胞分泌促炎细胞因子的影响,并探索其潜在的机制。方法体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292,采用100ng/ml Pam3CK4联合100、200和400μg/ml乳铁蛋白孵育细胞。ELISA检测乳... 详细信息

目的观察乳铁蛋白对Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3CSK4刺激人肺上皮细胞分泌促炎细胞因子的影响,并探索其潜在的机制。方法体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292,采用100ng/ml Pam3CK4联合100、200和400μg/ml乳铁蛋白孵育细胞。ELISA检测乳铁蛋白处理前后培养上清TNF-α和IL-8分泌的变化;实时定量PCR和ELISA检测短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)蛋白和mRNA表达的影响。提取细胞核蛋白,ELISA测定乳铁蛋白处理前后NF-κB活性的变化,采用Western blot检测IκB的表达;并用siRNA沉默NCI-H292细胞SPLUNC1,观察其对TNF-α和IL-8分泌的影响。结果100、200和400μg/ml乳铁蛋白预处理肺上皮细胞后,可下调Pam3CK4诱导分泌TNF-α和IL-8。实时定量PCR结果显示,100、200和400μg/ml乳铁蛋白处理后,SPLUNC1mRNA水平明显增高,并呈一定的剂量依赖性,ELISA也得到了类似的结果。采用转录和翻译抑制剂放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理,可显著降低乳铁蛋白诱导SPLUNC1的表达。此外,乳铁蛋白处理可抑制Pam3CK4激活NF-κB,主要表现为NF-κB的DNA结合活性降低、IκB降解减少。siRNA沉默SPLUNC1表达后,可明显削弱乳铁蛋白对TNF-α和IL-8的抑制作用。结论乳铁蛋白对Pam3CK4诱导的细胞因子分泌具有抑制作用,其机制与上调SPLUNC1表达、抑制NF-κB的活性有关。

关键词：乳铁蛋白 Toll样受体2 细胞因子

结核分枝杆菌mpt53蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2020年第7期15卷 768-773页

作者：杨雨昕付玉荣伊正君潍坊医学院医学检验学院山东潍坊261031 潍坊医学院病原生物学教研室

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌Rv2878c基因编码蛋白mpt53的结构和功能。方法从NCBI中获得Rv2878c基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析mpt53蛋白的相关生物学信息。结果Rv2878c基因全长为922 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白mpt53由172个氨基酸组成,等电点5.19,为含有信号肽的非跨膜蛋白;该蛋白含有21个磷酸化位点,1个保守域,18个(得分≥0.80)B细胞抗原表位和8个(得分≥15)T细胞抗原表位;二级结构预测mpt53中α-螺旋占32.56%,β-折叠占23.84%,β-转角占7.56%,无规则卷曲占36.05%。富集分析显示该蛋白与氧化还原反应有关。讨论生物学信息分析mpt53蛋白为分泌蛋白,可用于研发结核病血清学诊断试剂。蛋白的二级结构助于氧化折叠,是抗结核药物的潜在靶点;该蛋白含有有大量潜在的T、B细胞抗原表位,是结核病疫苗的候选蛋白。

关键词： mpt53蛋白结核分枝杆菌 Rv2878c 生物信息学分析

SPLUNC1负向调控肺炎克雷伯菌夹膜多糖诱导细胞因子分泌

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中国免疫学杂志 2019年第22期35卷 2711-2714页

作者：曹二龙谭潇刘选梅肖非马婷贺印旎邵阳学院医学检验学院医学检验技术教研室

目的:观察肺炎克雷伯菌夹膜多糖(CPS)对人肺上皮细胞表达短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)的影响,并探讨其在介导细胞因子分泌中的作用。方法:培养肺炎克雷伯菌并提取其CPS,将其与体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292孵育。实时定量PCR和EL... 详细信息

目的:观察肺炎克雷伯菌夹膜多糖(CPS)对人肺上皮细胞表达短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)的影响,并探讨其在介导细胞因子分泌中的作用。方法:培养肺炎克雷伯菌并提取其CPS,将其与体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292孵育。实时定量PCR和ELISA检测SPLUNC1蛋白和mRNA表达的影响。提取细胞核蛋白,ELISA测定CPS处理前后NF-κB活性的变化,采用Western blot检测IκB的表达,并采用NF-κB抑制剂PDTC预处理,观察其在SPLUNC1表达中的作用。ELISA检测CPS处理前后培养上清TNF-α和IL-8分泌的变化;并采用siRNA沉默NCI-H292细胞SPLUNC1,观察其对TNF-α和IL-8分泌的影响。结果:实时定量PCR结果显示,0.5~3μg/ml CPS处理后,SPLUNC1 mRNA水平明显增高,并呈一定的剂量依赖性,ELISA也得到了类似的结果。0.5~3μg/ml CPS也能激活NF-κB,主要表现在NF-κB的DNA结合活性增高、IκB表达减少。同时,CPS也能诱导肺上皮细胞分泌TNF-α和IL-8,采用NF-κB抑制剂PDTC预处理细胞后,细胞因子分泌明显减少。此外,采用siRNA沉默SPLUNC1表达后,TNF-α和IL-8的分泌有所增多。结论:肺炎克雷伯菌夹膜多糖可经激活NF-κB诱导人肺上皮细胞系表达SPLUNC1,后者能在一定程度上负向调控TNF-α和IL-8分泌。

关键词：肺炎克雷伯菌荚膜多糖细胞因子

降钙素原、D-二聚体、N-末端脑钠肽前体对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者预后的意义

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包头医学院学报 2024年第1期40卷 53-56,61页

作者：刘菊花刘军钟如柱广东省廉江市人民医院检验科广东廉江524400 广东医科大学病原生物学实验室广东省廉江市人民医院呼吸内科

目的:探讨降钙素原、D-二聚体、N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者预后的意义。方法:回顾性分析102例重度AECOPD的临床资料。根... 详细信息

目的:探讨降钙素原、D-二聚体、N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者预后的意义。方法:回顾性分析102例重度AECOPD的临床资料。根据患者预后情况分为预后不良组(36例)和预后良好组(66例),检测对比两组的降钙素原、D-二聚体和NT-proBNP,采用logistic回归分析进行多因素分析,并以ROC曲线评价预后预测价值。结果:预后不良组降钙素原、D-二聚体、NT-proBNP的浓度均明显高于预后良好组(P<0.01)。降钙素原、D-二聚体和NT-proBNP在logistic回归分析中的P值均<0.05。降钙素原、D-二聚体和NT-proBNP的AUC分别为0.743、0.778、0.708(P<0.01)。降钙素原联合D-二聚体、降钙素原联合NT-proBNP、D-二聚体联合NT-proBNP的AUC分别为0.847、0.815和0.798(P<0.01)。3项指标联合检测的AUC为0.862(P<0.01)。结论:降钙素原、D-二聚体和NT-proBNP均是重度AECOPD预后不良的独立危险因素,并在重度AECOPD预后预测中均有一定的价值,其中三者联合检测的预后预测效能最高。

关键词：降钙素原 D-二聚体 N-末端脑钠肽前体重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期预后

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结核分枝杆菌GLCB蛋白的生物信息学分析

中国病原生物学杂志 2020年第5期15卷 512-517页

作者：陈浩天付玉荣伊正君潍坊医学院医学检验学系山东潍坊261053 潍坊医学院病原生物学教研室

目的对结核分枝杆菌Rv1837c基因编码蛋白GLCB的结构和功能进行生物信息学分析和预测。方法自GenBank数据库中获取Rv1837c全部基因信息,运用ProtParam及ProtScale分别预测其编码的glcB蛋白理化性质和亲疏水性;使用SignalP,NetPhos和TMHM... 详细信息

目的对结核分枝杆菌Rv1837c基因编码蛋白GLCB的结构和功能进行生物信息学分析和预测。方法自GenBank数据库中获取Rv1837c全部基因信息,运用ProtParam及ProtScale分别预测其编码的glcB蛋白理化性质和亲疏水性;使用SignalP,NetPhos和TMHMM分析glcB的信号肽、磷酸化位点、跨膜螺旋;分别利用SOPMA,SWISSMODEL分析glcB蛋白的二级结构并建立三级结构模型;利用Vaxijen v2.0进行抗原性分析并用ABCpred预测glcB蛋白的B细胞抗原表位。结果Rv1837c基因全长2226bp,其编码的glcB蛋白含有741个氨基酸残基,疏水系数-0.1545,为亲水性蛋白,不稳定指数为33.81,定义其为稳定蛋白。glcB蛋白无信号肽和跨膜蛋白,含有大量磷酸化位点及B细胞抗原表位。结论生物信息学分析glcB蛋白为亲水性蛋白,具有潜在多个抗原表位,可作为结核病疫苗研发的候选蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1837c glcB蛋白生物信息学

结核分枝杆菌Pst S1蛋白结构与功能的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 806-810,821页

作者：吴姝伊正君付玉荣潍坊医学院病原生物学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院医学检验学系

目的应用生物学信息工具预测分析结核分枝杆菌H37Rv标准菌株Pst S1蛋白的结构和功能。方法登录NCBI数据库,获取Pst S1蛋白基因组信息,应用ProParam工具和ProScale工具对Pst S1蛋白进行基本理化性质和疏水性的分析;运用SignaIP 4.1Serve... 详细信息

目的应用生物学信息工具预测分析结核分枝杆菌H37Rv标准菌株Pst S1蛋白的结构和功能。方法登录NCBI数据库,获取Pst S1蛋白基因组信息,应用ProParam工具和ProScale工具对Pst S1蛋白进行基本理化性质和疏水性的分析;运用SignaIP 4.1Server和TMHMM Server v.2.0工具对Pst S1蛋白的信号肽和跨膜区进行预测;利用SOMPA工具分析Pst S1蛋白的二级结构,并采用SWISS MODEL工具对该蛋白进行三级结构同源建模;运用ABCpred软件和SYFPEITHI预测Pst S1蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位。结果Pst S1蛋白编码基因Rv0934全长1 125bp,编码374个氨基酸。该蛋白理论相对分子质量为38.243 13×103,理论等电点为5.14,分子式为C1703H2660N456O527S9,半衰期为30h,脂溶指数为86.79,不稳定指数为25.65,总平均亲水性为0.066,为稳定性亲水蛋白。Pst S1蛋白在20-21区域形成一段信号肽序列,无跨膜区域,不属于跨膜蛋白。二级结构中α螺旋、β折叠、β转角、无规则卷曲分别占32.89%、18.18%、6.42%、42.51%。预测该蛋白含有16个B细胞抗原表位和27个CTL表位。结论生物信息学分析Pst S1蛋白为稳定性亲水蛋白,含有信号肽和较多B、T细胞抗原表位,具有抗原性,可作为结核病的血清学诊断和亚单位疫苗新的靶点。

关键词：结核分枝杆菌 Pst S1 结构功能生物信息学

结核分枝杆菌PE_PGRS33蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 780-785页

作者：陈浩天付玉荣伊正君潍坊医学院医学检验学系山东潍坊261053 潍坊医学院病原生物学教研室

目的应用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1818c基因编码蛋白PE_PGRS33的结构和功能进行预测分析。方法自GenBank数据库中提取Rv1818c基因相关基因信息;运用ProtParam及ProtScale预测其编码的PE_PGRS33蛋白理化性质和亲疏水性;分别运用N... 详细信息

目的应用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1818c基因编码蛋白PE_PGRS33的结构和功能进行预测分析。方法自GenBank数据库中提取Rv1818c基因相关基因信息;运用ProtParam及ProtScale预测其编码的PE_PGRS33蛋白理化性质和亲疏水性;分别运用NetPhos、TMHMM分析PE_PGRS33的磷酸化位点、跨膜螺旋;利用SOPMA、SWISS、MODEL分析PE_PGRS33蛋白的二级结构并建立三级结构模型;利用Bepired、ABCpred及SYFPEITHI预测PE_PGRS33蛋白的B细胞与T细胞表位。结果Rv1818c基因编码的PE_PGRS33蛋白含有498个氨基酸残基,疏水系数0.425,为疏水性蛋白。PE_PGRS33含有7个磷酸化位点,不存在跨膜区域,二级结构以无规卷曲为主(占50.20%),结构较松散。利用SWISS-MODEL建构建出PE_PGRS33蛋白的三级结构。PE_PGRS33蛋白含有27个B细胞抗原表位,数个T细胞优势表位。结论PE_PGRS33蛋白是结核分枝杆菌的重要表面暴露蛋白,与结核分枝杆菌的潜伏感染密切相关。生物信息学预测该蛋白含有多个抗原表位,可作为结核治疗的潜在分子靶标。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1818c PE_PGRS33蛋白生物信息学